奶牛飼料用復合微生物添加劑及其制備方法

專利名稱：：奶牛飼料用復合微生物添加劑及其制備方法
技術領域：
：本發明涉及一種微生物制劑，具體地說是一種奶牛用微生物制劑及其制備方法，屬于微生物領域。技術背景乳酸菌是一類以分解糖類產生乳酸的菌的總稱、此類制劑應用最早、最廣泛，種類繁多。通常為厭氧或者兼性氧生長，缺點是不耐高溫，經8(TC處理5min，損失70%80%。在顆粒飼料制備過程中損失率較大。但耐酸，在pH值為3.04.5時仍可生長，對胃中的酸性環境有一定的耐受性。在動物體內通過生物拮抗、降低pH值阻止和抑制致病菌的侵入和定植，降解亞硝氨、氨、fJ引哚、糞臭素等有害物質，維持腸道中正常的生態平衡。活菌體內和代謝產物中含有較高的超氧化物歧化酶(SOD),能增強動物的體液免疫和細胞免疫。也能夠產生氨基酸、淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶等消化酶。乳酸菌在動物腸道的定植具有特異性。研究發現乳酸菌在在哺乳和斷乳期動物中使用能夠防治腹瀉，維持腸道正常生態平衡。目前，主要應用的乳酸菌主要是來源于乳酸桿菌屬、乳酸鏈球菌屬和雙歧桿菌屬的近30種的微生物。飼用酵的種類豐富，主要有熱帶假絲酵母、產朊假絲酵母、啤酒酵母、紅色酵母等。飼用酵母對動物體的作用分為以下幾點l)促生長特性..酵母細胞富含蛋白質、核酸、維生素和多種酶。具有提供養分、增加飼料適口性，加強消化吸收等功能，并可提高動物飼料的利用率。由于酵母豐富的營養組成，因此詞用酵母可以部分或者全部替代飼料中的魚粉；2)改善腸道微生態環境。酵母菌是腸道有益微生物，研究發現飼料中添加酵母可促進瘤胃微生物的生長和活性，使厭氧菌總數上升、纖維素發酵菌數量明顯上升；3)促進動物體免疫功能.增強抗病力。酵母細胞壁的主要成分是甘露聚糖、葡聚糖，研究發現甘露聚糖可增強吞噬細胞的活性。在火雞口糧中添加甘露聚糖可使血清中IgG和肝臟的lgA濃度提高25%;4)可直接和腸道病原體結合，中和腸道中毒素。酵母中的甘露聚糖可以和腸道病原菌的纖毛結合，阻止病原菌在腸道粘膜中的定植。試驗還發現甘露聚糖可以降低畜禽動物糞便中沙門氏菌、大腸桿菌的含量。芽抱桿菌是一類好氧菌，在一定條件下產生芽孢，和常用的乳酸菌等益生菌相比，芽孢桿菌具有以下優點和特點l)具有耐高溫、耐酸堿、耐壓等特點，能夠耐受顆粘飼科加工的影響；2)在貯藏過程以孢子形式存在，不消耗飼料的營養成分，可以保持飼料的質量3)進入腸道后，在腸道上部迅速復活.復活率接近100%;4)芽孢桿菌能夠產生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等多種氨基酸；5)芽孢桿菌可以消耗大量的氧，維持腸道厭氧環境，抑制致病菌的生長，維持腸道正常生態平衡；6)具有平衡和穩定乳酸桿菌的作用。目前使用的菌株有枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)、蠟樣芽包桿菌(Bacilluscereus)、東洋芽孢桿菌(Bacillustoyol)等。目前，微生態制劑在推廣應用方面的主要問題是產品加工處理后穩定性差，細菌易失活，功效降低。其原因除了和產品的質量有關外，還應考慮該產品是否能平衡腸道的生態系統。現有微生物制劑多針對禽畜類，如雞、豬等，其種群腸道菌群的生成是長期進化的結果。現有微生物飼料添加劑并沒有專門針對奶牛的，由于一種適于某類動物的活菌制劑不一定適于另一類動物，因此，禽畜類微生物添加劑對奶牛詞養并不能起到理想的效用。目前針對奶牛的微生物添加劑大部分為單一微生物添加劑，雖然對于奶牛的消化系統和吸收有一定益處，但是功效單一，效果不理想。目前急需一種可以增強奶牛胃腸功能，同時可以保證詞料用微生物添加劑穩定性，提高奶牛產奶量和奶質的奶牛飼料用微生物添加劑。
