備
[0047]向裝有攪拌子的10ml四口燒瓶中加入N，N-二甲氨基酮酸0.285g(l.0Ommol)，3_雙辛氨基-苯酸0.41g( 1.25mmol)和甲基磺酸1ml。在N2保護下，加熱至95°C反應。16小時后停止反應，降至室溫后加入10ml冰水，用飽和碳酸鈉溶液中和至pH = 6，過濾，將濾餅真空干燥得粗品。干法上樣經柱層析(甲醇:二氯甲烷=1:20，v/v)分離，得雙辛烷基羅丹明(0.43g,75.1%)o
[0048]3、能量共振體系的建立以及對微絲菌的識別
[0049]在50μπιΟ1/L的十六烷基三甲基溴化銨溶液中，加入上述制備的量子點水溶液使其終濃度為0.lymol/L，加入上述雙辛烷基羅丹明熒光探針使其終0.lymol/L，震蕩I分鐘，加入含有微絲菌的污泥搖勻后進行標記識別。標記后的微絲菌在熒光顯微鏡下顯示紅色絲狀物，標記成功。
[0050]實施例3[0051 ] !、量子點制備
[0052]在1ml的反應瓶中加入5.0ml超純水、0.0255g的碲粉和0.0252g的硼氫化鈉，氮氣置換三次，48度反應30分鐘備用。
[0053]在裝有攪拌子的10ml的單口瓶中加入0.0255g的氯化鎘、0.0252g的巰基乙酸和50ml超純水，用氮氣置換三次，加入3ml前驅體，水浴加熱至回流保持15分鐘即停止加熱，降溫待用。
[0054]2、探針的制備
[0055]向裝有攪拌子的10ml四口燒瓶中加入N，N-二甲氨基酮酸0.285g(l.0Ommol)，3_十二烷基-苯酚0.305g(l.lmmol)和甲基磺酸(5ml)。在吣保護下，加熱至100°C反應。14小時后停止反應，降至室溫后加入50ml冰水，用飽和碳酸鈉溶液中和至pH=7，過濾，將濾餅真空干燥得粗品。干法上樣經柱層析(甲醇:二氯甲烷=1:20，v/v)分離，得單十二烷基羅丹明(0.316g,60.1%)o
[0056]3、共振體系的建立以及對微絲菌的識別
[0057]在75ymol/L的芐基三乙基氯化銨水溶液中，加入上述制備的量子點水溶液使其終濃度為0.5ymol/L，加入上述單十二烷基羅丹明熒光探針使其終0.075ymol/L，震蕩I分鐘，加入含有微絲菌的污泥搖勻后進行標記識別。標記后的微絲菌在熒光顯微鏡下顯示紅色絲狀物，標記成功。
[0058]實施例4
[0059]!、量子點制備
[0060]在1ml的反應瓶中加入5.0ml超純水、0.0255g的碲粉和0.0378g的硼氫化鈉，氮氣置換三次，40度反應30分鐘備用。
[0061 ]在裝有攪拌子的10ml的單口瓶中加入0.0255g的氯化鎘、0.0378g的巰基乙酸和50ml超純水，用氮氣置換三次，加入4ml前驅體，水浴加熱至內溫90度保持10分鐘即停止加熱，降溫待用。
[0062]2、探針的制備
[0063]向裝有攪拌子的10ml四口燒瓶中加入N，N-二甲氨基酮酸0.285g (I.0Ommo 1),3-十六烷基-苯酚0.416g(1.25mmoI)和甲基磺酸(6ml)。在N2保護下，加熱至90°C反應。12小時后停止反應，降至室溫后加入60ml冰水，用飽和碳酸鈉溶液中和至pH=5，過濾，將濾餅真空干燥得粗品。干法上樣經柱層析(甲醇:二氯甲烷=1:20，v/v)分離，得單十六烷基羅丹明(0.326g,58%)o
[0064]3、共振體系的建立以及對微絲菌的識別
[0065]在50ymol/L的四丁基溴化銨水溶液中，加入上述制備的量子點水溶液使其終濃度為0.2ymol/L，加入上述單十六烷基羅丹明熒光探針使其終0.06ymol/L，震蕩I分鐘，加入含有微絲菌的污泥搖勻后進行標記識別。標記后的微絲菌在熒光顯微鏡下顯示紅色絲狀物，標記成功。
[0066]實施例5
[0067]丨、量子點制備
[0068]在1ml的反應瓶中加入5.3ml超純水、0.0255g的碲粉和0.0252g的硼氫化鈉，氮氣置換三次，50度反應25分鐘備用。
[0069]在裝有攪拌子的10ml的單口瓶中加入0.0255g的氯化鎘、0.0300g的巰基乙酸和48ml超純水，用氮氣置換三次，加入5ml前驅體，水浴加熱至內溫90度保持20分鐘即停止加熱，降溫待用。
[0070]2、探針的制備
