具有高多酚含量的蘋果的制作方法

專利名稱：具有高多酚含量的蘋果的制作方法
專利說明具有高多酚含量的蘋果 本發明涉及含高濃度多酚的蘋果、得到所述蘋果的方法和這些蘋果作為治療或預防心血管疾病、結腸癌和幫助消化健康方法的用途。
心血管疾病(CVD)和癌癥是全世界死亡的兩個主要原因。
在歐盟，CVD是發病和死亡的主要來源，每年花費1690億歐元(Leal et al.(2006)Eur.Heart J.27(13)1610-9)，而在美國，據美國心臟協會估計，71,300,000名美國人患有一種或多種形式的CVD。
據世界衛生組織稱，癌癥每年導致全世界約760萬(或13％)人死亡。尤其是，肺癌、胃癌、肝癌、結腸癌和乳腺癌是這些死亡中一半以上的來源。
流行病學證據似乎提示，富含水果和蔬菜的飲食提供對預防這些慢性疾病的顯著保護作用。這種保護作用中的許多因素與在水果和蔬菜中發現的稱為多酚的一大類植物化學物質有關。
多酚稱為自然生物反應調節劑，因為強有利的實驗證據證明它們調節身體對過敏原、病毒和致癌原的反應能力。它們顯示抗過敏、抗炎、抗微生物和抗癌活性。另外，多酚還起強抗氧化劑的作用，防止氧化劑和自由基損害，有助于預防與氧化性應激有關的各種疾病。
但據估計，多數人未消耗可得到由多酚提供的健康益處的足夠量。例如，目前平均每個美國人日攝取表兒茶素比減少CVD風險所需推薦劑量低2-4倍(Gu et al.(2004)J Nutr 134(3)613-7；Prior and Gu(2005)Phytochemistry 66(18)2264-80)。因此，通過食物增加攝取量已成為一個重要的健康目標。
蘋果可為多酚的重要來源，它提供減少CVD風險所需推薦劑量約10％(Gu et al.(2004)同上)。但是，多酚的濃度和分布在各品種中差異極大(參見表1)。許多現代甜點中蘋果的多酚含量的確可能小于1000mg/kg。
因此，本發明目的是提供具有增加的多酚水平的蘋果。
因此，按照本發明的一個方面，提供含總多酚含量大于5000mg/kg的蘋果。
按照本發明的第一個方面，提供含總多酚含量大于10000mg/kg的蘋果。
在一個實施方案中，多酚含量為10000-100000mg/kg。在另一個實施方案中，多酚含量為10000-50000mg/kg。因此，這些蘋果中多酚濃度比任何其它報道的鮮重來源的濃度高得多。因此，它們可在人們的食物中提供大量食物來源的多酚，從而為消費者提供與增加的多酚攝取有關的健康益處。可認識到，本文中所述“多酚含量”是指鮮重含量。干重含量的當量范圍將比存在的鮮重含量高約5-7倍。
在一個實施方案中，蘋果包括″通紅(red-cut through)″蘋果。可以認識到，術語″通紅″在本領域中熟知，是指具有紅果肉的蘋果。
當本文中使用時，術語多酚是指特征在于每個分子中存在大于一個苯酚基團的一組化學物質。在一個實施方案中，多酚包括亞組類黃酮。
已在各種植物中表征出5000種以上的天然類黃酮。按照化學結構將它們分類，可分為不同的亞類。在一個實施方案中，類黃酮包括 (a)黃烷酮(例如橙皮素、柚苷配基、圣草酚)，它們基于式(I)所示化學骨架
(b)異黃烷酮(例如金雀異黃素、黃豆苷元、黃豆黃素)，它們基于式(II)所示化學骨架
(c)黃酮(例如藤黃菌素、芹黃素、柑桔黃酮)，它們基于式(III)所示化學骨架
(d)黃酮醇(例如櫟精、莰非醇、楊梅黃酮、異鼠李亭、藿香黃酮醇、鼠李金)，它們基于式(IV)所示化學骨架
(e)黃烷-3-醇(例如兒茶素、棓兒茶素、表兒茶素、表棓兒茶素)，它們基于式(V)所示化學骨架
(f)黃烷-3，4-二醇，它們基于式(VI)中所示化學骨架
(g)二氫黃酮醇，它們基于式(VII)所示化學骨架
(h)花色素(例如花青素、翠雀色素、錦葵花素、花葵素、芍藥素、矮牽牛配基)，它們基于式(VIII)所示化學骨架
(i)花色素苷，它們基于式(IX)所示化學骨架
