專利名稱：一種洋水仙脫毒組培鱗莖的培養方法
技術領域：
本發明涉及植物脫毒組培快繁技術領域，尤其涉及一種洋水仙脫毒組培鱗 莖的培養與檢測方法。
背景技術：
洋水仙(A^rAs")是從歐洲引入我國水仙新品種的統稱，為石蒜科水仙 屬多年生草本植物。20世紀80年代后進行較大規模的引入，主要用于春季花展， 少量盆栽作為年宵花使用。洋水仙與中國水仙相比，具有花大色艷，清香宜人 等特點；大部分品種副花冠成喇叭狀，且以黃色為多，因而又泛稱為"喇叭水 仙"或"黃水仙"。洋水仙又是優良的園林地被花卉作為切花使用。洋水仙一 般通過分蘗的子球進行繁殖，每個母鱗莖可分蘗2 4個小鱗莖。但是，由于病 毒侵染導致逐年退化，鱗莖變小，開花能力下降。浙江省農業科學院從英國引進洋水仙新品種，擬通過脫毒組培技術大量繁 殖脫毒鱗莖，以滿足國內市場需要，同時克服病毒的危害和蔓延。我們從英國 引進栽培于溫室的洋水仙中發現，絕大部分植株均表現花葉和斑駁等癥狀。通 過對病毒病原的普通生物學、血清學特征和基因組全序列的研究，首先鑒定、 明確了侵染洋水仙的主要線狀病毒有4個屬的8個成員，包括馬鈴薯Y病毒屬 (genus Potyvirus) 水仙黃條病毒(vVarcj'ss^yellow stripe virus, NYSV)， 水 仙遲季黃化病毒(Akrcj.ss"s late season yellows virus, NLSYV)， 水仙退化 病毒(Tlkrcj'ss〃s degeneration virus, NDV)， 虎目艮萬年青花葉病毒 (6 rait/ o卵2腿mosaic virus, 0rMV)， 香石竹潛隱病毒屬(genus Carlavirus)水仙普通潛隱病毒(Akrcj's薦common latent virus, NCLV),水仙無癥病毒 (7Varcis5YAS symptomless virus, NSV)，柘橙病毒屬(genus Macluravirus) 水 仙潛隱病毒(TVkrcj'ssws latent virus ， NLV)及馬鈴薯X病毒屬(genus Potexvirus)7JC仙花葉病毒(Akrc^sws mosaic virus, NMV)等8禾中病毒，這8 種病毒單獨或復合侵染是引起洋水仙種質嚴重退化的重要原因之一；同時提出 以田間洋水仙發生的病毒，經擴增、克隆和原核表達制備成病毒特異性抗血清， 進而對洋水仙植株樣品進行病毒ELISA檢測的方法(Chen J etal. 2006. Archives of Virology, 151:2261-2267; Zheng HY et al. 2006. Archives of Virology, 151:1667_1672; Chen J et al. 2006. Archives of Virology, 151:1673-1677; Chen J et al. 2007. Archives of Virology, 152:441-448; Chen J et al. 2003， Journal of Phytopathology, 151:26-29)。到目前為止 有關洋水仙莖尖脫毒組培及病毒檢測的研究尚未見報道。發明內容本發明目的是，針對現有洋水仙常規生產繁種技術中所存在的繁殖率低，帶 病毒率高，且通常呈多種線狀病毒復合侵染，而又難以分離純化等缺陷，提供一 種能大量、快速繁殖鱗莖，又能脫除鱗莖所帶病毒并經特異檢測，以確保無毒的 洋水仙鱗莖脫毒、組培與檢測的配套方法。本發明目的通過以下技術方案來實現。 一種洋水仙脫毒組培鱗莖的培養方法，按如下步驟進行 (1)培養基的配制，包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升 所含重量為1)基本培養基子鱗莖誘導、增殖及鱗莖生長培養基用MS培養基；生根培養基用1/2 MS培養基;其中，蔗糖或白糖20 40g/L，瓊脂7 9 g/L，pH5. 