發明內容本發明人經過長期反復試驗發現，動物生產詞喂飼料中采用復合微生物添加劑比單一微生物添加劑具有更好的作用效果，原因在于復合微生物制劑具有協同作用，不同微生物在動物胃腸道的作用機理不同，能起到互補長短，互相促進的作用，其應用效果比單一菌劑更顯著，更穩定高產，絕對適用于奶牛應用。本發明的目的在于提供一種能夠有效提高奶牛產奶量，對奶成分中的乳脂率和乳蛋白等成分有顯著提高的奶牛飼料用微生物添加劑。本發明的另一目的在于提供一種上述奶牛飼料用微生物添加劑的制備方法。本發明用于制備納豆枯草芽孢桿菌的菌種為枯草芽孢桿菌(^"7/w^6"&)，其保藏編號為CGMCCNo.2420，分離自納豆；屎腸球菌菌種為屎腸球菌(￡wteracoccus/flec/Mm)，其保藏編號為CGMCCNo.2419;所述釀酒酵母菌菌種為釀酒酵母菌(Sacc/^ramycMce^v/Wae)，其保藏編號為CGMCCNo.2418。上述三株菌種均已于2008年3月26日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)。為實現上述目的，本發明采用如下具體技術方案一種奶牛飼料用復合微生物添加劑，其中，該微生物添加劑含有納豆枯草芽孢桿菌、屎腸球菌和釀酒酵母菌的發酵產物的混合物。上述的一種奶牛詞料用復合微生物添加劑，其中，所述微生物添加劑還含有載體，所述載體為豆粕、玉米粉和紅薯淀粉中的一種或幾種，優選豆粕，高壓熟化為佳。上述發酵產物混合物為含有納豆枯草芽孢桿菌活菌的發酵菌液、含有屎腸球菌活菌的發酵菌液和含有釀酒酵母菌活菌的發酵菌液的混合菌液，各發酵菌液之間的體積比為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>上述混合菌液與載體的體積重量(v/w)比為0.24，最佳比例為l:1。上述納豆枯草芽孢桿菌、屎腸球菌和釀酒酵母菌的發酵菌液菌液濃度分別為>109cell/mL、〉108cell/mL和〉l()9cell/mL。上述復合微生物添加劑中細菌總數為109cfu/g以上，所述復合微生物制劑為混合發酵菌液和載體按比例配制后的成品。一種上述奶牛詞料用復合微生物添加劑的制備方法，其具體制備步驟如下(1)發酵菌液的制備納豆菌液的制備從PDA斜面培養基上取兩環活化納豆枯草芽孢桿菌菌種，接入裝有30mL種子培養基的100mL錐形瓶，30°C、180r/min培養24h;所述種子培養基成分蔗糖1%，大豆蛋白胨1%,NaC10.5%，Na2HP040.6%，NaH2P040.1%,CaCl20.02%，MgSO40.05%，pH值調至7;取2%(v/v)種子液加入裝有30mL發酵培養基的100mL錐形瓶中，37°C、180r/min培養24h，所述發酵培養基成分葡萄糖1%，蔗糖1%，大豆蛋白胨6%，胰蛋白胨4%，Na2HP040.6%,NaH2P040.1%，CaCl20.02%，MgSO40.05%，pH值調至7;培養后的發酵菌液稀釋后進行顯微鏡血球計數板計數；菌液濃度MO、ell/mL，置于4。