專利名稱：一種造血干細胞凍存的方法及保護劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種造血干細胞凍存的方法及保護劑，特別是涉及造血干細胞保護劑配方的組成成分、濃度、溫度及凍存的程序。
背景技術：
近年的研究已證實自體造血干細胞移植支持大劑量化療，可提高對化療敏感的腫瘤的療效；異體造血干細胞移植可以根治白血病等惡性造血系統疾病。造血干細胞的移植作為一種安全有效的方法，越來越被廣大醫務工作者及患者所接受，這與造血干細胞在體外的合理凍存與復蘇是分不開的。造血干細胞移植的成功與否，很重要的一點取決于造血干細胞的凍存以及快速復蘇和回輸。既往的經典凍存方法要求采用二甲基亞砜(DMSO) 10%, 羥乙基淀粉(HES) 6%和人血白蛋白(HSA) 4%作為造血干細胞保護劑，按一定比例配比后，放入程序降溫儀逐漸降溫，之后轉至_80°C深低溫冰箱，最后在_196°C液氮保存，這種條件下保存的干細胞持續時間長，可達到幾十年，造血干細胞凍存效果好，但存在著一些問題1.此種方法成本高，人血白蛋白價格高，供應有限；2.程控降溫的程序較復雜，需要程序降溫儀等高造價設備，需要在有規模的醫學中心并在有經驗的操作人員指導下才能完成，推廣困難；3.供儲存用的液氮罐空間較少，且需不斷補充液氮，操作繁瑣且隨著貯存時間的延長，貯存成本在逐漸增加。以上這些不利因素制約了造血干細胞移植在臨床的推廣。
發明內容
本技術方案旨在提供一種簡易的造血干細胞凍存的方法以及新的保護劑，能夠減低造血干細胞保護劑的成本，無需程序降溫儀等高造價設備，無需添加液氮的繁瑣、高風險程序，操作簡單，易于在各級醫療機構推廣。一種造血干細胞凍存的方法無菌條件下，將造血干細胞懸液或骨髓液與干細胞保護劑混合冷凍保存即可，所述的干細胞保護劑成分包括DMS0，1640無菌培養基和血液保存液I (ACD I )，三者體積比例9-10 5 :5-6。所述的干細胞保護劑體積占到造血干細胞懸液或骨髓液與干細胞保護劑的混合物的19-21%。具體操作如下先將干細胞保護劑的三種成分DMS0，1640無菌培養基和血液保存液I按比例預混完全，之后將預混好的干細胞保護劑直接加入裝有造血干細胞懸液或骨髓液的容器內，操作時要不斷搖動，充分混勻，之后分裝，排凈空氣，封口，泡沫盒封裝，放入_80°C冰箱保存即可。一種造血干細胞保護劑成分包括DMS0，1640無菌培養基和血液保存液I，三者體積比例9-10 5 :5-6。本技術方案的核心技術特征是用DMS0，1640無菌培養基和血細胞分離機使用的血液保存液I液作為干細胞保護劑，替代傳統的造血干細胞保護劑成分，無需使用程序降溫儀，因為我們給凍存袋外加了合適大小的泡沫盒，利用凍存袋本身的熱量及泡沫盒構建了一個簡易的程序降溫系統。這種方法可以使造血干細胞直接在_80°C深低溫冰箱保存而且在I年內不影響造血干細胞的質量。優點和有益效果1、此方法可有效保存造血干細胞，從檢測到的不同時間點(1、3、6、9、12個月)復蘇的干細胞回收效率來看，此方法凍存的干細胞的細胞活性、粒細胞巨噬細胞集落生成單位CFU-GM和⑶34+細胞回收率與經典方法相比無明顯差異(P>0. 05)，解凍后的干細胞數量與質量足以保障移植的成功；2、本方法操作簡便；3、本方法成本低，使用的儀器設備較簡單，易于掌握和推廣。
具體實施例方式以下結合具體實施方式
進一步說明本發明，而非限制本發明。將裝有血細胞分離機分離的造血干細胞懸液或手術抽取的骨髓液的無菌采血袋傳送到無菌操作間或超凈臺，選擇DMS0，1640無菌培養基和血細胞分離機使用的血液保存液I (ACD I)液作為干細胞保護劑，干細胞保護劑與造血干細胞懸液或手術抽取的骨髓液的混合液的最終比例分別是DMSO 9-10%, 1640無菌培養基5%，ACD I液5_6%，造血干細胞懸液或骨髓液79-81%，其中造血干細胞懸液或骨髓液無需去紅細胞處理。先將干細胞保護劑的三種成分DMS0，1640無菌培養基和A⑶I液在無菌瓶內按比例預混完全，操作時要不斷搖動無菌瓶，之后將預混好的干細胞保護劑直接加入裝有造血干細胞懸液或骨髓液的無菌采血袋內，邊加入邊搖晃采血袋，將4種成分在無菌采血袋內充分混勻，之后將混勻液分裝至醫用無菌造血干細胞凍存袋內，排凈空氣，封口，標簽注明采集時間、姓名、采集量，選與凍存袋大小相合適的泡沫盒作為凍存袋外包裝，泡沫盒封口，標簽注明采集時間、姓名、采集量。將泡沫盒直接放入_80°C冰箱保存即可。我們取10份不同個體的血細胞分離機采得的造血干細胞懸液，每份樣品分成2組，再分別分5袋凍存，采用本技術方案和經典的凍存方案在不同時間點進行抽樣檢測，數據取平均值，結果如下表一凍存過程中不同時間點細胞活力的檢測(％)
權利要求
1.一種造血干細胞凍存的方法，其特征在于，無菌條件下，將造血干細胞懸液或骨髓液與干細胞保護劑混合冷凍保存即可，所述的干細胞保護劑成分包括DMSO，1640無菌培養基和血液保存液I，三者體積比例9-10 5 :5-6 ；
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的干細胞保護劑體積占到造血干細胞懸液或骨髓液與干細胞保護劑的混合物的19-21%。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，先將干細胞保護劑的三種成分DMSO，1640無菌培養基和血液保存液I按比例預混完全，之后將預混好的干細胞保護劑直接加入裝有造血干細胞懸液或骨髓液的容器內，操作時要不斷搖動，充分混勻，之后分裝，排凈空氣，封口，泡沫盒封裝，放入-80°C冰箱保存即可。
4.一種造血干細胞保護劑，其特征在于，所述的干細胞保護劑成分包括DMS0，1640無菌培養基和血液保存液I，三者體積比例9-10 5 :5-6。
全文摘要
本發明公開了一種造血干細胞凍存的方法及保護劑，具體是在無菌條件下，將造血干細胞懸液或骨髓液與干細胞保護劑混合冷凍保存即可，所述的干細胞保護劑成分包括DMSO，1640無菌培養基和血液保存液Ⅰ，三者體積比例9-1055-6。該方法能夠減低造血干細胞保護劑的成本，無需程序降溫儀等高造價設備，無需添加液氮的繁瑣、高風險程序，操作簡單，易于在各級醫療機構推廣。
文檔編號A01N1/02GK103004751SQ20121055226
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月18日 優先權日2012年12月18日
發明者何暉, 劉昭前, 尹繼業, 周宏灝 申請人:中南大學