0032] 實施例2:地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis)H43的形態和生理生化特征
[0033] 1.試驗方法
[0034] 參照《Bergey's Mannual of Syetematic Bacteriology》的實驗方法進行，檢測 其革蘭氏染色，菌體大小和形態、生長溫度、生長pH范圍、化Cl耐受性、淀粉水解、脂肪酶活 性、V-P、甲基紅、葡萄糖產酸實驗。
[0035] 2.試驗結果
[0036] 結果表明：該菌革蘭氏染色呈陽性，顯微鏡下呈排列呈桿狀，兼性好氧，生長溫度 40-60°C，生長抑范圍為6-9，化Cl耐受性為ο %-4%，V-P為陽性、甲基紅實驗為陰性，可W利 用葡萄糖產酸、水解淀粉、利用橄攬油乳化生產脂肪酶等。
[0037] 實施例3:地衣芽抱桿菌(Bacillus lichenifo;rmis)H43菌株的16sDNA鑒定：
[0038] 1.供試菌株:本發明地衣芽抱桿菌(Bacillus lichenifo;rmis)H43
[0039] 2.試驗方法：
[0040] ①獲得活性良好的細菌:先將H43的菌株復蘇，取lOOuL凍存液注入lOmLLB液體培 養基，55°C，leOrpm搖床培養12-24h。將搖出來的菌液劃線培養，55°C恒溫箱培養2地，挑取 平板上的單克隆，接種到LB液體培養基的試管里搖床55°C，160巧m培養12-2地。
[0041 ] ②細菌DNA提取法(Takara試劑盒）
[0042] ③細菌16S rDNA擴增
[0043] 所用引物：Seq forward 5'-GAGCGGATAACAATTTCACACAGG-3'
[0044] Seq reverse 5'-CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3'
[0045] 鑒定結果于說明書附圖2
[0046] 實施例4:地衣芽抱桿菌(Bacillus lichenifo;rmis)H43菌株對原油的降解試驗
[0047] 1.供試菌株:本發明地衣芽抱桿菌(Bacillus lichenifo;rmis)H43 [004引 2.試驗方法：
[0049] 將供試菌株在LB平板上活化，挑取單菌落接入50mL LB液體培養基中55Γ培養至 對數生長期。實驗組W1%的接種量接種培養好的菌液至裝有lOOmLW原油(0.5g)為碳源的 無機鹽降解基礎培養基(成分與實施例1相同），未接菌的含油培養基為對照組，實驗組、對 照組各Ξ瓶。55°C(160rpm)培養7d，取出后用四氯化碳萃取，使用紫外分光光度計測0D282， 原油降解率=(對照組0D28廣實驗組0D282)/對照組0D282 X 100%。
[0050] 3.結果分析:在55°C培養7天，H43對原油的降解率為46 %，說明地衣芽抱桿菌可高 效降解原油。
[0化1] 實施例5:地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis)H43的GC-MS試驗 [0052] 1.供試菌株:本發明地衣芽抱桿菌(Bacillus lichenifo;rmis)H43菌株
[0053] 2.所用培養基:無機鹽培養基，微量元素培養基，LB培養液，原油0.5g
[0054] 3.試驗方法（1)將分離到的石油控降解菌株接種于LB培養基中，55°C培養12h，至 對數生長期，按1%接種量加入lOOmLW原油為唯一碳源的無機鹽液體培養基中，做3個重 復，同時做Ξ個不接菌對照。未加菌液的作為空白對照組。
[0055] (2)置于55°C恒溫搖床上16化/min培養7、14和21d。培養結束后，整瓶提取殘留石 油控，測定石油控含量，并用GC/MS檢測石油控成分變化規律。
[0056] 4.試驗結果:如下表
[0057] 表2:H43菌株對不同長度石油控的降解效率
[0化引
[0059] 結果分析：地衣芽抱桿菌可降解C14-C27之間的正構燒控，且降解率在43%到 66%。
[0060] 實施例6:地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis)H43菌株改變原油粘度的試驗
[0061 ] 1.供試菌株:本發明地衣芽抱桿菌(Bacillus lichenifo;rmis)H43菌株
[0062] 2.試驗方法:將供試菌株在LB平板上活化，挑取單菌落接入50ml LB液體培養基中 55°C過夜培養至對數生長期。W10%接種量接種培養好的菌液至100ml W原油(2%)為碳源 的無機鹽降解基礎培養(成分與實施例1相同）的Ξ角瓶中。55°C搖床培養（150rpm)培養7 天，將石油原油與發酵液和菌分離并脫水，利用馬爾文Kinexus Pro測定原油粘度和剪切速 率隨時間的變化。
[0063] 3.試驗結果：
[0064] 加入試驗菌株地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis化43之后，降低了原油粘 度，增加了原油的流動性。另外，原油粘度隨著剪切速率的增大而減小，且當剪切速率增大 到某個值之后，原油粘度基本保持不變。
【主權項】
1. 本發明從石油烴污染土壤中分離獲得一株耐熱地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis)可以高效降解石油烴。本發明還公布了地衣芽孢桿菌菌株處理高溫含油污 水的方法。2. 權利要求1利用地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)處理污水的溫度范圍為45 ~60°C 〇3. 權利要求1利用地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)產耐高溫脂肪酶。4. 權利要求1利用地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis) 12h處理高溫含油廢水的 新技術，其石油烴去除率達89.8%。5. 權利要求1所述地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)的處理高溫含油污水的營 養劑包括無機鹽、微量元素和LB培養基的復合培養基。6. 權利要求1所述的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)具有降低石油粘度，改 變原油流動性的能力。
【專利摘要】本發明公開了一株中等嗜熱地衣芽孢桿菌及其在處理高溫含油污水中的應用。本發明從中石化華東分公司泰州采油廠石油污染土壤中分離獲得一株地衣芽孢桿菌屬菌株，菌落直徑為4-5mm，菌落形態呈圓形，邊緣整齊，表面濕潤光滑，淺黃色；油鏡下菌體呈短桿狀，革蘭氏陽性菌，中生芽孢，無運動性；生長溫度在40-60℃，最適生長溫度50℃，V-P試驗、番紅染色均為陽性，產耐高溫脂肪酶，發酵液可水解淀粉，產酸，16sDNA鑒定為地衣芽孢桿菌(Bacillus？licheniformis)。本發明還公布了地衣芽孢桿菌菌株(Bacillus？licheniformis)處理高溫含油污水的應用。實驗結果表明，本發明地衣芽孢桿菌菌株能高效降解石油烴類，應用于高溫(45-60℃)含油污水的處理可降低能源浪費，同時可減少冷卻過程中的芳香烴揮發帶來的環境污染。
【IPC分類】C12N1/20, C12R1/10, C12N9/20, C02F3/34
【公開號】CN105670956
【申請號】
【發明人】羅明志, 閆筱, 王悅, 鄧林紅, 陳皓, 程旺林, 姚紅生
【申請人】常州大學
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2015年10月29日