C保存備用；PM斜面培養基成分葡萄糖2%，蛋白胨1%，酵母膏0.5%，瓊脂1.52.0%。屎腸球菌菌液的制備從MRS瓊脂培養基中取兩環活化屎腸球菌菌種，接種入裝有30mLMRS液體培養基的100mL錐形瓶，37°C、厭氧培養24h制得種子液，取2%(V/V)種子液加入裝有30mLMRS液體培養基的100mL錐形瓶，37°C、厭氧培養24h制得屎腸球菌發酵菌液；該發酵液稀釋后進行顯微鏡血球計數板計數，菌液濃度M()Scell/mL，置于4"C保存備用；MRS瓊脂培養基成分蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄糖20g，K2HP042g，乙酸鈉5g，MgS040.2g，MnS040.05g，吐溫-801g，檸檬酸二銨2g，瓊脂20g，pH6.26.4，121。C滅菌15min。釀酒酵母菌菌液的制備從YPD瓊脂培養基中取兩環活化釀酒酵母菌菌種，接種入裝有30mLYPD液體培養基的100mL錐形瓶，37"C培養24h制得種子液，取2。/。(V/V)種子液加入裝有30mLYPD液體培養基的100mL錐形瓶，37°C培養24h制得屎腸球菌發酵菌液，該發酵菌液稀釋后進行顯微鏡血球計數板計數，菌液濃度〉10、ell/mL，置于4'C保存備用；YPD瓊脂培養基成分葡萄糖20g，蛋白胨10g，酵母膏5g，瓊脂1520g，水1000mL，pH自然，121。C滅菌，15min。(2)將上述制備的納豆枯草芽孢桿菌、屎腸球菌和釀酒酵母菌的發酵菌液按體積比為0.51.5:12:12的比例，最佳為l:1:l的比例混合均勻制成混合菌液。上述的一種奶牛飼料用復合微生物添加劑的制備方法，其還包括下述步驟(3)高壓滅菌熟化載體，12rC，30min;(4)以比例為0,24(v/w)，最佳為l:l(v/w)的比例將步驟(2)制備的混合菌液添加到熟化后的載體中混合均勻。上述的一種奶牛飼料用復合微生物添加劑的制備方法，其中，步驟(1)中所述納豆枯草芽孢桿菌菌種可為商業購買菌種，最佳為枯草芽孢桿菌(5ac///^^"/&)，其保藏編號為CGMCCNo.2420，分離自納豆；所述屎腸球菌菌種可為商業購買菌種，最佳為屎腸球菌(￡"feracoccas/aec&m)，其保藏編號為CGMCCNo.2419;所述釀酒酵母菌菌種可為商業購買菌種，最佳為釀酒酵母菌(&cc/2a/-ow_yce>scereWi7'ae)，其保藏編號為CGMCCNo.2418。上述的一種奶牛飼料用復合微生物添加劑的制備方法，其中，所述載體為豆粕、玉米粉和紅薯淀粉中的一種或幾種。經上述方法制備得出的奶牛飼料用微生物添加劑中的細菌總數為109cfu/g以上。上述奶牛伺用微生物添加劑的使用方法為按照奶牛日糧的0.05%0.1%(wt%)添加飼喂，每天詞喂1次。本發明所用的術語"發酵菌液"、"活菌"、"發酵產物"具有本領域技術人員熟知且承認的含義。所述發酵菌液是通過適合的環境培養本發明所述的納豆枯草芽孢桿菌、屎腸球菌和釀酒酵母菌，使其生長至一定細菌濃度獲得的。所述活菌是指通過生物法培養納豆枯草芽孢桿菌、屎腸球菌和釀酒酵母菌得到的具有生活9能力的菌體。所述發酵產物為微生物經一定環境發酵后所得的菌體、酶及其代謝產物。只要按照本發明公開的制備方法的具體步驟制備各發酵菌液，并保證最終菌液中活菌濃度即可以達到本發明所述有益效果，并無任何隨機性，所述各菌種均可通過購買獲得，使用本發明保藏菌種效果更佳。