6 5.8;2) 子鱗莖誘導培養基MS+ BA 0. l lmg /L和NAA 0. 05 0. 5mg/L;3) 子鱗莖增殖培養基MS+ BA 0. 05 0. 5mg /L和NAA 0. 1 lmg/L;4) 鱗莖生長培養基MS+ BA 0. 01 0. lmg /L禾卩NAA 0. 05 0. 5mg/L;5) 生根培養基1/2MS+ NAA 0. 1 0. 5mg/L; (2)洋水仙脫毒組培鱗莖的培養1) 鱗莖低溫處理鱗莖經8'C低溫處理2 4周；2) 鱗莖萌芽將低溫處理后的鱗莖放在25X:培養室內，培養1 2周， 使鱗莖快速萌芽；3) 外植體的選取與滅菌取3 5cm的鱗莖幼芽，經滅菌處理后，在無 菌條件40倍的雙筒解剖鏡下，摘出0. 2 0. 3mm帶1 2個葉原基的莖尖作為脫 毒組培用外植體；4) 莖尖誘導培養將外植體接種在子鱗莖誘導培養基上，在培養條件下 培養1 2個月，從莖尖誘導形成幼芽或子鱗莖；5) 子鱗莖增殖培養將幼芽或子鱗莖轉接到子鱗莖增殖培養基上，在培 養條件下培養30 45天至增殖出子鱗莖；根據對子鱗莖數量的需求，每隔30 45天按同樣方法進行子鱗莖再增殖；6) 子鱗莖生長培養將子鱗莖轉接到子鱗莖生長培養基上，在培養條件下培養30 45天使鱗莖長大到0. 5 lcm;7) 生根培養將長大的子鱗莖轉接在生根培養基中，在培養條件下培養 20 30天至子鱗莖上部長出葉片，基部長出數根根系；8) 移栽當生根子鱗莖苗長高至3 5cm以上、長出5根以上根時，移栽至基質培養基，在培養條件下培養1 2個月后成苗；(3)病毒ELISA檢測將田間洋水仙發生的病毒，經擴增、克隆和原核表達所獲得的相關病毒外 殼蛋白，注射小鼠或家兔免疫并制備成病毒特異性抗血清后，對脫毒組培獲得的鱗莖苗進行病毒ELISA檢測。所述培養基的配制，包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升 所含重量為(1) 基本培養基子鱗莖誘導、增殖及鱗莖生長用MS培養基；生根用1/2MS培養基，其中，瓊脂8g/L， pH為5.7;(2) 子鱗莖誘導培養基蔗糖30g/L的MS+ BA 0. 5mg /L和NAA 0. lmg/L;(3) 子鱗莖增殖培養基:白糖為40g/L的MS+ BA 0. lmg /L和NAA 0. 5mg/L;(4) 鱗莖生長培養基白糖為40g/L的MS+ BA 0. 05mg /L和NAA 0. lmg/L;(5) 生根培養基白糖為20g/L的1/2MS+ NAA 0. 25mg/L。 所述的滅菌處理是將鱗莖幼芽經75%酒精浸泡0. 5 1. 0分鐘，再用0. 1%升汞水溶液浸泡10 15分鐘，最后用無菌水沖洗3 5次。所述各脫毒組培階段的培養條件是，培養溫度為25±2°C，光照光強為 1500 2500 Lx，光照時間為10h/d。所述的移栽基質由泥炭珍珠巖蛭石按體積比l: 2: 2配制而成。 本發明的有益效果是1)針對洋水仙花葉病毒病通常系由多種線狀病毒復合侵染所致，并又難以 分離、純化的特點，采用由本發明人分離、鑒定明確的洋水仙8種花葉病毒外殼蛋白基因為病原，制備成病毒特異性抗血清后，所建立的ELISA檢測技術體系，無需分離、純化，即能快速對組培鱗莖苗實施是否帶毒及帶何種病毒的檢測，可以杜絕所述病毒的攜帶與傳播，以確保組培苗的安全質量；2) 建立的洋水仙脫毒組培快繁技術體系，脫毒效果好，脫毒鱗莖增殖快， 其月增殖率可達3 5倍，其生根率和移栽成活率達100%，適合工廠化育苗，可 商品化生產；3) 脫毒鱗莖可比未脫毒鱗莖生長速度快、開花期早、花色鮮艷。
