一種用糖精鈉標準品代替蒜素標準品測定蒜素含量的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種蒜素含量方法，具體涉及一種用糖精鈉標準品代替蒜素標準品測 定蒜素含量的方法。
【背景技術】
[0002] 蒜素（二烯丙基硫代亞磺酸酯Allicin)是大蒜素等硫醚類化合物的前體，是大蒜 破碎后，大蒜中的蒜氨酸(Alliin)經蒜酶(Allinase)酶解，水解而產生的重要的活性物質， 其含量的多少是衡量大蒜及其制品質量和定價的一項重要指標。
[0003] 目前測定蒜與蒜制品中蒜素含量的方法有定硫法、電化學方法、生物檢定方法，薄 層掃描法及紫外法，高效液相色譜法(HPLC)等。其中定硫法、電化學方法不能將蒜素和其它 含硫化合物分開，測定為含硫總量;生物檢定方法是利用蒜素的抗菌活性進行測定，專屬性 差;薄層掃描法為半定量方法;紫外法需要進行衍生化(利用吸收系數法），且衍生化的專屬 性不強，測定的是一類化合物的總和;高效液相色譜法(HPLC)的分離性好、靈敏度高、定量 準確。目前測定蒜與蒜制品中蒜素含量的標準是NY/T 2643-2014《大蒜及制品中蒜素的測 定高效液相色譜法》，該方法使用蒜素對照品，通過樣品中蒜素峰面積與對照品峰面積的比 值換算樣品中蒜素的含量，但由于該方法使用的蒜素標準品性質極不穩定，制備困難，目前 國內購買不到蒜素的對照品，只能從國外購買，且價格比較昂貴、貯存條件要求嚴格。并且 蒜素對照品在打開使用后，其含量隨時間增長逐漸降低，由于蒜素標準品不穩定容易帶來 測試誤差。
【發明內容】
[0004] 針對現有技術的不足，本發明旨在提供一種用糖精鈉標準品代替蒜素標準品測定 蒜素含量的方法，利用糖精鈉作為蒜素標準品的替代對照品，避免蒜素標準品不穩定容易 帶來測試誤差的問題，并且節約成本。
[0005] 為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：
[0006] -種用糖精鈉標準品代替蒜素標準品測定蒜素含量的檢測方法，包括如下步驟：
[0007] S1繪制蒜素標準曲線，得到相關系數超過設定值的線性關系良好的蒜素濃度范 圍；
[0008] S2繪制糖精鈉標準曲線，得到相關系數超過設定值的線性關系良好的糖精鈉濃度 范圍；
[0009] S3根據步驟S1和S2得到的線性關系良好的蒜素濃度范圍和糖精鈉濃度范圍，計算 得到蒜素和糖精鈉之間的校正因子，從而得到蒜素和糖精鈉之間的對應關系；
[0010] S4根據步驟S3得出的校正因子，采用糖精鈉標準品代替蒜素標準品，通過高效液 相色譜法測定待測樣品的蒜素含量。
[0011] 進一步地，步驟S1和步驟S2的設定值可為0.99。
[0012]進一步地，步驟S1的具體方法為:取一定量蒜素標準品溶解稀釋，并制成多種濃度 的上機液，注入高效液相色譜儀，記錄主峰面積，用蒜素的濃度X對蒜素的峰面積Y進行線性 回歸，得線性回歸方程，相關系數r>0.99對應的蒜素濃度范圍即為線性關系良好的蒜素濃 度范圍。
[0013]更進一步地，步驟S1的方法具體為：
[0014] 準確稱取5mg蒜素標準品至10.OOmL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，作為儲 備液A，然后分別吸取501^、1001^、2001^、4001^、8001^、11^、211^儲備液八至51^容量瓶中，分 別用水定容至刻度線，即配制成濃度為511^凡、1〇11^凡、2〇11^凡、4〇11^凡、8〇11^凡、10〇11^凡、 200mg/L的上機液，注入高效液相色譜儀，液相色譜條件按照NY/T 2643-2014《大蒜及制品 中蒜素的測定高效液相色譜法》，進樣量10uL，記錄主峰面積，用蒜素的濃度X對蒜素的峰面 積Y進行線性回歸，得線性回歸方程，Y = 11290X+2139.2，r = 0.9999，即蒜素在5-200mg/L濃 度范圍內，線性關系良好。
[0015] 進一步地，步驟S2的具體方法為:取一定量糖精鈉標準品溶解稀釋，并制成多種濃 度的上機液，注入高效液相色譜儀，記錄主峰面積，用糖精鈉的濃度X對糖精鈉的峰面積Y進 行線性回歸，得線性回歸方程，相關系數r>0.99對應的糖精鈉濃度范圍即為線性關系良好 的糖精鈉濃度范圍。
[0016]更進一步地，步驟S2的具體方法為：
[0017]準確稱取25mg糖精鈉標準品至25.OOmL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，作 為儲備液 B，然后分別吸取 251^、501^、1001^、2001^、4001^、8001^、11^、21^儲備液8至511^容 量瓶中，分別用水定容至刻度線，即配制成濃度為5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L、 160mg/L、200mg/L、400mg/L的上機液，注入高效液相色譜儀，液相色譜條件按照NY/T 2643-2014《大蒜及制品中蒜素的測定高效液相色譜法》，進樣量10uL，記錄主峰面積，用糖精鈉的 濃度X對糖精鈉的峰面積Y進行線性回歸，得線性回歸方程，Y = 6422.2X-1546.3，r = 0.9999，即糖精鈉在5-400mg/L范圍內，線性關系良好。