本發明的優點與效益本發明所述的復合微生物制劑，其活性成分是納豆枯草芽孢桿菌、屎腸球菌和釀酒酵母菌，三種微生物產生協同作用，經過長期反復的動物實驗顯示，在奶牛飼料中添加本發明所述的復合微生物添加劑后可以顯著提高飼喂奶牛的產奶量。在對飼喂奶牛牛奶乳品質指標的觀察中發現，飼料中添加本發明所述復合微生物添加劑后，飼喂奶牛產奶中乳脂率有顯著提高，乳蛋白產量也顯著增高。此外，飼喂奶牛飼料中添加本發明復合微生物添加劑后，奶牛泌乳期體細胞數明顯下降。體細胞數是乳房健康程度的指示，乳中體細胞增多是機體的一種抵御反應，乳房的感染越嚴重，體細胞數也就越高。因此，本發明奶牛飼料用復合微生物添加劑可以使奶牛患乳房炎和隱形乳房炎的發病幾率減少，奶牛機體的自身免疫能力明顯增強。同時，奶牛日糧中添加本發明所述復合微生物添加劑后，可以有效地提高機體谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(S0D)的含量，對清除機體脂類氫過氧化物、有機氫過氧化物、H202，協同維生素E保護細胞免受脂質過氧化損害有一定的作用，脂質過氧化代謝產物丙二醛(MDA)顯著降低。具體實施方式實施例l一、材料及來源1、納豆枯草芽孢桿菌菌種為保藏編號為CGMCCNo.2420的枯草芽孢桿菌(5fld〃z^S由他)；2、屎腸球菌菌種為保藏編號為CGMCCNo.2419的屎腸球菌(五"&racoco^/aec/wm);3、釀酒酵母菌菌種為保藏編號為CGMCCNo.2418的釀酒酵母菌(Sacc/^ramyc^4、豆粕來源中畜陽光飼料公司。二、奶牛飼料用復合微生物添加劑的制備(1)發酵菌液的制備納豆枯草芽孢桿菌菌液的制備從PDA斜面培養基上取兩環活化納豆枯草芽孢桿菌菌種，其保藏編號為CGMCCNo.2420，接人裝有30mL種子培養基(蔗糖1%，大豆蛋白胨1%，NaC10.5%，Na2HP040.6%，NaH2P040.1%，CaCl20.02%，MgS040.05%，pH值調至7)的100mL錐形瓶，30°C、180r/min培養24h。取2%(v/v)種子液加入裝有30mL發酵培養基(葡萄糖1%，蔗糖1%，大豆蛋白胨6%，胰蛋白胨4%，Na2HP040.6%，NaH2P040.1%，CaCl20.02%，MgSO40.05%，pH值調至7)的100mL錐形瓶中，37°C、180r/min培養24h。稀釋一定倍數后進行顯微鏡血球計數板計數。菌液濃度>109'mL"，置于4。C保存備用。PDA斜面培養基成分葡萄糖2%，蛋白胨1%，酵母膏0.5%，瓊脂1.52.0%。屎腸球菌菌液的制備從MRS瓊脂培養基中取兩環活化屎腸球菌菌種其保藏編號為CGMCCNo.2419，接種入裝有30mLMRS液體培養基的100mL錐形瓶，37°C、厭氧培養24h制得種子液，取2%(V/V)種子液加入裝有30mLMRS液體培養基的100mL錐形瓶，37°C、厭氧培養24h制得屎腸球菌發酵菌液，即為試驗用菌液。該發酵液稀釋一定倍數后進行顯微鏡血球計數板計數，菌液濃度>108.mL"，置于4。C保存備用。MRS瓊脂培養基成分蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，葡萄糖20g，K2HP042g，乙酸鈉5g，MgS040.2g，MnS040.05g，吐溫-801g，檸檬酸二銨2g，瓊脂20g。pH6.26.4，121。C滅菌15min。