專利名稱：一種鷹嘴豆組培快速繁殖方法
技術領域：
本發明屬于植物組織培養技術領域，尤其涉及一種鷹嘴豆組培快速繁殖方法。
背景技術：
鷹嘴豆(Cicer arietinum.L)是世界上栽培面積較大的食用豆類作物之一，主要分布于世界40多個國家。在我國，主要種植于新疆、甘肅等省區。鷹嘴豆是豆科，鷹嘴豆屬植物，起源于亞洲西部和近東地區，全球栽培面積超過千萬公頃，大多分布在印度、巴基斯坦和土耳其等干旱或半干旱地區，是世界第三大豆科作物。鷹嘴豆也是我國維吾爾族人民喜愛的一種副食品，在新疆已有2500年的歷史，種植面積在30萬畝左右。由于鷹嘴豆具有較高的營養價值、豐產耐旱、直立抗倒伏、較耐高溫和生物固氮等特點，上述優良性狀已引起鷹嘴豆商業生產者和研究者的重視。目前，國內對鷹嘴豆的研究還處于起步階段，且國內關于鷹嘴豆遺傳轉化體系的研究尚未見報道，同時我們具有地理和資源優勢，對鷹嘴豆有強大的市場需求，有條件開展對鷹嘴豆遺傳轉化體系的研究工作，并為今后的相關研究奠定基礎。這一研究對以后鷹嘴豆轉基因研究，遺傳育種的研究，離體組織培養等研究提供技術支持和理論依據；為鷹嘴豆經濟效益的提高和鷹嘴豆產量及品質的提高有一定的推動作用，對鷹嘴豆遺傳育種的推廣和發展有積極作用。
發明內容
本發明提供一種利用鷹嘴豆成熟種子萌發形成帶腋芽的小段為外植體快速繁殖鷹嘴豆的新方法，這一研究對今后鷹嘴豆轉基因，遺傳育種等研究提供技術支持和理論依據；為鷹嘴豆經濟效益的提高和鷹嘴豆產量及品質的提高有一定的推動作用。
本發明實施例是這樣實現的，一種鷹嘴豆組培快速繁殖方法，該方法按以下步驟進行:配制基本培養基及各階段培養基；選取大小均一皺粒鷹嘴豆種子進行消毒處理后萌發；待鷹嘴豆幼苗長至IOcm左右，切取帶腋芽的莖段于誘導培養基中培養；將初代幼芽接種于增殖培養基上，培養為繼代幼芽；將繼代幼芽接種到生根培養基中進行生根培養。進一步，組培培養基包括基本培養基及各階段培養基，組分與各組分在每升中所含重量為:I)基本培養基:MS 或 1/2MS 培養基，其中 Gelzan2g/L，MgCl2L 97g/LpH5.7-6.0 ；2)種子萌發培養基:1/2MS ；3)誘導培養基:MS+2，4-D0.5mg/L+6_BA3mg/L ；4)增殖培養基:MS+6-BA2mg/L+IBAlmg/L ；5)生根培養基:1/2MS (IOg 蔗糖)+6-BA2mg/L+IBAlmg/L。
進一步，鷹嘴豆種子消毒處理與萌發方法為:選取大小均一皺粒鷹嘴豆種子，I %次氯酸鈉溶液滅菌10分鐘，無菌水清洗5-6次，無菌水浸泡一晝夜，次日超凈工作臺中，0.1%升汞浸泡I分鐘，以無菌水沖洗并用無菌濾紙吸除表面水分后，接種于1/2MS培養基中，26±2°C，16/8光暗交替培養。進一步，誘導培養方法為:待鷹嘴豆幼苗長至IOcm左右，切取帶腋芽的莖段于誘導培養基中培養；26±2°C溫度下，16/8光暗交替培養,經20天左右培養至外植體誘導萌發出初代幼芽。進一步，增殖培養方法為:將初代幼芽接種于增殖培養基上，在同上條件下經15-20天培養至分化形成2-5倍、芽長3-5厘米的繼代幼芽。進一步，生根培養:將繼代幼芽接種到生根培養基中，在相同條件下經30-40天培養至幼苗基部長出8-15條毛細根系，再經20-30天培養至根長7-10厘米。本發明提供的利用鷹嘴豆成熟種子萌發形成帶腋芽的小段為外植體快速繁殖鷹嘴豆的新方法，這一研究對今后鷹嘴豆轉基因，遺傳育種等研究提供技術支持和理論依據；為鷹嘴豆經濟效益的提高和鷹嘴豆產量及品質的提高有一定的推動作用。
具體實施例方式為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。本發明提供了一種鷹嘴豆組培快速繁殖方法，該方法按以下步驟進行:(一 )組培培養基的配制:包括基本培養基及各階段培養基的組分與各組分在每升中所含重量為:I)基本培養基:MS 或 1/2MS 培養基，其中 Gelzan2g/L，MgCl2L 97g/LpH5.7-6.0 ；2)種子萌發培養基:1/2MS ；3)誘導培養基:MS+2，4-D0.5mg/L+6_BA3mg/L ；4)增殖培養基:MS+6-BA2mg/L+IBAlmg/L ；5)生根培養基:1/2MS (IOg 蔗糖)+6-BA2mg/L+IBAlmg/L ；( 二 )鷹嘴豆種子的滅菌與萌發:選取大小均一皺粒鷹嘴豆種子，I %次氯酸鈉溶液滅菌10分鐘，無菌水清洗5-6次，無菌水浸泡一晝夜，次日超凈工作臺中，0.1 %升汞浸泡I分鐘，以無菌水沖洗并用無菌濾紙吸除表面水分后，接種于1/2MS培養基中，26±2°C，16/8光暗交替培養；(三)誘導培養:待鷹嘴豆幼苗長至IOcm左右，切取帶腋芽的莖段于誘導培養基中培養。