專利名稱：一種利用高產富硒雜交紅米發酵廢糟培養桑黃的方法
技術領域：
—種利用高產富硒雜交紅米611A/R319發酵廢糟培養桑黃的方法，屬于生物工程 技術領域。涉及發酵法培養桑黃菌絲體，是將桑黃子實體接種至新鮮的固體斜面上進行培 養，待斜面長好后接種至含較低濃度的高產富硒雜交紅米611A/R319發酵廢糟的液體培 養基中進行種子的培養，即對菌種加以馴化；再接入添加了足量高產富硒雜交紅米611A/ R319發酵廢糟的液體培養基中進行深層液體發酵培養。高產富硒雜交紅米611A/R319是四 川大學與四川農業大學水稻研究所共同研究的高產雜交富硒紅米，該雜交稻富含硒、鍺等 有益微量元素；該雜交紅米加工成紅米釀后會產生發酵廢糟，發酵廢糟中仍含有較高含量 的未被微生物轉化的微量元素以及糖類和蛋白質，所以可通過培養桑黃菌絲體得到營養豐 富的菌絲體混合液。發酵結束后，通過對混合發酵液進行過濾、烘干、粉碎，得到營養物質含 量豐富的桑黃菌絲體粉。
二背景技術：
桑黃(Phelli皿s igniarius)是我國珍稀的一種天然藥物，屬擔子菌綱，多孔菌 目，多孔菌科。子實體無柄，菌蓋扁半球形或馬蹄形，木質，淺肝褐色至暗灰色或黑色。味微 苦，性寒。《本草綱目》記載桑黃能"利五臟，宣腸胃氣，排毒氣";現代研究證實桑黃具有很 高的藥用價值，可以強化免疫力，誘導癌細胞自行死亡，抑制癌細胞的轉移，減輕化療和放 療的副作用，預防和避免癌癥的復發；還具有護肝作用；通過降低和調整血糖濃度，有效預 防及改善糖尿病；降低血脂，防止動脈硬化，防止心腦血管病的發生；預防和治療類風濕性 關節炎；桑黃提取物能夠完全抑制尿酸，對通風有良好的效果；抗過敏，對過敏性鼻炎，久 治不愈的濕疹療效很好。 富硒紅米，是在水稻生長發育過程中通過以微量元素富積技術為核心而培育出的 具有高含量的微量元素營養功能稻米，以其果皮具有紅色色素沉淀而得名。高產富硒雜交 紅米611A/R319是四川大學與四川農業大學水稻研究所共同研究的高產雜交紅米，該雜交 紅米同普通紅米一樣，含有眾多對人體健康有益的活性功能單元，如花青素、黃酮、生物堿、 甾醇、強心甙等，在抗炎、抗過敏、改變體內酶活性、改善微循環、增加冠狀動物血流量、提高 機體免疫功能、抗氧化和延緩衰老等方面意義重大。此外，還含有較高的蛋白質和硒、鐵、鋅 等微量元素。經檢測，高產富硒雜交紅米611A/R319的發酵廢糟中也含有較高含量的未被 微生物轉化的微量元素以及糖和蛋白質。
三
發明內容
本發明的目的是提供一種利用高產富硒雜交紅米611A/R319發酵廢糟培養桑黃 的方法。 本發明的技術方案將桑黃子實體接種至新鮮的固體斜面上進行培養，待斜面長 好后接種至含較低濃度的高產富硒雜交紅米611A/R319發酵廢糟的液體培養基中進行種 子的培養，即對菌種加以馴化；再接入添加了足量高產富硒雜交紅米611A/R319發酵廢糟的液體培養基中進行深層液體發酵培養。由于高產富硒雜交紅米611A/R319發酵廢糟中含有豐富的硒、鐵和鋅等微量元素以及糖類和蛋白質，所以該混合發酵液中營養物質豐富。發酵結束后，通過對混合發酵液進行過濾、烘干、粉碎，得到營養物質含量豐富的桑黃菌絲體粉。
步驟為 1)待用菌種的培養 出發菌株為桑黃(Phellinus igniarius);
①斜面培養 培養基配方以g/L計馬鈴薯200、瓊脂20、葡萄糖5、硫酸鎂2.0、磷酸二氫鉀3.0，pH自然； 培養方法取桑黃子實體中心部分接種于新鮮的斜面上，在25t:下培養7天左右；②500mL —級搖瓶種子培養，裝液量150mL/500mL : 培養基配方以g/L計馬鈴薯200、葡萄糖5、硫酸鎂2. 0、磷酸二氫鉀3. 0、維生素B10. 01， pH自然； 培養方法將培養好的斜面接種至事先滅菌的搖瓶中，在25士rC下，轉速110rpm下培養7天；③1000mL 二級搖瓶種子培養，裝液量400mL/1000mL :
培養基配方與一級搖瓶種子培養基配方相同； 培養方法將培養好的一級種子以10%的接種量接種至事先滅菌的搖瓶中，在25t:下，轉速110rpm下培養2天，即成待用菌種；
