同時測定烤煙中6種多酚含量的分析方法
【技術領域】
[0001] 本發明的實施方式涉及煙葉化學成分分析技術領域，更具體地，本發明的實施方 式涉及一種同時測定烤煙中6種多酚含量的分析方法。
【背景技術】
[0002] 煙草中含有數量眾多、變化復雜的酚類化合物，其種類在煙葉和煙氣中已鑒定出 的有280多種。按照酚類化合物中羥基數目的不同，可分為簡單酚和多酚兩類。簡單酚在煙 草中的種類較多，但含量極微。多酚的種類相對來說較少，但含量高，也較為重要。這是因 為煙草中的多酚一般具有令人愉快的香氣，在燃吸時由于干餾、氧化和裂解等作用，可產生 多種具有芳香氣味的成分。多酚類物質在卷煙燃吸時還能產生酸性反應，中和煙氣的部分 堿性，使卷煙的吃味醇和。研宄顯示，煙草中多酚類物質的含量高低與煙葉的等級相一致， 與卷煙制品的等級也呈正相關，多酚類物質含量高的卷煙，其等級也越高，反之亦然。因此， 曾有學者提出將煙草中酚類物質含量與蛋白質氮含量的比值定義為"芳香值"，作為判斷煙 草香、吃味的化學指標。目前，多酚類物質也是煙草科研工作者和卷煙企業的配方人員比較 關心的一類化學成分，對它的研宄越來越多，也越來越具體。
[0003] 煙草中的多酚主要有咖啡單寧類（新綠原酸、綠原酸和隱綠原酸等）、黃酮類（蕓 香苷和莰菲醇基-3-蕓香糖苷等）和香豆素類（莨菪亭和莨菪靈等）等。綠原酸和蕓香苷 是煙草中含量最高的兩種多酚，新綠原酸和隱綠原酸是綠原酸的異構體。一些研宄顯示，綠 原酸、蕓香苷、新綠原酸和隱綠原酸是烤煙中含量最高的4種多酚，而且對卷煙的感官質量 有重要影響。莰菲醇基-3-蕓香糖苷和蕓香苷的結構非常相似，都是黃酮類蕓香糖苷，在 煙草中的含量也比較高。莨菪亭是典型的香豆素類多酚，對煙葉和卷煙的品質也有重要影 響。因此，研宄能準確、快速地測定煙草中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、莨菪亭、蕓香苷和莰 菲醇基-3-蕓香糖苷的分析方法具有重要意義。超高效液相色譜法（Ultra Performance Liquid Chromatography, UPLC)是Waters公司在2004年時推出的，其技術核心是在非常高 的壓力下（其柱壓最高可達到18, 000PSI)，通過降低固定相的粒度（可采用1. 7 μπι的色譜 柱填料），提高流動相線速度的方法，對復雜樣品進行高效、快速的分離和分析。目前，采用 超高效液相色譜法同時測定烤煙中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、莨菪亭、蕓香苷和莰菲醇 基-3-蕓香糖苷6種多酚的分析方法尚未見報道。
【發明內容】
[0004] 本發明克服了現有技術的不足，提供一種利用超高效液相色譜法同時測定烤煙 中6種多酚含量的分析方法，解決新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、莨菪亭、蕓香苷和莰菲醇 基-3-蕓香糖苷6種多酚含量分析方法復雜和結果不準確的問題。
[0005] 為解決上述的技術問題，本發明的一種實施方式采用以下技術方案：
[0006] -種同時測定烤煙中6種多酚含量的分析方法，它包括以下步驟：
[0007] (1)將烤煙煙葉干燥后粉碎，獲得煙葉粉碎料；
[0008] (2)稱取少量上述煙葉粉碎料，用甲醇溶液萃取后過濾，得到濾液；
[0009] (3)將所述濾液采用超高效液相色譜法進行分析獲得烤煙煙葉的超高效液相色譜 圖，其分析條件為：采用HSS T3色譜柱，其柱溫為30°C，進樣量為1 μ L ;流動相包括流動相 A和流動相Β，所述流動相的流速為0. 4mL/min ;所述流動相A為冰乙酸的水溶液，其冰乙酸 與水的體積比為2:100 ;所述流動相B為冰乙酸的甲醇溶液，其冰乙酸與甲醇的體積比為 2:100 ;梯度洗脫程序如下：
[0010]
【主權項】
1. 一種同時測定烤煙中6種多酚含量的分析方法，其特征在于它包括以下步驟： (1) 將烤煙煙葉干燥后粉碎，獲得煙葉粉碎料； (2) 稱取少量上述煙葉粉碎料，用甲醇溶液萃取后過濾，得到濾液； (3) 將所述濾液采用超高效液相色譜法進行分析獲得烤煙煙葉的超高效液相色譜圖， 其分析條件為：采用HSST3色譜柱，其柱溫為30°C，進樣量為1yL;流動相包括流動相A和 流動相B，所述流動相的流速為0. 4mL/min;所述流動相A為冰乙酸的水溶液，其冰乙酸與水 的體積比為2:100 ;所述流動相B為冰乙酸的甲醇溶液，其冰乙酸與甲醇的體積比為2:100 ; 梯度洗脫程序如下：
