人體lbm（瘦體重）檢測試劑盒和方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及基因檢測，具體涉及人體LBM基因檢測試劑盒。
【背景技術】
[0002] 肥胖是身體成分發生了變化，身體成分是指人的所有組織器官的總成分，它的單 位就是體重，分成脂肪和非脂肪兩種成分。前者稱為脂體重(或稱肥體重)，后者稱為瘦體重 (或稱去脂體重)，亦稱"去脂體重"（化t-化ee body),為除脂肪W外身體其他成分的重量， 肌肉是其中的主要部分。
[000引"瘦體重"由身體細胞重量（BCW)、細胞外水分（ECW)、和去脂的固體部分（FFS)組 成。其主要成分是骨骼、肌肉等。正常情況，瘦體重與身體脂肪含量有一定比例。測量瘦體 重對促進能量轉換和耗氧、調節水鹽代謝等具有重要意義。在運動訓練中，運動員保持較高 的瘦體重，對提高有氧耐力和運動能力是非常有好處的。運動員的運動能力在相當程度上 決定于骨骼肌類型和骨骼肌的收縮能力，因此，W骨骼肌為主要成分的瘦體重占總體中的 比例，對運動員的運動能力有很大影響。瘦體重發達說明身體強壯體質好，如運動員或一些 平時就注重鍛煉身體的人，他們肌肉強健，雖然體重高但卻不屬于肥胖。
[0004] 瘦體重的計算公式是： 瘦體重=體重(W)-脂肪重量（f ) 脂肪重量=體重（W) X體脂率（F%) 瘦體重主要由肌肉組成，而肌肉在體內的最大含量是高度遺傳的，基因是決定因素。后 天的訓練和運動增加的瘦體重只能在基因決定的最高含量W下。
【發明內容】
[0005] 有鑒于此，本發明提供了一種LBM基因檢測試劑盒，該試劑盒對受測者的相關基 因進行檢測，分析得到其體內潛在的LBM含量水平，并計算瘦體重數值，且PCR擴增反應在 同一臺PCR儀上同步進行并具備檢測的高效性、特異性。
[0006] 一種LBM基因檢測試劑盒，包括盒體及盒體內單獨存放的試劑，存放的試劑包括： (1)針對2個基因 SNP多態位點的PCR反應引物組： 針對SNP RS16892496的引物組： 5' -GTTGAAGAGCAAGCCCCCA-3' 5' -GTGACTTGTACCCACG-3' 5' -GAACCAATAATACTCTCCTC-3' 5> -CATTTGGAATGGAAAC-3> 針對SNP RS7832552的引物組： 5' -GTGATAGTGTGAGGTAC-3' 5' -GTTTATTMGAGCATTCA-3' 5' -ATCTTTMAGAATTCTAG-3' 5> -TGCATTGGATTTTG-3> (2) PCR擴增試劑； (3) 瓊脂糖凝膠電泳分析試劑。
[0007] 本發明提供的瘦體重基因檢測試劑盒的有益效果是；通過PCR引物的設計使多個 PCR擴增反應在同一臺PCR儀上同步進行，對受測者的相關基因進行檢測，并實現檢測的高 效性、特異性，分析得到其瘦體重的遺傳因素，計算體內LBM數值，從而為受測者獲得一個 合適的健康方案，了解自身的肌肉含量和質量，在健身運動中采取相應的策略避免對其無 效甚至是有害的方法。同時為專業運動員的選材和訓練提供科學依據。
【附圖說明】
[0008] 圖1是反應產物瓊脂糖凝膠電泳圖。
【具體實施方式】
[0009] 瘦體重基因檢測試劑盒，包括盒體及盒體內單獨存放的試劑，存放的試劑包括： (1) 針對2個基因 SNP多態位點的PCR反應引物組： 針對SNP RS16892496的引物組： 5' -GTTGAAGAGCAAGCCCCCA-3' 5' -GTGACTTGTACCCACG-3' 5' -GAACCAATAATACTCTCCTC-3' 5> -CATTTGGAATGGAAAC-3> 針對SNP RS7832552的引物組： 5' -GTGATAGTGTGAGGTAC-3' 5' -GTTTATTMGAGCATTCA-3' 5' -ATCTTTMAGAATTCTAG-3' 5> -TGCATTGGATTTTG-3> (2) PCR擴增試劑； (3) 瓊脂糖凝膠電泳分析試劑。
[0010] 下面將結合實施例對本發明提供的方法予W進一步的說明。
[0011] 本實施例對測試者采用瘦體重基因檢測試劑盒同時檢測2個基因的SNP多態位 點，并根據基因分型結果，分析得到其瘦體重的遺傳因素，計算體內LBM數值，從而為受測 者獲得一個合適的健康方案，了解自身的肌肉含量和質量，在健身運動中采取相應的策略 避免對其無效甚至是有害的方法。
[0012] 使用到的瘦體重基因檢測試劑盒內試劑由W下組成： (1)針對2個基因 SNP多態位點的PCR反應引物組： 針對SNP RS16892496的引物組： 5' -GTTGAAGAGCAAGCCCCCA-3' 5' -GTGACTTGTACCCACG-3' 5' -GAACCAATAATACTCTCCTC-3' 5> -CATTTGGAATGGAAAC-3> 針對SNP RS7832552的引物組： 5' -GTGATAGTGTGAGGTAC-3' 5' -GTTTATTMGAGCATTCA-3' 5' -ATCTTTMAGAATTCTAG-3' 5> -TGCATTGGATTTTG-3> (2)PCR擴增試劑；10XPCR緩沖液，該PCR緩沖液為lOOmM Tris-肥1 P冊.3,500mM KC1，15mM MgC12 ;dNTPs混合物，該dNTPs混合物為Η磯酸鳥嘿嶺脫氧核巧酸dGTP，Η磯 酸腺嘿嶺脫氧核巧酸dATP，Η磯酸胸腺嚼巧脫氧核巧酸dTTP，Η磯酸胞嚼巧脫氧核巧酸 dCTP四種核巧酸，各組分濃度為2. 5mM ;5υ/μ 1熱啟動Taq酶。
[001引（3)瓊脂糖凝膠電泳分析試劑諒脂糖、TAE緩沖液、DNA分子量標準、Goldview 染色液和DM上樣緩沖液，該緩沖液W漠酪藍為指示劑稀釋至IX后使用。
[0014] 使用上述瘦體重基因檢測試劑盒按如下步驟進行檢測： (1)提取樣本基因組DNA。
[0015] 采集該測試者唾液，向l-2ml唾液樣品中加入500ul提取緩沖溶液，該DNA提取 緩沖溶液溶劑為50mM的化is-肥1 pH7. 4、0. 5mM的邸TA和50mM的化C1，反復吹打混勻 后，SOOOXg離必5分鐘，棄去上清，此步驟重復一次；得到的沉淀中加入500ul裂解液， 該裂解液溶劑為 50mM Tris-肥 1 pH7. 4,50mM Tris-肥 1 pH7. 4，150mM 化Cl，lmM 邸TA，1% Triton x-100，l% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS,蛋白酶 K20mg/mL,徹底懸浮沉淀并 充分混勻后，室溫放置30分鐘，期間來回顛倒離必管數次；得到的混合液中，加