專利名稱：一種從牡丹種子中取胚接種方法
技術領域：
本發明屬于植物生物技術領域，具體涉及一種從牡丹種子中取胚接種方法。
背景技術：
牡丹suffruticosa Andr.),雍容華貴，富麗堂皇,深受人們的喜愛。伴隨著人民生活水平的提高，我國牡丹的栽培面積越來越大。傳統的繁殖方法生產周期長，生產成本高，同時易導致牡丹感染病毒，種性下降。為了實現牡丹種植的規模化、工廠化，降低生產成本，通過組織培養快速繁殖是一條有效的途徑。而在牡丹組織培養快速繁殖中，目前用的最多也是最有效的方法就是牡丹的成熟胚培養。牡丹成熟胚培養的第一步就是如何從牡丹種子里面取出胚進行無菌接種。傳統的從牡丹種子中取胚接種的方法是采取當年的牡丹種子，在超凈工作臺內， 先對牡丹種子進行無菌消毒，再用解剖刀沿種子腹縫線切去一半，然后用鑷子固定好種子，再取一個鑷子將胚取出。取胚成功率一般為6(Γ70%，取胚后成功繁殖率為90、5%。此種方法由于將種子直接切去一半，容易傷及胚，而且實驗人員在超凈工作臺內工作受到一定程度的束縛，不僅耗時、操作不小心易損傷胚，對操作人員實驗水平也有較高要求。
發明內容
本發明的目的在于克服現有技術的不足之處，找到一種操作簡單方便，不易損傷胚，而且大大提高取胚效率的方法。本發明提供的技術方案如下
一種從牡丹種子中取胚接種方法，包括以下步驟
Α.選取當年6月底至7月初采取牡丹種子；將牡丹種子表面的黏液用自來水清洗掉；
B.用手指固定牡丹種子，從牡丹種子腹縫線對應的背面開始，以不含胚軸的一端為起點切割，切至牡丹種子高度的三分之二處，胚保留在未切割的剩下的牡丹種子內，最后將處理過的牡丹種子再用清水清洗一遍，備用；
C.在超凈工作臺內，將牡丹種子放置在75%酒精內消毒2(T30 s，之后用O. I %升汞消毒5 min,再將消毒后的牡丹種子用無菌水沖洗5飛次，吸干牡丹種子上的水份；
D.固定好牡丹種子切口的兩側，將其掰開，胚保留在其中的一半上，用消過毒的鑷子將胚取出；
E.將胚根朝下，子葉朝上，垂直插放于培養基中培養。本發明的有益效果是本發明提供了一種從牡丹種子中取胚接種方法，其有益效果有以下幾個方面
I、本發明在超凈工作臺外先對種子進行初步的處理，即從牡丹種子腹縫線對應的背面開始，以不含胚軸的一端為起點切割，切至牡丹種子高度的三分之二處，胚保留在未切割的剩下的牡丹種子內；由于在超凈工作臺外處理，實驗人員能夠更隨意的進行實驗操作，切割效率大大提高，而且本方法僅切牡丹種子的一部分，大大降低了損傷胚的可能性。2、本發明可以大大避免在取胚的時候對胚的傷害，因為胚很小不容易被看見，直接在超凈工作臺中用解剖刀切割，很容易將胚切傷，或者直接就找不到胚，而降低了接種胚的成功率。而本發明方法在超凈工作臺內僅需要將牡丹種子沿切口掰開，即可見到胚。3、牡丹種子很光滑，傳統方法的在超凈工作臺內用鑷子固定，用解剖刀切胚時容易使種子逃脫，造成種子的浪費；通過采用本發明，在切割牡丹種子時，可以用手指固定牡丹種子，相比傳統方法更方便、牢固、簡單，減少了牡丹種子的浪費。4、通過采用本發明，大部分的操作步驟在超凈工作臺外進行，減少了超凈工作臺內工作的時間，降低了污染率。
具體實施例方式下面對本發明的實施例做詳細說明本實施例在以本發明技術方案為前提下進行·實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發明的保護范圍不限于下述的實施例。實施例I
A.采取600粒牡丹種子，每150粒作為一組；
B.將牡丹種子表面的黏液用自來水清洗掉；
C.用手指固定牡丹種子，從牡丹種子腹縫線對應的背面開始，以不含胚軸的一端為起點切割，切至牡丹種子高度的三分之二處，胚保留在未切割的剩下的牡丹種子內，最后將處理過的牡丹種子再用清水清洗一遍，備用；
D.將處理過的牡丹種子再用清水清洗一遍；
E.在超凈工作臺里，用鑷子固定好牡丹種子切口的兩側，將其掰開，胚保留在其中的一半上，用消過毒的鑷子將胚取出；
F.將胚根朝下，子葉朝上，垂直插放于培養基中培養。G.統計四組實驗結果，成功取胚的牡丹種子分別為135粒、137粒、132粒、136粒，取胚后成功繁殖的有132粒、133粒、130粒、133粒。即四組實驗的取胚成功率分別為90%、91. 3%,88%,90. 7%，取胚后成功繁殖率為 97. 8%,97. 1%、98· 5%,97. 8%。上述實施例結果表明，通過采用本發明，大大提高了取胚的成功率，而且采用本發明對取出的胚沒有不良影響，為大批牡丹成熟胚組培工作提供了一種很好的從牡丹種子中取胚接種的方法。
權利要求
1. 一種從牡丹種子中取胚接種方法，其特征在于，包括以下步驟 A、選取當年6月底至7月初之間采取的牡丹種子，將牡丹種子表面的黏液用自來水清洗掉； B、用手指固定牡丹種子，從牡丹種子腹縫線對應的背面開始，以不含胚軸的一端為起點切割，切至牡丹種子高度的三分之二處，胚保留在未切割的剩下的牡丹種子內，最后將處理過的牡丹種子再用清水清洗一遍，備用； C、在超凈工作臺內，將牡丹種子放置在75%酒精內消毒2(T30 s，之后用O. I %升汞消毒5 6 min，再將消毒后的牡丹種子用無菌水沖洗5飛次，吸干牡丹種子上的水份； D、固定好牡丹種子切口的兩側，將其掰開，胚保留在其中的一半上，用消過毒的鑷子將胚取出； E、將牡丹胚體的胚根朝下，子葉朝上，垂直插放于培養基中培養。
全文摘要
一種從牡丹種子中取胚接種的方法，屬于植物生物技術領域。該方法包括選材、清洗、切割牡丹種子、消毒、取胚、接種等步驟。本發明大部分操作在超凈工作臺外完成，不僅能夠使實驗人員更方便的操作、提高工作效率，還大大降低了污染率；而且本發明中切割牡丹種子時，采取從牡丹種子腹縫線對應的背面開始，以不含胚軸的一端為起點切割，切至牡丹種子高度的三分之二處停止的方法，大大降低了切割種子時損傷胚的可能性，減少了牡丹種子的浪費。
文檔編號A01H4/00GK102934611SQ20121040653
公開日2013年2月20日 申請日期2012年10月23日 優先權日2012年10月23日
發明者施江, 郭倩, 辛莉, 董普輝, 史國安 申請人:河南科技大學