[0018] 進一步地，步驟S3的具體方法為:分別在蒜素和糖精鈉線性關系良好的濃度范圍 中選擇任意濃度，并準確配置相應濃度的蒜素標準工作溶液和糖精鈉標準工作溶液;然后 將兩標準工作溶液各自注入液相色譜儀，記錄蒜素、糖精鈉主峰面積，蒜素、糖精鈉標準工 作溶液均連續進樣若干次，以蒜素和糖精鈉各自的主峰峰面積除以相對應的濃度計算各自 的響應因子，再以糖精鈉的響應因子比蒜素的響應因子，得到蒜素對糖精鈉的校正因子，從 而得到蒜素和糖精鈉之間的對應關系，即單位質量糖精鈉相當于多少質量的蒜素。
[0019] 進一步地，步驟S4中，高效液相色譜法的液相色譜條件及樣品前處理條件按照NY/ T 2643-2014《大蒜及制品中蒜素的測定尚效液相色譜法》中的標準，具體步驟為：
[0020] 4.1)測定:在步驟S2得到的糖精鈉線性關系良好的濃度范圍之內選取濃度Ao作為 糖精鈉標準工作溶液質量濃度;稱取一定質量的試料m按照NY/T 2643-2014的標準前處理 定容V得到待測液，注意要使待測液中蒜素含量在步驟S1中得到蒜素線性關系良好的濃度 范圍內；然后分別取適量待測液和糖精鈉標準工作溶液，注入高效液相色譜儀，以色譜峰面 積定量，記錄待測液的主峰面積為A，糖精鈉標準工作溶液的主峰面積為A〇;
[0021] 4.2)結果計算：
[0022]待測液中蒜素的含量P為:P = apQA/AQ;a表示步驟S3中得到的糖精鈉與蒜素的校正 因子；
[0023 ]待測樣品中蒜素的含量W為W=pV/m，V為定容體積;m為試料質量。
[0024]本發明的有益效果在于:采用糖精鈉標準品代替蒜素標準品檢測蒜素含量避免了 蒜素標準品在配制后由于不穩定所帶來的試驗誤差，且由于糖精鈉標準品價格遠比蒜素標 準品便宜、易購買，也節約了成本。另外，在本發明實驗條件下，蒜素標樣和糖精鈉標樣的出 峰時間相近，且分離度好，準確性高。
【附圖說明】
[0025]圖1為本發明實施流程圖；
[0026]圖2為蒜素標準曲線示意圖；
[0027]圖3為糖精納標準曲線不意圖；
[0028]圖4為100mg/L蒜素標準工作溶液圖譜；
[0029]圖5為100mg/L糖精鈉標準工作溶液圖譜；
[0030]圖6為鮮蒜樣品圖譜。
【具體實施方式】
[0031]以下將結合附圖對本發明作進一步的描述，需要說明的是，本實施例以本技術方 案為前提，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發明的保護范圍并不限于本實 施例。
[0032] 如圖1所示，一種用糖精鈉標準品代替蒜素標準品測定蒜素含量的方法包括如下 步驟：
[0033] S1蒜素標準曲線的繪制，得到相關系數超過設定值的線性關系良好的蒜素濃度范 圍。
[0034]準確稱取5mg蒜素標準品至10.OOmL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，作為儲 備液A，然后分別吸取501^、1001^、2001^、4001^、8001^、11^、211^儲備液八至51^容量瓶中，分 別用水定容至刻度線，即配制成濃度為511^凡、1〇11^凡、2〇11^凡、4〇11^凡、8〇11^凡、10〇11^凡、 200mg/L的上機液，注入高效液相色譜儀，液相色譜條件按照NY/T 2643-2014《大蒜及制品 中蒜素的測定高效液相色譜法》，進樣量10uL，記錄主峰面積，用蒜素的濃度(X)對蒜素的峰 面積(Y)進行線性回歸，得線性回歸方程，Y = 11290X+2139.2(r = 0.9999)，如圖2所示。說明 蒜素在5-200mg/L范圍內，線性關系良好。
[0035] S2糖精鈉標準曲線的繪制
[0036]準確稱取25mg糖精鈉標準品至25.00mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，作 為儲備液 B，然后分別吸取 251^、501^、1001^、2001^、4001^、8001^、11^、21^儲備液8至511^容 量瓶中，分別用水定容至刻度線，即配制成濃度為5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L、 160mg/L、200mg/L、400mg/L的上機液，注入高效液相色譜儀，液相色譜條件按照NY/T 2643-2014《大蒜及制品中蒜素的測定高效液相色譜法》，進樣量10uL，記錄主峰面積，用糖精鈉的 濃度(X)對糖精鈉的峰面積(Y)進行線性回歸，得線性回歸方程，Y = 6422.2X-1546.3(r = 0.9999)，如圖3所示。說明糖精鈉在5-400mg/L范圍內，線性關系良好。
[0037] S3上述結果表明蒜素在5-200mg/L的濃度范圍內，糖精鈉在5-400mg/L的濃度范圍 內，可用任一濃度溶液進行二者校正因子的測定。
[0038] 準確配制線性范圍內（即在步驟S1和步驟S2得到的線性良好的濃度范圍內各選取 一個濃度值，為了計算方便，本實施例中均采用l〇〇mg/L)的蒜素標準工作溶液和糖精鈉標 準工作溶液。制備得到的蒜素標準工作溶液和糖精鈉標準工作溶液圖譜分別如圖4、圖5所 示。注入液相色譜儀，進樣量10uL，記錄蒜素、糖精鈉主峰面積，蒜素標準工作溶液、糖精鈉 標準工作溶液均連續進樣5次，以蒜素和糖精鈉各自的主峰峰面積除以相對應的濃度計算 各自的響應因子，再以糖精鈉的響應因子比蒜素的響應因子計算蒜素對糖精鈉的校正因 子，結果見表1。
[0039] 表 1
[0040]