具體實施方式
通過以下實施例對本發明作進一步的詳細說明，但本發明的內容并不局限于此。BA: 6-節氨基嘌呤(6-Benzylamin叩urine)，美國進口國內分裝，分析純，純 度99. 9%。NAA: a-萘乙酸(l-Naphthylaceticacid)，美國進口國內分裝，分析純，純度 99. 5%。實施例l:一種洋水仙脫毒組培鱗莖的培養方法，按如下步驟進行(1)培養基的配制，包括基本培養基和組培各階段培養基的組分與每升所 含重量為1) 基木培養基子鱗莖誘導、增殖及鱗莖生長培養基用MS培養基，生 根培養基用1/2 MS培養基；其中，瓊脂為8g/L， pH為5. 7;2) 子鱗莖誘導培養基蔗糖30g/L的MS+ BA 0. 5mg /L和NAA 0. lmg/L;3) 子鱗莖增殖培養基白糖40g/L的MS+ BA 0. lmg /L和NAA 0. 5mg/L;4) 鱗莖生長培養基白糖40g/L的MS+ BA 0. 05mg /L和NAA 0. lmg/L;5) 生根培養基白糖20g/L的1/2 MS+ NAA 0. 25mg/L。(2) 洋水仙脫毒組培鱗莖的培養1) 鱗莖低溫處理鱗莖經8"低溫處理3周；2) 鱗莖萌芽將低溫處理后的鱗莖放在25。C培養室內，培養1 2周， 使鱗莖快速萌芽；3) 外植體的選取與滅菌:取3 5cm的鱗莖幼芽，經75似酉精浸泡0.7分 鐘，再用0. 1%升汞水溶液浸泡13分鐘，最后用無菌水沖洗3 5次后，在無菌條 件40倍的雙筒解剖鏡下，摘出0. 2 0. 3mm帶1 2個葉原基的莖尖作為脫毒組 培用外植體；4)莖尖誘導培養將外植體接種在子鱗莖誘導培養基上，在溫度25i2'C， 光強2000 Lx，光照時間10h/d的條件下培養1 2個月，從莖尖誘導形成幼芽或 子鱗莖；5) 子鱗莖增殖培養將幼芽或子鱗莖轉接到子鱗莖增殖培養基上，在同 步驟4)培養條件下培養30 45天至增殖出子鱗莖；根據對子鱗莖數量的需求， 每隔30 45天按同樣方法進行子鱗莖再增殖；6) 子鱗莖生長培養將子鱗莖轉接到子鱗莖生長培養基上，在同步驟4) 培養條件下培養30 45天使鱗莖長大到0. 5 lcm;7) 生根培養將長大的子鱗莖轉接在生根培養基中，在同步驟4)培養 條件下培養20 30天至子鱗莖上部長出葉片，基部長出數根根系；8) 移栽當生根子鱗莖苗長高至3 5cm以上、長出5根以上根時，移 栽至由泥炭珍珠巖蛭石按體積比l: 2: 2配制而成的基質培養基中，在同 步驟4)培養條件下培養1 2個月后成苗；(3) 病毒ELISA檢測1)洋水仙病毒病原種類的鑒定① 取病樣取洋水仙花葉病害病樣，-S(TC儲存備用；② 電鏡觀察取病汁液經負染后，用電鏡觀察病毒粒子的形態；③ 病毒種類RT-PCR檢測和鑒定對侵染洋水仙8種病毒的序列分別合成 擴增各種病毒外殼蛋白基因的引物；以植物總RNA為模板，逆向引物(-)合成 病毒第一鏈cDNA，進而以此cDNA為模板，采用TaKaRa公司LA TaqTMPCR體系 或ET化^ DNA聚合酶體系，對各種病毒逐一進行RT-PCR檢測；2)病毒ELISA檢測 將田間洋水仙發生的病毒，經擴增、克隆和原核表達所獲得的相關病毒外 殼蛋白，注射小鼠或家兔免疫并制備成病毒特異性抗血清，對脫毒組培獲得的 鱗莖苗進行病毒ELISA檢測(1) 病毒外殼蛋白基因擴增、克隆和原核表達應用上述RT-PCR技術擴增相關病毒的外殼蛋白基因，與TA載體連接克隆， 然后經雙酶切，產物與用同樣雙酶切的原核表達載體連接，連接產物轉化BL21 plysaE或plysaS，并經IPTG誘導表達，用SDS-PAGE檢測病毒外殼蛋白基因的 表達情況；(2) 抗血清的制備 (i)目的蛋白純化制備12% SDS-PAGE，濃縮膠不插梳子，濃縮膠上方留一定的空間用于加樣； 取適量表達菌體，加1. 