專利名稱：一種富鍺蛹蟲草菌絲體的培養方法
技術領域：
本發明涉及一種富鍺蛹蟲草菌絲體的培養方法，屬于生藥學技術領域。
背景技術：
蛹蟲草(Cordyc印s militaris (L. ) Link)又稱為北蟲草、北冬蟲夏草、蛹草， 隸屬于真菌界(Fungi)、子囊菌門(Ascomycota)、盤菌亞門(Pezizomycotina)、糞殼菌綱(Sordarimycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、麥角菌禾斗(Clavicipiaceae)、蟲草屬 [Cordyceps (Fr.) Link]，是蟲草屬真菌的模式種。蛹蟲草在世界各地均有分布，是一種蟲生真菌，也是藥用真菌中的一種，該真菌侵染寄主昆蟲的幼蟲、成蟲或蛹，使其僵化，在一定條件下，該僵蟲形成具有蟲(僵蟲菌核)、草(真菌子座)復合形態的真菌結構。現代研究表明蛹蟲草含有蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、核苷、留醇等多種生物活性物質；對人體具有多種顯著的生理功能，具有增強免疫力、調節內分泌、抗疲勞、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗腫瘤、 抗缺氧、鎮靜、降血糖、保護肝腎及呼吸系統等多種生理功能。其活性成分和功能與著名的藥用真菌冬蟲夏草〔Cordyc印s sinensis (Berk. ) Sacc〕極其相似，某些活性成分如蟲草素、 核苷等物質含量還高于冬蟲夏草生藥。鍺是一種具有高度生物活性的微量元素，是人體不可缺少的物質之一。鍺主要以化合物和絡合物的形式存在，分為有無機鍺與有機鍺兩種，無機鍺毒性較大，對人體是嚴格禁用的，有機鍺的藥理作用和保健功能已引起了人們的重視，尤其是富集在植物和草藥中的有機鍺被認為是發揮藥理作用和保健功能的主要因素。近年來研究表明有機鍺可使人體酶活化，增強細胞活力，促進機體新陳代謝，具有抗腫瘤、消炎與免疫調節、抗病毒、抗氧化、抗衰老、降血脂、促進植物和微生物的生長、改善血液循環、增加攜氧量等多重功能，某些藥物的醫療保健功能都與之有關。國內外目前關于富鍺蛹蟲草菌絲體產品及其培養方法沒有相應的報道。
發明內容
為了克服傳統蛹蟲草發酵菌絲體現有生成技術的不足，本發明提供一種操作簡單、培養周期短，菌絲體產率高，無污染，無廢棄物，具有補鍺功能，可以進行產業化生產的一種富鍺蛹蟲草菌絲體的培養方法。本發明是通過如下技術方案實現的一種富鍺蛹蟲草菌絲體的培養方法，其特征在于包括試管斜面菌種培養即菌種活化一三角瓶液體種子培養一液體種子罐培養一發酵罐發酵培養一板框壓濾一熱風循環干燥一粉碎一粉末狀富鍺蛹蟲草菌絲體；所述的試管斜面菌種培養是配制培養基；配制好培養基后120-123 滅菌20分鐘，冷卻后，無菌條件下接入蛹蟲草菌種，置于15 恒溫培養箱暗培養5 8天；所述的培養基重量配方比例為葡萄糖1.0% 4.0%，蛋白胨0.5% 1.2%，酵母提取物 0.2% 1.2%，瓊脂粉1% 2%，用水補充至IOOml ；其pH值為5. O 7. 