其中糖可選自葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖等。
在一個實施方案中，類黃酮包括原花色素。原花色素是由黃烷-3-醇亞基組成的生物聚合物。聚合物主要通過4和8位以及4和6位連接。在另一個實施方案中，原花色素是4，8位連接的聚合物，該聚合物具有式(X)所示結構
在一個實施方案中，類黃酮包括花色素、原花色素、黃烷醇、黃酮醇、黃酮、黃烷酮和異黃酮。在另一個實施方案中，類黃酮包括黃烷醇和原花色素。
在一個實施方案中，黃烷-3-醇具有式(V)a所示結構
其中R1代表氫或OH基團。
在一個實施方案中，黃烷-3-醇具有式(V)b所示結構
其中R1定義同上。
其中R1代表氫的式(V)b化合物稱為表兒茶素，其中R1代表OH基團的式(V)b化合物稱為表棓兒茶素。
在一個實施方案中，黃烷-3-醇具有式(V)c所示結構
其中R1定義同上。
其中R1代表氫的式(V)c化合物稱為兒茶素，其中R1代表OH基團的式(V)c化合物稱為棓兒茶素。
在一個實施方案中，花色素包括具有式(VIII)a所示結構的花青素
在一個實施方案中，類黃酮包括具有式(VIII)b所示結構的翠雀色素
在一個實施方案中，原花色素具有式(X)a所示結構
其中R1定義同上；和 n＝2-30。
在一個實施方案中，n＞10(即11-30)。在另一個實施方案中，式(X)a化合物的分子量大于1000。在再另一個實施方案中，式(X)a化合物的分子量＞1000且＜9000(例如＞3000且＜9000)。
原花色素包括原花青素和原翠雀色素亞組，酸水解后，這些物質分別生成花青素和翠雀色素。
治療方法 本發明多酚證明具有許多健康益處。例如，流行病學研究提示較高的類黃酮攝取與減少的CVD風險有關(Arts et al(2001)Epidemiology 12(6)668-675；Sesso et al.Am J Clin Nutr 771400-8；Mink et al.(2007)Am J Clin Nutr 85(3)895-909)，這可能是它們具有在人體中改善內皮功能和抑制血小板凝集的能力的原因(Keen et al.(2005)Am J Clin Nutr 81(1Suppl)298S-303S；Vita J A(2005)Am JClin Nutr 81(Suppl)292S-7S；Heptinstall et al.(2006)J CardiovascPharmacol 47 Suppl 2S197-205)。
但是，最新證據提示分子量大于600的分子在小腸中很少被吸收到血流中，因為它們太大以致無法通過腸壁。例如，在人研究中測得的兒茶素和表兒茶素的Tmax值表明這些小分子量化合物主要在小腸中吸收(Donovan et al.，(1999)，J.Nutr.，129(9)，1662-1668；Richelle et al.(1999)Eur.J.Clin.Nutr.53(1)22-26；Lee et al.(2002)，CancerEpidemiol.Biomark.Prev.，11(10Pt 1)1025-1032)。另外，顯示(+)-兒茶素單體具有與(-)-表兒茶素單體相比相對低的生物利用度(Shoji T etal.(2006)J Agric Food Chem.54(3)884-92)。
盡管在人血漿中檢測到低水平的原花青素B1(表兒茶素-(4β-8)-兒茶素)和B2(表兒茶素-(4β-8)-表兒茶素)，但低聚和聚合原花色素似乎未顯著地吸收到小腸中。消耗巧克力后，在血漿中檢測不到二聚體B5(表兒茶素-(4β-6)-表兒茶素)(Holt et al.，(2002)，Am.J.Clin.Nutr.，76，798-804)。沒有研究在血漿中檢測到聚合度大于四聚體的原花色素。因此，原花青素低聚物和聚合物(式(X)a化合物，其中n＞2)說明吸收到小腸中的多酚小于10％，因此不可能是導致減少的CVD風險的因素(Déprez et al.，(2001)，Antioxidants and Redox Signalling，3，957-967；Shoji et al(2006)同上)。最新試驗的確顯示CVD風險減少與使用原花色素無必然關系(Williamson et al(2005)Am J Clin Nutr.81(1Suppl)，243S-255S)。
