國Mi 11 ipore公司；標準物 質：馬來酰肼(實驗室編號320-4)、馬來酰肼-D2(氘代馬來酰肼，實驗室編號320-6)，默克公 司;Agilent 1290-ABSciex Triple Quad高效液相色譜串聯質譜儀，美國Agilent公司；液 相色譜柱:HILIC極性柱，規格為150mX3.0mm，膜厚為5μπι，美國Agilent公司;AG285型十萬 分之一天平(METTLER TOLEDO)，感量0. lmg;超聲波清洗器(深圳科美達超聲波設備有限公 司）；0.22μπι有機相濾膜，上海佐菲實驗設備有限公司。
[0048] 一種用液相色譜串聯質譜(LC-MS/MS)檢測煙草中農藥殘留馬來酰肼(抑芽丹)含 量的方法，是通過以下步驟來實現的：
[0049] 1)標準儲備液的配制：
[0050]①馬來酰肼標準儲備液(400yg/mL):
[0051] 準確稱取馬來酰肼標準品20mg于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，混勻。標準儲 備液-18 °C儲存6個月。
[0052]②馬來酰肼標準中間液I(20yg/mL):
[0053] 準確移取400yg/mL標準儲備液0.5mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容，混勻。標準中 間液I于-18°C儲存6個月。
[0054]③馬來酰肼標準中間液II(2yg/mL):
[0055] 準確移取20yg/mL馬來酰肼標準中間液I 0. lmL用甲醇定容至lmL，混勻。標準中間 液II現用現配。
[0056]④馬來酰肼-D2內標標準儲備液(200yg/mL):
[0057] 準確稱取馬來酰肼-D2標準品5mg于25mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，混勻。標準 儲備液-18 °C儲存6個月。
[0058]表4標準曲線溶液的配制
[0059]
[0060]⑤馬來酰肼-D2內標標準中間液(20yg/mL):
[0061 ] 準確移取200yg/mL標準儲備液0.25mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容，混勻。標準中 間液-18 °C儲存6個月。
[0062]⑥標準曲線溶液的配制見表4(煙草提取液處理同1)但不加內標），馬來酰肼標準 品濃度為0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.(^8/1^，馬來酰肼-02內標濃度均為叫8/11^:
[0063]分別制備7個不同濃度的馬來酰肼標準工作溶液，每個濃度取1.5mL裝入色譜瓶， 供液相色譜串聯質譜檢測。
[0064] ⑦將7個標準樣品的馬來酰肼響應值與馬來酰肼的含量進行線性回歸，得到標準 工作曲線，y = 4.20682x，其中，y為峰面積比，X為馬來酰肼含量，線性相關系數R2為0.999， 如圖1所示；
[0065] 2)待測樣品的制備
[0066] 稱取lg(精確至O.OOOlg)試樣于50mL離心管中，加入lOmL提取溶液1%甲酸甲醇震 蕩提取(275rpm) lOmin，超聲lOmin后于4000rpm離心10min，取上清液過0 · 22μηι濾膜進行上 機測定；
[0067] 3)液相色譜串聯質譜儀操作條件;HILIC極性液相色譜柱，規格為150mX 3.0mm，膜 厚為5μπι;柱溫度為室溫，流速0.3mL/min;進樣體積:5yL，流動相:A相為超純水，B相為乙腈， 設置參數如表5所示;質譜參數如表6所示；
[0068]表5流動相參數設置 ΓηηΑο?
