專利名稱：高產胞壁降解酶和抗菌肽的綠色木霉菌株及其生防試劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種真菌，尤其涉及一種高產胞壁降解酶和抗菌肽的綠色木霉綠色木
菌株及其生防試劑。
背景技術：
進入21世紀，隨著經濟的發展和人民生活水平的不斷提高，人們的健康意識和環 保意識大大加強。減少化學農藥的使用，采用綠色生物農藥防治病蟲草害已成為農藥發展 的必然趨勢。我國是一個農業大國，每年農作物病蟲草害受害面積大約2億公頃(次)，每 年需要生產和使用農藥約25萬噸(有效成份)。在所使用的農藥中，化學農藥占了相當大的 比例，生物農藥所占的比例相對很小。由于化學農藥的殘留量較大，對人體存在毒害作用， 所以化學農藥的使用會受到很大程度的限制，生物農藥是一種有效解決化學農藥的污染和 殘留問題的一種環保型無公害農藥。目前人們對無污染、無公害綠色食品呼聲日益高漲，生 物防治已經成為繼化學防治后又一重要的防治方法，許多生物殺菌劑已經投入使用并取得 了顯著效果。研究和采用生物防治技術以逐漸取代農藥是農業持續性發展的需要。。
—些研究結果表明，利用一些有益微生物對土壤中的特定病原菌的寄主產生有害 物質，通過競爭營養和空間等途徑來減少病原菌的數量，從而減輕病害發生。因此，應用生 物防治不失為一種控制蔬菜病蟲害的行之有效的方法。木霉是最有前途的生防菌之一，具 有控制病害和促進作物生長的雙重效果。木霉屬主要用來防治多種植物病害，如番茄、黃瓜 和豇豆的猝倒病、草莓的黑根腐病、大白菜的根瘤病等。 木霉菌屬于真菌界、雙核菌門、半知菌亞門、絲孢綱、叢梗孢目、從梗孢科，是土壤 微生物區系的重要組成部分，其菌絲生長及孢子萌發能夠適應較廣的溫濕度范圍和pH范 圍，且腐生性強、生長和繁殖快，可迅速利用營養和占據空間。目前，已知木霉菌的9個種 中，有5種具有生防潛力，分別是哈茨木霉(T.harzia皿m)、綠色木霉(T. virid)、康氏木霉 (T. koningii)、鉤木霉(T. hamat咖)和長枝木霉(T. longibrachiat咖)。當前使用最多的是 哈茨木霉和綠色木霉。 木霉是一種廣譜性拮抗菌，能夠拮抗多種病原真菌，尤其對土傳真菌有顯著的拮 抗效果。除個別為弱病原菌外，大多數對植物病原真菌具有拮抗作用，其特點表現在三個 方面。第一、木霉菌對于生長的環境具有廣泛的適應性，可利用各種簡單或復雜的碳源和 氮源，甚至還有轉化和降解一些有害或持久存在的污染物的能力，最適生長溫度為28 32t:，但個別也可在5t:下或6(rc上生長和繁殖。第二，木霉菌產生多樣的拮抗作用，主要 有四種即競爭作用、重寄生作用、產生抗生物質和溶菌酶類。第三，木霉菌具有寄生的廣譜 性，對18個屬、29個種都可以寄生。 木霉作為有效的生物農藥資源，以其適應性廣、生存能力強、對植物病原菌拮抗作
用的廣譜性，在防病同時還能產生多種酶分解土壤中的植物殘體、降解大分子化合物使植
物能夠吸收利用、能與土壤中其它益菌協調生長、不污染環境等優點而倍受青睞。 目前已發現許多微生物具有生防作用，木霉菌(Trichoderma spp.)就是一類普遍存在并具有重要經濟意義的生防益菌，已用來防治多種植物病害。早在60多年前，人們就 認識到木霉菌對植物病原菌的拮抗作用。近年來，人們對木霉菌的生物防治機制進行了大 量的研究，認為其拮抗作用主要表現在代謝胞外酶、抗菌素類物質、誘導植物抗性、水解酶 與植物的防衛反應、保護酶與植物的抗病作用、毒性蛋白和協同拮抗作用等方面。
