五女山冰葡萄酒gc-ms指紋圖譜的構建方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及冰葡萄酒GC-MS指紋圖譜的構建方法，特別涉及五女山冰葡萄酒的指 紋圖譜的構建，屬于食品分析技術領域。
【背景技術】
[0002] 冰葡萄酒也稱冰果酒，為酒中極品。由于冰凍條件苛刻其產量極少，所以冰葡萄酒 為世界上最昂貴的酒種之一。由于其制作工藝獨特，所以冰葡萄酒具有異于其它葡萄酒的 獨特風味，是獨一無二的葡萄佳釀。葡萄酒質量的好壞與人們的身體健康密切相關，是食品 質量控制的一個重要組成部分。葡萄酒的成分復雜，不能僅用一種成分來評價酒的質量以 及作為酒產品的鑒定指標。近年來，葡萄酒質量檢測及分析逐漸成為新的研究熱點，指紋圖 譜技術被廣泛應用于這一研究領域，葡萄酒的指紋圖譜是指酒樣本經光譜或色譜等現代分 析技術手段獲得的酒的特征圖譜。對于成分復雜的葡萄酒，指紋圖譜具有系統性、特征性和 重復性，能展現出葡萄酒質量控制標準的整體性與模糊性。構建冰葡萄酒的指紋圖譜，不僅 能確立品牌冰葡萄酒的標志性指紋圖譜，同時可以甄別冰葡萄酒的真偽，因此該檢測方法 得到了國際上的認可。
[0003] 現今國內對葡萄酒指紋圖譜的研究主要集中在葡萄酒香氣成分上，但是單一的香 氣成分不足以對葡萄酒的品質進行全面的衡量，且產生的香氣成分的特征指紋圖譜差異性 不強，無法有效的對葡萄酒產地和質量進行甄別。
[0004] 根據目前的研究，對葡萄酒進行氣相色譜-質譜（gas chromatography-mass spectrometryAC-MS)指紋圖譜的建立及質量判別研究，主要采用整酒萃取的方法得到圖 譜，如專利申請CN103217487A公開了用液-液萃取的方法分別得到酒樣中二氯甲烷和乙酸 乙酯的特征指紋圖譜，但是發明人經反復試驗發現，采用整酒萃取的方法準確性不夠，因為 萃取過程中需要加入有機溶劑如乙酸乙酯等，而后期對溶劑蒸發處理時，溶劑會把冰葡萄 酒中的特性成分帶走，而導致檢測的結果不準確，另一方面，試驗所用溶劑基本為分析純， 含有雜質，而在檢測的時候，比重較重的雜質仍會遺留在酒份中，反而會干擾最終指紋譜 圖。現有技術中還有通過HPLC-MS法建立葡萄酒黃酮類物質成分的指紋圖譜，利用GC-MS法 建立進口葡萄酒香氣成份的指紋圖譜，通過兩種指紋圖譜對進口葡萄酒的產地進行溯源和 品質評定的相關報道(如發明專利CN 103217487 B)，但是該方法存在操作繁瑣，需使用大 量有機溶劑等問題。如處理25g葡萄酒樣品，需分次使用60mL二氯甲烷，然后在45°C水浴氮 氣吹至lmL，用于GC-MS檢測。檢測的色譜條件程序升溫的初始溫度為40°C，保持3min，但樣 品處理時是在45°C下去溶劑，檢測的初始溫度為40°C沒有意義。HPLC-MS檢測時，處理30g葡 萄酒樣品，需分次使用60mL乙酸乙酯，然后在40°C減壓濃縮至近干，用3mL甲醇溶解，用于 HPLC-MS檢測。該兩種方法均使用大量的有機溶劑，在去溶劑的過程中酒樣品中的輕組分一 并被去掉，使所得的萃取樣品的代表性較差，同時也存在著由于使用大量的有機溶劑(兩倍 或兩倍以上于樣品的量），溶劑中比重重的雜質會遺留在萃取的酒樣品中，反而會干擾最終 指紋譜圖。
[0005] 因此如何精準的得到冰葡萄酒的指紋圖譜一直是本領域的難題。
【發明內容】
[0006] 本發明為了解決現有技術中冰葡萄酒的指紋圖譜準確性不高的問題，提供了一種 用于五女山冰葡萄酒GC-MS指紋圖譜的構建方法，實現五女山冰葡萄酒的識別，確立其GC-MS標志性指紋圖譜。該方法簡單快速，準確性高。