而據認為，這些分子通過結腸時極少分解(Rios，L.et al.，(2002)Am.J.Clin.Nutr.，76，1106-1110)。在該階段，它們可被腸微生物區系消化，為此它們用作有效的益生元類物質，或它們可抑制結腸癌。發現蘋果原花青素(式(X)a化合物)在實驗動物中顯著減少結腸中癌前損害的數目(American Association for Cancer Research，Third AnnualInternational Conference)，而蘋果原花青素(式(X)a化合物，其中n＞9)使存活的結腸癌細胞減少82％(Kroon et al.(2004)Am J Clin Nutr80(1)15-21)，支持該結論。
因此，根據該發現，將多酚分離為低分子量多酚和高分子量多酚是適當的。
在一個實施方案中，低分子量多酚含單體(式(I)-(IX)化合物)和二聚體(式(X)a化合物，其中n＝2)，它們的分子量小于600。在另一個實施方案中，低分子量多酚含分子量小于300的單體(式(I)-(IX)化合物)。
在一個實施方案中，低分子量多酚的濃度包括大于22％的總多酚含量。在一個實施方案中，低分子量多酚的總多酚含量為22％-40％。在另一個實施方案中，低分子量多酚的總多酚含量為22％-40％，其中至少85％，例如至少90％，例如至少95％，例如至少99％低分子量多酚含式(V)a化合物。
在再另一個實施方案中，低分子量多酚的總多酚含量為22％-40％，其中至少85％，例如至少90％，例如至少95％，例如至少99％低分子量多酚含式(V)b化合物，其中R1代表氫(例如表兒茶素-α異構體)。
在一個實施方案中，高分子量多酚含低聚物和聚合物(式IV化合物，其中n＞2)，它們的分子量大于600。在另一個實施方案中，高分子量多酚含低聚物和聚合物(式IV化合物，其中n＞1)，它們的分子量大于300。
因此相信，低分子量多酚可代表有效預防或治療心血管疾病。另外，還相信高分子量多酚可構成對結腸癌的有效預防或治療。
可以認識到，因為前文中定義的蘋果含有這種大量的兩種類型的此類多酚，它們很可能具有有效預防或治療心血管疾病或結腸癌的能力。
還可以認識到，可通過本領域技術人員熟知的方法，由所述蘋果例如蘋果片、蘋果果肉、蘋果汁等制備多種蘋果提取物和各種干提取物。因此，這些得到的蘋果提取物通常含高濃度多酚。因此，在本發明的一個方面，提供由前文定義的蘋果制備的蘋果提取物，該提取物含多酚。這種蘋果提取物很可能具有類似于該蘋果的療效。
還會認識到，可通過本領域技術人員熟知的方法，從所述蘋果分離一種或多種多酚。這種多酚分離物將具有前文中所述療效。
因此，按照另一方面，提供前文定義的用于預防或治療心血管疾病或結腸癌的蘋果、蘋果提取物或多酚分離物。
在另一方面，提供前文定義的蘋果、蘋果提取物或多酚分離物在制備藥物中的用途，該藥物用于預防或治療心血管疾病或結腸癌。
在本發明的再另一方面，提供治療或預防心血管疾病或結腸癌的方法，該方法包括給予前文定義的蘋果、蘋果提取物或多酚分離物。
在本發明的再另一方面，提供藥用組合物，該組合物含用于預防或治療心血管疾病或結腸癌的蘋果、蘋果提取物或多酚分離物。
可以認識到，本文使用的術語“治療”表示目的為抵抗病癥例如疾病或障礙，而對患者進行的處理和照顧。該術語將包括對患者患有給定病癥的所有治療范圍，例如給予活性化合物，用以緩解癥狀或并發癥，延遲疾病、障礙或病癥的發展，緩解或減輕癥狀和并發癥，和/或治愈或消除疾病、障礙或病癥以及預防病癥，其中預防可理解為目的為抵抗疾病、病癥或障礙而對患者進行的處理和照顧，它包括給予活性化合物，用以防止癥狀或并發癥發作。所治療的患者優選為哺乳動物，尤其是人類，但它也可包括動物，例如狗、貓、母牛、綿羊、馬和豬。
