專利名稱：桑黃的人工栽培方法
技術領域：
本發明涉及一種藥用真菌的栽培方法，尤其涉及桑黃(尸力e////7^Pil 4 t)的人工栽培方法，屬于藥用真菌的人工栽培領域。
背景技術：
桑黃(戶力6///"^ 6a咖ii Pil d t)又稱桑臣、桑耳、桑黃菇等。分類學上屬擔子菌門(Basidiomycota)、層菌纟岡(Hymenomycetes)、非木宵菌目(Aphyllophorales) 、 4秀革孑Li菌牙牛(Hymenochaetaceae)、木層孑L菌屬(尸力e////7^),是大型珍稀藥用真菌。
桑黃是目前國際公認的生物抗癌領域中有效率排在第 一位的藥用菌。近年來，國內外學者對桑黃的藥理作用及化學成分作了進一步的研究，表明桑黃具有抗癌、抗腫瘤、免疫調節作用(Shihata S，Nishikawa Y， Mai CF " a厶Anti-tumor studies on some extracts ofBasidiomycetes [J].G謹,1968, 59: 159~161; Kong D H， Hong N D,Han S B， 1996, Stimulation of humeral and cell mediated immunity bypolysaccharidefrommushroom戶/ze〃/做s/z'她肌/她w J/mmw7c^/zarmaco/， 18: 295);保肝和抗肝硬化作用、抗脂質過氧化作用 (Shon YH， Nam KS. Antimutagenicity and induction ofanticarcinogenie phase II enzymes by basidiomycetes [J]. JbMrwa/
4礎w—w應co/ogy， 2001， 77(1): 103~109);抗誘變作用、降血糖作用、抗肺炎作用、抑菌和消炎作用(Jang BS，KimJCda/. Extracts of尸/ze〃/"w gz7vw and尸/ze〃/wws 6a畫"inhibit pulmonary inflammationinduced by lipopolysaccharide in rats[J]. 5/o&c/mo/ogy2004,(26):31 33)等；桑黃的藥用成分主要是多糖，多糖除葡萄糖外，還有半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖和墨角藻糖等。
隨著科學技術的不斷進步，國、內外權威醫藥機構研究發現，我國珍稀藥用菌桑黃對腫瘤(癌癥)具有幾乎100 %的抑制率，因此有"抗癌之王"的美譽。同時，國外的醫療機構在對艾滋病患者的臨床治療中也有應用，即使長期大劑量服用，桑黃對人或實驗動物也無任何毒副作用，因此桑黃不僅具有治療作用，而且還可作為保健食品的重要原料。
野生的桑黃生境非常特殊、復雜，導致其數量非常稀少，加上人工栽培難度大，這極大的限制了桑黃在臨床上的應用。近年來國內外對野生桑黃子實體的成分、藥理等方面的研究較多，而對人工栽培方面的研究較為少見。目前韓國學者釆用室外蔭棚木段埋畦栽培桑黃取得成功。曰本也開展了桑黃栽培產業，并具有相當規模，取得了巨大經濟效益。國內對桑黃的研究尚處于起步階段，部分地方現在也有少量摸索性的試驗，劉利等采用新鮮楊樹木段栽培，通過兩年的時間收獲了少量的桑黃(劉利，劉冰，劉明才等.長白山野生桑黃菌人工栽培初探.食用菌，2005， (3): 32) 。 2001 ~ 2004年遼寧省鐵嶺市林業科學研究院與中科院聯合，首先對桑黃的子實體培養技術進行了試驗，探索出一套適于瓶栽的生產技術，其瓶栽基質之一為新鮮樺木