[0007] 本發明的技術構思是這樣的：由于冰葡萄酒香氣很大，其香氣成分基本存在于蒸 汽中，因此發明人僅通過對蒸汽成分進行分析即可得知冰葡萄酒的指紋圖譜。本發明無需 添加任何有機溶劑進行萃取，通過蒸餾和頂空處理的方法得到冰葡萄酒的指紋圖譜。為了 避免指紋圖譜中出現的較多譜峰對特種酒的特征信息的遮掩，使指紋圖譜更具產品特點， 圖譜清晰、可辨，本發明采用蒸餾的方法，將冰葡萄酒通過蒸餾取其從初餾點開始的部分餾 分酒，然后采用頂空的方法取其蒸汽作為指紋圖譜的構建基礎，利用GC-MS方法獲得冰葡萄 酒的指紋圖譜。
[0008] 由于冰葡萄酒蒸汽中含有大量的CH3CH20H，在做GC-MS檢測時，CH3CH 20H會使離子 源信號發生飽和，因此，本發明在檢測過程中在2.12min至2.25min對CH3CH 2OH信號采取終止 ?目號米集來處理。
[0009] 本發明的技術要點是:將冰葡萄酒蒸餾，收集初餾點~102°C餾分，用頂空瓶法取 其蒸汽，用GC-MS構建指紋圖譜。
[0010]進一步的，指紋圖譜構建方法的具體步驟為：
[0011] (1)收集餾分:取冰葡萄酒蒸餾，收集初餾點~102 °C餾分；
[0012] (2)頂空處理：向頂空瓶中裝入已干燥的NaCl粉末，移取餾分于頂空瓶中，在75~ 85°C下保持0.5~lh，用于GC-MS分析；
[0013] ⑶指紋圖譜構建:用GC-MS方法構建冰葡萄酒的指紋圖譜。
[0014] 優選的，餾分與NaCl粉末的比例為(2~4)ml:lg。
[0015] 優選的，頂空處理具體為：向頂空瓶中裝入已干燥的NaCl粉末，移取餾分于頂空瓶 中，在80 °C下保持1 h，用于GC-MS分析。
[0016] 作為本發明一個優選的實施例，GC條件:Rxi-5silMS色譜柱(30mX0.25mmX0.25y m)，汽化室溫度250°C，程序升溫，起始40°C，保持lmin，以3°C/min至180°C，保持lOmin，總的 保留時間為57min;載氣為高純氬氣，總流速54. OmL/min，柱流速1. OOmL/min;分流比50:1， 進樣量0.3mL;
[0017] MS條件:離子源為EI源，電力電壓70eV，離子源溫度200°C，接口溫度230°C，溶劑延 遲1.67min，信號采集時間1.67min~2.12min，2.25min~57.00min，質量掃描范圍45~ 400m/z。
[0018] 作為本發明一個優選的實施例，所述的冰葡萄酒為五女山橡木桶裝冰葡萄酒。
[0019] 收集餾分的溫度與指紋圖譜的準確性密切相關，因為冰葡萄酒中含有水分會造成 圖譜干擾，而由于冰葡萄酒的成分復雜，40°C蒸汽中就能檢測出近59種成分。因此需要從初 餾點至102°C的范圍內收集餾分，在頂空處理過程中加入NaCl粉末的作用也是吸收水分，將 收集到的餾分酒進行頂空處理。
[0020] 與現有技術相比，本發明的有益效果是:本發明指紋圖譜的構建方法簡單、快速， 無需添加有機溶劑進行萃取，指紋圖譜準確性高，重復性好，圖譜清晰、可辨，具有很強的差 異性，可廣泛應用于五女山冰葡萄酒的質量甄別。
【附圖說明】
[0021]圖1是2013年、2014年生產的五女山橡木桶裝冰葡萄酒初餾點~102°C餾分總離子 流圖；其中：1、2014年生產的橡木桶裝冰葡萄酒，2、2013年生產的橡木桶裝冰葡萄酒；
[0022] 圖2是圖1在保留時間為1.7min~lOmin區域的放大對比圖；
[0023]圖3是2014年生產的五女山橡木桶裝冰葡萄餾分酒樣6次實驗所得圖譜，其中：從a ~f分別為第1次測試圖譜、第2次測試圖譜、…、第6次測試圖譜；