8 ；所述的三角瓶液體菌種培養是配制培養基，配制好培養基后120-123°C°C滅菌20分鐘，冷卻后，無菌條件下接入蛹蟲草固體斜面菌種，接種量為每IOOml液體培養基中接入Icm2固體斜面菌種，置于恒溫振蕩培養箱15 暗培養5 8天；所述的培養基重量配方比例為葡萄糖1.0% 4.0%，蛋白胨0.5% 1.2%，酵母浸出粉0.2% 1.2%，用水補充至IOOml ；其pH值為5. 0 7. 8 ；所述的液體種子罐培養是配制培養基，配制好培養基后120-123 滅菌20分鐘， 裝液量為罐體溶劑的60% 80%，滅菌冷卻后，無菌條件下接入蛹蟲草三角瓶液體菌種， 接種量為5%，發酵過程中罐壓0.05Mpa，通氣量為1 0. 5 1，15 培養2 4天，即可轉入發酵罐發酵；所述的培養基重量配方比例為葡萄糖1. 0% 4. 0%，蛋白胨0. 5% 1.2%，酵母浸出粉0.2% 1.2%，用水補充至IOOml ；其pH值為5. 0 7. 8 ；所述的發酵罐發酵培養是配制培養基；配制好培養基后120-123°c滅菌20分鐘， 冷卻后，無菌條件下接入蛹蟲草液體菌種，接種量為10%，發酵過程中罐壓0. 05Mpa，通氣量為1 0.5 1，15 培養2 3天，待菌絲變細或還原糖含量小于0.2%時，即可出罐，收集菌絲體；所述的培養基重量配方比例為葡萄糖1.0% 4.0%，蛋白胨0.5% 1. 2%，酵母浸出粉0. 2% 1. 2%，豆粕粉0. 2% 1. 0%，二氧化鍺粉末0. 02% 0. 03%, 用水補充至IOOml ；其pH值為5. 0 7. 8 ；所述的板框壓濾是將發酵好的蛹蟲草發酵液泵入板框壓機，壓濾后收集菌絲，將濾餅粉碎成小塊狀菌絲體后，放入熱風循環干燥；所述的干燥劑粉碎是將得到的小塊狀菌絲體置于60°C 80°C熱風循環烘箱中干燥，干燥后用粉碎機進行粉碎成粉狀，收集粉碎物得到粉末狀菌絲體產品。所述的試管斜面菌種培養的培養基配方重量比優選為葡萄糖3.0%，蛋白胨 1%，酵母提取物0.5%，瓊脂粉1.8%，用水補充至IOOml ；其pH值為6.8。所述的試管斜面菌種培養的培養基還可以使用酵母浸出粉替代酵母提取物，其配方重量比為每IOOOml水含葡萄糖1. 0% 4. 0%，蛋白胨0. 5% 1. 2%，酵母浸出粉 0.2% 1.2%，瓊脂粉 2% ；其pH值為5.0 7.8。優選為葡萄糖3.0%，蛋白胨 1%，酵母浸出粉0.5%，瓊脂粉1.8%，用水補充至IOOml ；其pH值為6.8。本發明同現有技術相比可產生如下積極效果和顯著的進步專利申請人通過對蛹蟲草菌絲體對鍺離子富集規律的研究，了解到蛹蟲草菌絲體的富集鍺的能力高，本發明產品發酵周期短，菌絲體得率高，生產過程中無污染、無廢棄物，有機鍺含量高，具有補鍺的功效。本發明采用特點的培養基以及培養方法發酵的富鍺蛹蟲草菌絲體，可以增加產品的功效，富鍺蛹蟲草在發酵過程中在培養基中添加無機鍺，通過蛹蟲草菌在生長過程中對鍺元素的吸收和轉化形成有機鍺，降低了無機鍺的毒性，使鍺能安全、高效的發揮對人體的醫療保健功效。富鍺蛹蟲草菌絲體及微量元素有機物的抗氧化、抗疲勞、抗突變和抗腫瘤能力有顯著增強，小鼠急性經口毒理實驗和蠶豆根尖細胞微核實驗表明，富鍺蛹蟲草菌絲體沒有致突變作用，這說明富鍺蛹蟲草作為食品和藥品是安全可靠的。
具體實施例方式下面通過實施例對本發明作進一步詳細說明。實施例1
