專利名稱：一種海藻微生物肥水劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種海藻微生物肥水劑及其制備方法，屬于水產養殖等技術領域。
背景技術：
當前經濟發展中，水產養殖業在我國已形成產業規模，并在國民經濟中占有重要地位。在整個水產養殖工業過程中，對養殖水質的肥化(又稱肥水)占有非常重要的地位，直接影響養殖產量。一般每隔10-15天或者依據水質的變化都會使用肥水產品，尤其是在出現“轉水”情況以后，浮游植物大量死亡，嚴重影響光合作用，池塘會發生缺氧現象，引起水產動物的死亡，此時就需要使用肥水產品使浮游植物大量繁殖，因此研發一種高效的肥水產品非常具有生產實踐意義。由于長期集約化生產，人們為了追求經濟上投入少、輸出多，養殖時間短，水產養殖業中使用的肥水產品多以化肥為主，生物肥較少。使用化肥的優點是 見效快，其缺點是肥效時間短，流失多，化學耗氧量、氨氮及亞硝酸鹽含量高，不利于水產動物的生長，同時還使得水體中微生態環境日益惡化，以致養殖水體越來越瘦，自凈與調節機制失控。因此，利用微生物技術進行水質處理研究已成為近幾十年來新興的水質處理技術和方法，在國內外已有較多的報到，并具有顯著的效果。中國專利CN101891307A公開了一種海水養殖生物凈化劑及其制備方法，所述海水養殖生物凈化劑利用海水代替淡水培養生物凈化劑來治理海水養殖污染，節約了淡水，同時依賴海水中含藏的微生物起到肥水的功能，在兼具水產養殖凈化功能的同時起到肥水劑的效果。但是，該發明中所述的凈化劑主要是以凈化水質的效果為主，同時限于海水中所含的營養成分有限，尤其缺乏適宜于微生物生長必需的一些微量元素，這在一定程度上影響了所述海水養殖生物凈化劑作為肥水劑的肥效，而且，所述產品中使用的海水也在一定程度上限制了其加工產地。中國專利CN101597187A公開了一種用于水產養殖的復合微生物肥料及其生產方法，所述肥料采用味精生產過程中的發酵濾餅為原料，將發酵濾餅與熟石灰混合、粉碎，同時利用稻殼分別吸附發酵后的單一菌劑混合后加入發酵濾餅中，并混入無機肥料制得。該方法所述的肥料采取有益微生物復合，起到凈化水質的作用；同時利用發酵味精過程中的濾餅廢料，起到降低成本、增加營養的作用。但由于濾餅為固態殘渣，其營養成分濾出較為困難，因此在制備過程中需要進行較為復雜的前處理步驟，包括將發酵濾餅與熟石灰混合、粉碎，堆放15-20小時，當溫度下降，低于35°C時進行第二次粉碎等步驟。該方法中，原料處理及制備過程較為繁瑣，耗時耗力，同時濾餅中營養成分的濾出效果也有待商榷。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種原料制備簡單，肥效顯著同時兼具凈化水體功能，且應用范圍廣泛的海藻微生物肥水劑；
本發明所要解決的第二個技術問題在于提供一種利用提取味精后的廢液生產的微生物肥水劑，及提取味精后的廢液在制備微生物肥水劑中的應用；本發明還公開了上述肥水劑的制備方法。為解決上述技術問題，本發明所述的海藻微生物肥水劑的制備方法包括如下步驟
S01，將保存的光合菌、放線菌、固氮菌擴大培養后，得到所需的生物菌液，備用；
S02，取枯草芽孢桿菌菌種在適宜其生長的培養基中擴大培養，得到所需的枯草芽孢桿菌劑，備用；
S03，取提取過甘露醇和褐藻酸鈉后的海藻廢渣液經濾床得到固體海藻渣，然后對固體海藻渣進行殺菌、消毒、并浸泡、粉碎、研磨、制漿，制得海藻漿料，備用；海藻廢渣液經過殺菌、消毒、并浸泡、粉碎、研磨等步驟后，采用本領域技術人員熟知的手段提取甘露醇和褐藻酸鈉即可； 所述濾床為浙水絞籠平板濾床；
S04，取步驟SOl得到的生物菌液1-3份、步驟S02得到的枯草芽孢桿菌劑5_10份、步驟S03得到的海藻漿料20-30份、味精廢液20-40份、助劑5_9份、糖蜜12-20份和水105-125份混合并控制28-35°C進行發酵，所述份數均為重量份數；
S05，將所得的發酵液計量包裝制得海藻微生物肥水劑成品。進一步的，所述步驟S04包括
S04-1，取所述生物菌液1-3份和所述海藻漿料20-30份混合并接入到含有所述助劑2-4份、所述糖蜜6-10份和水55-65份的培養基中擴大培養，得到海藻生物菌液；
S04-2，取所述海藻生物菌液、所述枯草芽孢桿菌劑5-10份、所述味精廢液20-40份、所述助劑3-5份、所述糖蜜6-10份和水50-60份進行混合并控制28_35°C進行發酵；