發明內容
本發明提供了 一種高產胞壁降解酶和抗菌肽的綠色木霉菌株。
—種高產胞壁降解酶和抗菌肽的綠色木霉菌株，命名為綠色木霉(Trichoderma viride) TV501，保藏于位于武漢市珞珈山武漢大學的中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保 藏日期為2009年12月31日，保藏號為CCTCC N0 :M 209321。 該菌株主要生理學特征為菌落在PDA培養基表面生長較快，第二天形成白色菌 絲薄層，當分生孢子成熟后，菌落自中央到邊緣，漸漸變為不同程度的綠色菌落，菌落與培 養基結合緊密。在顯微鏡下，分生孢子梗從菌絲的側枝生出，直立分支小枝常對生，上生分 生孢子團。分生孢子球形，淺色或無色，菌絲具有橫隔和分枝，分枝彎曲或呈波形。
—種利用上述綠色木霉TV501制得的生防試劑，以總重量1000份計，原料組成
為 綠色木霉TV501發酵液 480 970份
表面活性劑 0. 01 30份 水 余量。
所述木霉發酵液通過如下方法制得 將木霉TV501接種到種子培養基中，在3(TC、200rpm下振蕩培養3d制得種子液， 將種子液接種到發酵培養基中，在28 30°C、150 200rpm下振蕩發酵培養5 7天，制 得木霉發酵液。 上述發酵也可以在發酵罐進行放大，發酵時控制發酵液pH為5. 8 6. 2，溫度 28 30。C，溶氧量20 30%，攪拌速度150 200rpm。 優選地，以1L體積計，所述的發酵培養基由1. 5-2. 5g NaN03、0. 5-1. 5gK2HP04、 0. 4-0. 6g KC1、0. 4-0. 6g MgS04、0. 009-0. 015g FeS04、25_35g蔗糖、350-450ml麩皮提取液 以及余量的水組成，所述的麩皮提取液通過將50g麩皮置于1. 5L水中在9(TC煮1小時，過 濾后用水定容至450ml制得。 更優選地，以1L體積計，所述的發酵培養基由0. 25-0. 35gCa (N03) 2 4H20、 0.05-0.15g KN03、0. 05-0. lg KCl、0.2-0.4g MgS04 7H20、0. 01-0. 03g NaH2P04. 2H20、 0. 5-2. 00g大豆胨、4. 00-6. 00g酒石酸胺、2 3mgFeCl3 6H20、4. 0-6. Omg MnS04. H20、 2. 0-3. Omg ZnS04 7H20、1. 0-2. 5mgH3B03、0. 5-1. Omg KI、0. 2-0. 4g酵母提取物、350-450ml 麩皮提取液以及余量的水組成，所述的麩皮提取液通過將lg麩皮置于1. 5L水中在9(TC煮 1小時，過濾后定容至450ml制得。 所述的表面活性劑所述的表面活性劑為吐溫-20 (Tween-20)、曲拉通 (Triton-100)和Silwet L_77。在木霉發酵液中添加表面活性劑，以加快藥劑滲透，控制植 物病原菌的生長繁殖。 本發明綠色木霉菌株能夠高產細胞壁降解酶和抗菌肽，由它制得的生防試劑對草莓白粉病、草莓灰霉病、黃瓜白粉病等蔬菜、瓜果病害有較好田間防效，顯著提高了蔬菜、瓜 果的產量和品質，減少了化學農藥的使用量，改善生態環境，提高食用安全性，顯示出廣闊 的發展前景，有助于農業增效農民增收。
具體實施例方式