;紫外檢測器采用二極管陣列檢測器，其檢測波長為342nm，其參比波長為480nm，檢測 波長的帶寬為4nm，參比波長的帶寬為100nm; (4) 根據上述超高效液相色譜圖，以保留時間定性，用外標法定量，獲得烤煙煙葉中新 綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、莨菪亭、蕓香苷和莰菲醇基-3-蕓香糖苷共6種多酚的含量。
2. 根據權利要求1所述的同時測定烤煙中6種多酚含量的分析方法，其特征在于步驟 (1)所述干燥是將烤煙煙葉在40°C下干燥8h，干燥后采用YC/T31 - 1996標準中規定的方 法測定烤煙煙葉的含水量，在步驟（4)計算烤煙煙葉中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、莨菪 亭、蕓香苷和莰菲醇基-3-蕓香糖苷共6種多酚的含量時排除水分對6種多酚含量的影響。
3. 根據權利要求1所述的同時測定烤煙中6種多酚含量的分析方法，其特征在于步驟 (1) 所述煙葉粉碎料全部能夠通過40目篩。
4. 根據權利要求1所述的同時測定烤煙中6種多酚含量的分析方法，其特征在于步驟 (2) 所述萃取的方法是：將稱取的煙葉粉碎料放入樣品瓶，按照煙葉粉碎料的重量與甲醇 溶液的體積之比為〇. 095~0. 105g:50mL向上述樣品瓶中加入甲醇溶液，所述甲醇溶液中 甲醇與水的體積比為1:4,然后將樣品瓶放入超聲波清洗器中萃取30~35min。
5. 根據權利要求4所述的同時測定烤煙中6種多酚含量的分析方法，其特征在于所述 煙葉粉碎料的重量與甲醇溶液的體積之比為〇.lg:50mL。
6. 根據權利要求1所述的同時測定烤煙中6種多酚含量的分析方法，其特征在于所述 HSST3 1.8ym色譜柱的尺寸為 2.1mmX100mm。
7. 根據權利要求1所述的同時測定烤煙中6種多酚含量的分析方法，其特征在于所述 以保留時間定性和用外標法定量前，分別稱取新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、莨菪亭、蕓香苷 和莰菲醇基-3-蕓香糖苷適量，用甲醇溶液溶解和稀釋，所述甲醇溶液中甲醇與水的體積 比為1:4,配置成6種多酚的下述濃度的標準溶液，下述濃度均以yg/mL為計量單位：
將上述所有標準溶液分別采用步驟（3)所述的超高效液相色譜法進行分析，根據標準 溶液的濃度及色譜圖的響應峰面積，建立標準溶液的線性工作曲線，該線性工作曲線用于 外標法定量。
8.根據權利要求1所述的同時測定烤煙中6種多酚含量的分析方法，其特征在于步驟 (2)所述過濾是采用孔徑為0. 22ym的水系濾膜過濾。
【專利摘要】本發明公開了一種同時測定烤煙中6種多酚含量的分析方法，先將烤煙煙葉粉碎后用甲醇溶液萃取，過濾后濾液用超高效液相色譜法進行分析，采用HSST3色譜柱和二極管陣列檢測器，其檢測波長為342nm，其參比波長為480nm，檢測波長的帶寬為4nm，參比波長的帶寬為100nm；流動相的流速為0.4mL/min；流動相A為冰乙酸的水溶液，流動相B為冰乙酸的甲醇溶液，以梯度淋洗的方式同時測定了烤煙中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、莨菪亭、蕓香苷和莰菲醇基-3-蕓香糖苷這6種多酚的含量。本發明所述方法的加標回收率在95.6～109.3％之間，檢出限為3.7～9.9μg/g，相對標準偏差為0.5～3.9％(n＝4)，標準溶液的相關系數均大于0.9995，而且方法的前處理簡單，分析時間短。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號】CN104777256
【申請號】CN201510204399
【發明人】李力, 李東亮, 戴亞, 肖克毅
【申請人】川渝中煙工業有限責任公司
【公開日】2015年7月15日
【申請日】2015年4月27日