[0047] -種對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，具體操作步驟同實施例1， 不同的是色譜條件與系統適用性試驗步驟中：以40:60的乙腈一磷酸鹽緩沖液(pH6.8)為流 動相，檢測波長為310nm;柱溫為30°C〇
[0048] 實施例10
[0049] -種對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，具體操作步驟同實施例1， 不同的是色譜條件與系統適用性試驗步驟中：以35:75的乙腈一甲酸鈉緩沖液(pH6.8)為流 動相，檢測波長為354nm;柱溫為40°C 〇
[0050] 實驗例
[00511含量測定方法學驗證：
[0052]儀器與試藥：
[0053] 型號為Waters e2695_2998高效液相色譜儀。
[0054] 對照品：番瀉苷A(批號201301)、番瀉苷B(批號201301)購自中國食品藥品檢定研 究所，通便寧片由廣州白云山奇星藥業有限公司制得；乙腈(色譜純，Merck KGaA)，作為溶 劑用的碳酸氫鈉、醋酸鈉、磷酸二氫鉀、甲酸鈉為分析純試劑，購于廣州化學試劑廠。
[0055]色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以40:60的乙 腈一醋酸鈉緩沖液(PH6.8)為流動相，檢測波長為310nm;柱溫為30°C，理論板數按番瀉苷B 峰計算應不低于6000。
[0056] 1、供試品溶液制備:取通便寧片，研細;精密稱取0.8g，然后加入提取溶劑25mL，超 聲處理lOmin，所述提取溶劑為質量百分數為0.1%的碳酸氫鈉水溶液;過濾，向濾液中加入 O.lmL稀鹽酸;然后振搖萃取3次，其中萃取溶劑為乙醚，每次振搖萃取采用的乙醚為25mL， 取水層，將水層蒸干，將剩下的殘渣用0.1%的碳酸氫鈉溶液溶解并定量至10mL，過濾，收集 濾液，即得;其高效液相色譜圖如圖1所示。
[0057] 2、對照品溶液制備：取番瀉苷A對照品、番瀉苷B對照品適量，減壓干燥24小時，置 棕色量瓶中，加0.1%碳酸氫鈉溶液制成每lml含番瀉苷A 0. lmg、番瀉苷B 0.15mg的混合溶 液，搖勻，即得。其高效液相色譜圖如圖2所示。
[0058] 3、線性關系考察:精密稱取番瀉苷A對照品0.01151g，番瀉苷B對照品0.02218g，加 〇. 1 %碳酸氫鈉溶液定容至l〇〇ml容量瓶中，超聲使完全溶解，制得番瀉苷混合對照品母液 (番瀉苷A濃度為0.1090mg/ml;番瀉苷B濃度為0.2105mg/ml)。精密量取番瀉苷混合對照品 母液1、3、5、7ml，分別置10ml容量瓶中，加0.1 %碳酸氫鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，上述溶液 分別進樣?〇μ1，按上述色譜條件測定峰面積。以番瀉苷A濃度為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標 (Y)，繪制標準曲線，回歸方程為Y = 9.00e+006X-3.76e+003，相關系數r = 0.99996;以番瀉 苷B為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，回歸方程為Y = 8.72e+006X+7.70e+ 003，相關系數r = 0 · 99995。結果表明通便寧片中番瀉苷A在Ο · 01090mg/ml-0 · 1090mg/ml范 圍內線性關系良好;番瀉苷B在0.02105mg/ml-0.2105mg/ml范圍內線性關系良好，試驗結果 見表1、表2。
[0059]表1線性關系考察數據(番瀉苷A)
[00601
[
[
[0063] 重復性試驗：按前述供試品溶液的制備方法平行制備6份供試品溶液，測定峰面 積，計算番瀉苷A、番瀉苷B的含量。結果番瀉苷A、番瀉苷B的含量平均值為3.9183mg/g、 4.45611^/^，1?0為0.7%、0.6%，表明重復性良好，見表3、表4。
[0066] 表4重復性試驗數據(番瀉苷Β)
[0064] 豐宙有《^才略撇:來、、/Ε#Λ、
[0065]
[0067]
[0068]
[0069] 穩定性試驗:精密吸取供試品溶液10μ 1，于0、3、6、9、12、24小時進樣，測定峰面積， 計算番瀉苷Α、番瀉苷Β的RSD值均為0.5%。表明供試品溶液在24小時內穩定性良好。結果見 表5、表6〇
[0070] 表5穩定性試驗數據(番瀉苷Α)
[00711
[1
[1
[0074] 加樣回收試驗:取已知含量的供試品6份，精密稱定，分別精密加入混合對照品溶 液(番瀉苷Α濃度為0.06254mg/ml，番瀉苷Β濃度為0.07448mg/ml)各25ml，按照前述供試品 溶液的制備方法制備并測定。本方法番瀉苷A的平均回收率為97.7%，RSD為1.4% ;番瀉苷B 平均回收率為98.8 %，RSD為2.2 %。結果見表7、表8。
[0075] 豐7 翁:來、、/Ε#Λ、
[0076]
[0077]
[0078] ；
[0079]
[0080] 不同廠家色譜柱考察:取通便寧片，按前述供試品溶液的制備方法制備供試品，用 不同品牌的色譜柱進行含量測定。試驗結果表明考察的3根色譜柱均適用于本方法。結果見 表9〇
[0081] 表9不同廠家色譜柱考察數據 ^0Λ〇〇1
