一種液相串聯質譜檢測煙草中抑芽丹含量的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及煙草中農藥殘留檢測領域，具體涉及一種液相串聯質譜檢測煙草中抑 芽丹含量的方法。
【背景技術】
[0002] 煙草中的農藥殘留量關乎卷煙產品的安全性和內在質量，在行業中已引起高度關 注。C0RESTA農用化學品咨詢委員會(ACAC)2003年發布了農用化學品指導性殘留限量的基 本原則與實施意見，對99種農藥殘留提出了指導性限量，2010年增加到了 200多種，并將繼 續增加。我國目前主要參照ACAC限量作為煙草貿易評價依據。中國煙草總公司《煙草農藥最 大殘留限量》對煙草農藥殘留123種進行控制，并在此基礎上提出我國煙草農藥殘留重點關 注的21種農藥名單，其中，殺菌劑類9種、植物生長調節劑類3種、除草劑類2種、殺蟲劑7種。
[0003] 我國煙草科技工作者對煙草中農藥殘留的多種分析方法作了大量改進研究，采用 現代的分析技術將檢測方法逐步集中，在已頒布的農殘檢測方法標準系列中，由2007年的7 個調整2011年的5個。其中，馬來酰肼(即為抑芽丹)的測定由紫外分光光度法，改為《煙草及 煙草制品馬來酰肼農藥殘留的測定-高效液相色譜法》(YC/T405.5-2011)檢測方法。然而該 方法對樣品的前處理較為繁瑣，如在試樣的蒸餾提取過程中，需要保持回流冷凝管冷凝充 分，蒸餾瓶始終保持在約200°C狀態下相對穩定，且要調整到在20min時間內收集到100mL蒸 餾液的蒸餾速率。該方法費時、費力，需要專人看管蒸餾過程，不利于批量試樣的農藥殘留 檢測，影響檢測效率的提高，需要進一步的改進和完善。基于上述原因，研究一種更便捷、準 確的測定煙草中農藥殘留馬來酰肼含量的方法是十分必要。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是為了解決現有技術中存在的技術問題，提供一種液相串聯質譜檢 測煙草中抑芽丹的方法，該方法檢測限低，重復性好，適用于煙草中農藥殘留馬來酰肼含量 的檢測。
[0005] 為了解決以上技術問題，本發明的技術方案為：
[0006] 0.5-2%的甲酸甲醇溶液作為萃取液在液相串聯質譜檢測煙草制品中抑芽丹含量 中的應用。
[0007] -種液相串聯質譜檢測煙草制品中抑芽丹含量的方法，包括如下步驟：
[0008] 1)配制一系列不同濃度的馬來酰胺標準溶液，利用液相色譜串聯質譜方法進行檢 測，建立標準曲線；
[0009] 2)將0.5-2%的甲酸甲醇溶液作為萃取液制備得到的煙草樣品利用高效液相色譜 串聯質譜的方法進行檢測；
[0010] 3)根據標準曲線計算得到煙草樣品中馬來酰胺的含量。
[0011 ]優選的，步驟2)中，煙草樣品的制備方法，包括如下步驟：
[0012]將所述萃取液倒入煙草試樣中，并加入馬來酰肼-D2內標液，震蕩提取5-20min，超 聲提取5-20min后，過濾得上清液即得煙草樣品。
[0013]優選的，每克煙草試樣用8-12mL萃取液萃取。
[0014]優選的，煙草樣品中馬來酰肼-D2內標液的濃度為lyg/mL;
[0015] 或，振蕩提取的轉速為250-300rpm。
[0016] 優選的，所述過濾使用的濾膜的孔徑為0.22μπι。
[0017] 優選的，步驟1)中，建立標準曲線的溶液為7個不同濃度，馬來酰肼的濃度分別為 0 · lyg/mL、0 · 2yg/mL、0 · 5yg/mL、1 · 0yg/mL、2 · 0yg/mL、5 · Oyg/mL和10 · Oyg/mL，馬來酰餅-D2 內標濃度均為lyg/mL。