6 mLl X SDS上樣緩沖液，充分裂解后置IO(TC水浴10 min， 離心(10，000 g)7min，上清液進行電泳；電泳完畢后，將凝膠置0. 25 M KC1 4 T染色0.5h，切下病毒外殼蛋白條帶放入研缽研磨，加入適量1XSDS上樣緩 沖液，用5-20%梯度SDS-PAGE進行第2次電泳；電泳完畢后，將凝膠置0. 25 M KC1 4。C染色0.5h，切下目的條帶。如果用于免疫小鼠，分裝4份；如果用于家兔不需分裝。-30 。C保存。(ii) 免疫小鼠或家兔并制備抗血清免疫小鼠取份含目的蛋白的凝膠于研缽，加入生理鹽水(約2mL)充 分研磨，用注射器注射小鼠，小鼠每只每次注射0.5 mL;免疫家兔每只家兔蛋白用量是每只小鼠的4倍，每次注射2mL; 7天后注射第二次，總共注射4次；最后一次注射后3天斷頭取血，制備抗血清；(iii) 吸附去除非目的蛋白產生的抗體加1/4體積BL21 pLys S或BL21 pLys E菌體蛋白吸附抗血清屮的抗BL21 pLys S /BL21 pLys E菌體蛋白的抗體(根據目的蛋白是用BL21 pLys S菌株 還是用BL21 pLys E菌株表達來決定使用何種菌體蛋白吸附)，2 h后離心 (10， 000 g) 7 min，吸取上清液,4 。C保存；吸附用菌體蛋白的制備培養BL21 pLys S或BL21 pLys E 200 mL，離心 后將菌體懸浮于20 mL PBS中，在冰浴條件下用超聲波細胞粉碎機充分破碎菌 體，離心(IO，OOO g)7 min，取上清即為菌體蛋白；(iv) 抗血清純度檢測用Western blot的方法檢測抗血清的純度；需要特別注意以下幾點第一，選用12%SDS-PAGE進行電泳，每只小鼠的 抗血清需要3個泳道，分別為BL21 pLys S或BL21 pLys E菌體蛋白對照、誘 導表達目的蛋白的菌體蛋白和標準蛋白Marker;第二，加一抗血清(即制備的 小鼠抗血清)時每只小鼠的抗血清用一個培養皿，不要將不同小鼠的抗血清混 在一起，推薦抗血清的用量為15mL —抗稀釋液加25uL抗血清；第三，顯色 反應后對抗血清的純度進行評估如果BL21 pLys S或BL21 pLys E菌體蛋白 對照泳道無顯色條帶，誘導表達目的蛋白的菌體蛋白泳道有顯色條帶，而且顯色條帶的位置與H的蛋白大小相一致，說明抗血清的純度符合要求，個別情況下，BL21 pLys S或BL21 pLys E菌體蛋白對照泳道無顯色條帶，但誘導表達 冃的蛋白的菌體蛋白泳道有多條顯色帶，其中主要條帶的位置與目的蛋白大小 相一致，這種抗血清也可以用，因為這些細的條帶可能是目的蛋白裂解造成的； 第四，將檢測合格的抗血清-3(TC保存備用(加入適量疊氮鈉)； (3) ELISA檢測技術 用建立的ELISA檢測技術對洋水仙各脫毒組培階段的鱗莖進行病毒種類及 其含量檢測。(i) 包被稱取病葉樣品和健葉對照各0. 2 g，分別加入包被液各1 mL研 磨，離心(5，00。 g)后包被96孔板，每孔IOO iiL， 4 。C， 12 h;(ii) 封閉加封閉液，每孔150 wL , 37 。C孵育1 h;(iii) 加一抗加入適當稀釋的抗血清(ELISA緩沖液稀釋)，37 。C孵育2h;(iv) 加酶標二抗加入1/5000的羊抗鼠IgG-堿性磷酸酶(Sigma， ELISA 緩沖液稀釋)，37 。C孵育2 h;(v) 加底物lmg/mL的p-NPP (Sigma，溶于底物緩沖液，pH 9. 8)， 37 。C 黑暗中孵育，分別在40 min、 1 h和2 h測OD艦值;注除封閉為150 uL/孔外，其余步驟均用100 uL/孔，每步后用PBS-T 注滿微孔，洗板3次，每次3-5 min; 試劑(i) 包被液(0.05 mol/L碳酸鹽緩沖液，pH 9.6):稱Na線0.1465 g， Na2C03 0. 