聯合療法 在治療中通過同時或序貫給予，用大于一種藥物治療多種疾病。因此，在用于治療上述疾病之一的治療方法中，本發明蘋果、提取物或多酚分離物互相聯合使用，或作為通常用于治療所述疾病的其他公認療法的輔助療法，或與通常用于治療所述疾病的其他公認療法聯合使用均在本發明范圍內。在一個實施方案中，提供藥用組合物，該組合物含前文定義的蘋果、提取物或多酚分離物和組合應用的一種或多種另外的治療藥物。
以此類推，在制備治療所述疾病的藥物中，本發明蘋果、提取物或多酚分離物和通常用于治療上述疾病之一的其它治療活性化合物組合使用，也在本發明范圍內。
可按本領域技術人員認為必需或便利的任何方式且為了本說明書的目的，進行聯合治療，關于化合物用于組合的次序、量、重復或相對量認為不受限制。
合成方法 因此，本發明還提供得到前文定義的蘋果的方法，該方法包括使通紅(red-through)仁果與蘋果雜交的步驟。
可以認識到，所述″通紅仁果″是指具有紅果肉的水果，且其由薔薇科(rosaceae)中蘋果亞科(maloideae)的開花植物生產。此類通紅仁果的實例包括酸蘋果(crabapple)(蘋果屬)和山楂(山楂屬；例如銳刺山楂(Crataegus oxyacantha))。在一個實施方案中，通紅仁果是山楂(山楂屬；例如銳刺山楂(Crataegus oxyacantha))。由山楂制備本發明蘋果的優點是山楂果直徑通常小于20mm，具有高的表面積體積比例，因此較易凍干。所以，山楂果可在得到的蘋果中提供高濃度多酚，因此被推薦為心血管疾病的天然療法(Walker，A.F.et al.，(2002)Phytother Res.16，48-54)。
可以認識到，可使通紅仁果與任何合適的蘋果雜交。蘋果的選擇將主要取決于得到的蘋果的需要的性質(例如甜度、堅度等)。在一個實施方案中，使通紅仁果與酸蘋果(蘋果屬)雜交。
通常，本發明方法將需要在各階段干預。例如，雜交步驟后，通常應在得到的蘋果上進行多酚剖面測量(profiling)，直至它們可分為以下3類之一 (1)特征在于總多酚含量為10,000-20,000mg/kg，更典型12,000-14,000mg/kg(按鮮重計)的水果； (2)特征在于總多酚含量為20,000-100,000mg/kg，更典型15,000-40,000mg/kg(按鮮重計)的水果；和 (3)特征在于總多酚含量最高達10,000mg/kg，更典型9,000-10,000mg/kg(按鮮重計)的水果。
通常，一旦將蘋果歸類到上述3類中之一，本發明方法然后將需要繁殖步驟，以得到活的蘋果。
組合物 在一個實施方案中，本發明高分子量多酚可與其它益生元類物質例如單糖、二糖和多糖組合使用。因此，按照本發明的另一個方面，提供益生元組合物，該組合物含一種或多種高分子量多酚；一種或多種單糖、二糖或多糖。合適的糖是具有式(XI)所示結構的低聚果糖
其中n通常為2-14，適合為2-10，例如2-8。
在另一個實施方案中，本發明高分子量多酚可與蘋果提取物組合使用，該蘋果提取物提供各種單糖、二糖和多糖。
當多酚與其它益生元類物質或蘋果提取物組合使用時，可通過任何便利途徑序貫或同時給予各組分。該組合提供刺激微生物區系的優點，其幫助改善腸健康、腸功能、鈣吸收和免疫反應，以及還減少結腸癌風險(Rios，L.et al.同上)。
在一個方面，本發明提供劑型，該劑型含蘋果提取物或多酚分離物和/或上述組合(下文中稱為本發明組合物)。