所述份數均為重量份數。所述生物菌液是將所述光合菌、放線菌、固氮菌同時接種至適配的培養基中發酵得到的。所述步驟SOl中，所述生物菌液是將所述光合菌、放線菌、固氮菌分別接種至適配的培養基中擴大培養，并將各自所得的菌液按照重量份數比為2-4:2-4:1-3的比例混合得到的。所述光合菌、放線菌、固氮菌菌液的重量份數比為2:2:1。所述步驟S04中，所述生物菌液為2份、所述枯草芽孢桿菌劑為7份、所述海藻漿料為25份、所述味精廢液為35份、所述助劑為6份、所述糖蜜為20份、水為110份。優選的，所述步驟S04中
所述步驟S04-1中，所述生物菌液為2份、所述海藻漿料為25份所述助劑為3份、所述糖蜜為10份、水為60份；
所述步驟S04-2中，所述枯草芽孢桿菌劑為7份、所述味精廢液為35份、所述助劑為3份、所述糖蜜為10份、水為50份。所述步驟SOl中，所述光合菌包括沼澤紅假單胞菌、莢膜紅假單胞菌、球形紅假單胞菌、嗜硫紅假單胞菌、深紅紅螺菌或黃褐紅螺菌中一種或幾種的混合物；所述放線菌包括細黃鏈霉菌、涇陽鏈霉菌或弗蘭氏克菌中一種或幾種的混合物；所述固氮菌包括圓褐固氮菌、棕色自生固氮菌、敏捷氮單胞菌或印度拜耶林克氏菌中一種或幾種的混合物。所述助劑包括殼寡糖、殼聚糖以及微量元素鋅、鐵、錳、銅的氧化物或鹽類中的一種或幾種的混合物。所述糖蜜為蔗糖。本發明還提供了應用上述制備方法制備得到的海藻微生物肥水劑。本發明所述的將所述菌種接入適配的含有碳源、氮源、無機鹽和水的無菌培養基中培養，其目的是為了實現菌種的增殖，本領域技術人員可以通過現有技術中常規培養基實現上述目的，也可以選用適于該菌屬的基本培養基實現該屬菌種的增殖，并不簡單限定于某種特定培養基。在本發明中，所述沼澤紅假單胞菌，莢膜紅假單胞菌，球形紅假單胞菌，嗜硫紅假單胞菌或，深紅紅螺菌或黃褐紅螺菌屬于光合細菌。光合細菌是具有原始光能合成體系的原核生物的總稱，是水環境中重要的微生物類群。光合細菌在厭氧和好氧下均能生長，但更適宜于含氧量不足的水體，其適應的PH值為5-9，最適pH為7 ;適宜作用溫度為15-40°C，最適溫度為30°C，在海水、淡水中均可生長。光合細菌能以光作為能源，以CO2或有 機物作為營養碳源進行繁殖，能利用太陽能同化CO2，在不同的自然條件下具有不同的功能，如固氮、脫氫、固碳、氧化硫化物等多種功能，故在自然界的碳素、氮素、硫素轉化循環中起重要作用。光合細菌營養豐富，營養價值高，菌體內含有豐富的氨基酸、蛋白質、葉酸、維生素B族。光合細菌能夠利用水中的有機物質作為營養源合成自身營養，產生新的光合細菌，同時能迅速分解水中的氨態氮、硫化物等有害物質，大幅度降低養殖水體中的COD(化學需氧量)、B0D (生化需氧量)等污染指標，提高水體的pH值，光合細菌還可通過吸收水中的耗氧因子而間接增加水中的氧氣含量，增加溶氧，提高養殖密度，改善水體環境。本發明中對所述光合菌株的培養包括但不限于各實施例中所述的培養基配方及條件，本領域技術人員可知的任何適宜于光和菌株生長的培養基均可作為培養基使用，本發明選取了現有技術中常用的培養基配方為酵母粉3. 0g，蛋白胨3. 0g，硫酸鎂(MgS04*7H20)0. 5g，氯化鈣O. 3g，蒸餾水1000mL。調pH值6. 8-7. 0，將配置好的培養基121 °C高壓滅菌20min。所述細黃鏈霉菌，涇陽鏈霉菌或弗蘭氏克菌屬于放線菌。放線菌是一類廣泛分布于自然界的好氧菌，多數放線菌的最適生長溫度為23-27°C。放線菌可以攝取光合細菌產生的氨基酸，產生抗生素；這些抗生素能夠爭奪有害霉菌及細菌生長繁殖所需的物質，有效地抑制病原菌的生長繁殖，為有益微生物的生存創造良好的環境。放線菌還具有改善土壤團粒結構，轉化氮、磷、鉀等元素的功能。放線菌有助于固氮菌和VA菌根菌的作用。放線菌能分解有機物，生成各種代謝產物，再在其他微生物的作用下使之礦質化。本領域常見的培養放線菌的培養基配方為可溶性淀粉2. 0g，硝酸鉀0. lg，磷酸氫二鉀0. 05g,氯化鈉0. 05g,硫酸鎂(MgSO4·7Η20) 0. 05g,硫酸亞鐵0. OOlg,瓊脂2g，水100ml。先把淀粉放在燒杯里，用5mL水調成糊狀后，倒入95mL水，攪勻后加入其他藥品，使它溶解。在燒杯外做好記號，加熱到煮沸時加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解后，補足失水。調整pH值到7. 2-7. 4，分裝后滅菌，備用。所述圓褐固氮菌，棕色自生固氮菌，敏捷氮單胞菌或印度拜耶林克氏菌屬于固氮菌。固氮菌能將大氣中的分子態氮氣轉化為作物能利用的氨，進而為其提供合成蛋白質所必需的氮素營養。固氮菌屬于嚴格好氧性，有機營養型；包括固氮菌屬、氮單孢菌屬、拜耶林克氏菌屬和德克斯氏菌屬。