一種改善陽虛和/或緩解疲勞類化學物質的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于食品、藥品或保健品分析領域，尤其涉及一種改善陽虛和/或緩解疲勞 類化學物質的檢測方法。
【背景技術】
[0002] 隨著現代社會生活壓力的逐漸增大，越來越多的人面臨性欲減弱、易疲勞的困擾， 因此，改善陽虛、緩解疲勞類保健食品及中成藥的市場需求日益增長。然而，某些不法廠商 為了壯陽、緩解疲勞功效、牟取暴利，在改善陽虛、緩解疲勞的保健食品及中成藥中非法添 加壯陽和緩解疲勞的西藥。消費者長期服用含有壯陽或緩解疲勞類藥物的保健食品或中成 藥，會嚴重營養身體健康。
[0003] 現有技術中，常見的檢測手段主要包括:薄層色譜法、高效液相色譜(HPLC)法、高 效液相色譜一質譜/質譜(HPLC-MS/MS)法、氣相色譜氮磷檢測法和氣相色譜一質譜(GC- MS)法，但此類檢測手段多見于某一類藥物在尿樣或血樣中的分析，在未見有系統的、多類 化學成分的研究方法，尤其是壯陽、緩解疲勞保健食品和中成藥中的檢測方法報道。由于前 處理方法及分析方法的局限性，大多數研究只是檢測壯陽類中的某一種或者某幾種化學成 分。綜上所述，現有技術中，并未能對于壯陽和/或緩解疲勞類化學物質進行多指標完整的 檢測，且上述檢測手段還具有成本高、檢測時間長以及工作效率低的缺點。
[0004] 因此，研發出一種改善陽虛和/或緩解疲勞類化學物質的多指標快速檢測方法，成 為了本領域技術人員亟待解決的問題。
【發明內容】
[0005] 本發明提供了一種改善陽虛和/或緩解疲勞類化學物質的檢測方法，用于解決現 有技術中，并未能對于改善陽虛和/或緩解疲勞類化學物質進行多指標完整的檢測的問題。 同時，本發明提供的檢測方法還可以解決現有技術中且成本高、檢測時間長以及工作效率 低的缺點。
[0006] 本發明提供的一種改善陽虛和/或緩解疲勞類化學物質的檢測方法，為:步驟一、 待測樣品經C18固相萃取柱純化，收集洗脫液A;步驟二、所述洗脫液A經季胺固相萃取柱純化 后，先用去離子水和甲醇沖洗，收集洗脫液B;繼續用含1 %HC1的甲醇溶液沖洗，收集洗脫液 C;步驟三、所述洗脫液B經羧酸固相萃取柱純化，先用去離子水和甲醇淋洗，棄去流出液;繼 續用5%的氨水甲醇溶液沖洗，收集洗脫液D;步驟四、合并所述洗脫液C和所述洗脫液D，水 浴氮氣吹干，甲醇定容后，微孔濾膜過濾，得待測品；步驟五、所述待測品通過高效液相色 譜-三重四級桿方法進行定性檢測和/或定量檢測。
[0007] 優選地，所述C18固相萃取柱的基質為硅膠-Si (CH3 )C18H37，所述C18固相萃取柱 的粒徑為40_63以111，所述(：18固相萃取柱的孔徑為60人，所述〇18固相萃取柱的含碳量11%。
[0008] 優選地，所述季胺固相萃取柱的基質為鍵合有三甲基氨丙基的高純硅膠，所述季 胺固相萃取柱的粒徑為40~63nm，所述季胺固相萃取柱的孔徑為6〇A，所述季胺固相萃取 柱的孔體積為〇.8cm3/g，所述季胺固相萃取柱的比表面積為480m2/g，所述季胺固相萃取柱 的離子交換容量為l.lmeq/g。
[0009] 優選地，所述羧酸固相萃取柱的基質為N-乙基吡咯烷酮-二乙烯基苯共聚物，所述 羧酸固相萃取柱粒徑為40~63μπι，所述羧酸固相萃取柱的平均孔徑為7〇A，所述羧酸固相 萃取柱的離子交換容量為1.4meq/g。
[0010] 優選地，所述水浴溫度為40°C，所述微孔濾膜為0·22μπι微孔濾膜。
[0011] 優選地，所述定性檢測和/或定量檢測的對照品為o.lmg/ml的偽伐地那非、羥基豪 莫西地那非、豪莫西地那非、硫代艾地那非、那紅地那非、那莫西地那非、鹽酸育亨賓、氨基 他達拉非、紅地那非、西地那非、伐地那非、他達那非、巰基西地那非、去乙基伐地那非、N-去 甲基西地那非、二甲基西地那非、格列齊特、二乙氨基他達拉非、羥基伐地那非和甲磺酸酚 妥拉明的甲醇溶液中的一種或多種。
[0012] 優選地，所述待測品的定性檢測和/或定量檢測采用梯度洗脫方法，所述梯度洗脫 的流動相為體積濃度0.1 %的甲酸水溶液和體積濃度0.1 %的甲酸乙腈溶液的中的一種或 二者的混合溶液;進樣0~5min時，流動相1的配比為90 %所述甲酸水溶液和10 %所述甲酸 乙腈溶液的混合溶液;進樣5~7.5min時，流動相2為所述乙酸乙腈溶液;進樣7.5min后，流 動相3的配比為90%所述甲酸水溶液和10%所述甲酸乙腈溶液的混合溶液。
[0013] 優選地，所述待測品的定性檢測和/或定量檢測采用電噴霧離子源，正離子模式進 行檢測；電噴霧電壓為5.5KV，離子源溫度為550°C;脫溶劑氣為N2,所述脫溶劑氣的氣流壓 力為50psi ;錐孔反吹氣為N2，所述錐孔反吹氣的氣流壓力為35psi ;碰撞氣為N2;掃描模式 為多反應監測模式。