可便利地將本發明組合物單獨給予或與藥學上可接受的載體或賦形劑組合給予。可按照常規技術例如在RemingtonThe Science andPractice of Pharmacy，第19版，Gennaro，Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1995中公開的那些，用藥學上可接受的載體或稀釋劑和任何其它已知助劑和賦形劑配制本發明組合物。
合適的藥物載體包括惰性固體稀釋劑或填充劑、無菌水溶液和各種有機溶劑。固體載體的實例為乳糖、石膏粉、蔗糖、環糊精、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、硬脂酸鎂、硬脂酸和纖維素的低級烷基醚。液體載體的實例是糖漿、花生油、橄欖油、磷脂、脂肪酸、脂肪酰胺、聚氧乙烯和水。
同樣，載體或稀釋劑可包括任何本領域中已知的緩釋材料，例如單獨或與蠟混合的甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。然后容易用適合公開的給藥途徑的多種劑型給予通過使本發明組合物與藥學上可接受的載體混合形成的藥用組合物。可通過藥劑領域中已知的方法，將制劑便利地制成單位劑量形式。
因此，在另一個方面，提供用于治療心血管疾病的劑型，該劑型含一種或多種低分子量多酚或其藥學上可接受的鹽或前藥，和一種或多種藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
因此，在另一個方面，提供用于治療結腸癌的劑型，該劑型含一種或多種高分子量多酚或其藥學上可接受的鹽或前藥，和一種或多種藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
可配制劑型，用于通過任何合適的途徑例如口服、直腸、鼻、肺、局部(包括含服和舌下)、透皮、腦池內、腹膜內、陰道和腸胃外(包括皮下、肌內、鞘內、靜脈內和皮內)途徑給藥，優選口服途徑。可以認識到，優選的途徑將取決于所治療的患者的一般狀況和年齡、所治療的病癥性質和所選擇的活性成分。
對于局部使用，考慮含本發明化合物的噴霧劑、霜劑、軟膏劑、膠凍劑、凝膠劑、吸入劑、皮膚貼劑、植入劑、混懸液等。對于該申請的目的，局部應用將包括漱口水和含漱劑。
口服給藥組合物包括固體劑型例如硬或軟膠囊劑、片劑、軟錠劑、糖錠劑、丸劑、硬錠劑、散劑、顆粒劑；和液體劑型例如溶液、乳液、水或油混懸液、糖漿和酏劑，它們各自含預定量的本發明組合物，并可含合適的賦形劑。可按照任何已知方法制備將口服用的組合物，此類組合物可含一種或多種選自以下的物質甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑，以便提供藥品美觀和爽口制劑。
水性混懸劑可含與適合制備水性混懸劑的賦形劑混合的本發明組合物。此類賦形劑是懸浮劑例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃芪膠和阿拉伯膠；分散劑或濕潤劑可以是天然磷脂例如卵磷脂，或環氧烷與脂肪酸的縮合產物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環氧乙烷與長鏈脂族醇的縮合產物例如十七碳亞乙基氧基鯨蠟醇，或環氧乙烷和由脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的縮合產物例如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯，或環氧乙烷和由脂肪酸和己糖醇酐衍生的部分酯的縮合產物例如聚乙烯脫水山梨醇單油酸酯。水性混懸劑也可含一種或多種著色劑、一種或多種矯味劑和一種或多種甜味劑例如蔗糖或糖精。
油性混懸劑可通過將本發明組合物懸浮于植物油例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油，或懸浮于礦物油例如液體石蠟中配制。油性混懸劑可含增稠劑例如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇。可加入甜味劑例如上述那些和矯味劑，以提供可口的口服制劑。可通過加入抗氧化劑例如抗壞血酸保存這些組合物。