鋸木屑3600 g，玉米面810 g，白糖45 g，石膏45 g;瓶栽基質之二為暴馬子丁香木屑4 OOOg(干木屑重)，高梁米糠500 g,石膏50g，KH2P0412 g，蔗糖(或葡萄糖)40 g，硫酸銨40 g;但由于栽培技術還不夠成熟，造成產量低，形成的子實體質量差(不成形)，人工栽培的桑黃子實體商品國內尚無采收先例。
由于桑黃的抗癌機理漸漸被人們所認識，加上深層培養的成功報道，市場上對桑黃的需求越來越大。由于受利益的驅使人們無節制的開采野生桑黃，致使野生資源瀕臨滅絕、無法恢復，而人工生產技術又不成熟。因此，研究和發展桑黃的人工栽培新方法，這對于滿足市場的需求非常重要。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是針對現有的桑黃人工栽培方法中所普遍存在的技術不成熟，產量低，子實體質量差(不成形)等缺陷，提供一種新的人工栽培桑黃的方法，該方法采用袋料栽培桑黃，摸索出了最適合于桑黃子實體發育的空氣相對濕度、溫度、光照等環境因子，具有產量高，子實體質量好，技術完善等優點。
本發明所要解決的技術問題是通過以下技術方案來實現的
一種人工培養桑黃的方法，包括
(1)從桑黃子實體上分離的菌林純化后接種到母種培養基中培養獲得桑黃母種；(2 )桑黃母種接種到原種培養基上培養獲得桑黃原種；(3)將桑黃原種接種到栽培袋內的栽培種培養基中培養；(4 )將長滿菌絲的栽培袋轉移至出菇室進行出菇培養；其中，所述的出菇培養是在以下環境條件下進行出菇培養空氣相對濕度為85 - 90%，溫度為22~25 。C。
本發明人通過大量的試驗發現，出菇室中的空氣相對濕度對桑黃菇的生長速度及其質量影響較大，為此，本發明人考察了不同梯度的相對濕度對桑黃菇的生長速度及其質量影響，最終發現，將出菇室中的空氣相對濕度控制為85 ~ 90%的對于桑黃耳芽(菇)的生長較為有利。進一步的試驗又發現當桑黃耳芽(菇)在出菇室里的生長時間超過20天后，此時將出菇室的空氣相對濕度由85~90%調整為95%,更加有利于桑黃耳芽(菇)的生長，所得到的桑黃菇的質量也達到最佳。
溫度是影響桑黃耳芽(菇)的生長速度及其質量的另一個重要環境因子。溫度過高，子實體雖長得快些，但子實體重量較輕，且溫度過高再加上高濕，很容易感染雜菌，從而降低產量。有鑒于此，發明人考察了出菇室中的不同的溫度對于桑黃耳芽(菇)的生長和質量的影響；在考慮到溫度和空氣相對濕度之間相互影響的前提下，最終發現，將出菇室中的溫度控制為22~25 。C時，能兼顧桑黃子實體的生長速度和生長質量(在85 ~ 95%這一空氣相對濕度下，桑黃子實體感染雜菌的現象也比較少見)。
為了達到更好的出菇效果，還可以對出菇室采用草簾或遮陽網的方式對出菇室進行遮光，將出菇室的光照強度控制在200 - 300 lx最有利于出菇。此外，本發明人通過試驗發現在步驟(4)中當出菇室有充足的氧氣時，有利于出菇；為此，當栽培袋上剛出現耳芽時，讓出菇室早晚各通風5min;當桑黃耳芽在出菇室里的生長時間超過20天以后加大出菇室通風量，也即是說，將出菇室早晚各通風5 min調整為早晚各通風20 min，這樣能最大程度的加快桑黃耳芽的生長的同時可保證桑黃耳芽的質量。
栽培袋的菌絲處于不同的生長程度時將其轉移至出菇室進行出菇培養，對于桑黃菇的生長速度和質量也有一定的影響；為了確定合