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菌種蛹蟲草菌種XGYSG014，來源于徐州工程學院食品(生物)工程學院實驗室。試管斜面菌種培養 配制培養基培養基重量配方比例為葡萄糖4 %，蛋白胨1 %，酵母浸出粉1 %，瓊脂粉2%，用水補充至IOOml ；其pH值為6. 8，配制好培養基后121°C滅菌20分鐘，冷卻后， 無菌條件下接入蛹蟲草菌種，置于25°C恒溫培養箱暗培養5 7天。三角瓶液體菌種培養配制培養基培養基重量配方比例為葡萄糖4 %，蛋白胨1 %，酵母浸出粉1 %，用水補充至IOOml ；其pH值為6. 8配制好培養基后121°C滅菌20分鐘，冷卻后，無菌條件下接入蛹蟲草固體斜面菌種，接種量為IOOml液體培養基中接入Icm2固體斜面菌種，置于恒溫振蕩培養箱15 暗培養5 7天。種子罐培養配制培養基培養基重量配方比例為葡萄糖4%，蛋白胨1%，酵母浸出粉1%， 用水補充至IOOml ；其pH值為6. 8，培養基后121°C滅菌20分鐘，200L發酵罐中裝液量為 140L,滅菌冷卻后，無菌條件下接入蛹蟲草三角瓶液體菌種，接種量為5%，發酵過程中罐壓 0. 05Mpa，通氣量為1 0.5 1，15 培養2 4天，即轉入200L發酵罐發酵。發酵罐培養配制培養基培養基重量配方比例為葡萄糖4%，蛋白胨0.5%，酵母浸出粉 0.5%,豆粕粉1 %，二氧化鍺粉末0. 03 %，用水補充至IOOml ；其pH值為6. 8，配制好培養基后121°C滅菌20分鐘，2噸發酵罐中裝液量為1.5噸，冷卻后，無菌條件下接入蛹蟲草液體菌種，接種量為10%，發酵過程中罐壓0.05Mpa，通氣量為1 0. 5 1，22°C培養2 4 天，待菌絲變細或還原糖含量小于0.2%時，即可出罐，收集菌絲體，如需要進行放大培養可將2000L發酵罐作為種子罐繼續放大到20噸。(5)板框壓濾將發酵好的蛹蟲草發酵醪液通過高壓泵泵入板框壓機，壓濾后收集菌絲，將濾餅粉碎成小塊狀菌絲體后，置入烘盤，放入熱風循環干燥。(6)干燥劑粉碎將得到的小塊狀菌絲體置于70°C熱風循環烘箱中干燥Mh，使菌絲體水分以后用粉碎機進行粉碎粉狀，收集粉碎物得到粉末狀菌絲體產品。上述蛹蟲草富鍺菌絲體經原子吸收分光光度計檢測，有機鍺含量為485. 41 μ g/g 以上。
權利要求
1.一種富鍺蛹蟲草菌絲體的培養方法，其特征在于包括試管斜面菌種培養即菌種活化一三角瓶液體種子培養一液體種子罐培養一發酵罐發酵培養一板框壓濾一熱風循環干燥一粉碎一粉末狀富鍺蛹蟲草菌絲體；所述的試管斜面菌種培養是配制培養基，配制好培養基后120-123°c滅菌20分鐘，冷卻后，無菌條件下接入蛹蟲草菌種，置于15 恒溫培養箱暗培養5 8天；所述的培養基重量配方比例為葡萄糖1.0% 4.0%，蛋白胨0.5% 1.2%，酵母提取物0.2% 1. 2%，瓊脂粉 2%，用水補充至IOOml ；其pH值為5. 0 7. 8 ；所述的三角瓶液體菌種培養是配制培養基，配制好培養基后120-123 滅菌20分鐘， 冷卻后，無菌條件下接入蛹蟲草固體斜面菌種，接種量為每IOOml液體培養基中接入Icm2 固體斜面菌種，置于恒溫振蕩培養箱15 暗培養5 8天；所述的培養基重量配方比例為葡萄糖1.0% 4.0%，蛋白胨0.5% 1.2%，酵母浸出粉0.2% 1.2%，用水補充至IOOml ；其pH值為5. 