07 95 g溶于40 mL蒸餾水，溶解后定容至50 mL，兩周內使用；(ii) 封閉液5 g脫脂奶粉溶于100 mL PBS-T中；(iii) PBS-T: 取10XPBS 40 mL (10XPBS:在800 mL蒸餾水中溶解80 g NaCl、 2 g KC1、 14. 4 g Na2 HP04和2. 4 g K H2P04，用HC1調節pH值至7. 4， 加蒸餾水定容至1 L，高壓蒸汽滅菌20 min，保存于室溫)，加入0. 2 mL Tween20， 加蒸餾水定容至400 mL;(iv) ELISA緩沖液:稱l g脫脂奶粉，2 g PVP (Polyvinyl-Pyrrolidone， Mw 40,000， Sigma),溶于100 mL PBS-T中；(v) 底物緩沖液9.7 mL二乙醇胺(Diethanolamine)， 0.01 g MgCl2，加 入80mL去離子水，用HCl調節pH至9.8，再加水至100 mL，用棕色瓶避光保 存于黑暗中；(vi) 底物稱取p-NPP (p-Nitrophenyl Phosphate) 2.5 mg溶于2. 5 mL 底物緩沖液中。實施例2:本實施例基本培養基中的瓊脂為7g/L， pH為5.6;子鱗莖誘導培養基為 蔗糖20g/L的MS+ BA O.lmg /L和NAA 0.3mg/L;子鱗莖增殖培養基為白糖 20g/L的MS+BA0.5mg/L和NAA0.1mg/L;鱗莖生長培養基為白糖30g/L的 MS+ BA 0.02mg /L和NAA 0.25mg/L;生根培養基為白糖40g/L的1/2 MS+ NAA0.45mg/L;鱗莖經8°C、 2周低溫處理；鱗莖幼芽經75%酒精浸泡0. 5分鐘，0. 1%升汞水溶液浸泡10分鐘；誘導、增殖、生長、生根各階段的培養條件為溫度25士2i:，光強1500 Lx，光照時間10h/d外；其余步驟工藝均同于實施例1。 實施例3:本實施例基本培養基中的瓊脂為9g/L， pH為5.8;子鱗莖誘導培養基為 蔗糖40g/L的MS+BAlmg/L和NAA 0.5mg/L;子鱗莖增殖培養基為白糖30g/L 的MS+BA0.3mg/L和NAA lmg/L;鱗莖生長培養基為白糖20g/L的MS+BA0.09mg /L和NAA 0.5mg/L;生根培養基為白糖30g/L的1/2 MS+ NAA 0.lmg/L; 鱗莖經8t:、 4周低溫處理；鱗莖幼芽經75%酒精浸泡l.O分鐘，0. 1%升汞水溶 液浸泡15分鐘；誘導、增殖、生長、生根各階段的培養條件為溫度25士2。C， 光強2500Lx，光照時間10h/d外；其余步驟工藝均同于實施例1。 試驗例(病毒檢測)1、 對照材料從田間采集的病葉洋水仙自然分蘗的子球；2、 處理材料以實施例l、 2或3獲得的脫毒組培鱗莖；3、 病毒ELISA檢測由于洋水仙常含有多種線狀病毒復合侵染，通常病毒 難以分離純化，從而應用本發明人鑒定明確的8種洋水仙病毒外殼蛋白基因，經擴增、克隆和原核表達后獲得的大量相關病毒外殼蛋白，用于小鼠或家兔免疫，制備而成的病毒特異性抗血清，供病毒ELISA檢測之用；4、 檢測結果如下表所示-處理檢測的結果對照陽性脫毒組培鱗莖陰性
權利要求
