一株多粘類芽孢桿菌及其應用
【專利摘要】本發明涉及植物病害的生物防治，屬于植物保護學科中的生物防治研究與應用領域。本發明公開了一株拮抗多種植物病原真菌的多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)JY1?5，菌株保藏的編號為CGMCC No.12410。該菌株能有效抑制蔬菜灰霉病菌，防治番茄灰霉病的效果明顯優于常規化學藥劑速克靈，比速克靈的防效提高57.3％，并具有防治多種植物病害的潛力。增加生物藥劑、減少化學藥劑使用有利于環境保護、減少農藥殘留、農業可持續發展。CGMCC No.1241020160428
【專利說明】
一株多粘類芽孢桿菌及其應用
技術領域
[0001]本發明涉及植物病害的生物防治，屬于植物保護學科中的生物防治研究與應用領域。
【背景技術】
[0002]植物病害是制約植物安全生長的主要障礙之一，目前防治方法主要是噴施化學藥劑。蔬菜作物生長期短，頻繁使用化學藥劑存在農藥殘留的風險，研制和使用生物農藥能減少化學藥劑的使用量。對植物病原菌具有拮抗作用的微生物是研制生物農藥的主要來源，這類微生物種類繁多、分布廣泛，即使同一種微生物由于分布于不同地區，其拮抗作用強弱或機制也有一定差異。挖掘生防微生物資源，首先是用目標病菌廣泛篩選拮抗菌，這是生物防治研究領域的基礎工作。
[0003]對拮抗菌的基礎研究包括拮抗性強弱、抑菌譜寬度、拮抗性能的穩定性、拮抗機理、抗菌物質種類與代謝等。研制生物農藥包括拮抗菌的發酵條件優化、助劑使用、劑型研制等。生物農藥田間應用包括防治病害的最適時間、防治方法、使用劑量與次數等。所有這些都必須建立在獲得拮抗性能較好的生防微生物菌株的基礎上。
[0004]本發明中從土壤中篩選獲得多粘類芽孢桿菌JY1-5菌株，經前期初步研究，JY1-5具有較好的拮抗植物病原真菌的性能。對其進一步研究，具有研發新型生物農藥的可能。
【發明內容】
[0005]針對防治蔬菜病害化學藥劑使用量大、次數多、容易引起農藥殘留問題，應該減少化學藥劑使用，增加生物防治措施。
[0006]本發明公開了一種多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)JYl_5，其菌株保藏編號為CGMCC N0.12410。
[0007]多粘類芽孢桿菌(PaenibaciIIuspolymyxa)JY1-5可作為措抗多種植物病原真菌的生防細菌。
[0008]本發明還公開了多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)JTl_5在防治蔬菜灰霉病中的應用。
[0009]JY1-5菌株是以番茄灰霉病菌為目標真菌，從土壤中篩選得到。經分子生物學方法鑒定為多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa) JY1-5能有效抑制蔬菜灰霉病菌(Botrytis c inerea )生長，對其它病菌如黃瓜枯萎病菌(Fusar i um oxy sporumf.sp.cucumerinum)、桃褐腐病菌(Moni I ia fructicola)、水稻稻痕病菌(Pyricu I ariaoryzae)等也有較好的措抗作用。轉移十代后測定，其措抗性能穩定。田間防治番前灰霉病試驗顯示，該菌株的發酵產物對番茄灰霉病有較好的防治作用，防效明顯優于化學藥劑速克靈，防治效果比速克靈提高了53.7%。
【附圖說明】
[0010]圖1為多粘類芽孢桿菌JY1-5對多種植物病原真菌的拮抗效果。圖中第一行從左到右依次是水稻稻瘟病菌、水稻紋枯病菌、黃瓜枯萎病菌；第二行從左到右依次是桃褐腐病菌、辣椒疫霉和番茄灰霉病菌。
[0011]圖2為JY1-5培養十代后抑菌能力測定。
[0012]圖3為JY1-5基于16SrDNA的系統發育進化樹。
[0013]本發明所述JY1-5菌株于2016年4月28日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，(北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所)，分類命名為多粘類芽抱桿菌(Paenibacillus polymyxa)，保藏編號為CGMCC N0.12410。
【具體實施方式】
[0014]實施例1:菌株分離與鑒定
[00?5]菌株分離與措抗性測定:(I)分別取不同地區土樣Ig，加水制成一定濃度的土壤懸浮液，再進行梯度稀釋13?15倍，取10ul稀釋液涂板，置28度培養箱中培養481!。(2)挑取單菌落保存。(2)以灰霉病菌為目標真菌，用對峙培養法測定分離菌株的拮抗性，25度培養4-5天，測定拮抗圈大小。(3)對拮抗效果較好的菌株，同樣方法測定其拮抗譜。(4)將拮抗作用較強的菌株在牛肉膏蛋白胨培養液中繼代培養十代后，通過對峙培養檢測菌株拮抗作用的穩定性。
[0016]篩選出的菌株命名為JY1-5。圖1培養皿中部為各種病原真菌菌落，左右兩孔滴加了JY1-5菌液，在其周圍形成了明顯的空白圈即抑菌圈，說明JY1-5菌株發酵過程中能產生抑制物質使周圍的病菌不能生長。jn-5繼代培養十代后仍保持較強的抑菌活性(圖2)。
[0017]菌株種類鑒定:(I )CTAB法提取細菌基因組，用Nanodrop測定基因組濃度和純度。
(2)以提取的基因組為模板，用16S rDNA通用引物進行PCR擴增，對擴增產物測序。(3)將測得的序列在GenBank中比對分析，利用Mega軟件構建系統發育進化樹，明確JY1-5為多粘類芽抱桿菌(PaenibaciIIus polymyxa)(圖3)。
[0018]實施例2:田間試驗
[0019](I)將試驗菌株JY1-5用牛肉膏蛋白胨培養液震蕩培養5?7天，獲得細菌懸浮液。
[0020](2)選擇果實已發病的番茄生長田塊，除去所有病果，噴施菌液于果實表面，以防治番茄灰霉病常用藥劑速克靈(河北滄州中天化工有限責任公司)為化學藥劑對照，噴清水為未防治對照，每7天噴施一次。每小區4m2，重復三次。
[0021]對番茄灰霉病防病實驗中，對照的病情指數為36.57%，速克靈為30.09%，JYl-5為23.61%;對照的發病率為37.56%，速克靈為33.43%，JYl-5為23.61%。其中速克靈對灰霉病的防效為17.73% JY1-5的防效為40.59%，可見JY1-5的防病效果明顯高于速克靈。
【主權項】
1.一株多粘類芽孢桿菌(Paenibaci I Ius po lymyxa) JY1-5，其保藏編號為CGMCCN0.12410。2.權利要求1所述多粘類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyxa)JY1-5作為措抗多種植物病原真菌的生防細菌的應用。3.權利要求1所述多粘類芽孢桿菌(Paenibacilluspolymyxa)JY1-5在防治蔬菜灰霉病中的應用。
【文檔編號】A01N63/00GK106085905SQ201610422377
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月13日 公開號201610422377.5, CN 106085905 A, CN 106085905A, CN 201610422377, CN-A-106085905, CN106085905 A, CN106085905A, CN201610422377, CN201610422377.5
【發明人】張清霞, 童蘊慧, 何玲玲, 陳夕軍
【申請人】揚州大學