專利名稱：一種可視的管花肉蓯蓉的接種方法
技術領域：
本發明屬于管花肉蓯蓉的人工栽培技術領域，具體地說涉及一種可視的管花肉蓯蓉的接種方法。
背景技術：
管花肉蓯蓉(Cistanche tubulosa(Schenk)R.Wight)屬于列當科寄生植物，為瀕危中藥材和國家二級保護植物，其專性寄生在檉柳屬(Tamarix L.)植物的根部，性甘，咸，溫，具有補腎壯陽，潤腸通便之功效。
在肉蓯蓉人工栽培方面，接種是一個重要環節。目前，肉蓯蓉的接種方法主要有(1)接種紙接種方法即在距寄主30～50厘米處挖長40厘米、寬20厘米、深30～40厘米的坑，將特制的種子紙翻放入土中，上有種子180粒左右，然后回填土至坑沿約10厘米處；(2)、人工開挖接種誘導溝接種專利申請《肉蓯蓉的人工種植方法》(申請號為03141377.3)和名稱為《紅柳大蕓人工種植技術》(專利號為CN00137107.X)的專利公開了人工開誘導溝接種的方法，即在距梭梭樹或檉柳樹50～80cm處作苗床，苗床長1～2m、寬1m，深30～50cm苗床可設在寄主的兩側，并施入駱駝糞或牛羊糞，開溝條播或挖穴點播，播后覆土30～40cm，其上仍留淺溝或淺穴，以便澆水保持苗床濕潤。其他類似的方法是將處理后的肉蓯蓉種子與做為寄主的梭梭樹一同植入施有底肥的樹溝內寄生培養；(3)專利《一種利用檉柳莖接種管花肉蓯蓉的方法》(申請號為200610087305.6)公開了利用檉柳莖接種管花肉蓯蓉的方法，主要是在檉柳莖上切口，促進生根，并將帶有管花肉蓯蓉種子濕泥片包裹于切口處從而接種管花肉蓯蓉的方法。以上這些接種方法都無法監測肉蓯蓉種子從萌發到寄生的過程，隨機性大，接種率低，肉蓯蓉產量低而不穩定，因此需要找到一種可控的并且接種率高的管花肉蓯蓉的接種方法。
發明內容
本發明目的是提供一種可視管花肉蓯蓉的接種方法，本方法通過體式顯微鏡能夠觀察到管花肉蓯蓉接種的一系列過程，用此方法進行管花肉蓯蓉接種，提高了接種率，適用于檉柳-管花肉蓯蓉復合苗工廠化生產。
實現本發明的技術方案是一種可視的管花肉蓯蓉的接種方法，包括如下步驟(1)、管花肉蓯蓉種子的層積將大小為0.7～0.8mm的管花肉蓯蓉種子置于0～5℃冰箱中冷藏15～90天，備用；(2)、檉柳根系的培養取檉柳實生苗，用清水洗凈根部，剪掉部分枝干，并去掉部分主根，取裝有3/4沙土的塑料盒，塑料盒側面一端鉆兩個直徑為0.8cm的孔，將檉柳的根莖部位卡在孔中，主枝穿過孔露在塑料盒外部，將檉柳根水平埋于塑料盒的沙土中，沙土剛能覆蓋住檉柳根；塑料盒中沙土含水量為5～20％；檉柳的放置方向與塑料盒的長底邊平行；將沙土表面保持平整，在沙土表面上鋪兩層紗布，并在紗布上放置一塊透明玻璃板；用錫箔紙將塑料盒完全包裹起來；將塑料盒有玻璃板的一面朝下，整個塑料盒呈水平放置，并置于光照為1000～1600lux、溫度為20～30℃的條件下培養；(3)、管花肉蓯蓉種子的消毒將經過步驟(1)層積的管花肉蓯蓉種子用清水沖洗3～5遍，再用含0.01～0.1％吐溫的0.1～5％次氯酸鈉消毒3～15分鐘，然后用無菌水沖洗4～5遍；(4)、管花肉蓯蓉接種打開塑料盒，將步驟(3)所得管花肉蓯蓉種子置于穿出紗布的檉柳根附近0～5.0厘米，接種溫度為20～35℃，然后每隔3天打開一次塑料盒蓋，在體式顯微鏡下觀察種子萌發和接種于寄主根的情況；接種成功后7～15天，將接種成功的檉柳移植到田間種植。
上述方法步驟(4)中接種溫度優選為20～25℃。
由于管花肉蓯蓉種子很小，肉眼很難觀察萌發和接種的初始階段，運用體式顯微鏡可清楚地觀察到管花肉蓯蓉萌發和接種的過程，可以明確地知道管花肉蓯蓉種子的萌發時間和接種時間，便于確定移栽時期。