[0014] 優選地，所述檢測方法還包括預處理步驟，所述預處理在步驟一前進行:所述預處 理的方法為:待測樣品依次經粉碎、醇提后過濾，收集上清液，所述上清液減壓濃縮后，靜 置，靜置產物中滴加醇溶液，離心取上清液，減壓濃縮，靜置即得。
[0015] 本發明還提供了包括以上任意一項所述的檢測方法在改善陽虛和/或緩解疲勞類 化學物質的定性檢測和/或定量檢測中的應用。
[0016] 綜上所述，本發明提供的一種改善陽虛和/或緩解疲勞類化學物質的檢測方法， 為:步驟一、待測樣品依次經粉碎、醇提后過濾，收集上清液，所述上清液減壓濃縮后，第一 次靜置，得第一產物;步驟二、向所述第一產物中滴加醇溶液，離心取上清液，減壓濃縮，第 二次靜置，得第二產物;步驟三、所述第二產物經C 18固相萃取柱純化，收集洗脫液A;步驟四、 所述洗脫液A經季胺固相萃取柱純化后，先用去離子水和甲醇沖洗，收集洗脫液B;繼續用含 1%HC1的甲醇溶液沖洗，收集洗脫液C;步驟五、所述洗脫液B經羧酸固相萃取柱純化，先用 去離子水和甲醇淋洗，棄去流出液;繼續用5 %的氨水甲醇溶液沖洗，收集洗脫液D;步驟六、 合并所述洗脫液C和所述洗脫液D，水浴氮氣吹干，甲醇定容后，微孔濾膜過濾，得待測品。步 驟七、待測品通過高效液相色譜-三重四級桿方法進行定性檢測和/或定量檢測。從本方案 可以清楚的得出，本發明提供的檢測方法，可以有效地解決現有技術中，并未能對于改善陽 虛和/或緩解疲勞類化學物質進行多指標完整的檢測的問題。同時，本發明提供的檢測方 法，還可以解決現有技術中且成本高、檢測時間長以及工作效率低的缺點。
【附圖說明】
[0017] 為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現 有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本 發明的實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據 提供的附圖獲得其他的附圖。
[0018] 圖1為本發明實施例檢測對照品的總離子流圖譜；
[0019] 圖2為本發明實施例1樣品的總離子流圖譜；
[0020] 圖3為本發明實施例2樣品的總離子流圖譜。
【具體實施方式】
[0021] 下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施 例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通 技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范 圍。
[0022]為了更詳細說明本發明，下面結合實施例對本發明提供的一種改善陽虛和/或緩 解疲勞類化學物質的檢測方法，進行具體地描述。
[0023]本發明提供的一種改善陽虛和/或緩解疲勞類化學物質的檢測方法，最低檢出限 量達0.5ng/ml。此外，由于保健食品基質復雜，本發明提供的前處理方法，能有效提取20種 目標成分，便于目標成分的高效檢測。
[0024] 實施例1
[0025] 分別稱取偽伐地那非、羥基豪莫西地那非、豪莫西地那非、硫代艾地那非、那紅地 那非、那莫西地那非、鹽酸育亨賓、氨基他達拉非、紅地那非、西地那非、伐地那非、他達那 非、巰基西地那非、去乙基伐地那非、N-去甲基西地那非、二甲基西地那非、格列齊特、二乙 氨基他達拉非、羥基伐地那非和甲磺酸酚妥拉明對照品各2.5mg，分別加甲醇定溶到25ml， 制成最終濃度為〇. lmg/ml的對照品溶液。
[0026]利用Waters超高效液相色譜-三重四級質譜聯用儀對上述制得的對照品溶液進行 檢測分析。監測分析具體的實驗參數設定為：
[0027]高效液相色譜儀:Waters超高效液相色譜-三重四級質譜聯用儀；
[0028] 色譜柱:Waters BEH C18,2.1*100mm，1.8ym;
[0029] 柱溫:室溫；
[0030] 進樣體積：5yL;
[0031] 流速:0.3mL/min;
[0032] 流動相A為含有0.1 % (v/v)甲酸的水溶液，流動相B為含有0.1 % (v/v)甲酸的乙腈 溶液。按照表1所述的流動相比例進行梯度洗脫：
[0033] 表1:流動相比例
[0034]
[0035] 采用電噴霧離子(ESI)源，正離子模式進行檢測。電噴霧電壓（IS) :5.5kV;離子源 溫度：550°C;脫溶劑氣和錐孔反吹氣為N2,脫溶劑氣流壓力50psi;錐孔反吹氣