造血干細胞-80℃非程控降溫凍存方法及保護劑的制作方法
【專利摘要】本發明涉及造血干細胞-80℃非程控降溫凍存方法及保護劑，所述保護劑由5體積份試劑A和2體積份試劑B組成，試劑A為二甲基亞砜、羥乙基淀粉溶液，其中二甲基亞砜、羥乙基淀粉的質量百分比分別為10～20%、5.4～6%，試劑B為白蛋白溶液，白蛋白的質量百分比為20～40%。本發明所述保護劑的配方簡單，原料便宜；該保存方法能較簡便的在-80℃非程控降溫的條件下保存造血干細胞，保存的細胞存活率高于90%，利于臨床推廣及應用，用于臨床造血干細胞-80℃的低溫短期保存。
【專利說明】造血干細胞-80°C非程控降溫凍存方法及保護劑
【技術領域】
[0001]本發明屬于干細胞冷藏存儲領域，特別涉及一種造血干細胞-80°c非程控降溫凍存方法及保護劑。
【背景技術】
[0002]造血干細胞在臨床上應用廣泛，造血干細胞凍存是保證造血干細胞移植成功的關鍵技術之一，故其凍存方式尤為重要。目前臨床造血干細胞凍存有一 196°C液氮程控降溫保存和一 80°C非程控降溫保存，前者能長期保存且細胞損傷少，一般可保存23~25年，但操作復雜、設備昂貴，解凍后有細胞凝集現象，后者可保存干細胞I~2年，其操作相對簡便、費用低，但保存細胞時間及細胞活性受限。探索一種安全、簡便、快速、價廉及有效的干細胞凍存方法，對于臨床造血干細胞的儲存、應用及造血干細胞移植成功具有重要意義。
[0003]在造血干細胞的凍存中，使用的凍存劑及方法均非常重要。目前應用于一 80°C低溫保存干細胞的保護劑有二甲基亞砜(下稱DMS0)、CP-1、羥乙基淀粉、RPMI1640培養基、人血白蛋白等，不同的保護劑的配方及使用方法差異較大，對干細胞的保存效果與保存時間也存在差異，多數保存細胞的存活率為80%左右，干細胞安全難以保證，一些凍存方法還存在操作復雜缺點。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一種造血干細胞_80°C非程控降溫凍存方法及保護劑，所述保護劑的配方簡單，原料便宜；該保存方法能較簡便的在_80°C非程控降溫的條件下保存造血干細胞，保存的細胞存活率高于90%，為臨床外周血造血干細胞的儲存應用及造血干細胞移植提供可靠保證。
[0005]本發明的技術方案是:`造血干細胞-80°C非程控降溫凍存保護劑，所述保護劑由5體積份試劑A和2體積份試劑B組成，所述試劑A為二甲基亞砜和羥乙基淀粉溶液，其中二甲基亞砜、羥乙基淀粉的質量百分比分別為10~20%、5.4~6%，所述試劑B為白蛋白溶液，白蛋白的質量百分比為20~40%。
[0006]所述試劑A中二甲基亞砜質量百分比為10%、羥乙基淀粉的質量百分比為5.4%，試劑B中白蛋白的質量百分比為20%。
[0007]二甲基亞砜和羥乙基淀粉溶液的溶劑為生理鹽水或血漿。
[0008]二甲基亞砜為細胞凍存通透性保護劑，可降低冰點并延緩細胞冷凍過程，10%的二甲基亞砜保護劑在一 80°C低溫中能有效保存細胞。
[0009]造血干細胞_80°C非程控降溫的凍存方法，具體步驟為取上述試劑B與干細胞混勻，取干細胞+試劑B等體積的剛配好的上述的試劑A，混勻，置于-80°C凍存。
[0010]試劑B與干細胞的體積比為2:3。
[0011]試劑A的體積與試劑B和干細胞的總體積相同。
[0012]羥乙基淀粉是大分子非通透性細胞保護劑，可使細胞脫水，減少細胞內冰晶形成，對細胞膜具有保護作用。
[0013]白蛋白作保護劑在一 80°C條件下可以保護直接凍存的造血干細胞。
[0014]采用上述技術方案，二甲基亞砜、羥乙基淀粉及白蛋白聯合應用，可以有效地使干細胞凍存實現通透性保護作用，不僅降低冰點并延緩細胞冷凍過程，還增加干細胞的非通透性細胞保護作用，少細胞內冰晶形成，有效保護細胞膜，同時實現對干細胞的直接保護作用。
[0015]本發明中使用的DMSO為市售，羥乙基淀粉為醫療純級市售，氯化鈉溶液為市售，白蛋白溶液為市售，造血干細胞為臨床采集，可用于造血干細胞移植的外周血造血干細胞、骨髓造血干細胞和臍帶血造血干細胞。
[0016]采用簡便的方法對凍存細胞進行有效處理，在非程控降溫的前提下，使造血干細胞的凍存及復蘇過程有利于最大限度保存細胞活性，是一 80°C低溫保存干細胞成功的關鍵。本發明所述保護劑的配方簡單，原料便宜；所述保存方法操作簡單，在_80°C非程控降溫的條件下保存造血干細胞，其保存的細胞存活率高于90%，可用于臨床造血干細胞-80°C的低溫短期保存。
[0017]本發明所述體積份為毫升或升。
【具體實施方式】
[0018]一.本發明所述 造血干細胞_80°C非程控降溫凍存保護劑各試劑的用量，如表1所示:
[0019]表1
[0020]
【權利要求】
1.一種造血干細胞-80°C非程控降溫凍存保護劑，其特征在于:所述保護劑由5體積份試劑A和2體積份試劑B組成，所述試劑A為二甲基亞砜和羥乙基淀粉溶液，其中二甲基亞砜、羥乙基淀粉的質量百分比分別為10~20%、5.4~6%，所述試劑B為白蛋白溶液，白蛋白的質量百分比為20~40%。
2.根據權利要求1所述的造血干細胞_80°C非程控降溫凍存保護劑，其特征在于:所述試劑A中二甲基亞砜質量百分比為10%、羥乙基淀粉的質量百分比為5.4%，試劑B中白蛋白的質量百分比為20%。
3.根據權利要求1所述的造血干細胞_80°C非程控降溫凍存保護劑，其特征在于:二甲基亞砜和羥乙基淀粉溶液的溶劑為生理鹽水或血漿。
4.一種造血干細胞_80°C非程控降溫的凍存方法，其特征在于:取權利要求1或2所述的試劑B與干細胞混勻，取剛配好的權利要求1或2所述的試劑A，混勻，置于-80°C凍存。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于:試劑B與干細胞的體積比為2:3。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于:試劑A的體積與試劑B和干細胞的總體積相同。
【文檔編號】A01N1/02GK103548814SQ201310549445
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月7日 優先權日:2013年11月7日
【發明者】陳潔平, 黃其林 申請人:中國人民解放軍第三軍醫大學第一附屬醫院