適的轉移時機，本發明人也進行了摸索和試驗，最終發現當栽培袋內的桑黃菌絲長滿栽培袋且菌絲呈深黃色或者栽培袋內開始出現突起的瘤狀桑黃子實體原基時，此時將栽培袋轉移至出菇室進行出菇培養，最有利于桑黃子實體的發生和耳芽的生長。
步驟(4)中當菌絲滿袋后可以在栽培袋肩部上下錯開劃1~3個月牙形的出菇口 ，去除口上的膜；其中，該出菇口的口長優選為3~4 cm, 口寬優選為1 cm。開月牙形口能長成半圓形桑黃，菌肉較厚，子實體較重，有利于提升子實體的品質；此外，采用月牙形的出菇口，采摘下的桑黃是一個月牙形，可有效提升桑黃的商品價值。而直接開口， 一方面容易導致出菇污染，另一方面長成的桑黃菌肉較薄，成薄片狀，直接影響商品價值。
以下所列舉的技術方案也是發明人所進一步優選的結果，采用其中任何一種技術方案都可以為本發明帶來更好的技術效果
步驟(1)中所述的母種培養基優選為PDA培養基，其具體配方
8組成為馬鈴薯(去皮)200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、 KH2P04 1 g、VBaOmg、水1000 ml; pH自然；母種培養時間為10-15天。特別是，還包括在獲得所述母種后，將母種放于溫度為4 。C冰箱內后熟7-10天。
步驟(2)中所述的原種培養基優選為由以下各組分組成小麥粒98% (w/w)，碳酸鉤1% (w/w),石灰1% (w/w);該原種培養基配制好后含有60% (w/w)的水分。進一步優選為，步驟(2)中在將所述桑黃母種接種到原種培養基前6-9小時內，拿出母種，將母種活化后再接種到原種培養基中。
步驟(3)中所述的栽培種培養基優選為由以下各組分組成柞木屑78% (w/w)、麥麩17% (w/w)、黃豆粉3% (w/w)、石灰1% (w/w)、石膏1% (w/w);該栽培種培養基配制好后含有65% (w/w)的水分。
特別是，步驟(1 )、 ( 2 )和(3 )中所述的培養都是在25 。C恒溫暗室條件下進行培養。
本發明采用袋料栽培桑黃，相比于傳統的木段栽培方法，本發明方法節省了大量的木材，縮短了生產周期；此外，本發明方法摸索出了最適合于桑黃子實體生長的空氣相對濕度、溫度、光照、氧氣等環境因子，通過人工精確控制出菇室內的相對濕度(例如采用加濕器控制相對濕度)、溫度、光照、氧氣等環境因子，在保證桑黃子實體質量的同時能最大程度的促進桑黃子實體的生長速度，具有產量高、子實體質量好、省時省力等優點。
具體實施方式
下面結合具體實施例來進一步描述本發明，本發明的優點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發明的范圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和范圍下可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發明的保護范圍內。
實驗材料
1、 培養基
a. 母種培養基(PDA ):馬鈴薯(去皮)200 g、葡萄糖20g、瓊脂20 g、 KH2P041 g、 VB!IO mg、水IOOO ml， pH自然。
b. 原種培養基小麥粒98°/。，碳酸鈣1%，石灰1%,水分60%。
c. 栽培種培養基柞木屑78%、麥麩17%、黃豆粉3%、石灰1%、石膏1%、水分65%。
d. 菌抹分離純化培養基馬鈴薯(去皮)200 g，葡萄糖20g,瓊脂20 g，磷酸二氫鉀1 g,維生素B!IO mg，水IOOO ml， pH值自然。
2、 桑黃(/%e////2〃s ^"肌7 Pil d t)子實體桑黃子實體從黑龍江省鏡泊湖采集；桑黃子實體的主要生物學性
