專利名稱：松針提取物用于抗植物病原菌的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物農藥技術領域，具體來說是涉及松針提取物用于抗植物病原菌及采用松針提取物的抗植物病原菌的生物農藥。
背景技術：
目前，農業生產中使用的農藥主要是化學農藥，雖然能殺死農作物上的有害病原菌，但施用過后的殘留物對人體依舊有極大的傷害，施用過化學農藥的農產品也常因農藥殘留成分過高而被國內外銷售市場拒絕，造成很大一部分的農產品滯銷。此外，部分化學農藥常帶有劇毒，時常會造成人、畜農藥中毒事故。因此，農民迫切希望尋求一種防治植物病菌效果好，對人畜無害，且價格便宜的農藥，以提高農產品的安全性和環保性，并能降低生產成本。植物源農藥具有在環境中生物降解快、對人畜及對非靶標生物毒性低、有害生物不易產生抗性、成本低、易得等特點，符合現代農業環保、健康、持續發展的時代要求，具有極高的開發價值，越來越受到重視。目前已有大量研究者在進行生物農藥的研發，聞雙婷開發出一種中草藥制成的生物農藥，主要用于農作物害蟲的防治；程國金等開發出一種以桑葉為來源的生物農藥，主要用于滅殺菜青蟲、蝗蟲等害蟲；洪偉等研發出一種以雷公藤為原料的生物農藥，能夠防治農作物害蟲。雖然我國在生物農藥的研發上已取得一定的成果，但對植物源農藥的開發依舊處于初級階段，廣泛尋求理想的植物源農藥仍然刻不容緩。隨著對植物源生 物農藥的不斷研究與開發，為松針的利用提供了新的思路。松針資源豐富，來源廣泛、再生速度快、可一年四季采收。其成分主要有黃酮、有機酸、揮發油等，具有一定的抗菌活性，可以考慮開發松針源生物農藥。目前我國對針松抗菌活性成分的提取和應用尚處于起步階段，對松針在抗菌活性方面的研究還處在基礎階段，提取松針內的有效抑菌成分并用于生產實踐依然有一段較長的路要走。如中國發明專利(申請號:200810162531.5申請日:2008-12-01)公開了濕地松松針提取物用于食品抗菌保鮮。得到的濕地松松針提取物對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、霉菌有較強的抑制作用，并具有較強的抗氧化功能，該保鮮劑對熱具有良好的穩定性，具有較寬的PH使用范圍，用水將松針提取物溶解成不同濃度溶液，用于不同食品保鮮，保鮮效果明顯。雖然已知松針含有抗菌活性物質，對大腸桿菌、枯草芽抱桿菌、黑曲霉、黃曲霉等幾種常見的食品腐敗菌有廣泛的抑制作用，但對抗植物病害菌活性的研究依舊缺乏，沒有其對植物病害菌的殺菌譜。因此，利用松針提取物對植物病原菌進行更加深入的研究，研發出新型的抗植物病原菌制劑，為豐富植物源的生防制劑品種，綜合開發利用松針提供重要的理論依據。
發明內容
為了解決上述的技術問題，本發明的第一個目的是提供松針提取物用于抗植物病原菌的方法，該方法具有方法簡便、實用，成本低效果好，對環境污染小且農藥本身易降解的特點。本發明的第二個目的是提供抗植物病原菌的生物農藥，該生物農藥中包括了松針提取物。為了實現上述的第一個目的，本發明采用了以下的技術方案:松針提取物用于抗植物病原菌的方法。作為優選，所述的植物病原菌為苦瓜枯萎病菌、煙草赤星病菌、番茄早疫病菌、小麥赤霉病菌或蘋果腐霉病菌。作為優選，上述的松針提取物采用以下的方法步驟制備得到:I)收集松針，除雜洗凈，烘至恒重，粉碎為粉末；2)在松針粉末中按體積比1:10 20加入乙醇溶液后水浴，水浴溫度為60_90°C，回流提取得到濾液；3)將步驟2)得到的濾液旋轉蒸發為膏狀物提取物；4)真空干燥至恒重，取出研磨得到提取物粉末。作為優選，上述的步驟I)中松針粉末是30 100目。作為優選，上述的步驟2)中的乙醇體積百分比濃度為40-70%，提取次數為2 4次，每次提取時間I 2小時。為了實現上述的第二個目的，本發明采用了以下的技術方案:抗植物病原菌的生物農藥，該生物農藥中包括松針提取物。作為優選，所述的植物病原菌為苦瓜枯萎病菌、煙草赤星病菌、番茄早疫病菌、小麥赤霉病菌或蘋果腐霉病菌。作為優選，上述的松針提取物采用以下的方法步驟制備得到:I)收集松針，除雜洗凈，烘至恒重，粉碎為粉末；2)在松針粉末中按體積比1:10 20加入乙醇溶液后水浴，水浴溫度為60_90°C，回流提取得到濾液；3)將步驟2)得到的濾液旋轉蒸發為膏狀物提取物；4)真空干燥至恒重，取出研磨得到提取物粉末。作為優選，上述的步驟I)中松針粉末是30 100目。作為優選，上述的步驟2)中的乙醇體積百分比濃度為40-70%，提取次數為2 4次，每次提取時間I 2小時。本發明的技術方案具有以下優點，原料來源豐富、易得。方法工藝簡單，生產成本低，無任何毒害污染；該松針源生物農藥為干粉狀態，易于保存，可成功防治苦瓜枯萎病原菌、煙草赤星病原菌、小麥赤霉病原菌、番茄早疫病原菌等植物病原菌，是新一代的植物源無公害的生物農藥。