釀酒酵母菌菌液的制備從YPD瓊脂培養基中取兩環活化釀酒酵母菌菌種其保藏編號為CGMCCNo.2418，接種入裝有30mLYPD液體培養基的100mL錐形瓶，37'C培養24h制得種子液，取2y。(V/V)種子液加入裝有30mLYPD液體培養基的100mL錐形瓶，37'C培養24h制得屎腸球菌發酵菌液，即為試驗用菌液。該發酵液稀釋一定倍數后進行顯微鏡血球計數板計數，菌液濃度稀釋>109,mL"，置于4'C保存備用。YPD瓊脂培養基成分葡萄糖20g，蛋白胨10g,酵母膏5g，瓊脂1520g,水1000mL，pH自然，121。C滅菌，15min。(2)納豆枯草芽孢桿菌、屎腸球菌和釀酒酵母菌的發酵菌液按體積比為1:1:1的比例混合均勻制成混合菌液。經實驗證實，在0.51.5:12:12的比例范圍內配制混合菌液均可達到上述有益效果，實施例僅給出最佳配比，其他值不一一贅述。(3)高壓滅菌熟化載體，如豆粕、玉米粉或紅薯淀粉，12rC，30min。(4)以l:l(v/w)的比例將所述混合菌液添加到豆粕載體中混合均勻，65°〇烘烤16h,即制備出奶牛飼料用微生物添加劑。經實驗證實混合菌液和豆粕載體的體積重量比在0.24范圍內均有很好的效果，最佳實施例僅給出最佳配比，其他配比不一一贅述。經上述方法制備得出的奶牛飼料用微生物添加劑中的細菌總數為109cfu/g以上。三、奶牛飼料用復合微生物添加劑在奶牛飼喂中的應用1、奶牛來源北京安定棚諷奶牛養殖場選擇奶牛胎次14胎次、泌乳階段為泌乳前期和中期、產奶量2030kg、體重平均值為550kg泌乳奶牛70頭。2、分組將上述奶牛隨機分成5組，分別為試驗I、試驗II、試驗III、試驗IV和對照組。3、飼喂方式試驗奶牛每天分別詞喂精粗比l:l混合日糧20kg，日糧組成見表1，早晚兩次詞喂，自由飲水。試驗I、試驗II、試驗III和試驗IV組中分別添加有本發明實施例制備的奶牛飼料用復合微生物添加劑10g、20g、30g和40g，占飼喂日糧干物質的O.05%、0.1%、0.15%和2%，一次飼喂。試驗周期為67天。所應用的基礎日糧成分及營養水平見表1。表1基礎日糧的組成及其營養水平<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注1.每千克維生素預混料所提供成分維生素A200KIU，維生素D35000IU，維生素B310000mg。2.每千克微量元素預混料所提供成分銅(Cu)1600mg，鐵(Fe)2500mg，鋅(Zn)8000mg，錳(Mn)2500mg，碘(I)100mg，硒(Se)20mg。3、觀察內容試驗奶牛的奶產量、乳品質指標、奶牛泌乳期體細胞數和血液指標。5、實驗結果及分析-(1)復合微生物制劑對奶牛產奶量的影響見表2在本試驗中，由表2可以看出，與對照組相比，給早期泌乳奶牛飼喂不同水平的復合微生物制劑后，試驗I、II產奶量明顯提高，差異顯著(P〈0.05)，試驗III(25.49kg)、試驗IV(25.84kg)與對照組(24.19kg)相比，分別提高了5.37%、6.28%,但差異不顯著(P〉0.05)，試驗組之間差異不顯著(P>0.05)。飼喂復合微生物制劑的奶牛4%校正乳產量與對照組相比分別提高了16.56%(試驗I)、11.39%(試驗n)、11.30%(試驗m)、18.31%(試驗IV)，差異顯著(P<0.05)，試驗IV與對照比差異極顯著(P〈0.01)，但試驗組各處里之間無差異顯著性。