根據其與植物的生長關系，固氮菌可以分為共生固氮菌、聯合固氮菌和自生固氮菌。其中共生固氮菌的代表為根瘤菌，它們與豆科植物構成共生關系，侵入豆科植物的根部并在侵入部分形成根瘤；根瘤菌將空氣中游離態的氮固定并轉化為植物可以利用的氮，同時植物為固氮菌提供生長與繁殖的營養和環境。聯合固氮菌的代表為巴西固氮螺菌，它們可以侵入植物根部細胞，但并不致瘤。自生固氮菌的代表是圓褐固氮菌，這類菌不侵入植物細胞，與植物相互獨立，可將空氣中的氮固定并轉化為植物可利用的氮，并將之g集在土壤中。本領域常見的培養固氮菌的培養基配方為D_葡萄糖酸鈉5.0g，磷酸二氫鉀(KH2PO4) O. 4g，磷酸氫二鉀(K2HPO4·3Η20) O. Ig,硫酸鎂(MgSO4·7Η20) O. 2g，酵母膏 I. Og,氯化鈉O. lg，氯化鈣O. 02g，三氯化鐵(FeCl3*6H20)0. Olg，鑰酸鈉O. 002g，瓊脂18. 0g，蒸餾水IOOOmL0 調 ρΗ6· 8-7. 0，分裝后 121 °C 高壓滅菌 20min。所述枯草芽孢桿菌是一種可形成芽孢的好氧革蘭氏陽性菌，具有耐溫度變化、快速復活和較強分泌酶等特點，從而成為畜牧研究和生產中最常見的微生態制劑之一。枯草芽孢桿分泌的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短桿菌肽等活性物質菌對水產中的弧菌、大腸桿菌和桿狀病毒等有害細菌有很強的抑制作用，有效預防水產動物腸炎，爛鰓等疾病； 枯草芽孢桿菌分泌的幾丁質酶可以分解病原真菌的細胞壁而抑制真菌病害；枯草芽孢桿菌分泌的蛋白酶，脂肪酶，淀粉酶可以分解養殖池中的有毒有害物質，凈化水質；也可以分解池中殘餌、糞便、有機物等，具有很強的清理水中垃圾小顆粒的作用。此外，芽孢桿菌能直接利用溶解有機物作為碳源和氮源進行生長，當溶解有機氮被利用到一定程度或耗盡之后，氨氮即成為細菌生長繁殖的主要氮源，表現為水中氨氮被去除。綜上，枯草芽孢桿菌能夠凈化水質，優化養殖水體環境，保持養殖池內微生態平衡。本領域常見的培養枯草芽孢桿菌的培養基配方為蛋白胨10g，牛肉膏3. 0g，氯化鈉5. 0g，瓊脂18. 0g，蒸餾水IOOOmL0調pH7. 2-7. 5，分裝后121°C高壓滅菌20min。味精是利用谷氨酸細菌發酵作用生產的。每生產一噸味精就要產生15噸左右的味精廢液，且這些廢液為高濃度的有機廢液，包含氮，磷，氧化鉀，各種氨基酸等成分，屬于典型的難處理的高濃度有機廢水，嚴重影響了自然環境。所以如果能有效地利用味精廢液生產微生物肥水劑，不但可以減輕傳統污水處理的成本和壓力，還可以開辟味精廢液重新利用的新途徑。經測定，味精廢液中一般含水35-45%，有機質10-20%，氮5-9%，氨基酸4_7%，硫4-7%，微量元素1-2%，pH值約為3. 0-4. 0，本發明所述味精廢液取自齊魯味精廠。海藻營養成分十分豐富，富含特殊的碳水化合物，親糖蛋白，凝集活性免疫物質，酚類化合物，生長調節物質，多糖類，褐藻酸，氨基酸，脂肪酸，維他命B12，C及E，生物素及煙堿酸。同時海藻生長在海水里，每天吸收無機元素，其含有45種以上的礦質營養元素，以鈉，鉀，鐵，鈣，碘含量最多。作為最原始的生命形態，藻類生長速度快，結構簡單，適應能力強。整個藻體含有大量現代生物和陸地生物所缺乏的生物活性物質，營養物質及新材料成分，可充分的加以利用和開發。海藻液是從大型速生褐藻中提取的可溶物，是多種有效成分的混合物。海藻液中含有豐富的礦物質，氨基酸，維生素等營養成分及細胞分裂素，生長素，酚類等生長調節物質和抗生物質。本發明的上述技術方案相比現有技術具有以下優點
(I)本發明所述的海藻微生物肥水劑含有高含量復合菌(枯草芽孢桿菌含量大于3億/ml,光合菌、放線菌和固氮菌總含量大于I億/ml)，所述復合菌依靠相互間的協同作用，增殖形成一個復雜，結構穩定，功能廣泛的生物菌群，當這些有益復合菌被投入養殖水體后，能夠迅速復蘇，增殖形成優勢種群，有效抑制水中病原微生物的生長，增強魚蝦免疫力，降解水中氨氮，亞硝基，凈化水質；同時所述海藻微生物肥水劑所含有的蛋白質、氨基酸、碳水化合物、微量元素和各種生理活性物質為單細胞藻類的繁殖提供營養，培肥水體，這些藻類的光合作用，又為池內水產養殖動物的呼吸、有機物的分解提供氧氣，增加溶氧量；
(2 )本發明所述的海藻微生物肥水劑是利用味精廢液進行發酵得到的，