菌株誘變、分離和純化 打開紫外燈(30W)預熱15min，取5ml綠色木霉(T. virid)孢子懸液(水為介質) 置于直徑為6cm培養皿中，垂直放置離紫外燈30cm處照射15min，在處理期間用磁力攪拌器 攪拌。照射后的孢子懸液暗培養4h后涂布于PDA平板上進行初篩。 挑選平板上生長快，透明圈大(菌落直徑大于0. 5cm)的菌落作為復篩菌株。將 粗篩的數株菌株轉接到PDA斜面培養基，在25t:培養箱中培養6d，再接種到250ml的三角 瓶固體發酵培養基(NaN032g/L、K2HP04lg/L、KCl 0. 5g/L、MgS04 0. 5g/L、 FeS04 0 . 01g/L、蔗 糖30g/L、麩皮提取液350ml/L和瓊脂10g/L，麩皮提取液通過將50g麩皮置于1. 5L水中在 9(TC煮1小時，過濾后用水定容至450ml制得)中進行復篩，挑選生長快、透明圈大(菌落 直徑大于0. 5cm)，菌絲密集、產孢量多、轉綠快的一木霉菌落，接種到PDA斜面上進行保藏。
菌株鑒定 上述分離純化的菌株菌落在PDA培養基表面生長較快，第二天形成白色菌絲薄 層，當分生孢子成熟后，菌落自中央到邊緣，漸漸變為不同程度的綠色菌落，菌落與培養基 結合緊密。在顯微鏡下，分生孢子梗從菌絲的側枝生出，直立分支小枝常對生，上生分生孢 子團。分生孢子球形，淺色或無色，菌絲具有橫隔和分枝，分枝彎曲或呈波形。
該菌株的18S rDNA與木霉屬其他序列進行同源性比對，結果表明該菌株的18S rDNA與木霉屬多菌株的序列同源性在99X以上，其中與綠色木霉(Trichoderma viride) 的同源性達到100%。從菌落形態、菌絲的形狀及分生孢子形態比較分析來看，均與綠色木 霉相仿。因此，該菌株鑒定為綠色木霉(Trichoderma viride)，株號為TV501 。
制備發酵液 將上述分離純化得到的綠色木霉(Trichoderma viride)TV501接種到種子培養液 中，200rpm振蕩培養3d制得種子液。 搖瓶發酵，將種子液接種到含發酵培養基搖瓶中，在28-3(TC下200rpm振蕩培養 7d制得綠色木霉TV501發酵液。 也可以進行發酵罐擴大培養，以10L發酵罐為例，發酵液pH為6.0，溫度為28 3(TC，含氧量控制在20 30% (通過通風控制)，攪拌速度為200rpm，發酵時間為6天。
配制生防試劑及防效測試
實施例1 將綠色木霉TV501發酵液975重量份、吐溫-2025重量份混合均勻，制得生防試 劑，發酵液通過搖瓶振蕩培養獲得，其中發酵培養基的配方為 NaN03 1. 8g/L、 K2HP04 0. 5g/L、 KC1 0. 5g/L、 MgS04 0 . 4g/L、 FeS040. 01g/L、蔗糖 30g/L、麩皮提取液380ml/L。麩皮提取液通過將50g麩皮置于1. 5L水中在9(TC煮1小時， 過濾后用水定容到450ml。發酵后，發酵液通過濾紙酶活性測定和抗菌肽活性免疫檢測， 得到胞壁降解酶活性550. 7U/ml (表示每毫升酶活性單位，以每分鐘催化纖維素水解生成
5lymol葡萄糖的酶量為l個酶活力單位即1U)，抗菌肽活性500. 5U/ml(表示每毫升抗菌肽 活性單位，以每毫升中最低抑菌濃度所含抗菌肽蛋白量1 P g表示1個活性單位即1U)。