2) 50L —級液體種子培養，裝液量25-30L : ①一級液體種子培養基配方以g/L計葡萄糖5、麩皮50，麩皮水珠后取水溶性麩皮汁、酵母膏3. 0、維生素B10. 01、硫酸鎂2. 0、磷酸二氫鉀3. 0、高產富硒雜交紅米611A/R319發酵廢糟5，pH自然； ②控制工藝在O. lMpa下滅菌30分鐘，冷卻后按接種量5X-10X接入待用菌種，溫度25士rC，罐壓0. 05Mpa，通氣量1 : 0. 3， V/V，攪拌轉速100rpm ; ③轉罐標準發酵時間30-35小時，菌絲球上浮三分之一，鏡檢有鎖狀聯合，無雜菌； 3) 500L 二級液體種子培養，裝液量250-300L :
①培養基配方與一級液體種子配方相同； ②控制工藝在O. 1Mpa下滅菌30分鐘，冷卻后按接種量10% _15%接入一級種子，溫度25士rC，罐壓0. 05Mpa，通氣量1 : 0. 3， V/V，攪拌轉速100rpm ;
③轉罐標準發酵時間30-35小時，菌絲球上浮三分之一，鏡檢有鎖狀聯合，無雜菌； 4) 3000L深層液體發酵培養，裝液量1800L : ①發酵培養基配方以g/L計葡萄糖5 、麩皮50 ，麩皮水煮后取水溶性麩皮汁、酵母膏3. 0、維生素BA 01、硫酸鎂2. 0、磷酸二氫鉀3. 0、高產富硒雜交紅米611A/R319發酵廢糟10， pH自然；
②控制工藝在O. 1Mpa下滅菌30分鐘，冷卻后按接種量10% _15%接入二級種
子，溫度25士rC，罐壓0. 05Mpa，通氣量1 : 0. 3， V/V，攪拌轉速100rpm ; ③放罐標準發酵時間30-35小時，菌絲球上浮二分之一，鏡檢有鎖狀聯合，菌絲
球不能自溶； 5)固體發酵物的收集將培養好的發酵液用5000-6000rpm的離心機處理，收集菌
絲體； 6)菌絲體的烘干將收集的菌絲體用真空干燥箱在50-6(TC下烘干； 7)菌絲體的粉碎用帶冷凍的粉碎機將烘干的菌絲體粉碎至80目以上既得產品。
8)檢驗檢驗標準如下 ①多糖含量^ 4% @蛋白質含量>4% ③微量元素含量X). 15ii g/g，《0. 3ii g/g
水分《8% ⑤菌落總數《1000cfu/g，大腸桿菌《40npn/100g，酵母《25cfu/g，霉菌《25cfu/g，致病菌不得檢出。LD50為陰性。
鉛《1. 5mg/kg，石申《1. Omg/kg。 產品均由衛生防疫部門檢測合格后方可銷售。包裝檢驗合格后用鋁膜包裝袋包裝后即得產品桑黃粗菌體粉。 本發明的有益效果本發明利用高產富硒雜交紅米611A/R319發酵廢糟進行純種液體深層發酵培養桑黃菌體，大大縮短了生產周期，提高了產量。本發明主要采用富硒大米發酵廢糟，污染小、成本低、工藝簡便、科技含量高、不易被仿冒、有效成分含量高、附加值高，適宜工業化生產。
具體實施例方式
1、待用菌種的培養將桑黃子實體接種至事先滅好菌的用上述斜面配方配制的一只空白斜面上，在25t:培養6-10天后將斜面上的菌體刮入事先滅好菌的裝有適量無菌水和玻璃珠的三角瓶中，振蕩10分鐘，制成菌懸液。吸4ml該菌懸液于事先滅好菌的一級種子液體培養基中(裝液量150mL/500mL)，在25。C，轉速110rpm下培養7天得一級搖瓶種子；無菌條件下，將培養好的一級搖瓶種子一瓶倒入事先滅好菌的用上述二級搖瓶種子配方配制的液體培養基中(裝液量400mL/1000mL)，在25°C ，轉速110rpm下培養2天，長好后將兩瓶種子液合并即成待用菌種。 2、一級液體種子培養按上述一級液體中資培養基配方，在O. 1Mpa下滅菌30分鐘冷卻后接入搖瓶種子。按上述一級液體種子培養參數培養。采用50L全自動發酵罐，裝液量為25-30L。 3、二級液體種子培養按上述二級液體種子培養基配方，在O. 1Mpa下滅菌30分鐘冷卻后接入一級種子。按上述二級液體種子培養參數培養。采用500L全自動發酵罐，裝液量為250-300L。 4、深層液體發酵培養采用3000L發酵罐，裝液量為1800L。按上述發酵培養基配方，相同條件滅菌后接入二級液體種子。按上述發酵罐的培養參數培養。
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5、菌絲體的提取將培養好的發酵液用上述固體發酵物的收集方法，收集菌絲體，得到250kg濕菌體。 6、菌絲體粉的獲得按上述菌絲體粉的獲得方法，得到20kg菌絲體粉。
權利要求