所述味精廢液中含水35-45%，有機質10-20%，氮5-9%，氨基酸4_7%，硫4_7%，微量元素1-2%，pH值為3. 0-4. O ;當所述味精廢液與本發明所述其他發酵原料混合到一起時，其pH呈微酸性，可以不經過任何處理直接進行發酵，簡單方便，能夠有效降低生產成本；不僅可以 實現味精廢水的資源化利用，有效降低了廢水處理費用，解決了廢水中有機物污染治理問題；同時借助于味精廢液中含有的氨基酸及多種礦物質為微生物提供碳源和氮源，保證產品中菌種的高濃度和高存活率，同時也為微生物生長提供必需的營養組分；
(3)本發明所述的方法采用先將光合菌、放線菌和固氮菌混合得到的生物菌液與海藻漿料混合發酵得到海藻生物菌液，然后取得到的所述海藻生物菌液和枯草芽孢桿菌劑再與味精廢液混合發酵的二次發酵方式；有利于各種有益營養成分的充分浸出，有利于各種微生物菌群間的協同作用及與其他有效成分的充分作用，達到更好的改善效果；
(4)本發明所述的海藻漿料富含海洋生物活性物質、氨基酸及多種微量元素，營養全面，無需添加額外的營養物質即可滿足各種微生物的生長之用；
(5)本發明所述的海藻漿料屬于工業廢產物，可以降低生產成本，也有利于這些工業廢產物的環保化處理。
具體實施例方式實施例I
本實施例所述的海藻微生物肥水劑是通過如下步驟制備得到的
SOI，將保存的沼澤紅假單胞菌、細黃鏈霉菌、圓褐固氮菌分別在33°C、30°C、29°C進行擴大培養，然后將所得的菌種按照2:2:1的重量份數進行混合得到生物菌液，備用；
所述沼澤紅假單胞菌培養基配方為酵母粉3. 0g，蛋白胨3. 0g，硫酸鎂(MgSO4WH2O)O. 5g，氯化鈣O. 3g，蒸餾水1000mL。調pH值6. 8-7. O,將配置好的培養基121°C高壓滅菌20mino所述細黃鏈霉菌培養基配方為可溶性淀粉2. Og,硝酸鉀0. Ig,磷酸氫二鉀0. 05g，氯化鈉 0. 05g，硫酸鎂(MgS04*7H20)0. 05g，硫酸亞鐵 0. 001g，瓊脂 2g，水 100ml。先把淀粉放在燒杯里，用5mL水調成糊狀后，倒入95mL水，攪勻后加入其他藥品，使它溶解。在燒杯外做好記號，加熱到煮沸時加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解后，補足失水。調整PH值到7. 2-7. 4，分裝后滅菌，備用。所述圓褐固氮菌培養基配方為D_葡萄糖酸鈉5. 0g，磷酸二氫鉀(KH2PO4) 0.4g，磷酸氫二鉀(Κ2ΗΡ04·3Η20) 0. Ig,硫酸鎂(MgSO4WH2O) 0. 2g，酵母膏 I. Og,氯化鈉 0. Ig,氯化鈣0. 02g,三氯化鐵(FeCl3*6H20) 0. Olg,鑰酸鈉0. 002g,瓊脂18. Og,蒸餾水IOOOmL0調pH6. 8-7.0，分裝后121°C高壓滅菌20min。
S02，取枯草芽孢桿菌菌種擴大培養，得到所需的枯草芽孢桿菌劑，備用；
所述枯草芽孢桿菌培養基配方為蛋白胨10g，牛肉膏3. 0g，氯化鈉5. 0g，瓊脂18. Og,蒸餾水IOOOmL0調ρΗ7· 2-7. 5，分裝后121 °C高壓滅菌20min。S03，取海藻廢渣液經浙水絞籠平板濾床得到固體海藻渣，然后對固體海藻渣進行高溫(100°c以上)殺菌、消毒、并浸泡48h、粉碎至80目、研磨成120目，輸送至制漿機制漿，得到所述海藻漿料，備用；
S04，取步驟SOl得到的生物菌液2份、步驟S02得到的枯草芽孢桿菌劑7份、海藻漿料25份、味精廢液35份、助劑6份(包括殼寡糖、殼聚糖、硫酸鋅、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、氧化硼，各助劑的比例可以任意添加)、蔗糖20份和水110份進行混合，控制28-35°C進行發酵7天，所述份數均為重量份數。S05，將所得的發酵液計量包裝制得海藻微生物肥水劑成品。 實施例2
本實施例所述的海藻微生物肥水劑是通過如下步驟制備得到的
S01，將保存的沼澤紅假單胞菌、細黃鏈霉菌、圓褐固氮菌分別進行擴大培養，然后將所得的菌種按照2:2:1的重量份數進行混合得到生物菌液，備用；