選用的作物為草莓，具體品種為紅頰。 將生防試劑用水以l : 500的比例進行稀釋，對草莓田間進行噴灑，每畝使用量為 50kg(稀釋液)，每隔1周噴施1次，連續噴施3次。每次施藥后3天目測觀察藥劑對草莓 葉片和幼果等的影響情況，考查藥劑對草莓的安全性。并于藥前進行病情指數基數調查，每 次用藥后7天調查統計一次防效。田間試驗分別設50%速克靈可濕性粉劑1000倍液和清 水作對照。 結果表明，該生防試劑對草莓灰霉病的防效為57.8%，而化學藥劑50%速克靈 1000倍液僅為49.4%。 同時對草莓收獲產量進行統計，結果表明，噴施了本發明生防試劑的草莓產量比 對照50%速克靈可濕性粉劑1000倍液的產量增加2. 1%，比清水對照產量增加15. 8%。
實施例2 將綠色木霉TV501發酵液487. 5重量份、吐溫-2025重量份和水487. 5重量份混 合，攪拌均勻，制得生防試劑，發酵液采用搖瓶振蕩發酵制得，發酵培養基配方為
Ca (N03) 2 4H20 0. 28g/L、 KN03 0 . 08g/L、 KC1 0. 06g/L、 MgS04 7H200. 36g/L、 NaH2P04. 2H20 0. 02g/L、大豆胨lg/L、酒石酸胺5g/L、 FeCl3 6H202mg/L、 MnS04. H20 5mg/L、 ZnS04 7H20 2. 5mg/L、 H萬l. 4mg/L、 KIO. 7mg/L、酵母提取物0. 25g/L、麩皮提取液450ml/ L，麩皮提取液通過將lg麩皮置于1.5L水中在9(TC煮1小時，過濾后用水定容到450ml。 發酵后，發酵液通過濾紙酶活性測定和抗菌肽活性免疫檢測，得到胞壁降解酶活性580. 5U/ ml (表示每毫升酶活性單位，以每分鐘催化纖維素水解生成1 P mol葡萄糖的酶量為1個酶 活力單位即1U)，抗菌肽活性540. 8U/ml (表示每毫升抗菌肽活性單位，以每毫升中最低抑 菌濃度所含抗菌肽蛋白量1 P g表示1個活性單位即1U)。 選用的作物為草莓和黃瓜，具體品種為紅頰(草莓)和津優1號(黃瓜)。
將生防試劑用水以l : 500的比例進行稀釋，分別對草莓和黃瓜田間進行噴灑，每 畝使用量為50kg(稀釋液)，每隔1周噴施1次，連續噴施3次。每次施藥后3天目測觀察 藥劑對草莓、黃瓜葉片和幼果等的影響情況，考查藥劑對草莓、黃瓜的安全性。并于藥前進 行病情指數基數調查，每次用藥后7天調查統計一次防效。 對于草莓白粉病，分別設50%翠貝WDG3000倍液和清水作對照；對于草莓灰霉病， 分別設50%速克靈可濕性粉劑1000倍液和清水作對照；對于黃瓜白粉病，分別設30%醚菌 酯可濕性粉劑(百美)1000倍液和清水作對照。 田間試驗結果表明，生防試劑對草莓白粉病有較好的防治效果，相對防效(相對 對照)在80%以上，使用安全，其產量比對照50%翠貝WDG3000倍液的產量增加7. 6%，比 清水對照產量增加27.5%。 該生防試劑對草莓灰霉病也有一定的防治效果，相對防效(相對對照)在80%以 上，使用安全，其產量比對照50%速克靈可濕性粉劑1000倍液的產量增加3. 1 % ，比清水對 照產量增加25.8%。 該生防試劑對黃瓜白粉病有較好的防治效果，相對防(相對對照)效在80%以上， 使用安全，其產量與對照30%醚菌酯可濕性粉劑(百美)IOOO倍液持平，但比清水對照產量增加25%。
實施例3 將綠色木霉TV501發酵液975重量份、曲拉通-10025重量份混合均勻，制得生防 試劑，發酵液通過搖瓶振蕩發酵獲得，其中綠色木霉TV501發酵液的培養基配方為