1、一種洋水仙脫毒組培鱗莖的培養方法，其特征在于按如下步驟進行(1)培養基的配制，包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為1)基本培養基子鱗莖誘導、增殖及鱗莖生長培養基用MS培養基；生根培養基用1/2 MS培養基；其中，蔗糖或白糖20～40g/L，瓊脂7～9g/L，pH5.6～5.8；2)子鱗莖誘導培養基MS+BA 0.1～1mg/L和NAA 0.05～0.5mg/L；3)子鱗莖增殖培養基MS+BA 0.05～0.5mg/L和NAA 0.1～1mg/L；4)鱗莖生長培養基MS+BA 0.01～0.1mg/L和NAA 0.05～0.5mg/L；5)生根培養基1/2MS+NAA 0.1～0.5mg/L；(2)洋水仙脫毒組培鱗莖的培養1)鱗莖低溫處理鱗莖經8℃低溫處理2～4周；2)鱗莖萌芽將低溫處理后的鱗莖放在25℃培養室內，培養1～2周，使鱗莖快速萌芽；3)外植體的選取與滅菌取3～5cm的鱗莖幼芽，經滅菌處理后，在無菌條件下，摘出0.2～0.3mm帶1～2個葉原基的莖尖作為脫毒組培用外植體；4)莖尖誘導培養將外植體接種在子鱗莖誘導培養基上，在培養條件下培養1～2個月，從莖尖誘導形成幼芽或子鱗莖；5)子鱗莖增殖培養將幼芽或子鱗莖轉接到子鱗莖增殖培養基上，在培養條件下培養30～45天至增殖出子鱗莖；根據對子鱗莖數量的需求，每隔30～45天按同樣方法進行子鱗莖再增殖；6)子鱗莖生長培養將子鱗莖轉接到子鱗莖生長培養基上，在培養條件下培養30～45天使鱗莖長大到0.5～1cm；7)生根培養將長大的子鱗莖轉接在生根培養基中，在培養條件下培養20～30天至子鱗莖上部長出葉片，基部長出數根根系；8)移栽當生根子鱗莖苗長高至3～5cm以上、長出5根以上根時，移栽至基質培養基，在培養條件下培養1～2個月后成苗；(3)病毒ELISA檢測將田間洋水仙發生的病毒，經擴增、克隆和原核表達所獲得的相關病毒外殼蛋白，注射小鼠或家兔免疫并制備成病毒特異性抗血清后，對脫毒組培獲得的鱗莖苗進行病毒ELISA檢測。
2、 按權利要求1所述的培養方法，其特征在于所述的培養基的配制，包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為(1) 基本培養基子鱗莖誘導、增殖及鱗莖生長用MS培養基；生根用1/2MS培養基，其中，瓊脂8g/L， pH為5.7;(2) 子鱗莖誘導培養基蔗糖30g/L的MS+ BA 0. 5mg /L和NAA 0. lmg/L;(3) 子鱗莖增殖培養基:白糖為40g/L的MS+ BA 0. lmg /L和NAA 0. 5mg/L;(4) 鱗莖生長培養基白糖為40g/L的MS+ BA 0. 05mg /L和NAA 0. lmg/L;(5) 生根培養基白糖為20g/L的1/2MS+ NAA 0. 25mg/L。
3、 按權利要求1所述的培養方法，其特征在于所述的滅菌處理是，將鱗莖 幼芽經75%酒精浸泡0. 5 1. 0分鐘，再用0. 1%升汞水溶液浸泡10 15分鐘， 最后用無菌水沖洗3 5次。
4、 按權利要求1所述的培養方法，其特征在于所述的各脫毒組培階段的培 養條件是，溫度為25±2°。，光強為1500 2500 Lx，光照時間為10h/d。
5、 按權利要求1所述的培養方法，其特征在于所述的移栽基質由泥炭珍珠巖蛭石按體積比l: 2: 2配制而成。
全文摘要
本發明涉及一種洋水仙脫毒組培鱗莖的培養方法，屬植物繁殖技術領域。該方法包括培養基的配制、脫毒組培鱗莖的培養、病毒ELISA檢測等步驟。本發明能快速對組培鱗莖苗實施高靈敏度的病毒檢測，杜絕病毒的攜帶與傳播，可比未脫毒鱗莖生長速度快、開花期早、花色鮮艷；脫毒鱗莖增殖快，其月增殖率可達3～5倍，適合工廠化育苗。可在洋水仙的提純復壯及開發中推廣應用。
文檔編號A01H4/00GK101213938SQ200710306830
公開日2008年7月9日 申請日期2007年12月28日 優先權日2007年12月28日
發明者呂永平, 剛 徐, 林 林, 汪一婷, 牟豪杰, 曄 程, 鄭紅英, 陳劍平 申請人:浙江省農業科學院