一種利用高產富硒雜交紅米發酵廢糟培養桑黃的方法，其特征是將桑黃子實體接種至新鮮的固體斜面上進行培養，待斜面長好后接種至含較低濃度的高產富硒雜交紅米611A/R319發酵廢糟的液體培養基中進行種子的培養，即對菌種加以馴化；再接入添加了足量高產富硒雜交紅米611A/R319發酵廢糟的液體培養基中進行深層液體發酵培養；由于高產富硒雜交紅米611A/R319發酵廢糟中含有豐富的硒、鐵和鋅等微量元素以及糖類和蛋白質，所以該混合發酵液中營養物質豐富；發酵結束后，通過對混合發酵液進行過濾、烘干、粉碎，得到營養物質含量豐富的桑黃菌絲體粉；步驟為1)待用菌種的培養出發菌株為桑黃(Phellinus igniarius)；①斜面培養培養基配方以g/L計馬鈴薯200、瓊脂20、葡萄糖5、硫酸鎂2.0、磷酸二氫鉀3.0，pH自然；培養方法取桑黃子實體中心部分接種于新鮮的斜面上，在25℃下培養7天左右；②500mL一級搖瓶種子培養，裝液量150mL/500mL培養基配方以g/L計馬鈴薯200、葡萄糖5、硫酸鎂2.0、磷酸二氫鉀3.0、維生素B10.01，pH自然；培養方法將培養好的斜面接種至事先滅菌的搖瓶中，在25±1℃下，轉速110rpm下培養7天；③1000mL二級搖瓶種子培養，裝液量400mL/1000mL培養基配方與一級搖瓶種子培養基配方相同；培養方法將培養好的一級種子以10％的接種量接種至事先滅菌的搖瓶中，在25℃下，轉速110rpm下培養2天，即成待用菌種；2)50L一級液體種子培養，裝液量25-30L①一級液體種子培養基配方以g/L計葡萄糖5、麩皮50，麩皮水珠后取水溶性麩皮汁、酵母膏3.0、維生素B10.01、硫酸鎂2.0、磷酸二氫鉀3.0、高產富硒雜交紅米611A/R319發酵廢糟5，pH自然；②控制工藝在0.1Mpa下滅菌30分鐘，冷卻后按接種量5％-10％接入待用菌種，溫度25±1℃，罐壓0.05Mpa，通氣量1∶0.3，V/V，攪拌轉速100rpm；③轉罐標準發酵時間30-35小時，菌絲球上浮三分之一，鏡檢有鎖狀聯合，無雜菌；3)500L二級液體種子培養，裝液量250-300L①培養基配方與一級液體種子配方相同；②控制工藝在0.1Mpa下滅菌30分鐘，冷卻后按接種量10％-15％接入一級種子，溫度25±1℃，罐壓0.05Mpa，通氣量1∶0.3，V/V，攪拌轉速100rpm；③轉罐標準發酵時間30-35小時，菌絲球上浮三分之一，鏡檢有鎖狀聯合，無雜菌；4)3000L深層液體發酵培養，裝液量1800L①發酵培養基配方以g/L計葡萄糖5、麩皮50，麩皮水煮后取水溶性麩皮汁、酵母膏3.0、維生素B10.01、硫酸鎂2.0、磷酸二氫鉀3.0、高產富硒雜交紅米611A/R319發酵廢糟10，pH自然；②控制工藝在0.1Mpa下滅菌30分鐘，冷卻后按接種量10％-15％接入二級種子，溫度25±1℃，罐壓0.05Mpa，通氣量1∶0.3，V/V，攪拌轉速100rpm；③放罐標準發酵時間30-35小時，菌絲球上浮二分之一，鏡檢有鎖狀聯合，菌絲球不能自溶；5)固體發酵物的收集將培養好的發酵液用5000-6000rpm的離心機處理，收集菌絲體；6)菌絲體的烘干將收集的菌絲體用真空干燥箱在50-60℃下烘干；7)菌絲體的粉碎用帶冷凍的粉碎機將烘干的菌絲體粉碎至80目以上既得產品。
全文摘要
本發明涉及高產富硒雜交紅米611A/R319發酵后的廢糟培養桑黃的方法。高產富硒雜交紅米611A/R319是四川大學與四川農業大學水稻研究所共同研究的高產雜交富硒紅米，該雜交稻富含硒、鍺等有益微量元素；該雜交紅米加工成紅米釀后會產生發酵廢糟，發酵廢糟中仍含有較高含量的未被微生物轉化的微量元素以及糖類和蛋白質，所以可通過培養桑黃菌絲體得到營養豐富的菌絲體混合液。本發明主要包括菌種的培養、液體種子培養、深層液體發酵培養、固體發酵物收集、干燥、粉碎。用本發明方法培養桑黃，其產量高，且生長速度快。該菌絲體粉也可以作為一種食品添加劑，與適當的食品配比，制成功能型食品。
文檔編號A01G1/04GK101731101SQ20101010109
公開日2010年6月16日 申請日期2010年1月26日 優先權日2010年1月26日
發明者曹玫, 朱建清, 聶遠洋, 趙建, 顏亮 申請人:四川大學