狀如下擔子果多年生，無柄蓋形，新鮮時木栓質，無嗅無味，干后硬木質。菌蓋多為蹄形，偶爾半圓形，長達10 cm,寬達7 cm，基部厚達5 cm。菌蓋表面黑灰色至近黑色，具同心環帶和淺的溝紋，粗糙至光滑，具放射狀裂紋或開裂；邊緣鈍，污褐色。孔口表面褐色，污褐色至黑褐色，具折光反應；不育邊緣明顯，黃褐色，寬達5 mm;孔
10口多角形至圓形，每毫米7 10個；管口邊緣薄，全緣。菌肉褐色至污褐色，硬木質，厚達1 cm,明顯比菌管薄，略呈放射狀生長。當年菌管層金黃褐色，老菌管褐色，菌管分層明顯，每層厚度小于1 mm，長達3 cm。
實施例1
從野生桑黃(尸力e/"，s 6犯邁ii' Pil d t)子實體上分離得到的菌抹進行純化；
采用組織分離方法分離菌種用無菌解剖刀將野生桑黃子實體中部縱切成兩半，用刀切取O. 3 cm左右小方塊組織。用鑷子將菌肉組織移接于試管培養基的中央，其中，切取桑黃菌肉組織時的用具和切取的組織絕不要與桑黃菌體的其他部分相接觸，以免造成污染，接種后置于25 。C恒溫暗室中培養2 3 d后可見由組織塊長出黃色絨毛狀菌絲，此時須連續觀察一周，檢查雜菌污染情況。發現有青、綠、黃、桔紅等顏色小點及糊狀物，說明已污染雜菌，應及時剔除。待桑黃菌絲長到離接種塊2~3 cm時，挑取邊緣菌絲轉接于空白的斜面培養基上，轉管1 ~ 2次可獲得純化的桑黃菌絲。菌絲體長滿斜面需10 ~ 15天，滿管后將試管置于4。C冰箱中保存備用。
將純化后的桑黃菌絲接種在規格為20 x 200 mm的試管母種斜面培養基上擴大培養(12~15 d)獲得桑黃母種；桑黃母種放于4 。C冰箱后熟1周，在接原種前提前6 h以上拿出活化菌種，將母種接種于原種培養基(500 ml原種瓶)，15 d左右獲得原種，原種滿瓶后立即使用或置于4 。C冰箱保存備用；將原種接種到裝在栽培袋(17 cmx 33 cmx0. 05cm聚乙烯折角袋)內的栽培種培養基中，其中每袋裝栽培種 基質(干重)450 g， 30 d左右滿袋；以上菌種培養條件均為25 。C恒 溫暗室培養；
待桑黃菌絲長滿栽培袋后10 d左右菌絲呈現深黃色或者有些栽 培袋內開始出現突起的顏色稍深的瘤狀子實體原基，此時將栽培袋轉 移至出菇室，出菇室內溫度控制在25 'C，空氣相對濕度為85% (采用 加濕器控制空氣相對濕度)，室內有充足的氧氣，釆用草簾或遮陽網遮 光至有微量的散射光，控制出菇室內的光強度為300 lx;栽培袋與栽 培袋間距按10 cm擺放，在袋肩部上下交錯劃2個月牙形口 ， 口長3 cm， 口寬lcm，去除口上的膜。劃口后一周左右現耳芽，當出現耳芽時早 晚各通風5 min，當耳芽長到20 d左右加大通風量改為早晚各通風20 min，同時將空氣相對濕度調整為95% (可采用加濕器每天早晚各加濕 30 min)。桑黃A/v劃口到長成成品約需40天，見子實體生長圈顏色變 深開始干燥不在生長時釆收。
桑黃子實體的栽培結果桑黃子實體生長較快且整齊，顏色鮮黃 至黃褐色，多為半圓形，每袋可產桑黃子實體干品達30 g，其中，子 實體長為6. 3 cm,寬4. 8 cm，厚2. 5 cm。子實體內部組織排列緊密， 單位體積的子實體質量較重。
實施例2
本實施例與實施例1的區別在于桑黃菌絲長滿栽培袋后進行出菇培養的過程中，出菇室內溫度為22。C,空氣相對濕度始終恒定為90%; 在栽培袋的袋肩部劃1個月牙形口， 口長4cm， 口寬lcm;除此之外， 其余與實施例1相同。