[0018] 優選的，液相色譜的操作條件為:采用HILIC極性柱，規格為150m X 3. Omm，膜厚為5 μπι;柱溫度為室溫，流速0.3mL/min;進樣體積：5yL，流動相:A相為超純水，B相為乙腈，0-3111；[11，流動相由厶相5%、8相95%變為厶相27%，8相73% ;3-10111；[11，流動相由厶相27%，8相 73%變為A相30%，B相70% ;10-13min流動相由A相30%，B相70%變為A相5%、B相95%。
[0019] 優選的，質譜的檢測條件為:MH:母離子111.1，子離子42.1-82.1，去簇電壓為-60V，碰撞能為-40-26V; MH-D2:母離子113.0，子離子42.1-84.1，去簇電壓為-55V，碰撞能 為-40-25V。
[0020] 所述的檢測煙草制品中抑芽丹含量的方法在檢測煙草制品中抑芽丹含量中的應 用。
[0021] -種液相串聯質譜檢測煙草中抑芽丹含量的方法，具體包括如下步驟：
[0022] 1)萃取液的配制，萃取液為1 %的甲酸甲醇溶液，甲醇:HPLC級、甲酸:分析純級；
[0023] 2)標準工作曲線的建立
[0024] ①分別配制濃度為400yg/mL的馬來酰肼標準儲備液，20yg/mL中間液I和2yg/mL中 間液II，溶劑為甲醇；
[0025] ②分別配制濃度為200yg/mL的氘代馬來酰肼內標標準儲備液和20yg/mL中間液， 溶劑為甲醇；
[0026] ③標準曲線溶液的配制如下表1所示，
[0027]表1標準曲線溶液的配制
[0028]
[0029] 分別制備7個不同濃度的馬來酰肼標準工作溶液，每個濃度取1.5mL裝入色譜瓶， 供液相色譜串聯質譜儀檢測；
[0030] ③將7個標準樣品的馬來酰肼響應值與馬來酰肼的含量進行線性回歸，得到標準 工作曲線，線性相關系數R2>〇. 999;
[0031] 3)待測樣品的制備
[0032] 稱取lg(精確至O.OOOlg)試樣于50mL離心管中，加入10mL提取溶液1%甲酸甲醇， 震蕩提取(275印111)1〇111；[11，超聲10111；[11后于4000印1]1離心1〇111；[11，取上清液過0.22以1]1濾膜進行 上機測定；
[0033] 4)液相色譜串聯質譜儀操作條件;采用HILIC極性柱，規格為150mX 3.0mm，膜厚為 5μπι;柱溫度為室溫，流速0.3mL/min;進樣體積:5yL，流動相:A相為超純水，B相為乙腈，設置 參數如表2所示;質譜參數如表3所示；
[0034]表2流動相參數設置 「00351
[0037]
[0038] 5)分析結果的計算及分析結果的校正
[0039] 讀出待測樣品馬來酰肼的響應值，根據步驟2)所建立的馬來酰肼標準曲線，計算 得到樣品的馬來酰肼含量。
[0040] 通過選擇合適的萃取劑提高對目標化合物的提取率，選擇合適的內標物質濃度 1.0yg/mL以提高檢測目標化合物的準確度，本發明能實現農藥殘留馬來酰肼含量的檢測。
[0041] 本發明的有益技術效果為：
[0042] 該方法與現有方法相比，樣品萃取時，不需要鹽酸回流，操作簡單，提取效率好，雜 質干擾小，可大批量操作，重現性好，非常適用于煙葉中馬來酰肼殘留量的檢測。
[0043]本發明的標準工作曲線R2>0.999，方法定量限為2 . Omg/kg，方法的回收率（2.0， 10.0，80.0 mg/kg三個水平)為93.4-102.2 %，相對標準偏差(RSD% )為4%，具有較好的準確 度和精密度，適合大批量測定的特性，能很大限度提高煙草及其制品中馬來酰肼殘留量的 檢測效率。
【附圖說明】
[0044] 圖1為峰面積比與馬來酰肼含量的關系圖；
[0045] 圖2為本發明對煙草樣品的檢測譜圖。
【具體實施方式】
[0046] 下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明。
[0047]甲醇:HPLC，甲酸:分析純，乙腈:Mi 11 i-Q50超純水儀，美