上述方法中所述的層積處理促進肉蓯蓉種胚生長，完成形態后熟。采用0℃～5℃低溫層積處理15～90天，種子可在一定的時間內完成胚的形態后熟，在適當低溫下，管花肉蓯蓉種子能通過生理后熟，可以提早萌發。
上述接種方法中(2)中所述的大小為0.7～0.8mm種子，可以通過將管花肉蓯蓉種子先過篩孔直徑為0.8mm種子篩，然后再將所得種子通過篩孔直徑為0.7mm的種子篩而得到。
按照通常的方法，可以配制得到含0.01～0.1％吐溫的0.1～5％次氯酸鈉溶液，它的作用是消毒。
上述體視顯微鏡可以是OLYMPUS SZH10型。
上述塑料盒大小可以為(15cm×10cm×8cm)，一端有兩個直徑為0.8cm大小的孔，可使檉柳主枝生長在塑料盒外部進行光合作用，檉柳根部則留在塑料盒中，保持黑暗生長；另一端有六個直徑為0.5cm的孔，進行輸水透氣作用；濕沙土高度為塑料盒高度的3/4，把檉柳根埋于土中，沙土表面保持平整，在沙土表面上鋪兩層紗布，以便檉柳根能穿過紗布生長，在紗布上放置一塊透明玻璃板；再用錫箔紙將塑料盒完全包裹起來，使檉柳根生長在黑暗環境中，將塑料盒有玻璃板一面朝下，整個塑料盒呈水平放置，保證檉柳枝葉能進行光合作用，置于光照為1000～1600lux，溫度為20～30℃的條件下培養。
本發明優點和有益效果為(1).接種效率高，接種率可達100％；(2).縮短了管花肉蓯蓉的接種期；(3).勞動強度小，管理簡單；(4).可以連續觀察肉蓯蓉寄生過程和其生長動態；(5).適于檉柳-管花肉蓯蓉復合苗工廠化生產。
具體實施例方式
實施例1本試驗2005年在中國農業大學組織培養室內進行，包括以下步驟(1)、管花肉蓯蓉種子的層積2005年6月取2004年采于新疆于田的管花肉蓯蓉種子，用布袋裝好后，放置0～5℃冰箱中層積；(2)、檉柳根系的培養2005年8月，取檉柳實生苗，將檉柳的根系下部剪去一部分，以促使檉柳發出新的次生根，將檉柳的上部枝條剪去一部分枝條，防止移栽后失水；把塑料盒中鋪上濕沙土，將檉柳根系平行于塑料盒的長邊方向放置，在其上面輕輕覆蓋一層濕沙土，再鋪上兩層紗布，并澆適量水以保持濕潤；用大小合適的玻璃板放置在紗布上，用錫箔紙包裹住塑料盒保持檉柳根的黑暗生長；然后將有玻璃板的一面朝下，使塑料盒水平放置，檉柳枝條部位在上，進行光合作用，待檉柳根慢慢長出紗布外，備用；(3)、接種待檉柳的根系長出紗布2～4cm，2005年9月8日將層積90天的管花肉蓯蓉種子用含0.01～0.1％吐溫的0.1～5％次氯酸鈉溶液消毒，把管花肉蓯蓉種子放在檉柳根的附近，以不經過層積管花肉蓯蓉種子作為對照。每棵檉柳接種60粒，5棵為一個處理，重復三次。
(4)、定期觀察用體視顯微鏡觀察管花肉蓯蓉的萌發和寄生過程。
試驗結果(見表1)表明，經過層積的管花肉蓯蓉種子開始萌發時間比對照提前了7天，開始接種時間提前了18天，在萌發和接種時間上明顯短于對照。說明層積處理可以解除管花肉蓯蓉種子的休眠，縮短接種周期。
表1 層積處理管花肉蓯蓉種子對接種情況的影響
把經過3個月層積的管花肉蓯蓉種子接種到檉柳的根系周圍，于接種后40天，90天在體視顯微鏡下分別觀察接種情況，結果(見表2)如下接種40天在體視顯微鏡下觀察，層積的管花肉蓯蓉種子接種率達到26.7％，而對照為0；接種90天觀察，層積的接種率達到了100％，而對照僅達到53.3％，層積的管花肉蓯蓉接種率比對照提高了46.7％。說明層積處理可以明顯提高管花肉蓯蓉種子接種率。
表2 層積處理對管花肉蓯蓉種子接種率的影響
(注接種率(％)＝接種成功的檉柳/接種檉柳總數)實施例2本試驗2005年在中國農業大學組織培養室內進行，包括以下步驟(1)、管花肉蓯蓉種子的層積2005年7月取2004年采于新疆于田的管花肉蓯蓉種子，用布袋裝好后，放置0～5℃冰箱中層積。
