0057] 在制備為100mM、pH10.5(關于C肥S緩沖液，僅為P朋.0和pHlO.5)的各緩沖液30ml 中添加 Savinase酶液lOOyL而制成分解液，將剪切成2cmX2cm(120mg)的聚乳酸膜進行浸 潰，W45°C、100巧m使之振動16小時。在16小時后取出膜而W70°C使其干燥3小時，設為膜的 初期重量-分解后重量=分解量(mg)。
[005引聚乳酸膜的制作
[0化9]使用Labo Plasto Mill(株式會社東洋精機制作所制）W21(TC將聚乳酸 (Na化reworks公司制）制膜為厚度100皿的聚乳酸膜。
[0060]使用的生物分解性樹脂分解酶如下所述。
[0061 ] Savinase 酶液
[0062] 使用Savinase 16.0L(novozymes 公司）。
[0063] 使用W下緩沖液。
[0064] (i)Tris 緩沖液(7.0 ~9.0pKa = 8.06)
[0074] (vi)Tricine(S徑甲基甘氨酸)緩沖液(7.2~9.1地曰1 = 2.3地曰2 = 8.15)
[0075]
[0076] 對于上述(i i )C肥S緩沖液，準備p朋.0和pHlO. 5運巧巾，對于其它緩沖液，使用調節 為抑10.5的緩沖液。
[0077](實施例 1-1)
[0078] 在制備為lOOmM、抑10.5的Tris緩沖液30ml中添加 Savinase酶液10化L而制成分解 液，將剪切成2cmX2cm(120mg)的聚乳酸膜進行浸潰，W45°C、100巧m使之振動16小時。在16 小時后取出膜而W70°C使其干燥3小時，設為膜的初期重量-分解后重量=分解量(mg)。
[00巧](實施例1-2)
[0080]除了設為將緩沖液制備為100mM、p朋.0的CHES緩沖液W外，與實施例1-1同樣地進 行。
[00川（比較例1-1)
[0082] 除了將緩沖液設為憐酸緩沖液W外，與實施例1-1同樣地進行。
[0083] (比較例 1-2)
[0084] 除了將緩沖液設為Bicine緩沖液W外，與實施例1-1同樣地進行。
[00財（比較例1-3)
[0086] 除了將緩沖液設為TAI^緩沖液W外，與實施例1-1同樣地進行。
[0087] (比較例 1-4)
[0088] 除了將緩沖液設為Tricine緩沖液W外，與實施例1-1同樣地進行。
[0089] (比較例 1-5)
[0090] 除了將CHES緩沖液的抑設為10.5W外，與實施例1-2同樣地進行。
[0091] 將實施例1-1~1-2和比較例1-1~1-5中的聚乳酸膜的分解的結果示于下述的表1 和圖1。
[0092] 根據運些結果可理解，使用了本申請規定的緩沖液的實施例1-U1-2可高度地分 解聚乳酸膜。
[0093] [表1]
[0094] 表 1 Γ00951
[0096] 2.對根據本發明的第2方式的生物分解性膜的酶分解試驗
[0097] 在添加 Savinase、Esperase或Proteinase Κ(蛋白酶Κ)酶液且制成分解液的lOOmM CHES緩沖液(p朋.0)30ml中浸潰剪切成2cmX 2cm( 120mg)的聚乳酸膜，W45°C、lOOrpm使之 振動16小時。在16小時后取出膜而W70°C使其干燥3小時，設為膜的初期重量-分解后重量 =分解量(mg)。制成在縱軸設為分解量(mg)/初期膜表面積(8cm2 )=單位面積的分解量、在 橫軸設為初期酶濃度(mg/mU/初期膜表面積(8cm2) =單位面積的初期酶添加量的圖，在將 最佳濃度的存在的酶設為0、將除此W外的酶設為X、將在最佳濃度的分解量設為100 % 時，將可看到60% W上的分解量的濃度設為〇,將小于60%的情況設為X。
[0098] 聚乳酸膜的制作
[0099] 使用Labo Plasto Mill(株式會社東洋精機制作所制）W210°C將聚乳酸 (Na化reworks公司制）制膜為厚度100皿的聚乳酸膜。
[0100] 使用的生物分解性樹脂分解酶如下所述。
[0101] (i)Savinase 酶液