圖1是實施例1制備的松針源農藥對苦瓜枯萎病菌的抑制效果圖，左為加藥，右為對照。 圖2是實施例1制備的松針源農藥對煙草赤星病菌的抑制效果圖，左為加藥，右為對照。
圖3是實施例1制備的松針源農藥對番茄早疫病菌的抑制效果圖，左為加藥，右為對照。圖4是實施例1制備的松針源農藥對小麥赤霉病菌的抑制效果圖，左為加藥，右為對照。
具體實施例方式下面對本發明的具體實施方式
做一個詳細的說明。實施例1松針源生物農藥的制備過程，將采集來的松針除雜洗凈，于50°C電熱恒溫烘箱內烘干，粉碎至40目，得到的粉末常溫保存備用。稱取一定量松針粉末，加入15倍體積的40-70%乙醇溶液，60-90°C水浴回流提取lh，之后用循環式真空泵進行抽濾，收集濾液，再向濾渣中加15倍體積40-70%乙醇溶液，進行第二次提取，水浴回流提取Ih后抽濾，收集濾液，按照同樣的方法提取3次，之后合并濾液，用旋轉蒸發儀將溶液蒸發掉得到膏狀物，放入真空干燥箱中50°C烘至恒重，取出研磨得到提取物粉末，該粉末即為松針源生物農藥，常溫保存即可。實施例2對植物病原菌抗性測定，利用生產速率法對(I)中制得的松針源生物農藥進行植物病原菌生物抗性測定，具體操作如下:取(I)中制得的松針源生物農藥用水配成20-100mg/ml藥液；加藥培養基的制備:取配制的藥液0.5ml于滅菌的IOml試管中，加入9.5ml50°C左右的PDA培養基,搖勻,倒入滅菌培養皿中即成。菌種培養:選取處于同一生長勢的菌落圈，用無菌小鏟鏟取打孔器制得菌餅，并挖出孔內培養基，倒置于上述加藥培養基的平皿上，每皿三個。28°C恒溫倒置培養43h。用十字交叉法量取菌落圈直徑，取其平均值作為實驗結果，計算抑制率。 菌落圈直徑越小則抗菌活性越強。以清水代替藥液作為對照。
抑制率e%) =對照菌，=賴徑χ_
對照_落直徑不同提取條件下所得松針源農藥對植物病原菌抑制效果的比較不同提取溶劑對6種植物病原真菌菌絲生長的抑制作用比較
權利要求
1.松針提取物用于抗植物病原菌的方法。
2.根據權利要求1所述的松針提取物用于抗植物病原菌的方法，其特征在于:所述的植物病原菌為苦瓜枯萎病菌、煙草赤星病菌、番茄早疫病菌、小麥赤霉病菌或蘋果腐霉病菌。
3.根據權利要求1或2所述的松針提取物用于抗植物病原菌的方法，其特征在于松針提取物采用以下的方法步驟制備得到: O收集松針，除雜洗凈，烘至恒重，粉碎為粉末； 2)在松針粉末中按體積比1:10 20加入乙醇溶液后水浴，水浴溫度為60-90°C，回流提取得到濾液； 3)將步驟2)得到的濾液旋轉蒸發為膏狀物提取物； 4)真空干燥至恒重，取出研磨得到提取物粉末。
4.根據權利要求3所述的松針提取物用于抗植物病原菌的方法，其特征在于步驟I)中松針粉末是30 100目。
5.根據權利要求3所述 的松針提取物用于抗植物病原菌的方法，其特征在于步驟2)中的乙醇體積百分比濃度為40-70%，提取次數為2 4次，每次提取時間I 2小時。
6.抗植物病原菌的生物農藥，其特征在于:該生物農藥中包括松針提取物。
7.根據權利要求6所述的抗植物病原菌的生物農藥，其特征在于:所述的植物病原菌為苦瓜枯萎病菌、煙草赤星病菌、番茄早疫病菌、小麥赤霉病菌或蘋果腐霉病菌。
8.根據權利要求6或7所述的抗植物病原菌的生物農藥，其特征在于松針提取物采用以下的方法步驟制備得到: O收集松針，除雜洗凈，烘至恒重，粉碎為粉末； 2)在松針粉末中按體積比1:10 20加入乙醇溶液后水浴，水浴溫度為60-90°C，回流提取得到濾液； 3)將步驟2)得到的濾液旋轉蒸發為膏狀物提取物； 4)真空干燥至恒重，取出研磨得到提取物粉末。
9.根據權利要求8所述的抗植物病原菌的生物農藥，其特征在于步驟I)中松針粉末是30 100目。
10.根據權利要求8所述的抗植物病原菌的生物農藥，其特征在于步驟2)中的乙醇體積百分比濃度為40-70%，提取次數為2 4次，每次提取時間I 2小時。
全文摘要
本發明屬于生物農藥技術領域，具體來說是涉及松針提取物用于抗植物病原菌及采用松針提取物的抗植物病原菌的生物農藥。松針提取物用于抗植物病原菌的方法。本發明原料來源豐富、易得。方法工藝簡單，生產成本低，無任何毒害污染；該松針源生物農藥為干粉狀態，易于保存，可成功防治苦瓜枯萎病原菌、煙草赤星病原菌、小麥赤霉病原菌、番茄早疫病原菌等植物病原菌，是新一代的植物源無公害的生物農藥。
文檔編號A01P3/00GK103141522SQ20131008243
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月15日 優先權日2013年3月15日
發明者徐麗珊, 沈佳鑫, 吳文珊, 馬瑞 申請人:浙江師范大學