[0071 ] 向裝有攪拌子的10ml四口燒瓶中加入N，N-二甲氨基酮酸0.285g (I.0Ommo 1),3-雙十六燒基氨基-苯酸0.66g( 1.20mmol)和甲基磺酸(1ml)。在N2保護下，加熱至90°C反應。15小時后停止反應，降至室溫后加入10ml冰水，用飽和碳酸鈉溶液中和至pH = 5，過濾，將濾餅真空干燥得粗品。干法上樣經柱層析(甲醇:二氯甲烷= l:20，v/v)分離，得雙十六烷基不對稱羅丹明(3)(0.25g，31%)。
[0072 ] 3、共振體系的建立并對微絲菌的識別
[0073]在50ymol/L的十六烷基三甲基溴化銨水溶液中，加入上述制備的量子點水溶液使其終濃度為0.2ymol/L，加入上述雙十六烷基羅丹明熒光探針使其終0.06ymol/L，震蕩I分鐘，加入含有微絲菌的污泥搖勻后進行標記識別。標記后的微絲菌在熒光顯微鏡下顯示紅色絲狀物，標記成功。
[0074]綜上所述，本發明的內容并不局限在上述的實施例中，相同領域內的有識之士可以在本發明的技術指導思想之內可以輕易提出其他的實施例，但這種實施例都包括在本發明的范圍之內。
【主權項】
1.一種可識別微絲菌的能量共振體系的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)碲化鎘量子點的制備:按照超純水:碲粉:硼氫化鈉=(180-220)ml:lg:0.45-1.6g的比例加入到反應釜中，氮氣置換三次，40-50 0C反應20-40分鐘，得到前驅體； 按照氯化鎘:巰基乙酸:超純水:=Ig: 0.45-1.6g: (1800-2200)ml的比例加入到反應釜中，用氮氣置換三次，然后按照氯化鎘:前驅體=0.025g: 0.8-5ml，加入上述制備的前驅體，水浴加熱至回流，停止加熱，降溫待用，此為量子點水溶液； (2)具有長疏水鏈的長鏈烷基羅丹明熒光探針制備 按照N，N-二甲氨基酮酸:3-(單或雙)長鏈烷氨基-苯酚:甲基磺酸= Immol:1_1.25mmol:5-10ml的比例加入到反應釜中，在N2保護下，加熱至85-100°C反應，10-16小時后停止反應，降至室溫后加入甲基磺酸體積10倍的冰水，用飽和碳酸鈉溶液中和至pH = 5-7，過濾，將濾餅真空干燥得粗品，經柱層析分離，得長鏈烷基羅丹明； (3)能量共振體系的建立 在50-100ymol/L的季銨鹽水溶液中，加入上述制備的量子點水溶液使其終濃度為0.1-lymol/L，加入上述長鏈烷基羅丹明熒光探針使其終0.05-0.1ymol/L，震蕩I分鐘，能量共振溶液制備完成。2.根據權利要求1所述可識別微絲菌的能量共振體系的制備方法，其特征在于，所述步驟⑴中水浴加熱至回流3-30分鐘。3.根據權利要求1所述可識別微絲菌的能量共振體系的制備方法，其特征在于，所述3-(單或雙)長鏈燒氨基-苯酸為3_辛燒氨基-苯酸、3-雙辛燒氨基-苯酸、3-十二燒氨基-苯酸、3-雙十二燒氨基-苯酸、3-十六燒氨基-苯酸和3-雙十六燒氨基-苯酸。4.根據權利要求1所述可識別微絲菌的能量共振體系的制備方法，其特征在于在于，所述季銨鹽為四丁基溴化銨、十六烷基三甲基溴化銨或芐基三乙基氯化銨。5.根據權利要求1所述可識別微絲菌的能量共振體系的制備方法，其特征在于在于，所述步驟(2)中，柱層析所用溶劑體積比甲醇:二氯甲烷=1:20。6.—種如權利要求1-5任一項所述的方法制備的可識別微絲菌的能量共振體系。
【專利摘要】本發明公開了一種可識別微絲菌的能量共振體系及其制備方法，先制備碲化鎘量子點和長鏈烷基羅丹明熒光探針，再利用季銨鹽溶液為載體制備共振體系來識別微絲菌。本發明效果為長鏈烷基羅丹明熒光探針量子產率高，熒光強度高，熒光性質穩定，共振后識別濃度低至0.05μmol/L。本發明中所制備量子點把能量通過能量共振轉移給熒光探針，從而把熒光探針對微絲菌的識別濃度從10μmol/L降低至0.05μmol/L。
【IPC分類】C09K11/88, C09K11/06, C12Q1/04
【公開號】CN105648029
【申請號】
【發明人】費學寧, 林大勇, 谷迎春, 李冉, 焦秀梅
【申請人】天津城建大學
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年2月2日