所述沼澤紅假單胞菌培養基配方為酵母粉3. 0g，蛋白胨3. 0g，硫酸鎂(MgSO4WH2O)0. 5g，氯化鈣0. 3g，蒸餾水1000mL。調pH值6. 8-7. O,將配置好的培養基121°C高壓滅菌20mino所述細黃鏈霉菌培養基配方為可溶性淀粉2. Og,硝酸鉀0. Ig,磷酸氫二鉀0. 05g，氯化鈉 0. 05g，硫酸鎂(MgS04*7H20)0. 05g，硫酸亞鐵 0. 001g，瓊脂 2g，水 100ml。先把淀粉放在燒杯里，用5mL水調成糊狀后，倒入95mL水，攪勻后加入其他藥品，使它溶解。在燒杯外做好記號，加熱到煮沸時加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解后，補足失水。調整PH值到7. 2-7. 4，分裝后滅菌，備用。所述圓褐固氮菌培養基配方為D_葡萄糖酸鈉5. 0g，磷酸二氫鉀(KH2PO4) 0.4g，磷酸氫二鉀(Κ2ΗΡ04·3Η20) 0. Ig,硫酸鎂(MgSO4WH2O) 0. 2g，酵母膏 I. Og,氯化鈉 0. Ig,氯化鈣0. 02g,三氯化鐵(FeCl3*6H20) 0. Olg,鑰酸鈉0. 002g,瓊脂18. Og,蒸餾水IOOOmL0調pH6. 8-7.0，分裝后121°C高壓滅菌20min。S02，取枯草芽孢桿菌菌種擴大培養，得到所需的枯草芽孢桿菌劑，備用；
所述枯草芽孢桿菌培養基配方為蛋白胨10g，牛肉膏3. 0g，氯化鈉5. 0g，瓊脂18. Og,蒸餾水IOOOmL0調ρΗ7· 2-7. 5，分裝后121 °C高壓滅菌20min。S03，取海藻廢渣液經浙水絞籠平板濾床得到固體海藻渣，然后對固體海藻渣進行高溫(100°c以上)殺菌、消毒、并浸泡48h、粉碎至80目、研磨成120目，輸送至制漿機制漿，得到所述海藻漿料，備用；
S04-1，取所述步驟SOI得到的生物菌液2份和所述步驟S03得到的海藻漿料25份混合并接入到含有3份助劑(包括殼寡糖、殼聚糖、硫酸鋅、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、氧化硼，各助劑的比例可以任意添加)、10份蔗糖和60份水的培養基中擴大培養，得到海藻生物菌液；
S04-2，取得到的海藻生物菌液5份、步驟S02得到的枯草芽孢桿菌劑7份、味精廢液35份、助劑3份(包括殼寡糖、殼聚糖、硫酸鋅、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、氧化硼，各助劑的比例可以任意添加)、蔗糖10份和水50份進行混合，溫度控制在28-35°C，發酵7天，所述份數均為重量份數。S05，將所得的發酵液計量包裝制得海藻微生物肥水劑成品。實施例3
本實施例所述的海藻微生物肥水劑是通過如下步驟制備得到的
S01，將保存的沼澤紅假單胞菌和黃褐紅螺菌、細黃鏈霉菌和弗蘭氏克菌、圓褐固氮菌和印度拜耶林克氏菌進行分別進行擴大培養，然后將所得的菌種按照2:4:1的重量份數進行混合得到生物菌液，備用；
所述沼澤紅假單胞菌和黃褐紅螺菌培養基配方為磷酸二氫鉀O. 5g、硫酸鎂O. 5g、95%的酒精3mL、酵母浸出汁2g、消毒海水1000mL。所述細黃鏈霉菌和弗蘭氏克菌培養基配方為可溶性淀粉2. 0g，硝酸鉀O. lg，磷酸氫二鉀O. 05g,氯化鈉O. 05g,硫酸鎂(MgSO4WH2O) O. 05g,硫酸亞鐵O. OOlg,瓊脂2g，水100ml。先把淀粉放在燒杯里，用5mL水調成糊狀后，倒入95mL水，攪勻后加入其他藥品，使它溶解。在燒杯外做好記號，加熱到煮沸時加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解后，補足失水。調整pH值到7. 2-7. 4，分裝后滅菌，備用。所述圓褐固氮菌和印度拜耶林克氏菌培養基配方為D_葡萄糖酸鈉5. 0g，磷酸二氫鉀(KH2PO4)O. 4g，磷酸氫二鉀(Κ2ΗΡ04·3Η20)0· lg，硫酸鎂(MgS04*7H20)0. 2g，酵母膏 I. 0g,氯化鈉O. lg，氯化鈣O. 02g，三氯化鐵(FeCl3*6H20)0. 01g，鑰酸鈉O. 002g，瓊脂18. 0g，蒸餾水 IOOOmL0 調 ρΗ6· 8-7. 0，分裝后 121 °C 高壓滅菌 20min。S02，取枯草芽孢桿菌菌種擴大培養，得到所需的枯草芽孢桿菌劑，備用；
所述枯草芽孢桿菌培養基配方為蛋白胨10g，牛肉膏3. 0g，氯化鈉5. 0g，瓊脂18. Og,蒸餾水IOOOmL0調ρΗ7· 2-7. 5，分裝后121 °C高壓滅菌20min。S03，取海藻廢渣液經浙水絞籠平板濾床得到固體海藻渣，然后對固體海藻渣進行高溫(100°c以上)殺菌、消毒、并浸泡48h、粉碎至80目、研磨成120目，輸送至制漿機制漿，得到所述海藻漿料，備用；
S04-1，取所述步驟SOl得到的生物菌液I份和所述步驟S03得到的海藻漿料30份混合并接入到含有2份助劑(包括殼寡糖、殼聚糖、硫酸鋅、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、氧化硼，各助劑的比例可以任意添加)、10份蔗糖和55份水的培養基中擴大培養，得到海藻生物菌液；