0 7. 8 ；所述的液體種子罐培養是配制培養基，配制好培養基后120-123°C滅菌20分鐘，裝液量為罐體溶劑的60% 80%，滅菌冷卻后，無菌條件下接入蛹蟲草三角瓶液體菌種，接種量為5%，發酵過程中罐壓0.05Mpa，通氣量為1 0. 5 1，15 培養2 4天，即可轉入發酵罐發酵；所述的培養基重量配方比例為葡萄糖1. 0% 4. 0%，蛋白胨0. 5% 1.2%，酵母浸出粉0.2% 1.2%，用水補充至IOOml ；其pH值為5. 0 7. 8 ；所述的發酵罐發酵培養是配制培養基；配制好培養基后120-123°C滅菌20分鐘，冷卻后，無菌條件下接入蛹蟲草液體菌種，接種量為10 %，發酵過程中罐壓0. 05Mpa,通氣量為 1 0.5 1，15 培養2 3天，待菌絲變細或還原糖含量小于0.2%時，即可出罐，收集菌絲體；所述的培養基重量配方比例為葡萄糖1.0% 4.0%，蛋白胨0.5% 1.2%， 酵母浸出粉0. 2% 1. 2%，豆粕粉0. 2% 1. 0%，二氧化鍺粉末0. 02% 0. 03%，用水補充至IOOml ；其pH值為5. 0 7. 8 ；所述的板框壓濾是將發酵好的蛹蟲草發酵液泵入板框壓機，壓濾后收集菌絲，將濾餅粉碎成小塊狀菌絲體后，放入熱風循環干燥；所述的干燥劑粉碎是將得到的小塊狀菌絲體置于60°C 80°C熱風循環烘箱中干燥， 干燥后用粉碎機進行粉碎成粉狀，收集粉碎物得到粉末狀菌絲體產品。
2.根據權利要求1所述的一種富鍺蛹蟲草菌絲體的培養方法，其特征在于所述的試管斜面菌種培養的培養基配方重量比為葡萄糖3. 0 %，蛋白胨1 %，酵母提取物0. 5%，瓊脂粉1.8%，用水補充至IOOml ；其pH值為6.8。
3.根據權利要求1所述的一種富鍺蛹蟲草菌絲體的培養方法，其特征在于所述的液體種子罐培養的培養基配方重量比為葡萄糖1. 0% 4. 0%，蛋白胨0. 5% 1. 2%，酵母浸出粉0.2% 1.2%，瓊脂粉1% 2%，用水補充至IOOml ；其pH值為5. 0 7. 8。
4.根據權利要求1所述的一種富鍺蛹蟲草菌絲體的培養方法，其特征在于所述的發酵罐發酵培養的培養基配方重量比為葡萄糖1. 0% 4. 0%，蛋白胨0. 5% 1. 2%，酵母浸出粉0. 2 % 1. 2 %，豆粕粉0. 2 % 1. 0 %，二氧化鍺粉末0. 02 % 0. 03 %，用水補充至 IOOml ；其 pH 值為 5. 0 7. 8。
全文摘要
本發明涉及一種富鍺蛹蟲草菌絲體的培養方法，屬于生藥學技術領域。包括試管斜面菌種培養，即菌種活化→三角瓶液體種子培養→液體種子罐培養→發酵罐發酵培養→板框壓濾→熱風循環干燥→粉碎→粉末狀富鍺蛹蟲草菌絲體。本發明的有益效果是操作簡單、培養周期短，菌絲體產率高，無污染，無廢棄物，有機鍺含量高，具有補鍺功能。
文檔編號A01G31/00GK102172171SQ201110039370
公開日2011年9月7日 申請日期2011年2月14日 優先權日2011年2月14日
發明者侯進慧, 朱蘊蘭, 王陶, 邵穎, 陳安徽, 陳宏偉 申請人:徐州工程學院