適合通過加入水制備水性混懸劑的可分散粉末和顆粒提供和分散劑或濕潤劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑混合的本發明組合物。合適的分散劑或濕潤劑和懸浮劑已經通過上述那些舉例說明。它們也可含緩沖劑例如檸檬酸鹽和磷酸鹽緩沖劑、由碳酸鹽例如碳酸氫鹽例如碳酸氫鈉或碳酸氫銨和solic酸例如檸檬酸或檸檬酸鹽形成的泡騰劑。其它賦形劑例如甜味劑、矯味劑和著色劑也可存在。
本發明藥用組合物也可為水包油乳液形式。油相可以是植物油，例如橄欖油或花生油，或礦物油例如液體石蠟或其混合物。合適的乳化劑可以是天然膠例如阿拉伯膠或黃芪膠；天然磷脂例如大豆、卵磷脂；和由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或部分酯例如脫水山梨醇單油酸酯；和所述部分酯和環氧乙烷的縮合產物例如聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯。乳液也可含甜味劑和矯味劑。
可用甜味劑例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制糖漿和酏劑。此類制劑也可含緩和劑、防腐劑和矯味劑和著色劑。藥用組合物可以為無菌可注射水性或油性混懸劑形式。該混懸劑可按照已知方法，用合適的上述分散劑或濕潤劑和懸浮劑配制。無菌注射制劑也可以是在無毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌注射液或混懸液，例如1，3-丁二醇的溶液。在可使用的可接受的溶媒和溶劑中有水、林格氏液和等滲氯化鈉溶液。另外，無菌非揮發油可便利地用作溶劑或懸浮介質。為此目的，可采用使用合成甘油單酸酯或甘油二酸酯的任何非刺激性非揮發油。另外，脂肪酸例如油酸可用于注射劑的制備。
在另一個實施方案中，可將含多酚的流分和多酚分離物干燥。例如在低于30℃，例如低于20℃下，噴霧干燥或真空干燥，任選凍干，然后配制為固體劑型。
片劑可含和適合片劑制備的無毒的藥學上可接受的賦形劑混合的活性成分。這些賦形劑可以為例如惰性稀釋劑，例如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；制粒劑和崩解劑例如玉米淀粉或藻酸；粘合劑例如淀粉、明膠或阿拉伯膠；和潤滑劑例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。
片劑可不包衣，或可通過已知技術將它們包衣，以延緩在腸胃道的崩解和吸收，從而在較長時間內提供持續作用。
口服用制劑也可以作為硬明膠膠囊提供，其中活性成分與惰性固體稀釋劑例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合；或作為軟明膠膠囊提供，其中活性成分與水或油介質例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合。
腸胃外給藥劑型包括無菌水和非水注射溶液、分散體、混懸液或乳液，和用于臨用前再形成無菌注射溶液或分散體的無菌粉末。如果需要，應將此類水溶液適當緩沖，并先用足量鹽水或葡萄糖使液體稀釋劑等滲。水溶液尤其適合靜脈內、肌內、皮下和腹膜內給藥。使用的無菌含水介質均可容易地通過本領域技術人員已知的標準技術得到。長效注射制劑也考慮在本發明范圍內。
用于通過直腸給予化合物的組合物也可以是栓劑形式。可通過使本發明組合物與合適的非刺激性賦形劑混合，制備這些組合物，所述合適的非刺激性賦形劑在常溫下為固體但在直腸溫度下為液體，因此在直腸中將熔化，釋放本發明組合物。此類材料包括例如可可豆脂和聚乙二醇。
