加入0. 5血70 %己醇 清洗沉淀物，4°C，12000 X g離必5分鐘，棄上清液，此步驟重復一次；得到的沉淀物自然風 干，加入20 μ L無菌超純水回溶，電泳檢測，-2(TC保存。
[001 引（2)PCR 擴增 本實施例同時檢測RS16892496和RS7832552。每個SNP的檢測需要一對上下游引物、 兩條多態引物共4條PCR引物，共需要8條引物。每個SNP的檢測需要做兩管PCR擴增，為 防止出現假陽性之類的反應，衡量PCR是否成功，加設一管陰性對照組，共做5管PCR，所 述陰性對照組基因組模板及反應體系是一樣的，但沒有引物存在。
[0017] 根據不同的檢測位點，用相應的引物按如下比例分別配制PCR反應體系： 2.5μ 110XPCR緩沖液，2μ 1 dNTPs，0.5u 1引物組，熱啟動Taq酶0. 15μ 1，基因組模板 80mg，添加超純水至總體積為25 μ 1。
[0018] 將裝有反應溶液的化pendorf試管放入ΑΒΙ 9700 PCR儀中，設置反應條件如下： 預變性 95°C 3min ;熱循環 94°C 30s，6(TC 30s，72°C 30s，35 個循環；延伸 72°C 3min。反應 結束后，取出試管。
[001引由于5管PCR擴增反應是在同一臺PCR儀上同步進行的，為了實現檢測的高 效性、特異性，要求8條PCR引物的Tm值相近，為此需要先進行大量的DNA序列軟件分析來 設計PCR引物，并通過大量的實驗來進行Tm值的優化并確定設計的合理性，本試劑盒各基 因 SNP多態性的檢測是既相對獨立又相互聯系的，不可分割。
[0020] (3 )瓊脂糖凝膠電泳檢測 將擴增后的產物進行瓊脂糖電泳檢測，過程如下；3g瓊脂糖，加入lOOmL去離子水，微 波爐加熱Imin，冷卻到6(TC時加入5 μ L Goldview染色液，制成3%的瓊脂糖凝膠。PCR產 物10 μ L與6 X T邸緩沖液0. 8 μ L混合上樣，電壓100V電泳15min。紫外燈下讀取結果并 拍照，所得瓊脂糖電泳檢測圖如圖1所示。
[0021] 檢測得到2個基因分型分析結果如下=
根據W上分型結果，該測試者的基因對基礎代謝率的貢獻值（Y)為： 2. 7巧.55=5. 25KG。依據是 RS16892496 GG〉TG/TT GG 型的 LBM 比 TT 和 TG 型的多 2. 7KG, RS7832552 TT型比TC和CC型的LBM多2. 55KG。然后依據W下公式： 男性；LBM = (0. 32810 * W) + (0. 33929 * H) - 29. 5336巧 女性：LBM =( 0.29569 * W) + (0.41813 * H) - 43. 2933巧 BMR=P 化cal/day)=370+(21. 6*LBM) 該測試者是男性，因此計算得出其BMR=1837kcal/day。對其日常生活中的能量消耗可 依據下表計算： 極少或不運動 Daily kilocalories needed = BMR X 1. 2 較輕度的鍛煉（1 - 3 天 / 每周）Daily kilocalories needed = BMR X 1. 375 中度鍛煉（3 - 5 天 / 每周）Daily kilocalories needed = BMR X 1. 55 重度鍛煉化-7 天 / 每周）Daily kilocalories needed = BMR X 1. 725 極重度鍛煉（每天兩次）Daily kilocalories needed = BMR X 1. 9 如該男日常只從事較輕度的鍛煉，則其每天的能量消耗大約為： 1723*1. 375=252化cal。
[0022] W上所述僅為本發明的較佳實施例，并不用W限制本發明，凡在本發明的精神和 原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1. 基礎代謝率基因檢測試劑盒，包括盒體及盒體內單獨存放的試劑，其特征在于：存 放的試劑包括： (1) 針對2個基因 SNP多態位點的PCR反應引物組： 針對SNP RS16892496的引物組： 5, -GTTGAAGAGCAAGCCCCCA-3' 5' -GTGACTTGTACCCACG-3' 5' -GAACCAATAATACTCTCCTC-3' 5' -CATTTGGAATGGAAAC-3' 針對SNP RS7832552的引物組： 5' -GTGATAGTGTGAGGTAC-3' 5' -GTTTATTAAGAGCATTCA-3' 5' -ATCTTTAAAGAATTCTAG-3' 5' -TGCATTGGATTTTG-3' (2) PCR擴增試劑； (3) 瓊脂糖凝膠電泳分析試劑。2. 根據權利要求1所述的基礎代謝率基因檢測試劑盒，其特征在于：所述引物用量均 為 0· 5-1. Ομ 1〇3. 根據權利要求1所述的基礎代謝率基因檢測試劑盒，其特征在于：所述PCR擴增試 劑包括：10XPCR緩沖液，dNTPs，熱啟動Taq酶，基因組模板。4. 根據權利要求3所述的基礎代謝率基因檢測試劑盒，其特征在于：所述PCR緩沖液 包含：100mM Tris-HCl pH8.3,500mM KCl，15mM MgCl2。5. 根據權利要求3所述的基礎代謝率基因檢測試劑盒，其特征在于：所述PCR擴增 試劑用量為：l〇XPCR緩沖液2. 5μ 1，dNTPs2l·! 1，熱啟動Taq酶0. 1-0. 2μ 1，基因組模板 50-100ng〇6. 根據權利要求1所述的基礎代謝率基因檢測試劑盒，其特征在于：所述瓊脂糖凝膠 電泳分析試劑包括：瓊脂糖、TAE緩沖液、DNA分子量標準、DNA無毒染料和DNA上樣緩沖 液。7. 根據權利要求6所述的基礎代謝率基因檢測試劑盒，其特征在于：所述DNA無毒染 料優選Biotium Gelred無毒染料。8. 根據權利要求1所述的基礎代謝率基因檢測試劑盒，其特征在于：首先依據基因分 型結果計算LBM相關基因對基礎代謝率的總貢獻值為各基因對基礎代謝率貢獻值之和，其 單位是公斤。9. 根據權利要求8所述的計算方法，其特征在于：各基因對體重的貢獻值為依分型的 具體結果而定。10. 根據權利要求1、8和9,依據公式計算BMR，其特征在于該計算方法考慮到了基因的 影響。
【專利摘要】本發明提供了人體BMR（基礎代謝率）基因檢測試劑盒，該試劑盒包括盒體及盒體內單獨存放的試劑，試劑包括：（1）針對2個基因SNP多態位點的PCR反應引物組（2）PCR擴增試劑（3）瓊脂糖凝膠電泳分析試劑。本發明通過PCR引物的設計使多個PCR擴增反應可在同一臺PCR儀上同步進行，對受測者的相關基因進行檢測，并實現檢測的高效性、特異性，分析得到其BMR的遺傳因素，從而為受測者獲得一個合適的健康方案，了解自身的代謝水平，指導其科學合理的運動強度和日常飲食管理，在健身運動和減肥中采取相應的策略避免對其無效甚至是有害的方法。
【IPC分類】C12Q1/68
【公開號】CN105671133
【申請號】
【發明人】李則軒, 范家成, 盧駿, 別茜, 張靜靜, 朱軼凡, 張舒, 邱嘉銘
【申請人】武漢白原科技有限公司, 湖北省體育科學研究所
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2014年11月17日...