S04-2，取得到的海藻生物菌液8份、步驟S02得到的枯草芽孢桿菌劑10份、味精廢液20份、助劑5份(包括殼寡糖、殼聚糖、硫酸鋅、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、氧化硼，各助劑的比例可以任意添加)、蔗糖6份和水60份進行混合，控制28-35°C進行發酵7天，所述份數均
為重量份數。S05，將所得的發酵液計量包裝制得海藻微生物肥水劑成品。實施例4
本實施例所述的海藻微生物肥水劑是通過如下步驟得到的
S01，將保存的深紅紅螺菌、涇陽鏈霉菌、敏捷氮單胞菌分別在30°C進行擴大培養，然后將所得的菌種按照4:2:3的重量份數進行混合得到生物菌液，備用；
所述深紅紅螺菌培養基配方為磷酸二氫鉀0. 5g、硫酸鎂0. 5g、乙酸鈉3g、酵母浸出汁2g、消毒海水lOOOmL。所述涇陽鏈霉菌培養基配方為可溶性淀粉2. Og，硝酸鉀O. lg，磷酸氫二鉀O. 05g，氯化鈉 O. 05g，硫酸鎂(MgS04*7H20)0. 05g，硫酸亞鐵 O. OOlg，瓊脂 2g，水 100ml。先把淀粉放在燒杯里，用5mL水調成糊 狀后，倒入95mL水，攪勻后加入其他藥品，使它溶解。在燒杯外做好記號，加熱到煮沸時加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解后，補足失水。調整PH值到7. 2-7. 4，分裝后滅菌，備用。所述敏捷氮單胞菌培養基配方為D_葡萄糖酸鈉5. Og,磷酸二氫鉀(KH2PO4)O. 4g，磷酸氫二鉀(Κ2ΗΡ04·3Η20) 0. Ig,硫酸鎂(MgSO4WH2O) 0. 2g，酵母膏 I. Og,氯化鈉 0. Ig,氯化鈣0. 02g,三氯化鐵(FeCl3*6H20) 0. Olg,鑰酸鈉0. 002g,瓊脂18. Og,蒸餾水IOOOmL0調pH6. 8-7. 0，分裝后121 °C高壓滅菌20min。S02，取枯草芽孢桿菌菌種擴大培養，得到所需的枯草芽孢桿菌劑，備用；
所述枯草芽孢桿菌培養基配方為蛋白胨10g，牛肉膏3. 0g，氯化鈉5. 0g，瓊脂18. Og,蒸餾水IOOOmL0調ρΗ7· 2-7. 5，分裝后121 °C高壓滅菌20min。S03，取海藻廢渣液經浙水絞籠平板濾床得到固體海藻渣，然后對固體海藻渣進行高溫(100°c以上)殺菌、消毒、并浸泡48h、粉碎至80目、研磨成120目，輸送至制漿機制漿，得到所述海藻漿料，備用；
S04-1，取所述步驟SOl得到的生物菌液3份和所述步驟S03得到的海藻漿料20份混合并接入到含有4份助劑(包括殼寡糖、殼聚糖、硫酸鋅、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、氧化硼，各助劑的比例可以任意添加)、6份蔗糖和65份水的培養基中擴大培養，得到海藻生物菌液；
S04-2，取得到的海藻生物菌液10份、步驟S02得到的枯草芽孢桿菌劑5份、味精廢液40份、助劑3份(包括殼寡糖、殼聚糖、硫酸鋅、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、氧化硼，各助劑的比例可以任意添加)、蔗糖10份和水50份進行混合，控制28°C進行發酵6天，所述份數均為
重量份數。S05，將所得的發酵液計量包裝制得海藻微生物肥水劑成品。實施例5
本實施例所述的海藻微生物肥水劑是通過如下步驟制備得到的
S01，將保存的嗜硫紅假單胞菌、弗蘭氏克菌、印度拜耶林克氏菌分別進行擴大培養，然后將所得的菌種按照3:3:2的重量份數進行混合得到生物菌液，備用；
所述嗜硫紅假單胞菌培養基配方為磷酸二氫鉀0. 5g、硫酸鎂0. 5g、乙酸鈉3g、酵母浸出汁2g、消毒海水1000mL。所述弗蘭氏克菌培養基配方為可溶性淀粉2. Og,硝酸鉀0. Ig,磷酸氫二鉀0. 05g，氯化鈉 0. 05g，硫酸鎂(MgS04*7H20)0. 05g，硫酸亞鐵 0. 001g，瓊脂 2g，水 100ml。先把淀粉放在燒杯里，用5mL水調成糊狀后，倒入95mL水，攪勻后加入其他藥品，使它溶解。在燒杯外做好記號，加熱到煮沸時加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解后，補足失水。調整PH值到7. 2 7. 4，分裝后滅菌，備用。所述印度拜耶林克氏菌培養基配方為D_葡萄糖酸鈉5. 0g，磷酸二氫鉀(KH2PO4)0. 4g，磷酸氫二鉀(Κ2ΗΡ04·3Η20)0· lg，硫酸鎂(MgS04*7H20)0. 2g，酵母膏 I. 0g，氯化鈉 0. lg,氯化鈣0. 02g,三氯化鐵(FeCl3*6H20)0. Olg,鑰酸鈉0. 002g,瓊脂18. Og,蒸餾水IOOOmL0調pH6. 8-7. 0，分裝后121 °C高壓滅菌20min。S02，取枯草芽孢桿菌菌種擴大培養，得到所需的枯草芽孢桿菌劑，備用；
