專利名稱：用于培養餌料線蟲的細菌菌株(x－7品系)及其線蟲培養方法
技術領域：
本發明涉及一種用于培養餌料線蟲的細菌及其餌料線蟲Panagrellus redivivus的培養方法。
背景技術：
世界范圍的水產養殖，特別是對蝦的養殖熱帶動了水產品幼苗培育的發展，也加劇了生物餌料的需求，尤其是鹵蟲的需求。鹵蟲一般采自高鹽度水域，其集約化養殖尚未形成規模。最初，美國猶他州的大鹽湖是盛產鹵蟲的場地，多年來其鹵蟲卵產量一直占世界產量的80％以上，左右世界市場的供應。但是，九十年代以來，由于鹵蟲資源的過度收采以及湖水鹽度的改變，鹽湖的鹵蟲產量急劇下降，導致了鹵蟲的價格不菲。中亞地區也供應鹵蟲，但是由于所產鹵蟲質量的不穩定，市場的需求仍未滿足。為了滿足市場的需要和保護自然鹵蟲資源，有必要尋找新型的生物餌料以替代或部分替代目前廣泛使用的鹵蟲餌料。
目前，自由生活線蟲Panagrellus redivivus(一種小桿目腐生線蟲，卵胎生；中文名待定)已用作魚蝦苗的生物餌料(Schlechtriem et al.(2004)Aquaculture Research 35，547-551；Briedenbach et al.(1989)Journal of World Aquaculture Society 20，61-71；Hofsten et al(1983)Journal of Fish biology 23，419-428.)。這類線蟲作為生物餌料具有體積小，可在海水中生存72小時以上，個體不會過度增大而使幼蝦難以消化，營養價值高，世代時間短，繁殖力強，培養方法簡單的優點。因此是魚、蝦蟹等水產苗種適宜的高級活生物餌料。P.redivivus線蟲的培養一般采用在培養基中加入大腸桿菌或酵母菌實現的。大腸桿菌或酵母菌的加入主要是直接提供線蟲繁殖所需要的營養，或者在繁殖過程中轉化培養基為線蟲提供營養。但是，在商業化應用上，由于大腸桿菌是人類的病原菌，因此，難以用于生物餌料的大規模培養；酵母菌雖然作為生物餌料是安全的，但是，酵母菌的培養，特別是液體培養不如細菌方便。因此，有必要選擇新的菌株來培養這種生物餌料線蟲。
發明內容
本發明的目的是提出一種可用來培養Panagrellus redivivus這種生物餌料線蟲的細菌菌株。
本發明的另一目的是提供一種培養Panagrellus redivivus生物餌料線蟲的新方法。
本發明所提出的用于培養Panagrellus redivivus生物餌料線蟲的細菌菌株，為Xenorhabdus屬的Xenorhabdus sp.X-7品系細菌，該菌株是從專性寄生昆蟲的昆蟲病原線蟲體內分離的，革蘭氏陰性，屬于腸桿菌科(Enterobacteriaceae)。過氧化氫酶陰性硝酸鹽不能被降解為亞硝酸鹽；初生型菌體具有周身鞭毛；不產生生物熒光。在LB固體培養上，Xenorhabdus sp.X-7菌株的菌落呈現呈現土黃色。
該細菌菌株已保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，其保藏編號為CCTCC NOM 206090。
本發明提出的生物餌料線蟲的培養方法是，采用菌株Xenorhabdus sp.X-7 CCTCC M206090作為生產菌，其培養步驟包括將細菌菌株Xenorhabdus sp.X-7 CCTCC M 206090在蛋白胨水培養基上，于25-28℃下培養得到細菌液，然后將其加入線蟲培養基，再接入無菌的Panagrellus redivivus線蟲，置于25-28℃下培養6至15天，即可收獲所培養的線蟲。
在所述的生物餌料線蟲的培養方法中，所述的蛋白胨水培養基推薦采用含有1％(質量百分比)蛋白胨和0.5％(質量百分比)氯化鈉的蛋白胨水培養基。
推薦的線蟲培養基的組分配比(按質量百分比計)為酵母膏1％，面粉10％，黃豆粉5％，豬油4％，水65％，海綿15％。
昆蟲病原線蟲是目前新型的生物農藥，由于其安全性和有效性，許多工業化國家豁免注冊可以釋放。Xenorhabdus sp.X-7 CCTCC M 206090是利用這類昆蟲病原線蟲體內分離的Xenorhabdus屬共生細菌，利用它來培養P.redivivus線蟲不僅對環境和人畜安全，而且容易培養，特別是大型發酵罐的培養。本發明描述的方法可促進P.redivivus線蟲的產業化培養，為水產養殖業提供優良的生物餌料。