通常按有效達到預定目的的量例如有效治療或預防所治療的具體疾病的量，使用本發明化合物或其組合物。可按治療量給予化合物，獲得治療益處。治療益處表示去除或緩解正在治療的有關疾病和/或去除或緩解與有關疾病有關的一種或多種癥狀(system)。治療益處還包括終止或延緩疾病發展，無論是否得到改善。
確切劑量將取決于給藥的頻率和模式、所治療的患者的性別、年齡、重量和一般狀況、所治療病癥的性質和嚴重程度、待治療的任何伴發病，和本領域技術人員顯而易見的其它因素。有效劑量的測定完全在本領域技術人員的能力之內。
當本發明化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑合物或前藥與對相同疾病狀態有活性的第二種治療藥物組合使用時，各化合物的劑量可與化合物單獨使用時的劑量不同。本領域技術人員將容易地認識到適當劑量。
在另一個方面，本發明提供飲食組合物例如飲料，例如果汁、運動飲料、酸乳酪飲料、乳飲料、茶等或固體食品例如速食條(food snackbar)，例如水果條、果仁條和谷類食品條、谷類食物、甜點、巧克力(例如牛奶和深色巧克力)條等，該組合物含蘋果提取物和/或多酚分離物和/或上述組合。
在一個實施方案中，飲食組合物還可含其它營養物例如維生素、礦物質和益生元，例如低聚果糖和蘋果纖維和益生菌。
在一個實施方案中，將飲食組合物配制為前文定義的液體劑型。在另一個實施方案中，液體劑型還可含增稠劑、張力調節劑和緩沖劑。
合適的張力調節劑的實例包括糖和氯化鈉，例如可用它們提供特定濃度的溶液和等滲溶液。合適的緩沖劑的實例包括檸檬酸鹽和磷酸鹽。
因此，在另一方面，提供前文所述的飲食組合物，用于預防或治療心血管疾病和/或結腸癌。
在另一方面，提供前文定義的飲食組合物，該組合物包括在用于預防或治療心血管疾病和/或結腸癌的藥物制備中。
在本發明的再另一方面，提供治療或預防心血管疾病和/或結腸癌的方法，該方法包括給予前文定義的飲食組合物。
在本發明的再另一方面，提供藥用組合物，該組合物含前文定義用于預防或治療心血管疾病和/或結腸癌的飲食組合物。
現在，通過以下非限制性實施例舉例說明本發明。
實施例1具有高多酚含量的蘋果的制備 按前文所述，使得自山楂(Crataegus oxyacantha)的水果與酸蘋果(蘋果屬)雜交。剖面測量得到的水果中的多酚含量，結果見表1所示，其中將得到的多酚含量與市售蘋果對比 表1-本發明蘋果的多酚含量與市售蘋果的比較 以3份樣品的平均值作為樣品結果(n＝420)，各樣品由7個獨立的水果組成，該7個獨立的水果從單獨樹的外部(北、東、南和西位置)和樹的頂端、底部和中部采摘。
應注意，表1是指總多酚含量，但僅測量了黃烷-3-醇單體和包括(-)-表兒茶素、(+)-兒茶素、二聚體、三聚物、四聚體、五聚物、六聚物、七聚物和多聚物的聚合物。因此，總多酚含量很可能比表1中提供的量大得多。
由表1所示結果可以看到，本發明蘋果A-I具有比市售蘋果大的多酚含量。
實施例2用表兒茶素提取物進行心血管研究 招募10名健康志愿者，以改善血管緊張從而改善心血管功能的方式，測試由本發明方法得到的表兒茶素提取物的有效性。給予5名志愿者安慰劑水果飲料，給5名志愿者提供相同試驗飲料，但加入1mg/kg體重(基于(-)-表兒茶素單位)。通過反射率連續量化血管緊張，通過非侵入型數字光電容積脈搏波描記法(photoplethysmography)和連續的研究人員獨立性的自動分析數字體積脈沖(volume pulse)的運算法得到反射率。數據以相對僵硬指數SI(m/s)提供，并與血管年齡相關。通過紅光和紅外線穿過指腹(fingerpulp)的透射率測量脈波。確定一階導數的局部最小值，從而定義脈波的相應轉折點(＝拐點)。由轉折點(＝拐點)后的第3-第7數據點的平均值計算反射率。



圖1和圖2顯示2.5小時試驗結果。這些圖表明，與對照相比，消耗含提取物的試驗飲料的組(n＝10)的動脈僵硬指數(SI；