NaN03 1. 5g/L、 K2HP04 1. 0g/L、 KC1 0. 4g/L、 MgS04 0. 5g/L、 FeS040 . 0 1 2g/L、蔗糖 25g/L、麩皮提取液420ml/L。麩皮提取液通過將50g麩皮置于1. 5L水中在9(TC煮1小時，過 濾后用水定容到450ml。發酵后，發酵液通過總酶活性測定和抗菌肽活性免疫檢測，得到胞 壁降解酶活性551. 2U/ml (表示每毫升酶活性單位，以每分鐘催化纖維素水解生成1 P mol 葡萄糖的酶量為1個酶活力單位即1U)，抗菌肽活性507. 1U/ml (表示每毫升抗菌肽活性單 位，以每毫升中最低抑菌濃度所含抗菌肽蛋白量1 P g表示1個活性單位即1U)。
選用的作物為大白菜，具體品種為早熟5 將生防試劑用水以l : 500的比例進行稀釋，對大白菜田間進行噴灑，每畝使用量 為50kg(稀釋液)，每隔1周噴施1次，連續噴施2次。每次施藥后3天目測觀察藥劑對大 白菜霜霉病的影響情況，考查藥劑對大白菜的安全性。并于藥前進行病情指數基數調查，每 次用藥后7天調查統計一次防效。田間試驗分別設58%甲霜靈*錳鋅600倍液和清水作對 昭。 結果表明，生防試劑對大白菜霜霉病防治有顯著效果。第一次藥后防效達到 77.5%，與生產上使用的化學藥劑58%甲霜*錳鋅(對照)無顯著差；第二次藥后，生防試 劑的防治效果略低于化學藥劑對照，相對防效在80%以上，使用安全，其產量比對照58% 甲霜 錳鋅的產量無顯著差異，但比清水對照產量增加19. 5%。
實施例4將綠色木霉TV501發酵液487. 5重量份、曲拉通-10025重量份和水487. 5重量份
混合均勻，制得生防試劑，發酵液采用發酵罐制得，發酵培養基配方為Ca(N03)2 4H20 0. 30g/L、 KN030. 05g/L、 KC1 0. 08g/L、 MgS04 7H200. 2g/L、
NaH2P04. 2H20 0. 01g/L、大豆胨0. 5g/L、酒石酸胺4g/L、FeCl3 *6H202. 5mg/L、MnS04. H20 4mg/
L、ZnS04 7H20 2mg/L、H3B03l. Omg/L、KIO. 5mg/L、酵母提取物0. 2g/L、麩皮提取液380ml/L，
麩皮提取液通過將lg麩皮置于1. 5L水中在9(TC煮1小時，過濾后用水定容到450ml。發酵
后，發酵液通過總酶活性和抗菌肽活性測定，得到胞壁降解酶活性576. 4U/ml (表示每毫升
酶活性單位，以每分鐘催化纖維素水解生成1 P mol葡萄糖的酶量為1個酶活力單位即1U)，
抗菌肽活性542. 1U/ml (表示每毫升抗菌肽活性單位，以每毫升中最低抑菌濃度所含抗菌
肽蛋白量1 P g表示1個活性單位即1U)。 選用的作物為大白菜，具體品種為早熟5號。 將生防試劑用水以l : 500的比例進行稀釋，對大白菜田間進行噴灑，每畝使用量 為50kg(稀釋液)，每隔1周噴施1次，連續噴施2次。每次施藥后3天目測觀察藥劑對大 白菜霜霉病的影響情況，考查藥劑對大白菜的安全性。并于藥前進行病情指數基數調查，每 次用藥后7天調查統計一次防效。田間試驗分別設58%甲霜靈*錳鋅600倍液和清水作對 昭。 結果表明，生防試劑對大白菜霜霉病防治有顯著效果。第一次藥后防效達到 75.7%，與生產上使用的化學藥劑58%甲霜*錳鋅(對照)無顯著差；第二次藥后，生防試劑防效為82. 1%，顯著高于化學藥劑對照，使用安全，其產量比對照58%甲霜*錳鋅的產量 無顯著差異，但比清水對照產量增加21. 8%。