[0083] 專屬性考察:按中華人民共和國衛生部藥品標準新藥轉正標準第十一冊第28頁收 載的通便寧片的質量標準中【處方】去掉番瀉葉干膏粉，按【制法】制備陰性樣品，取陰性樣 品粉末按前述供試品溶液的制備方法制備陰性樣品溶液，按前述色譜條件與系統適用性試 驗條件測定，試驗結果表明陰性樣品溶液對測定沒有干擾，參見圖3。
[0084] 以上試驗表明該含量測定的方法專屬性好，精密度高，穩定性、重復性、準確度好。
[0085] 對于本領域的技術人員來說，可根據以上描述的技術方案以及構思，做出其它各 種相應的改變，而所有的這些改變都應該屬于本發明權利要求的保護范圍之內。
[0086] 上述實施方式僅為本發明的優選實施方式，不能以此來限定本發明保護的范圍， 本領域的技術人員在本發明的基礎上所做的任何非實質性的變化及替換均屬于本發明所 要求保護的范圍。
【主權項】
1. 一種對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，運用高效液相色譜法對番瀉 苷A、番瀉苷B進行定量測定，其特征在于包括如下步驟： 1) 供試品溶液制備：取通便寧片，研細；精密稱取，然后加入提取溶劑，超聲處理10-60min，所述提取溶劑的體積與通便寧片的質量比例為30-120mL/g;過濾，向濾液中加入稀 鹽酸，加入的稀鹽酸與提取溶劑的體積比為2-8:100;然后振搖萃取2-3次，其中每次振搖萃 取采用的萃取溶劑與提取溶劑的體積比為1:1，取水層，將水層蒸干，將剩下的殘渣用0.1% 的碳酸氫鈉溶液溶解，過濾，收集濾液，即得； 2) 對照品溶液制備：取番瀉苷A、番瀉苷B，精密稱定，然后用0.1 %的碳酸氫鈉溶液溶 解，得到對照品溶液，所述對照品溶液中番瀉苷A的濃度為10.90-109.Oyg/mL、番瀉苷B的濃 度為 21.05-210.5yg/mL; 3) 測定:精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入高效液相色譜儀進行檢測，即得； 其中，色譜條件為：以體積比為10-40:90-60的乙腈:酸鹽緩沖液(pH6.8)為流動相;檢 測波長為200-500nm;柱溫為22-48 °C ;色譜柱為C18柱，理論塔板數按番瀉苷B峰計算不少于 6000 〇2. 根據權利要求1所述的對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，其特征在 于:所述步驟1)中的提取溶劑為質量百分濃度為〇-〇. 1 %的碳酸氫鈉水溶液。3. 根據權利要求1所述的對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，其特征在 于:所述步驟1)中的萃取溶劑為三氯甲烷或乙醚。4. 根據權利要求1所述的對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，其特征在 于:所述步驟3)中的酸鹽緩沖液為磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液和甲酸鹽緩沖液中的一種。5. 根據權利要求1所述的對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，其特征在 于:所述步驟3)中的理論塔板數為6000-7000。6. 根據權利要求1所述的對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，其特征在 于包括如下步驟： 1) 供試品溶液制備:取通便寧片，研細;精密稱取〇. 8g，然后加入提取溶劑25mL，超聲處 理lOmin，所述提取溶劑為質量百分數為0.1 %的碳酸氫鈉水溶液；過濾，向濾液中加入 O.lmL稀鹽酸;然后振搖萃取3次，其中萃取溶劑為乙醚，每次振搖萃取采用的乙醚為25mL， 取水層，將水層蒸干，將剩下的殘渣用0.1%的碳酸氫鈉溶液溶解并定量至10mL，過濾，收集 濾液，即得； 2) 對照品溶液制備：取番瀉苷A對照品、番瀉苷B對照品，減壓干燥24小時，置棕色量瓶 中，加0.1%碳酸氫鈉溶液制成每lml含番瀉苷A 0. lmg、番瀉苷B 0.15mg的混合溶液，搖勾， 即得； 3) 測定:精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入高效液相色譜儀進行檢測，即得； 其中，色譜條件為：以體積比為40:60的乙腈:醋酸鈉緩沖液(pH6.8)為流動相;檢測波 長為310nm;柱溫為30°C;色譜柱為C18柱，理論塔板數按番瀉苷B峰計算為6500。7. 根據權利要求1所述的對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，其特征在 于:所述通便寧片為廣州白云山奇星藥業有限公司生產的通便寧片。
【專利摘要】本發明涉及一種對通便寧片中番瀉苷A和番瀉苷B的定量檢測方法，運用高效液相色譜法對番瀉苷A、番瀉苷B進行定量測定，包括如下步驟：1)供試品溶液制備；2)對照品溶液制備；3)測定。本發明的檢測方法，具有操作方便、專屬性強、準確度好、穩定性好的優點，能夠準確的反應通便寧片的質量，確保了人體用藥的有效性，對于控制工業生產通便寧片的質量有著重要的意義。
【IPC分類】G01N30/02
【公開號】CN105651881
【申請號】
【發明人】伏寶香, 劉靈, 彭丹婷, 彭中芳, 鍶景希
【申請人】廣州白云山奇星藥業有限公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2015年12月29日