圖1)和血管年齡(圖2)統計學上有改善(即降低)。
權利要求
1.一種蘋果，所述蘋果的總多酚含量大于10000mg/kg。
2.權利要求1中定義的蘋果，所述蘋果的總多酚含量為10000-100000mg/kg。
3.權利要求1或權利要求2中定義的蘋果，所述蘋果的總多酚含量為10000-50000mg/kg。
4.前述權利要求中任一項定義的蘋果，所述蘋果包括通紅蘋果。
5.前述權利要求中任一項定義的蘋果，其中所述多酚包括類黃酮。
6.權利要求5中定義的蘋果，其中所述類黃酮包括黃烷-3-醇和原花色素。
7.權利要求6中定義的蘋果，其中所述黃烷-3-醇包括式(V)a化合物
其中R1代表氫或OH基團。
8.權利要求6中定義的蘋果，其中所述原花色素包括式(X)a化合物
其中R2代表氫或OH基團；且
n＝2-30。
9.前述權利要求中任一項定義的蘋果，其中低分子量多酚中總多酚含量大于22％。
10.前述權利要求中任一項定義的蘋果，其中低分子量多酚中總多酚含量為22％-40％。
11.前述權利要求中任一項定義的蘋果，其中所述低分子量多酚中總多酚含量為22％-40％，其中至少85％，例如至少90％，例如至少95％，例如至少99％的低分子量多酚包含式(V)a化合物。
12.一種蘋果提取物，所述提取物包含由前述權利要求中任一項定義的蘋果制備的多酚。
13.一種多酚分離物，所述分離物由權利要求1-11中任一項定義的蘋果制備。
14.前述權利要求中任一項定義的蘋果、蘋果提取物或多酚分離物，所述蘋果、蘋果提取物或多酚分離物用于制備藥物，該藥物用于預防或治療心血管疾病或結腸癌。
15.得到權利要求1-11中任一項定義的蘋果的方法，所述方法包括使通紅仁果與蘋果雜交的步驟。
16.權利要求15中定義的方法，其中所述通紅仁果是山楂，且所述蘋果是酸蘋果。
17.一種益生元組合物，所述組合物包含權利要求12中定義的蘋果提取物和/或權利要求13中定義的多酚分離物，和一種或多種益生元類物質。
18.一種劑型，所述劑型包含權利要求12中定義的蘋果提取物和/或權利要求13中定義的多酚分離物。
19.一種用于制備藥物的包含權利要求13中定義的多酚分離物的劑型，所述劑型含有一種或多種低分子量多酚或其藥學上可接受的鹽或前藥，和一種或多種藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑，所述藥物用于治療心血管疾病。
20.一種用于制備藥物的包含權利要求13中定義的多酚分離物的劑型，所述劑型含有一種或多種高分子量多酚或其藥學上可接受的鹽或前藥，和一種或多種藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑，所述藥物用于治療結腸癌。
21.一種飲食組合物，所述組合物包含權利要求12中定義的蘋果提取物和/或權利要求13中定義的多酚分離物。
22.權利要求21中定義的飲食組合物，所述飲食組合物還含有其它營養物，例如維生素、礦物質和益生元和益生菌。
23.權利要求21或權利要求22中定義的飲食組合物，所述飲食組合物是飲料例如果汁、運動飲料、酸乳酪飲料和乳飲料，或固體食品例如速食條，例如水果條、果仁條和谷類食品條、谷類食物和甜點。
24.權利要求23中定義的飲食組合物，所述飲食組合物被配制成液體劑型。
25.權利要求24中定義的飲食組合物，其中所述液體劑型還含有增稠劑、張力調節劑、緩沖劑。
26.權利要求21-25中任一項定義的飲食組合物，所述組合物用于預防或治療心血管疾病或結腸癌。
全文摘要
本發明涉及含高濃度多酚的蘋果、得到所述蘋果的方法和這些蘋果作為治療或預防心血管疾病、結腸癌和幫助消化健康方法的用途。
文檔編號A01H5/08GK101553137SQ200780037439
公開日2009年10月7日 申請日期2007年8月8日 優先權日2006年8月9日
發明者R·伍德, W·巴內特 申請人:科雷森斯有限公司