實施例5 將綠色木霉TV501發酵液975重量份、Silwet L-77 (聚亞氧烷基改性聚甲基硅氧 烷)0. 01重量份以及水24. 99重量份混合攪拌均勻，采用發酵罐發酵，發酵培養基配方為
NaN03 2. 5g/L、 K2HP04 1. 5g/L、 KC1 0. 6g/L、 MgS04 0 . 6g/L、 FeS040 . 0 1 5g/L、蔗糖 35g/L、麩皮提取液450ml/L。麩皮提取液通過將50g麩皮置于1. 5L水中在9(TC煮1小時， 過濾后用水定容到450ml。發酵后，發酵液通過總酶活性和抗菌肽活性測定，得到胞壁降解 酶活性553. 1U/ml (表示每毫升酶活性單位，以每分鐘催化纖維素水解生成1 P mol葡萄糖 的酶量為1個酶活力單位即1U)，抗菌肽活性502. 5U/ml (表示每毫升抗菌肽活性單位，以每 毫升中最低抑菌濃度所含抗菌肽蛋白量1 P g表示1個活性單位即1U)。
選用的作物為黃瓜，具體品種為津優1號。 將生防試劑用水以l : 500的比例進行稀釋，對黃瓜田間進行噴灑，沒畝噴灑藥劑 量為50kg (稀釋液)，每隔1周噴施1次，連續噴施3次。每次施藥后3天目測觀察藥劑對黃 瓜葉片和幼果等的影響情況，考查藥劑對黃瓜的安全性。并于藥前進行病情指數基數調查， 每次用藥后7天調查統計一次防效。田間試驗分別設30%醚菌酯可濕性粉劑(百美)IOOO 倍液和清水作對照。 結果表明，生防試劑對黃瓜白粉病有較好的防治效果，田間防效穩定，基本維持在 50%左右，使用安全，其產量與對照30%醚菌酯可濕性粉劑(百美)1000倍液基本持平，但 比清水對照產量增加20%。
實施例6 將綠色木霉TV501發酵液975重量份、Silwet L-770. 01重量份以及水512. 49重 量份混合攪拌均勻，采用發酵罐發酵，發酵培養基配方為 Ca(N03)2 4H20 0. 35g/L、 KN03 0. 15g/L、 KC1 0. lg/L、 MgS04 7H200. 4g/L、 NaH2P04. 2H20 0. 03g/L、大豆胨2g/L、酒石酸胺6g/L、 FeCl3 6H203mg/L、 MnS04. H20 6mg/L、 ZnS04 7H20 3. Omg/L、 H3B032. 5mg/L、KI100mg/L、酵母提取物0. 4g/L、麩皮提取液450ml/L， 麩皮提取液通過將lg麩皮置于1. 5L水中在9(TC煮1小時，過濾后用水定容到450ml。發酵 后，發酵液通過總酶活性和抗菌肽活性測定，得到胞壁降解酶活性583. 5U/ml (表示每毫升 酶活性單位，以每分鐘催化纖維素水解生成1 P mol葡萄糖的酶量為1個酶活力單位即1U)， 抗菌肽活性547. 2U/ml (表示每毫升抗菌肽活性單位，以每毫升中最低抑菌濃度所含抗菌 肽蛋白量1 P g表示1個活性單位即1U)。
選用作物為印度南瓜，具體為印度南瓜品系。 生防試劑用水以500的比例進行稀釋，對印度南瓜田間進行噴灑，每畝使用量 為50kg(稀釋液)，每隔1周噴施1次，連續噴施3次。每次施藥后3天目測觀察藥劑對印 度南瓜葉片和幼果等的影響情況，考查藥劑對印度南瓜的安全性。并于藥前進行病情指數 基數調查，每次用藥后7天調查統計一次防效。田間試驗分別設50%翠貝3000倍液和清水 作對照。 結果表明，生防試劑對印度南瓜白粉病有較好的防治效果，田間防效為76. 6. 0%， 與對照50%翠貝的防效無顯著差異，使用安全，其產量與對照50%翠貝3000倍液基本持
8平，但比清水對照產量增加15%。
權利要求