桑黃子實體的栽培結果桑黃從劃口到長成成品約需50天，桑 黃子實體顏色鮮黃至黃褐色，多為半圓形，每袋可產桑黃子實體干品 達25g，其中子實體長5. 9cm,寬4. 6 cm，厚2. 3 cm。子實體內部 組織排列緊密，單位體積的子實體質量較重。
實施例3
本實施例與實施例1的區別在于桑黃菌絲長滿栽培袋后進行出 菇培養的過程中，出菇室內溫度為24。C，空氣相對濕度始終恒定為87%; 在袋肩部上下錯開劃3個月牙形口， 口長3cm, 口寬lcm;除此之外， 其余與實施例1相同。
桑黃子實體的栽培結果桑黃從劃口到成熟約需50天，由于出 菇口較多，長出的每個子實體的個體較小且不整齊，質量較輕，每袋 可產桑黃子實體干品達21. 6 g,其中長4. 1 cm,寬3. 8 cm,厚2. 1 cm。
實施例4
本實施例與實施例1的區別在于桑黃菌絲長滿栽培袋后進行出 菇培養的過程中，出菇室內溫度為25 °C,空氣相對濕度始終恒定為 85%;除此之外，其余與實施例l相同。
桑黃子實體的栽培結果桑黃從劃口到長成成品約需48天，顏色鮮黃至黃褐色，多為半圓形，每袋可產桑黃子實體干品為22 g， 其中， 子實體長為5. 1 cm，寬3. 9 cm，厚2. 2 cm。
只十比i式〗全例1
本對比試驗例與實施例1的區別在于
出菇室的空氣相對濕度如下將出菇室內溫度控制在20 。C;將 栽培袋轉移至出菇室的初期將出菇室內空氣相對濕度控制為80%,當 耳芽長到20 d左右將出菇室內空氣相對濕度控制為95%;除此之外， 其它各項內容均與實施例1相同；
桑黃子實體的栽培結果桑黃子實體生長較快，從劃口到長成成 品約需55天，桑黃子實體顏色鮮黃至黃褐色，生長較整齊，多為半 圓形，每袋產桑黃子實體干品為17.8 g,其中長4. 2cm,寬3. 9 era, 厚1. 8 cm。
對比試-瞼例2
本對比試驗例與實施例2的區別在于
出菇室的空氣相對濕度如下將栽培袋轉移至出菇室的初期將出 菇室內空氣相對濕度控制為70%;當耳芽長到20 d左右將出菇室內 空氣相對濕度控制為95%;除此之外，其它各項內容均與實施例1相
同；
桑黃子實體的栽培結果桑黃子實體生長較慢，從劃口到成熟 約需60天，桑黃子實體較小且生長不整齊，每袋可產桑黃子實體干品達12. 9 g,其中長5.8 cm,寬4. 1 cm,厚1. 7 cm。
對比試-驗例3
本對比試驗例與實施例3的區別在于
將栽培袋轉移至出菇室的初期將出菇室內空氣相對濕度控制為 60%;當耳芽長到20 d左右將出菇室內空氣相對濕度控制為95%;除 此之外，其它各項內容均與實施例3相同；
桑黃子實體的栽培結果初期空氣相對濕度太^f氐，劃口處干枯， 嚴重抑制耳芽的分化，個別能長出子實體原基的，始終處于瘤狀膨大 期，長不大。
對比試-驗例4
本對比試驗例與實施例1的區別在于
出菇室的空氣相對濕度如下將出菇室內的空氣相對濕度始終恒 定控制為95%;除此之外，其它各項內容均與實施例1相同；
桑黃子實體的栽培結果雜菌感染比較嚴重，桑黃子實體的產量 很低。
對比試-瞼例5
本對比試驗例與實施例2的區別在于出菇室內溫度控制為28 。C;除此之外，其它各項內容均與實施例2相同；
桑黃子實體的栽培結果桑黃子實體生長較快，從劃口到成熟
15只需45天，但桑黃子實體重量較輕，雜菌污染嚴重，每袋產桑黃子
實體干品為13. 7 g，其中長4. 5 cm，寬3. 7 cm，厚1. 2 cm。 對比試-驗例6
本對比試驗例與實施例4的區別在于出菇室內溫度控制為18 °C;除此之外，其它各項內容均與實施例4相同；