表2復合微生物添加劑劑對奶牛產奶量、乳成分的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注同行肩標相同字母表示差異不顯著(P〉0.05)，相鄰字母表示差異顯著(P〈0.05)，相間字母表示差異極顯著(P<0.01)。(2)奶牛飼料用復合微生物添加劑對奶成分的影響見表2從上述表2可以看出，在早期泌乳奶牛日糧中添加復合微生物制劑對牛奶中乳脂率均有不同程度的提高，試驗I、II、III與對照組相比雖有一定的提高，但差異不顯著(P〉0.05)，試驗IV提高最為明顯(19.34%)，顯著高于對照組(p〈o.o5);對乳脂產量而言，與對照組相比試驗i、n、m均有提高，差異顯著(P<0.05)，試驗IV最為明顯(P<0.01)，但試驗組之間無差異顯著性。在整個試驗過程中，牛乳中乳蛋白含量相對比較穩定，試驗組與對照組相比有很小幅度的下降，差異不顯著(P〉0.05)，但試驗組乳蛋白產量均高于對照組，試驗I、II最為明顯，差異顯著(P<0.05)，試驗組處理之間差異不顯著(P>0.05)。在整個試驗期，牛乳中乳糖含量也相對比較穩定，與對照組相比，試驗組分別提高了0.09、0.01、0.08、0.09個百分點，差異不顯著(P〉0.05)。乳中總固形物除試驗m組低于對照組外，其余各組均高于對照組，但各處理組之間差異都不顯著(P〉0.05)。試驗結果表明，在早期泌乳奶牛日糧中添加復合微生物制劑可提高乳脂率，對乳脂產量和乳蛋白產量的提高也有明顯的作用。(3)奶牛詞料用復合微生物添加劑對奶牛泌乳期體細胞數的影響見表2由上述表2可知，與對照組相比試驗組牛乳中體細胞數(SCC)明顯下降，差異顯著(P<0.05)，但試驗組處理之間無顯著性差異(P>0.05)。體細胞數是乳房健康程度的指示，乳中體細胞增多是機體的一種抵御反應，乳房的感染越嚴重，體細胞數也就越高。詞喂復合微生物制劑對奶牛泌乳期體細胞的降低有明顯的作用。體細胞數降低，奶牛患乳房炎和隱形乳房炎的發病幾率減少，且奶牛機體的自身免疫能力明顯增強。(4)添加復合微生物制劑對血液生化指標的影響見表3表3復合微生物添加劑對奶牛血液生化指標的影響試驗處理P項目試驗I試驗II試驗III試驗IV對照組SEMtrtdaytrt氺day超氧化物歧化酶(U/mL)70.88ab71.54ab75.72ab76.Ola67.88c2,030.0420.27190.9851谷胱甘肽過氧化物酶129.64125.17123.91124.57118.153.150.20110.00040.9613(咖ol/U丙二醛(醒ol/ml)9,18a9.12a8.25a8.13a10,97b0.560.0350.37850.6667注同行肩標相同字母表示差異不顯著(P〉0.05)，相鄰字母表示差異顯著(P〈0.05)，相間字母表示差異極顯著(P〈0.01)。由表3可以看出，奶牛日糧中添加不同水平復合微生物制劑引起血液中超氧化物歧化酶(SOD)含量的變化，試驗I、II血液中SOD的含量與對照組相比分別提高了4.42%、5.39%，差異不顯著(P〉0.05)，試驗III與對照組相比提高了ll.55%，差異顯著(P<0.05)，試驗IV提高了11.98X，差異極顯著(P〈0.01)。試驗組比對照組血液中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)含量分別提高了9.72%、5.94%、4.88%、5.43%，差異不顯著(P>0.05)。