26±2°C溫度下，16/8光暗交替培養，經20天左右培養至外植體誘導萌發出初代幼芽；(四)增殖培養:將初代幼芽接種于增殖培養基上，在同上條件下經15-20天培養至分化形成2-5倍、芽長3-5厘米的繼代幼芽；(五)生根培養:將繼代幼芽接種到 生根培養基中，在相同條件下經30-40天培養至幼苗基部長出8-15條毛細根系，再經20-30天培養至根長7-10厘米；以下結合具體實施例對本發明作進一步的說明。
[實例一]鷹嘴豆種子萌發與外植體制備(一)為了比較不同培養基對鷹嘴豆種子萌發效果的影響，制備了 MS、l/2MS、BjP 1/2B5培養基。選取大小均一皺粒鷹嘴豆種子，I %次氯酸鈉溶液滅菌10分鐘，無菌水清洗5-6次，無菌水浸泡一晝夜，次日超凈工作臺中，0.1%升汞浸泡I分鐘，以無菌水沖洗并用無菌濾紙吸除表面水分后，接種于以上各培養基中，26±2°C, 16/8光暗交替培養,篩選最適培養基。[實例二]鷹嘴豆種子萌發與外植體制備(二 )濃硫酸處理15分鐘，流水沖洗30分鐘，75%酒精清洗I分鐘，無菌水清洗5_6次，無菌水浸泡一晝夜，次日超凈工作臺中，0.1 %升汞浸泡I分鐘，接種于MS、1/2MS、BJP 1/2B5培養基中。[實例三]誘導培養基的篩選將帶腋芽的莖段分別接種于以下培養基上，篩選最適于誘導鷹嘴豆出芽培養基。
權利要求
1.一種鷹嘴豆組培快速繁殖方法，其特征在于，該方法按以下步驟進行: 配制基本培養基及各階段培養基； 選取大小均一皺粒鷹嘴豆種子進行消毒處理后萌發； 待鷹嘴豆幼苗長至IOcm左右，切取帶腋芽的莖段于誘導培養基中培養； 將初代幼芽接種于增殖培養基上，培養為繼代幼芽； 將繼代幼芽接種到生根培養基中進行生根培養。
2.如權利要求1所述的鷹嘴豆組培快速繁殖方法，其特征在于，組培培養基包括基本培養基及各階段培養基，組分與各組分在每升中所含重量為: 1)基本培養基:MS或 1/2MS 培養基，其中 Gelzan2g/L, MgCl2L 97g/LpH5.7-6.0 ； 2)種子萌發培養基:1/2MS； 3)誘導培養基:MS+2，4-D0.5mg/L+6-BA3mg/L ； 4)增殖培養基:MS+6-BA2mg/L+IBAlmg/L； 5)生根培養基:l/2MS(10g蔗糖)+6-BA2mg/L+IBAlmg/L。
3.如權利要求1所述的鷹嘴豆組培快速繁殖方法，其特征在于，鷹嘴豆種子的滅菌與萌發方法為: 選取大小均一皺粒鷹嘴豆 種子，1%次氯酸鈉溶液滅菌10分鐘，無菌水清洗5-6次，無菌水浸泡一晝夜，次日超凈工作臺中，0.1%升汞浸泡I分鐘，以無菌水沖洗并用無菌濾紙吸除表面水分后，接種于1/2MS培養基中，26±2°C，16/8光暗交替培養。
4.如權利要求1所述的鷹嘴豆組培快速繁殖方法，其特征在于，誘導培養方法為: 待鷹嘴豆幼苗長至IOcm左右，切取帶腋芽的莖段于誘導培養基中培養；26±2°C溫度下，16/8光暗交替培養，經20天左右培養至外植體誘導萌發出初代幼芽。
5.如權利要求1所述的鷹嘴豆組培快速繁殖方法，其特征在于，增殖培養方法為: 將初代幼芽接種于增殖培養基上，在同上條件下經15-20天培養至分化形成2-5倍、芽長3-5厘米的繼代幼芽。
6.如權利要求1所述的鷹嘴豆組培快速繁殖方法，其特征在于，生根培養: 將繼代幼芽接種到生根培養基中，在相同條件下經30-40天培養至幼苗基部長出8-15條毛細根系，再經20-30天培養至根長7-10厘米。
全文摘要
本發明公開了一種鷹嘴豆組培快速繁殖方法，首先配制基本培養基及各階段培養基；選取大小均一皺粒鷹嘴豆種子進行消毒處理后萌發；待鷹嘴豆幼苗長至10cm左右，切取帶腋芽的莖段于誘導培養基中培養；將初代幼芽接種于增殖培養基上，培養為繼代幼芽；將繼代幼芽接種到生根培養基中進行生根培養。本發明提供的利用鷹嘴豆成熟種子萌發形成帶腋芽的小段為外植體快速繁殖鷹嘴豆的新方法，這一研究對今后鷹嘴豆轉基因，遺傳育種等研究提供技術支持和理論依據；為鷹嘴豆經濟效益的提高和鷹嘴豆產量及品質的提高有一定的推動作用。
文檔編號A01H4/00GK103168684SQ201210596360
公開日2013年6月26日 申請日期2012年12月18日 優先權日2012年12月18日
發明者張樺, 高新, 蘇豫梅, 任燕萍, 付國勇 申請人:新疆農業大學