(2)、檉柳根系的培養2005年9月，取檉柳實生苗，將檉柳的根系下部剪去一部分，以促使檉柳發出新的次生根，將檉柳的上部枝條剪去一部分枝條，防止移栽后失水。把塑料盒中鋪上濕沙土，將檉柳根系平行于塑料盒的長邊方向放置，在其上面輕輕覆蓋一層濕沙土，再鋪上兩層紗布，并澆適量水以保持濕潤。用大小合適的玻璃板放置在紗布上，用錫箔紙包裹住塑料盒保持檉柳根的黑暗生長。然后將有玻璃板的一面朝下，使塑料盒水平放置，檉柳枝條部位在上，進行光合作用，待檉柳根慢慢長出紗布外，備用。
(3)、接種待檉柳的根系長出紗布2～4cm，2005年10月將層積三個月的管花肉蓯蓉種子消毒，把管花肉蓯蓉種子放在檉柳根的附近，以不經過層積管花肉蓯蓉種子作為對照。每棵檉柳接60粒，5棵為一個處理，重復三次，將其分別放到10℃、15℃、20℃、25℃、30℃的光照培養箱中培養。
(4).定期觀察用體視顯微鏡觀察管花肉蓯蓉的萌發和寄生過程。
分別在接種后的30天在體式顯微鏡下觀察管花肉蓯蓉的萌發率，接種后50天在體式顯微鏡下觀察管花肉蓯蓉的接種率。
由試驗結果(見表3)表明在體式顯微鏡下觀察接種30天的管花肉蓯蓉種子萌發情況，結果表明10℃時管花肉蓯蓉種子不萌發，15℃萌發率僅有0.6％，隨著溫度的升高，萌發率逐漸升高，30℃萌發率達到了最高即39.0％。但是30℃時管花肉蓯蓉種子萌發率高，芽管變褐色死亡的也多；在體式顯微鏡下觀察接種50天管花肉蓯蓉的接種率，結果表明15℃之前為0，20℃到30℃的接種率呈先升高后降低的趨勢，說明20～25℃是接種的最佳溫度。
表3 管花肉蓯蓉的萌發率和接種率的結果。
權利要求
1.一種可視的管花肉蓯蓉的接種方法，包括如下步驟(1).管花肉蓯蓉種子的層積將大小為0.7～0.8mm的管花肉蓯蓉種子置于0～5℃冰箱中冷藏15～90天，備用；(2).檉柳根的培養取檉柳實生苗，用清水洗凈根部，剪掉部分枝干，并去掉部分主根，取裝有3/4沙土的塑料盒，塑料盒側面一端鉆兩個直徑為0.8cm的孔，將檉柳的根莖部位卡在孔中，主枝穿過孔露在塑料盒外部，將檉柳根水平埋于塑料盒的沙土中，沙土剛能覆蓋住檉柳根；塑料盒中沙土含水量為5～20％；檉柳的放置方向與塑料盒的長底邊平行；將沙土表面保持平整，在沙土表面上鋪兩層紗布，并在紗布上放置一塊透明玻璃板；用錫箔紙將塑料盒完全包裹起來；將塑料盒有玻璃板的一面朝下，整個塑料盒呈水平放置，并置于光照為1000～1600lux、溫度為20～30℃的條件下培養；(3).管花肉蓯蓉種子的消毒將經過步驟(1)層積的管花肉蓯蓉種子用清水沖洗3～5遍，再用含0.01～0.1％吐溫的0.1～5％次氯酸鈉消毒3～15分鐘，然后用無菌水沖洗4～5遍；(4).管花肉蓯蓉接種打開塑料盒，將步驟(3)所得管花肉蓯蓉種子置于穿出紗布的檉柳根附近0～5.0厘米，接種溫度為20～35℃，然后每隔3天打開一次塑料盒蓋，在體式顯微鏡下觀察種子萌發和接種于寄主根的情況；接種成功后7～15天，將接種成功的檉柳移植到田間種植。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于其步驟(4)中所述的接種溫度為20～25℃。
全文摘要
本發明公開了一種可視管花肉蓯蓉的接種方法，本發明方法主要包括管花肉蓯蓉種子的層積、檉柳根的培養以及在檉柳根上接種管花肉蓯蓉，并通過體視顯微鏡觀察接種過程，接種成功后將檉柳移植到田間。本發明方法接種過程可人為控制，接種率高，適于管花肉蓯蓉－檉柳接種苗的工廠化生產。
文檔編號A01C1/00GK101049067SQ20071009942
公開日2007年10月10日 申請日期2007年5月21日 優先權日2007年5月21日
發明者郭玉海, 張金霞, 王華磊, 陳慶亮 申請人:中國農業大學