桑黃子實體的栽培結果桑黃子實體生長緩慢，從劃口到成熟約 需65天，桑黃子實體較小，每袋產桑黃子實體干品為15. 7 g，其中 長3. 7 cm，寬3. 4 cm，厚1. 6 cm。
權利要求
1、一種桑黃(Phellinus baumii Pilát)的人工栽培方法，包括(1)從桑黃子實體上分離的菌株純化后接種到母種培養基中培養獲得桑黃母種；(2)桑黃母種接種到原種培養基上培養獲得桑黃原種；(3)將桑黃原種接種到栽培袋內的栽培種培養基中培養；(4)將長滿菌絲的栽培袋轉移至出菇室進行出菇培養；其中，所述的出菇培養是在空氣相對濕度為85～90％，溫度為22～25℃的環境條件下進行出菇培養。
2、 按照權利要求1所述的人工栽培方法，其特征在于步驟(4)中 所述的出菇培養還包括當長出的桑黃耳芽在出菇室里的生長時間超 過20天以后，將出菇室的空氣相對濕度由85~90%調整為95%。
3、 按照權利要求1或2所述的人工栽培方法，其特征在于步驟(4 ) 中將出菇室的光照強度控制在200 ~ 300 lx。
4、 按照權利要求1或2所述的人工栽培方法，其特征在于步驟(4) 中所述的出菇培養還包括當栽培袋上剛出現耳芽時，讓出菇室早晚 各通風5min;當桑黃耳芽在出菇室里的生長時間超過20天后，將出 菇室的通風調整為早晚各通風20 min。
5、 按照權利要求1或2所述的人工栽培方法，其特征在于步驟(4 ) 中所述的出菇培養還包括當菌絲滿袋后在栽培袋肩部上下錯開劃 1 3個月牙形的出菇口，同時將出菇口上的膜去掉。
6、 按照權利要求1或2所述的人工栽培方法，其特征在于步驟(4 ) 中當栽培袋內的桑黃菌絲長滿栽培袋或者栽培袋內開始出現突起的瘤狀桑黃子實體原基時，將栽培袋轉移至出菇室進行出菇培養。
7、 按照權利要求1所述的人工栽培方法，其特征在于步驟(1)中所述的母種培養基的組成為去皮馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、 KH2P041 g、 VB,IO mg、水IOOO ml; pH自然。
8、 按照權利要求1所述的人工栽培方法，其特征在于步驟(2)中所述的原種培養基的組成為小麥粒98%，碳酸鈣1%，石灰1%。
9、 按照權利要求1所述的人工栽培方法，其特征在于步驟(3)中所述的栽培種培養基的組成為柞木屑78%、麥麩17%、黃豆粉3%、石灰1%、石膏1%。
10、 按照權利要求1所述的人工栽培方法，其特征在于步驟(1 )、 ( 2 )和(3)中所述的菌種培養都是在25 。C恒溫黑暗的條件下進行培養。
全文摘要
本發明公開了桑黃(Phellinus baumii Pilát)的人工栽培方法，包括(1)桑黃子實體上分離的菌株純化后接種到母種培養基中獲得母種；(2)母種接種到原種培養基上獲得桑黃原種；(3)將桑黃原種接種到栽培袋內的栽培種培養基中培養；(4)將長滿菌絲的栽培袋轉移至出菇室在以下條件下進行出菇培養空氣相對濕度為85～95％，溫度為22～25℃。本發明方法摸索出了最適合于桑黃子實體生長的空氣相對濕度、溫度、光照等環境因子，通過人工精確控制出菇室內的相對濕度、溫度等因子，在保證桑黃子實體質量的同時能最大程度的提高桑黃子實體的生長速度，具有產量高、子實體質量好、節省材料、生產周期短等優點。
文檔編號A01G1/04GK101485262SQ200910077398
公開日2009年7月22日 申請日期2009年2月19日 優先權日2009年2月19日
發明者崔寶凱, 張春鳳, 戴玉成, 萍 杜 申請人:北京林業大學;黑龍江農業經濟職業學院