血液中丙二醛(MDA)的含量隨著復合微生物制劑添加量的增加呈遞減趨勢，顯著低于對照組(P<0.05)。血液中SOD、GSH-Px、MDA的含量在試驗組各處理之間均無差異顯著性。結果表明，飼喂復合微生物制劑，可以有效地提高機體谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量，對清除機體脂類氫過氧化物、有機氫過氧化物、H202，協同維生素E保護細胞免受脂質過氧化損害有一定的作用，脂質過氧化代謝產物丙二醛(MDA)顯著降低。16本發明奶牛飼料用復合微生物添加劑與單一微生物添加劑效果比較復合微生物制劑由多種菌復合配制而成，能適應多種條件和宿主，具有促進生長、提高飼料轉化率、調整正常菌群平衡、提高免疫力等多種功效。相對于單一微生物添加劑而言，復合微生物制劑對奶牛生產性能的促進作用效果更佳。據劉飛等(2006)報道，飼喂添加乳酸茵的玉米青貯詞料對奶牛的產奶量沒有顯著影響，雖然牛乳中蛋白質和非脂乳固體的含量有小幅提高，而對乳脂肪的含量沒有影響。Wallace等(1993)綜合18個研究結果后報道，飼喂酵母培養物平均產奶量提高7.8%;本領域實驗人員在泌乳牛日糧中添加酵母菌培養物，產奶量平均提高7.8%。從瑞士進口的"環保樂"Biogreen，每克含活菌約2X109(乳桿菌7X107g、枯草桿菌7X107g、鏈球菌6X107g)。實驗人員用上述環保樂制劑，通過對泌乳前期60頭奶牛詞喂50天的試驗，結果表明，試驗組比對照組每頭奶牛增奶量為1.76%,而乳脂率沒有下降反而略有升高。本發明產品在奶牛上的實際應用效果顯示，本發明復合微生物添加劑可顯著提高標準奶量最高達18.31%，提高乳脂率最高達19.34%，在提高奶量和乳脂率的同時可降低奶牛的體細胞數，證明了本發明奶牛飼料用復合微生物添加劑比較現有單一制劑的應用效果更為顯著，并不是簡單的疊加的效果，且明顯優于現有復合微生物添加劑。權利要求1、一種奶牛飼料用復合微生物添加劑，其特征在于，該微生物添加劑含有納豆枯草芽孢桿菌、屎腸球菌和釀酒酵母菌的發酵產物混合物，細菌總數為109cfu/g以上。2、根據權利要求l所述的一種奶牛詞料用復合微生物添加劑，其特征在于，所述微生物添加劑還含有載體，所述載體為豆粕、玉米粉和紅薯淀粉中的一種或幾種。3、根據權利要求2所述的一種奶牛詞料用復合微生物添加劑，其特征在于，所述載體為豆粕。4、根據權利要求l所述的一種奶牛飼料用復合微生物添加劑，其特征在于，所述發酵產物混合物為含有納豆枯草芽孢桿菌活菌的發酵菌液、含有屎腸球菌活菌的發酵菌液和含有釀酒酵母菌活菌的發酵菌液的混合菌液，各發酵菌液之間的體積比為O.51.5:12:12。5、根據權利要求4所述的一種奶牛飼料用復合微生物添加劑，其特征在于，所述混合菌液與載體的體積重量比為0.24。6、根據權利要求4或5所述的一種奶牛飼料用復合微生物添加劑，其特征在于，所述納豆枯草芽孢桿菌、屎腸球菌和釀酒酵母菌的發酵菌液菌液濃度分別為>109cell/mL、〉108cell/mL禾口〉109cell/mL。7、一種奶牛飼料用復合微生物添加劑的制備方法，其特征在于，其制備步驟如下(1)發酵菌液的制備納豆枯草芽孢桿菌菌液的制備從PDA斜面培養基上取兩環活化納豆枯草芽孢桿菌菌種，接入裝有30mL種子培養基的100mL錐形瓶，30°C、180r/min培養24h;所述種子培養基成分蔗糖1%，大豆蛋白胨1%，NaC10.5%，Na2HP040.6%，NaH2P040.1%，CaCl20.02%，MgSO40.05%，pH值調至7;取2。