所述枯草芽孢桿菌培養基配方為蛋白胨10g，牛肉膏3. 0g，氯化鈉5. 0g，瓊脂18. Og,蒸餾水IOOOmL0調ρΗ7· 2-7. 5，分裝后121 °C高壓滅菌20min。S03，取海藻廢渣液經浙水絞籠平板濾床得到固體海藻渣，然后對固體海藻渣進行高溫(100°c以上)殺菌、消毒、并浸泡48h、粉碎至80目、研磨成120目，輸送至制漿機制漿，得到所述海藻漿料，備用；
S04-1，取所述步驟SOl得到的生物菌液I. 5份和所述步驟S03得到的海藻漿料23份混合并接入到含有2. 5份助劑(包括殼寡糖、殼聚糖、硫酸鋅、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、氧 化硼，各助劑的比例可以任意添加)、8份蔗糖和57份水的培養基中擴大培養，得到海藻生物菌液；
S04-2，取得到的海藻生物菌液6份、步驟S02得到的枯草芽孢桿菌劑6份、味精廢液25份、助劑3. 5份(包括殼寡糖、殼聚糖、硫酸鋅、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、氧化硼，各助劑的比例可以任意添加)、蔗糖7份和水53份進行混合，控制35°C進行發酵6天，所述份數均為
重量份數。S05，將所得的發酵液計量包裝制得海藻微生物肥水劑成品。實施例6
本實施例所述的海藻微生物肥水劑是通過如下步驟制備得到的
S01,將保存的沼澤紅假單胞菌、細黃鏈霉菌、圓褐固氮菌同時接種到適配的含有碳源、氮源、無機鹽和水的培養基中培養，在溫度不超過35°C的條件下培養，得到所需三種菌種的混合菌液，備用；
所述培養沼澤紅假單胞菌、細黃鏈霉菌、圓褐固氮菌的培養基配方為糖蜜10g，蛋白胨4g，氯化鈉(NaCl) 2. Og,硫酸亞鐵(FeSO4) O. 5g，硫酸鎂(MgSO4) O. 2g，生長因子溶液之一或它們的混合物10g，蒸餾水1000mL。調pH6. 8-7. 5，分裝后121°C高壓滅菌20min。S02，取枯草芽孢桿菌菌種在適宜其生長的培養基中擴大培養，得到所需的枯草芽孢桿菌劑，備用；
所述枯草芽孢桿菌培養基配方為蛋白胨10g，牛肉膏3. 0g，氯化鈉5. 0g，瓊脂18. Og,蒸餾水IOOOmL0調ρΗ7· 2-7. 5，分裝后121 °C高壓滅菌20min。S03，取海藻廢渣液經浙水絞籠平板濾床得到固體海藻渣，然后對固體海藻渣進行高溫(100°c以上)殺菌、消毒、并浸泡48h、粉碎至80目、研磨成120目，輸送至制漿機制漿，得到所述海藻漿料，備用；
S04-1，取所述步驟SOl得到的生物菌液2. 5份和所述步驟S03得到的海藻漿料27份混合并接入到含有3. 5份助劑(包括殼寡糖、殼聚糖、硫酸鋅、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、氧化硼，各助劑的比例可以任意添加)、7份蔗糖和63份水的培養基中擴大培養，得到海藻生物菌液；
S04-2，取得到的海藻生物菌液9份、步驟S02得到的枯草芽孢桿菌劑9份、味精廢液35份、助劑4. 5份(包括殼寡糖、殼聚糖、硫酸鋅、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、氧化硼，各助劑的比例可以任意添加)、蔗糖8份和水57份進行混合，控制30°C進行發酵8天，所述份數均為
重量份數。
S05，將所得的發酵液計量包裝制得海藻微生物肥水劑成品。將本發明實施例1-6所制備得到的微生物肥水劑用于南美白對蝦的養殖。選擇生態環境特征比較相近的蝦池進行試驗，蝦池水深I. 2米，面積為I畝，總共27個蝦池，將蝦池分為試驗組1-6，對照組2和對照組3，共三個重復，隨機排列；試驗前，各個蝦池內的水質均一致水體能見度為30-40厘米，溶氧量為4. 5mg/L,氨氮含量為O. 25mg/L,亞硝酸鹽含量為O. 08mg/L，pH值為8. 0，試驗過程中，開增氧機也一致。試驗組1_6分別對應施加實施例1-6所制備得到的海藻微生物肥水劑(下表中標注為試驗組1-1至試驗組1-6)，對照組2不施用任何肥料，對照組3施用化肥。海藻微生物肥水劑的施用量及施用方法為一畝I. 2米深的養蝦池施用I千克肥水劑，晴天無風時均勻潑灑入池。化肥的施用量及施用方法為所述化肥為碳酸氫銨和過磷酸鈣，碳酸氫銨和過磷酸鈣的用量共20千克，兩者的比例為3:1 ;把碳酸氫銨和過磷酸鈣溶于水，晴天無風時均勻 潑灑入池。所述碳酸氫銨由濟南世紀通達化工有限公司生產，氮含量17. 7% ;所述過磷酸鈣由石家莊市金鑫肥業有限公司生產，五氧化二磷> 12%。試驗后各組檢測性能，取其三個重復試驗的平均值，各組檢測性能如下表所示
