評估人體最大心跳、目標心跳的檢測試劑盒和計算方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及基因檢測，具體涉及人體最大必率基因檢測試劑盒。
【背景技術】
[0002] 人體在進行運動負荷時，隨著運動量的增加，耗氧量和必率也增加，在最大負荷 強度時，耗氧量和必率不能繼續增加時必率達到的最高水平，即最大必率。因此在測定最 大工作能力和最大耗氧量時，最大必率是一個重要的參考依據。目前最流行的理論最大必 率計算公式為：最大必率=220-實際年齡。
[0003] 相關的，為了提高必血管系統的有氧耐力水平，運動時必率必須保持在一個正常 的范圍內，即祀必率，而由最大必率可W推導出人體在運動時的有氧必跳區間，目標必率 等。如果必率過高，會對身體健康不利，導致惡必、頭暈、胸悶，糖尿病患者則會使血糖急劇 降低，而且減脂效果也不好，必率低對身體沒有危害，但是鍛煉效果不好。
[0004] 同時，很多研究表明，體內基因控制必跳信號，因此，為了更好更科學的指導運動 健身和訓練，準確理解個體的必跳遺傳因素，計算合理的必率區間和目標必率，都要求我們 從基因的水平加 W檢測。
【發明內容】
[0005] 有鑒于此，本發明提供了一種人體最大必率基因檢測試劑盒，該試劑盒對受測者 的相關基因進行檢測，分析得到其體內最大必率的遺傳因素，為受測者獲得一個合適在健 身運動時合理的必跳范圍，評估相應必臟健康風險，采取相應的策略避免對其無效甚至是 有害的方法。同時也為專業運動員提供訓練階段的必率指標。且PCR擴增反應在同一臺 PCR儀上同步進行并具備檢測的高效性、特異性。
[0006] -種最大必率基因檢測試劑盒，包括盒體及盒體內單獨存放的試劑，存放的試劑 包括： (1)針對4個基因 SNP多態位點的PCR反應引物組： 針對SNP RS9398652的引物組： 5' -CATATAGAGCTTTATTTCAA-3' 5' -GAAATCAGAATAGATTTG-3, 5' -GACCTTTATCATGTC-3' 5' -AACCACACGCTCACCTTAG-3' 針對SNP RS11154022的引物組： 5' -CAGAGGCTTGGGAGGA-3, 5' -CCACCTCCCTCTTTC-3' 5' -GGAAGACAAATGTTAC-3' 5' -CTGGGATTACAGGC-3' 針對SNP RS452036的引物組： 5' -CCTGCAACCACCCAA-3' 5' -GTCTAGAGCCCCAC-3' 5' -ACAAACAAGACCGGAATG-3, 5' -TCTGCAGGTGACCCTGG-3' 針對SNP RS223116的引物組： 5' -CCCTATTCCCAAACAA-3' 5, -gtATTTGTAGTAACAAGTAC-3^ 5' -GCCTTTGGAGATCTC-3' 5' -TGCTTAGTCCTCCTC-3' 2)PCR擴增試劑； (3)瓊脂糖凝膠電泳分析試劑。
[0007] 本發明提供的最大必率基因檢測試劑盒的有益效果是；通過PCR引物的設計使多 個PCR擴增反應在同一臺PCR儀上同步進行，對受測者的相關基因進行檢測，并實現檢測的 高效性、特異性，分析得到其體內最大必率的遺傳因素，為受測者獲得一個合適在健身運動 時合理的必跳范圍，評估相應必臟健康風險，采取相應的策略避免對其無效甚至是有害的 方法。同時也為專業運動員提供訓練階段的必率指標。【附圖說明】 圖1是反應產物瓊脂糖凝膠電泳圖。
【具體實施方式】
[000引最大必率基因檢測試劑盒，包括盒體及盒體內單獨存放的試劑，存放的試劑包 括： (1)針對4個基因 SNP多態位點的PCR反應引物組： 針對SNP RS9398652的引物組： 5' -CATATAGAGCTTTATTTCAA-3' 5' -GAAATCAGAATAGATTTG-3, 5' -GACCTTTATCATGTC-3' 5' -AACCACACGCTCACCTTAG-3' 針對SNP RS11154022的引物組： 5' -CAGAGGCTTGGGAGGA-3, 5' -CCACCTCCCTCTTTC-3' 5' -GGAAGACAAATGTTAC-3' 5' -CTGGGATTACAGGC-3' 針對SNP RS452036的引物組： 5' -CCTGCAACCACCCAA-3' 5' -GTCTAGAGCCCCAC-3' 5' -ACAAACAAGACCGGAATG-3, 5' -TCTGCAGGTGACCCTGG-3' 針對SNP RS223116的引物組： 5' -CCCTATTCCCAAACAA-3' 5, -gtATTTGTAGTAACAAGTAC-3^ 5' -GCCTTTGGAGATCTC-3' 5' -TGCTTAGTCCTCCTC-3' (2) PCR擴增試劑； (3) 瓊脂糖凝膠電泳分析試劑。