/ov/v種子液加入裝有30mL發酵培養基的100mL錐形瓶中，37°C、180r/min培養24h，所述發酵培養基成分葡萄糖1%，蔗糖1%，大豆蛋白胨6%，胰蛋白胨4%，Na2HP040.6%，NaH2P040.1%,CaCl20.02%，MgSO40.05%，pH值調至7;培養后的發酵菌液稀釋至菌液濃度>10<9>cell/niL，置于4t:保存備用；屎腸球菌菌液的制備從MRS瓊脂培養基中取兩環活化屎腸球菌菌種，接種入裝有30mLMRS液體培養基的100mL錐形瓶，37°C、厭氧培養24h制得種子液，取2%V/V種子液加入裝有30mLMRS液體培養基的100mL錐形瓶，37°C、厭氧培養24h制得屎腸球菌發酵菌液；該發酵液稀釋至菌液濃度>108cell/mL，置于4t:保存備用；釀酒酵母菌菌液的制備從YPD瓊脂培養基中取兩環活化釀酒酵母菌菌種，接種入裝有30mLYPD液體培養基的100mL錐形瓶，37"C培養24h制得種子液，取2%V/V種子液加入裝有30mLYPD液體培養基的100mL錐形瓶，37°C培養24h制得屎腸球菌發酵菌液，該發酵菌液稀釋至菌液濃度MO、ell/mL，置于4"C保存備用；(2)將上述制備的納豆枯草芽孢桿菌、屎腸球菌和釀酒酵母菌的發酵菌液按體積比為0.51.5:12:12的比例混合均勻制成混合菌液。8、根據權利要求7所述的一種奶牛飼料用復合微生物添加劑的制備方法，其特征在于，還包括下述步驟(3)高壓滅菌熟化載體，12rC，30min;(4)以l:lv/w的比例將步驟(2)制備的混合菌液添加到熟化后的載體中混合均勻。9、根據權利要求8所述的一種奶牛飼料用復合微生物添加劑的制備方法，其特征在于，所述載體為豆粕、玉米粉和紅薯淀粉中的一種或幾種。10、根據權利要求7所述的一種奶牛詞料用復合微生物添加劑的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述納豆枯草芽孢桿菌菌種為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)，其保藏編號為CGMCCNo.2420，分離自納豆；所述屎腸球菌菌種為屎腸球菌(^^racoccM/"ec/wm)，其保藏編號為CGMCCNo.2419;所述釀酒酵母菌菌種為釀酒酵母菌(Sacc/zaramyc^cereWw'fle),其保藏編號為CGMCCNo.2418。全文摘要本發明公開了一種奶牛飼料用復合微生物添加劑，該微生物添加劑含有納豆枯草芽孢桿菌、屎腸球菌和釀酒酵母菌的發酵產物混合物，細菌總數為10⁹cfu/g以上。本發明所述的復合微生物制劑，三種微生物產生協同作用，經過長期反復的動物實驗顯示，可以顯著提高飼喂奶牛的產奶量，且產奶中乳脂率有顯著提高，乳蛋白產量也顯著增高，奶牛泌乳期體細胞數明顯下降，可以使奶牛患乳房炎和隱形乳房炎的發病幾率減少，奶牛機體的自身免疫能力明顯增強。本發明成本低廉，效果顯著，具有很好的市場應用前景。文檔編號A23K1/00GK101253934SQ20081010348公開日2008年9月3日申請日期2008年4月7日優先權日2008年4月7日發明者卜登攀,周凌云,王加啟,鄧露芳,魏宏陽申請人:中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所