具體實施例方式
下列實驗及操作實例是進一步對本發明的說明，不應該當作對本發明的限制。
1.將菌株Xenorhabdus sp.X-7 CCTCC M 206090在含有1％(質量百分比)蛋白胨，0.5％(質量百分比)氯化鈉的蛋白胨水培養基上，于26℃下培養得到Xenorhabdus屬的細菌液；2.將線蟲培養基在121℃下滅菌40分鐘，線蟲培養基的組分配比(按質量百分比計)為酵母膏1％，面粉10％，黃豆粉5％，豬油4％，水65％，海綿15％；3.將100克經滅菌的線蟲培養基加到500ml的三角瓶中，再加入所培養的Xenorhabdus屬的細菌液，然后接入無菌的P.redivivus線蟲，置于25-28℃下培養，6至15天后收獲所培養的線蟲，即可收獲培養物中的線蟲。
在做上述用Xenorhabdus sp.X-7 CCTCC M 206090菌株培養Panagrellus redivivus生物餌料線蟲實驗時，發明人作了在同樣培養基中接入大腸桿菌(Escherichia coli) EPI100品系和啤酒酵母菌的Invscl，Gim2.8和R12品系的對比試驗，這些培養物同樣置于25-28℃下培養。6至15天計算培養物中線蟲的產量。
結果顯示分別接入Xenorhabdus sp.X-7 CCTCC M 206090菌株、大腸桿菌EPI100品系、啤酒酵母菌的Invscl、Gim2.8和R12品系菌液的培養瓶中，每瓶含100克培養基的產量分別是3135，2755，3470，3000，和1140萬條P.redivivus線蟲。可見，Xenorhabdus sp.X-7 CCTCCM 206090的細菌菌株可支持P.redivivus線蟲的繁殖，而且獲得較高的產量。
權利要求
1.一種用于培養生物餌料線蟲的細菌菌株，其特征在于該細菌菌株為保藏于中國典型培養物保藏中心的Xenorhabdus sp.X-7 CCTCC M 206090。
2.一種生物餌料線蟲的培養方法，其特征在于采用細菌菌株Xenorhabdus sp.X-7CCTCC M 206090作為生產菌，其培養步驟包括將細菌菌株Xenorhabdus sp.X-7 CCTCC M206090在蛋白胨水培養基上，于25-28℃下培養得到細菌液，然后將其加入線蟲培養基，再接入無菌的Panagrellus redivivus線蟲，置于25-28℃下培養6至15天，即可收獲所培養的線蟲。
3.根據權利要求1所述的生物餌料線蟲的培養方法，其特征在于所述的蛋白胨水培養基含有質量百分比為1％的蛋白胨和質量百分比為0.5％的氯化鈉。
4.根據權利要求1所述的生物餌料線蟲的培養方法，其特征在于所述的線蟲培養基的組分配比按質量百分比計為酵母膏1％，面粉10％，黃豆粉5％，豬油4％，水65％，海綿15％。
全文摘要
本發明提供一種用于培養餌料線蟲的細菌菌株(X－7品系)及其線蟲培養方法，所提供的細菌菌株為Xenorhabdus sp.X－7 CCTCC M 206090。其線蟲培養方法是以Xenorhabdus sp.X－7 CCTCC M 206090菌株為生產菌，其培養步驟包括將細菌菌株Xenorhabdus sp.X－7CCTCC M 206090在蛋白胨水培養基上，于25－28℃下培養得到細菌液，然后將其加入線蟲培養基，再接入無菌的Panagrellus redivivus線蟲，置于25－28℃下培養6至15天，即可收獲所培養的線蟲。本發明所提供的菌株是從昆蟲病原線蟲體內分離的Xenorhabdus屬共生細菌，利用它培養得到的P.redivivus線蟲，對環境和人畜安全，為水產養殖業優良的生物餌料。
文檔編號A23K1/18GK1995329SQ20061012280
公開日2007年7月11日 申請日期2006年10月17日 優先權日2006年10月17日
發明者韓日疇, 丘雪紅, 曹莉, 劉小芬, 劉秀玲, 陳鏡華 申請人:廣東省昆蟲研究所