[0102] 使用 Savinase 16.0L(novozymes 公司）。
[0103] (ii)Esperase 酶液
[0104] 使用Esperase 8.0L(novozymes公司）。
[0105] (iii)p;roK(P;roteinase K)酶液
[0106] 使來自TritiracMum a化um的ProteinaseK粉末20mg溶解于含有50w/w%甘油的 0.05M Tris-HCl緩沖液(P冊.0) 1ml，制成proK(ProteinaseK)酶液而使用。
[0107] (實施例2-1)
[010引添加 Savinase酶液50μ1，在lOOmM C皿S緩沖液(P朋.0)30ml中浸潰剪切成2cmX 2cm( 120mg)的聚乳酸膜，W45°C、100巧m使之振動16小時。在16小時后取出膜而W70°C使其 干燥3小時，設為膜的初期重量-分解后重量=分解量(mg)。
[0109] (實施例2-2~2-6、比較例2-1~2-18)
[0110] 采用與實施例2-1同樣的緩沖液、乳酸膜和分解條件，如下述表2所示地改變酶液 及其量而進行酶分解試驗。
[0111] 將各實施例和比較例的試驗條件和分解試驗的結果示于W下的表2和圖2~4。
[0112] [表 2]
[0113] 表2
[0114]
[0115] 由圖2、3可理解，對于作為本申請的第2方式規定的分解酶的Savinase和 Esperase，若使單位表面積的酶濃度發生改變，則存在生物分解性樹脂的分解成為最大的 最佳濃度。與此相對，如圖4所示，在作為W往的分解方法中主要使用的酶的蛋白酶K的情況 下，不存在生物分解性樹脂的分解成為最大的最佳濃度。此外，W往即使在假定使用具有最 佳濃度的生物分解性樹脂分解酶的情況下，也沒有認識到W生物分解性樹脂的單位表面積 的酶濃度為基準而存在分解峰，在無法得到高度分解的酶濃度條件下進行了分解。本發明 的第2方式是發現在將生物分解性樹脂在緩沖液中分解的條件下規定的酶具有最佳濃度運 樣的性質用于提高分解率而得到的。
【主權項】
1. 一種方法，是在含有最佳pH為7.5以上的生物分解性樹脂分解酶的緩沖液中分解生 物分解性樹脂的方法，所述緩沖液在其緩沖的平衡式的單側不存在來自緩沖成分的陰離 子，且其pH被調整為給予平衡向不存在所述陰離子的一側移動的條件的pH區域內。2. 如權利要求1所述的方法，其中，緩沖液的緩沖成分為三氨基甲烷或2-環己基氨基乙 烷磺酸。3. -種方法，其特征在于，是在含有具有最佳濃度的生物分解性樹脂分解酶的酶反應 液中分解生物分解性樹脂的方法，將在最佳濃度的生物分解性樹脂分解率設為1〇〇 %時，在 設為60%以上的生物分解性樹脂分解率的酶濃度的反應液中進行分解。4. 如權利要求1~3中任一項所述的方法，其中，生物分解性樹脂分解酶為堿性蛋白酶。5. 如權利要求1~4中任一項所述的方法，其中，生物分解性樹脂含有聚乳酸系樹脂。6. 如權利要求1~5中任一項所述的方法，其中，生物分解樹脂為顆粒、膜、粉末、單層纖 維、芯鞘纖維或膠囊的形態。
【專利摘要】本發明的目的在于提供一種有效率地分解生物分解性樹脂的方法。尤其是，本發明涉及一種方法，其是在含有最佳pH為7.5以上的生物分解性樹脂分解酶的緩沖液中分解生物分解性樹脂的方法，上述緩沖液在其緩沖的平衡式的單側不存在來自緩沖成分的陰離子，且其pH被調整為給予平衡向不存在上述陰離子的一側移動的條件的pH區域內。進而，本發明涉及一種方法，其是在含有具有最佳濃度的生物分解性樹脂分解酶的酶反應液中分解生物分解性樹脂的方法，其特征在于，將在最佳濃度的生物分解性樹脂分解率設為100％時，在設為60％以上的生物分解性樹脂分解率的酶濃度的反應液中進行分解。
【IPC分類】C12M1/00, C08J11/18, C12Q1/37
【公開號】CN105683271
【申請號】
【發明人】片山傳喜
【申請人】東洋制罐集團控股株式會社
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2014年9月25日