一種綠色木霉菌株，其特征在于命名為綠色木霉(Trichodermaviride)TV501，保藏號為CCTCC NOM 209321。
2. —種利用權利要求1所述的綠色木霉制得的生防試劑，其特征在于，以總重量1000 份計，原料組成為
3. 根據權利要求1所述的生防試劑，其特征在于所述的表面活性劑為吐溫-20、曲拉 通和聚亞氧烷基改性聚甲基硅氧烷中的至少一種。
4. 根據權利要求1所述的生防試劑，其特征在于，所述的綠色木霉TV501發酵液通過如 下方法制備將綠色木霉TV501接種至種子培養基中，制得種子液，將種子液接種到含發酵培養基 的搖瓶中，在28 30°C、150 200rpm的條件下振蕩培養5 7天，制得綠色木霉TV501 發酵液。
5. 根據權利要求1所述的生防試劑，其特征在于，所述的綠色木霉TV501發酵液通過如 下方法制備將綠色木霉TV501接種至種子培養基中，制得種子液，將種子液接種到含發酵培養基 的發酵罐中，發酵液pH控制在5. 8 6. 2，含氧量控制在20 30 % ，攪拌速率控制在150 200rpm，在28 3(TC發酵5 7天，制得綠色木霉TV501發酵液。
6. 根據權利要求4或5所述的制劑，其特征在于以1L體積計，所述的發酵培養基由 1.5-2. 5g NaN03、0. 5-1. 5g K2HP04、0. 4-0. 6g KC1、0. 4-0. 6g MgS04、0. 009-0. 015g FeS04、 25-35g蔗糖、350-450ml麩皮提取液以及余量的水組成，所述的麩皮提取液通過將50g麩皮 置于1.5L水中在9(TC煮1小時，過濾后用水定容至450ml制得。
7. 根據權利要求4或5所述的生防試劑，其特征在于，以1L體積計，所述的發酵培養基 由0. 25-0. 35g Ca(N03)2 4H20、0. 05-0. 15g KN03、0. 05-0. lg KC1、0. 2-0. 4g MgS04 7H20、 0. 01-0. 03g NaH2P04. 2H20、0. 5-2. OOg大豆胨、4. 00-6. OOg酒石酸胺、2 3mg FeCl3 *6H20、 4.0-6.0mg MnS04. H20、2. 0-3. Omg ZnS04 7H20、 1. 0-2. 5mg H3B03、0. 5-1. Omg KI、0. 2-0. 4g 酵母提取物、350-450ml麩皮提取液以及余量的水組成，所述的麩皮提取液通過將lg麩皮 置于1. 5L水中在9(TC煮1小時，過濾后定容至450ml制得。綠色木霉TV501發酵液表面活性劑水■ 9700份 0. 01 30份
全文摘要
本發明公開了一種高產胞壁降解酶和抗菌肽的綠色木霉菌株，命名為綠色木霉(Trichoderma viride)TV501，保藏號為CCTCC NoM209321。本發明綠色木霉菌株能夠高產細胞壁降解酶和抗菌肽，由它制得的生防試劑對草莓白粉病、草莓灰霉病、黃瓜白粉病等蔬菜、瓜果病害有較好田間防效，顯著提高了蔬菜、瓜果的產量和品質，減少了化學農藥的使用量，改善生態環境，提高食用安全性，顯示出廣闊的發展前景，有助于農業增效農民增收。
文檔編號A01P3/00GK101724572SQ20101004003
公開日2010年6月9日 申請日期2010年1月19日 優先權日2010年1月19日
發明者余紅, 忻雅, 來文國, 楊平平, 王淑珍, 童建新, 鄭桂珍, 阮松林, 馬華升 申請人:杭州市農業科學研究院