[0009] 下面將結合實施例對本發明提供的方法予W進一步的說明。
[0010] 受測者年齡30周歲，自測安靜必率70bpm。本實施例對測試者采用最大必率、目標 必率基因檢測試劑盒同時檢測4個基因的SNP多態位點，并根據基因分型結果，分析得到 其體內最大必率的遺傳因素，為受測者獲得一個合適在健身運動時合理的必跳范圍，評估 相應必臟健康風險，采取相應的策略避免對其無效甚至是有害的方法。同時也為專業運動 員提供訓練階段的必率指標。
[0011] 使用到的低密度脂蛋白基因檢測試劑盒內試劑由W下組成： (1) 針對4個基因 SNP多態位點的PCR反應引物組： 針對SNP RS9398652的引物組： 5' -CATATAGAGCTTTATTTCAA-3' 5' -GAAATCAGAATAGATTTG-3, 5' -GACCTTTATCATGTC-3' 5' -AACCACACGCTCACCTTAG-3' 針對SNP RS11154022的引物組： 5' -CAGAGGCTTGGGAGGA-3, 5' -CCACCTCCCTCTTTC-3' 5' -GGAAGACAAATGTTAC-3' 5' -CTGGGATTACAGGC-3' 針對SNP RS452036的引物組： 5' -CCTGCAACCACCCAA-3' 5' -GTCTAGAGCCCCAC-3' 5' -ACAAACAAGACCGGAATG-3, 5' -TCTGCAGGTGACCCTGG-3' 針對SNP RS223116的引物組： 5' -CCCTATTCCCAAACAA-3' 5, -gtATTTGTAGTAACAAGTAC-3^ 5' -GCCTTTGGAGATCTC-3' 5' -TGCTTAGTCCTCCTC-3' (2) PCR擴增試劑；10XPCR緩沖液，該PCR緩沖液為100mMTris-肥lp冊.3,500mM KCl，15mM MgC12 ;dNTPs混合物，該dNTPs混合物為Η磯酸鳥嘿嶺脫氧核巧酸dGTP，Η磯 酸腺嘿嶺脫氧核巧酸dATP，Η磯酸胸腺嚼巧脫氧核巧酸dTTP，Η磯酸胞嚼巧脫氧核巧酸 dCTP四種核巧酸，各組分濃度為2. 5mM ;5υ/μ 1熱啟動Taq酶。
[001引（3)瓊脂糖凝膠電泳分析試劑諒脂糖、TAE緩沖液、DNA分子量標準、Goldview 染色液和DM上樣緩沖液，該緩沖液W漠酪藍為指示劑稀釋至IX后使用。
[0013] 使用上述最大必率基因檢測試劑盒按如下步驟進行檢測： (1)提取樣本基因組DNA。
[0014] 采集該測試者唾液，向l-2ml唾液樣品中加入500ul提取緩沖溶液，該DNA提取 緩沖溶液溶劑為50mM的化is-肥1 pH7. 4、0. 5mM的邸TA和50mM的化C1，反復吹打混勻 后，8000Xg離必5分鐘，棄去上清，此步驟重復一次；得到的沉淀中加入500ul裂解液， 該裂解液溶劑為 50mM Tris-肥 1 pH7. 4,50mM Tris-肥 1 pH7. 4，150mM 化Cl，lmM 邸TA，1% Triton χ-100，1% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS,蛋白酶 K20mg/mL,徹底懸浮沉淀并 充分混勻后，室溫放置30分鐘，期間來回顛倒離必管數次；得到的混合液中，加入濃度為 lOmg/mLRNA酶的水溶液10 μ L，37°C下靜置lOmin ;得到的上清液中，加入等體積苯酪-氯 仿混合溶液，苯酪和氯仿體積比為1 : 1，充分混勻，混合液4°C，12000Xg離必5分鐘，上清 液移入干凈離必管內；加入等體積