[0024]圖4是國產酒1#和2014年生產的五女山橡木桶裝冰葡萄酒初餾點~102°C餾分總 離子流圖，圖中：1、2014年生產的橡木桶裝冰葡萄酒，3、國產1#冰葡萄酒；
[0025] 圖5是圖4在保留時間為1.7min~7.5min區域的放大對比圖；
[0026]圖6是國產酒2#和2014年生產的五女山橡木桶裝冰葡萄酒初餾點~102°C餾分總 離子流圖，圖中：1、2014年生產的橡木桶裝冰葡萄酒，4、國產2#冰葡萄酒；
[0027] 圖7是圖6在保留時間為1.7min~7.5min區域的放大對比圖；
[0028]圖8是進口酒1#和2014年生產的五女山橡木桶裝冰葡萄酒初餾點~102°C餾分總 離子流圖，圖中：1、2014年生產的橡木桶裝冰葡萄酒，5、進口 1#冰葡萄酒；
[0029] 圖9是圖8在保留時間為1.7min~7.5min區域的放大對比圖；
[0030]圖10是進口酒2#和2014年生產的五女山橡木桶裝冰葡萄酒初餾點~102°C餾分總 離子流圖，圖中：1、2014年生產的橡木桶裝冰葡萄酒，6、進口2#冰葡萄酒；
[0031] 圖11是圖10在保留時間為1.7min~7.5min區域的放大對比圖。
【具體實施方式】
[0032]下面結合實施例對本發明做進一步說明，但不用于限制本發明的保護范圍，下述 實施例中如無特殊說明，所采用的實驗方法均為常規方法，所用材料、試劑等均可從生物或 化學公司購買。作為優選本發明采用日本島津公司GC-MS儀。
[0033]本發明可以甄別出冰葡萄酒與其他冰酒，特別是對于遼寧省桓仁冰酒產區生產的 五女山冰葡萄酒。本發明可以使用遼寧五女山米蘭酒業有限公司任一種冰葡萄酒進行指紋 圖譜的構建，作為優選，下述實施例中所采用的五女山冰葡萄酒為遼寧省本溪市桓仁縣遼 寧五女山米蘭酒業有限公司從加拿大引進栽培的威代爾(Vidal)葡萄，于2013年、2014年生 產的橡木桶裝冰葡萄酒。本實施例針對桓仁縣遼寧五女山米蘭酒業有限公司橡木桶裝冰葡 萄酒構建指紋譜圖，獲得其指紋圖譜。由于GC-MS測定總離子流圖20min后沒有代表性的譜 峰，所以本實施例所用譜圖中的保留時間取在25min。
[0034]本實施例所采用的國產1#是莫高冰葡萄酒(水晶冰)產自甘肅省武威市涼州區黃 羊鎮新河街1號；
[0035]國產2#是張裕威代爾(黃金冰谷)產自遼寧張裕冰酒酒莊有限公司；
[0036] 進口 1#是威代爾2005VQA白冰酒產自加拿大哈伯莊園酒莊；
[0037]進口 2#是黑塔金冰酒產自德國萊茵肯德曼酒廠。
[0038] 實施例1
[0039] (1)收集餾分:取70mL五女山橡木桶裝冰葡萄酒蒸餾，收集初餾點~102°C餾分；
[0040] (2)頂空處理：向頂空瓶中裝入已干燥的NaCl粉末lg，移取3ml餾分于密封的6ml頂 空瓶中，在80°C下恒溫加熱lh，用于GC-MS分析；
[0041] (3)指紋圖譜構建:用GC-MS測定其總離子流圖，獲得冰葡萄酒的指紋圖譜。
[0042] GC 和 MS 條件：
[0043] GC條件：Rxi-5si IMS色譜柱（30m X 0 · 25mm X 0 · 25μπι)。汽化室溫度250 °C，程序升 溫，起始40°C，保持lmin，以3°C/min至180°C，保持lOmin，總的保留時間為57min。載氣為高 純氬氣，總流速54.0mL/min，柱流速1 .OOmL/min。分流比50:1，進樣量0.3mL。
[0044] MS條件:離子源為EI源，電力電壓70eV，離子源溫度200°C，接口溫度230°C，溶劑延 遲1.67min，信號采集時間1.67min~2.12min，2.25min~57.00min，質量掃描范圍