權利要求
1.一種制備海藻微生物肥水劑的方法，其特征在于，包括如下步驟 S01，將保存的光合菌、放線菌、固氮菌擴大培養，得到所需的生物菌液，備用； S02，取枯草芽孢桿菌菌種在適宜其生長的培養基中擴大培養，得到所需的枯草芽孢桿菌劑，備用； S03，取提取過甘露醇和褐藻酸鈉后的海藻廢渣液制漿得到海藻漿料，備用； S04，取步驟SOl得到的生物菌液1-3份、步驟S02得到的枯草芽孢桿菌劑5_10份、步驟S03得到的海藻漿料20-30份、味精廢液20-40份、助劑5_9份、糖蜜12-20份和水105-125份混合并控制28-35°C進行發酵，所述份數均為重量份數； S05，將所得的發酵液計量包裝制得海藻微生物肥水劑成品。
2.根據權利要求I所述的制備海藻微生物肥水劑的方法，其特征在于，所述步驟S04包括 S04-1，取所述生物菌液1-3份和所述海藻漿料20-30份混合并接入到含有所述助劑2-4份、所述糖蜜6-10份和水55-65份的培養基中擴大培養，得到海藻生物菌液； S04-2，取所述海藻生物菌液、所述枯草芽孢桿菌劑5-10份、所述味精廢液20-40份、所述助劑3-5份、所述糖蜜6-10份和水50-60份進行混合并控制28_35°C進行發酵； 所述份數均為重量份數。
3.根據權利要求I或2所述的制備海藻微生物肥水劑的方法，其特征在于所述步驟SOl中，所述生物菌液是將所述光合菌、放線菌、固氮菌同時接種至適配的培養基中發酵得到的。
4.根據權利要求I或2所述的制備海藻微生物肥水劑的方法，其特征在于 所述步驟SOl中，所述生物菌液是將所述光合菌、放線菌、固氮菌分別接種至適配的培養基中擴大培養，并將各自所得的菌液按照重量份數比為2-4:2-4:1-3的比例混合得到的。
5.根據權利要求4所述的制備海藻微生物肥水劑的方法，其特征在于所述光合菌、放線菌、固氮菌菌液的重量份數比為2:2:1。
6.根據權利要求I或3-5任一所述的制備海藻微生物肥水劑的方法，其特征在于所述步驟S04中，所述生物菌液為2份、所述枯草芽孢桿菌劑為7份、所述海藻漿料為25份、所述味精廢液為35份、所述助劑為6份、所述糖蜜為20份、水為110份。
7.根據權利要求2-5任一所述的制備海藻微生物肥水劑的方法，其特征在于，所述步驟S04中 所述步驟S04-1中，所述生物菌液為2份、所述海藻漿料為25份所述助劑為3份、所述糖蜜為10份、水為60份； 所述步驟S04-2中，所述枯草芽孢桿菌劑為7份、所述味精廢液為35份、所述助劑為3份、所述糖蜜為10份、水為50份。
8.根據權利要求1-7任一所述的制備海藻微生物肥水劑的方法，其特征在于 所述步驟SOl中，所述光合菌包括沼澤紅假單胞菌、莢膜紅假單胞菌、球形紅假單胞菌、嗜硫紅假單胞菌、深紅紅螺菌或黃褐紅螺菌中一種或幾種的混合物；所述放線菌包括細黃鏈霉菌、涇陽鏈霉菌或弗蘭氏克菌中一種或幾種的混合物；所述固氮菌包括圓褐固氮菌、棕色自生固氮菌、敏捷氮單胞菌或印度拜耶林克氏菌中一種或幾種的混合物。
9.根據權利要求1-7任一所述的制備海藻微生物肥水劑的方法，其特征在于所述助劑包括殼寡糖、殼聚糖以及微量元素鋅、鐵、錳、銅的氧化物或鹽類中的一種或幾種的混合物。
10.根據權利要求1-9任一所述的方法得到的海藻微生物肥水劑。
全文摘要
本發明涉及一種海藻微生物肥水劑及其制備方法，屬于水產養殖等技術領域。本發明所述的海藻微生物肥水劑由味精廢液，海藻漿料和光合菌，放線菌，固氮菌和枯草芽孢桿菌復合，同時添加適量份數的殼聚糖，殼寡糖，微量元素及糖蜜發酵而成。所述海藻微生物肥水劑采用味精廢液發酵而成，原料制備簡單；含有高含量復合菌(枯草芽孢桿菌含量大于3億/mL,光合菌、放線菌和固氮菌總含量大于1億/mL)，肥效顯著；同時兼具凈化水體功能；應用范圍廣泛，適用于海水和淡水養殖。
文檔編號C05F11/08GK102924134SQ20121048430
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月26日 優先權日2012年11月26日
發明者戰培林, 桑俊玲, 李作梅, 遲玉鵬 申請人:日照益康有機農業科技發展有限公司