[0072] 4)分析結果的計算及分析結果的校正
[0073] 讀出待測樣品馬來酰肼的響應值，根據步驟1)所建立的馬來酰肼標準曲線計算得 到樣品的馬來酰肼的含量為〇. 17mg/kg，如圖2所示，出峰時間為5.04min左右。
[0074] 上述雖然結合附圖對本發明的【具體實施方式】進行了描述，但并非對發明保護范圍 的限制，所屬領域技術人員應該明白，在本發明的技術方案的基礎上，本領域技術人員不需 要付出創造性勞動即可做出的各種修改或變形仍在本發明的保護范圍內。
【主權項】
1.0.5-2%的甲酸甲醇溶液作為萃取液在液相串聯質譜檢測煙草制品中抑芽丹含量中 的應用。2. -種液相串聯質譜檢測煙草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于:包括如下步驟： 1) 配制一系列不同濃度的馬來酰胺標準溶液，利用液相色譜串聯質譜方法進行檢測， 建立標準曲線； 2) 將0.5-2%的甲酸甲醇溶液作為萃取液制備得到的煙草樣品利用高效液相色譜串聯 質譜的方法進行檢測； 3) 根據標準曲線計算得到煙草樣品中馬來酰胺的含量。3. 根據權利要求2所述的檢測煙草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于：步驟2)中， 煙草樣品的制備方法，包括如下步驟： 將所述萃取液倒入煙草試樣中，并加入馬來酰肼-D2內標液，震蕩提取5-20min，超聲提 取5-20min后，過濾得上清液即得煙草樣品。4. 根據權利要求3所述的檢測煙草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于:每克煙草試 樣用8-12mL萃取液萃取。5. 根據權利要求4所述的檢測煙草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于:煙草樣品中 馬來酰肼-D2內標液的濃度為lyg/mL; 或，振蕩提取的轉速為250-300rpm。6. 根據權利要求3所述的檢測煙草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于:所述過濾使 用的濾膜的孔徑為〇.22μπι。7. 根據權利要求2所述的檢測煙草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于：步驟1)中， 建立標準曲線的溶液為7個不同濃度，馬來酰肼的濃度分別為0. lyg/mL、0.2yg/mL、0.5yg/ mL、1 · Oyg/mL、2 · Oyg/mL、5 · Oyg/mL和 10 · Oyg/mL，馬來酰肼-D2 內標濃度均為 lyg/mL。8. 根據權利要求2所述的檢測煙草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于:液相色譜的 操作條件為：采用HILIC極性柱，規格為150m X 3.0mm，膜厚為5μπι;柱溫度為室溫，流速 0.3mL/min;進樣體積:5yL，流動相:Α相為超純水，Β相為乙腈，0-3min，流動相由Α相5%、Β相 95%變為4相27%，8相73%;3-10111丨11，流動相由4相27%，8相73%變為4相30%，8相70% ; 10-13min流動相由Α相30%，Β相70%變為Α相5%、Β相95%。9. 根據權利要求2所述的檢測煙草制品中抑芽丹含量的方法，其特征在于:質譜的檢測 條件為:ΜΗ:母離子111. 1，子離子42.1-82.1，去簇電壓為-60V，碰撞能為-40-26V;MH-D2: 母尚子113.0,子尚子42.1-84.1，去族電壓為-55V，碰撞能為-46-25V〇10. 權利要求2-9任一所述的檢測煙草制品中抑芽丹含量的方法在檢測煙草制品中抑 芽丹含量中的應用。
【專利摘要】本發明公開了一種液相串聯質譜檢測煙草中抑芽丹含量的方法，1)配制一系列不同濃度的馬來酰胺標準溶液，利用液相色譜串聯質譜方法進行檢測，建立標準曲線；2)將制備得到的煙草樣品利用高效液相色譜串聯質譜的方法進行檢測；3)根據標準曲線計算得到煙草樣品中馬來酰胺的含量。將所述萃取液倒入煙草試樣中，震蕩提取5-20min，超聲提取5-20min后，過濾得上清液即得煙草樣品。該萃取液甲酸甲醇最佳濃度為1％。本發明中的萃取劑對煙草試樣進行萃取，萃取方法簡單，易于操作，大大簡化了樣品預處理工序；本發明的萃取劑對檢測的干擾程度小，保證了煙草中馬來酰胺檢測的準確度。
【IPC分類】G01N30/02, G01N30/06
【公開號】CN105651882
【申請號】
【發明人】徐海濤, 于宏曉, 岳勇, 張東海, 許鍇霖, 鄭軒, 張莎莎, 賀笑非, 管延渠, 陳建軍
【申請人】山東中煙工業有限責任公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2015年12月30日