專利名稱：灰楊組培體系的建立方法
技術領域：
本發明屬于生物領域，具體涉及一種灰楊組培體系的建立方法。
背景技術：
灰楊(PopulusXcanescens= Populus tremulaXP.alba)為楊柳科(Salicales)楊屬(Populus)植物，是荒漠河岸林的主要組成樹種。在自然條件下，前人主要通過灰楊種子和根蘗繁殖來擴大種群范圍的研究報道，但迄今為止，尚未見到有關灰楊遺傳轉化再生體系的研究文獻。
發明內容
本發明的目的在于提供一種灰楊組培體系的建立方法，為了實現本發明的目的，擬采用如下技術方案:本發明一方面涉及灰楊組培體系的建立方法，其特征在于包括如下步驟:(I)選取健壯灰楊植株，將灰楊的葉片垂直于主脈剪傷，接種于包含或組成為MS+Kinetin0.08-0.12mg/L+NAA0.2-0.4mg/L+2,4-D0.4-0.6mg/L 的培養基，暗室培養，每16-24天繼代一次；(2)取約疏松、生長旺盛的愈傷組織，轉入液體培養基，所述培養基為步驟(I)的培養基基礎上加入25-35g/L的蔗糖，在20-30°C條件下避光振蕩培養，轉速為100_200r/min;繼代培養前，將懸浮液用150-250目鋼網過濾，除去大量損傷細胞的殘存碎片，再轉入新鮮培養基，繼續懸浮培養，繼代3 4從而建立體系；(3)從繼代培養的組培苗中選取健壯、生長整齊的組培苗，剪成1.5-2.5cm左右的莖尖莖段，植入生根培養基中，所述生根培養基為包含或組成為l/2MS+AgN033-5mg/L+NAA0.04-0.06mg/L 的培養基；(4)選擇生長旺盛、根系發達的健壯組培苗，將瓶口的包扎物逐漸打開，使組培苗逐步適應外界環境，由開小口到完全敞開約需6-10天，在開瓶口后加入少量的水，使用玻璃罩扣住在陽光下馴化6-8天后移栽到花盆，移栽前把附著于幼苗根部的培養基沖洗干凈，任選地，使用一定濃度的多菌靈溶液泡洗；移栽到花盆后仍然用玻璃罩扣養，逐步揭開玻璃罩，直到苗木在花盆中發芽生長再移入大田；灰楊組培苗移栽時，幼苗期空氣相對濕度控制在80%以上，溫度為18 25°C，以及適宜的光照強度。在本發明的一個優選實施方式中，所述的步驟(I)的培養基為MS+Kinetin0.1mg/L+NAA0.3mg/L+2,4-D0.5mg/L。在本發明的另一個優選實施方式中，所述的步驟(2)的培養基為l/2MS+AgN034mg/L+NAA0.05mg/L。本發明的方法達到了無性 系建立、快速繁殖、工廠化育苗的目的，不僅為灰楊的工廠化繁殖和未來轉基因研究提供了技術基礎，且證明灰楊的非分生組織細胞也具有全能性。
具體實施例方式實施例1:(I)選取健壯灰楊植株,將灰楊的葉片垂直于主脈剪傷,接種于多種脫分化培養基上，摸索最優良的配方(見表I)，暗室培養，每20天繼代一次。表I灰楊愈傷組織誘導所用培養基(mg/L)
權利要求
1.灰楊組培體系的建立方法，其特征在于包括如下步驟: (1)選取健壯灰楊植株，將灰楊的葉片垂直于主脈剪傷，接種于包含或組成為MS+Kinetin0.08-0.12mg/L+NAA0.2-0.4mg/L+2,4-D0.4-0.6mg/L 的培養基，暗室培養，每16-24天繼代一次； (2)取疏松、生長旺盛的愈傷組織，轉入液體培養基，所述培養基為步驟(I)的培養基基礎上加入25-35g/L的蔗糖，在20-30°C條件下避光振蕩培養，轉速為100-200r/min ;繼代培養前，將懸浮液用150-250目鋼網過濾，除去大量損傷細胞的殘存碎片，再轉入新鮮培養基，繼續懸浮培養，繼代3 4從而建立體系； (3)從繼代培養的組培苗中選取健壯、生長整齊的組培苗，剪成1.5-2.5cm左右的莖尖莖段，植入生根培養基中，所述生根培養基為包含或組成為l/2MS+AgN033-5mg/L+NAA0.04-0.06mg/L 的培養基； (4)選擇生長旺盛、根系發達的健壯組培苗，將瓶口的包扎物逐漸打開，使組培苗逐步適應外界環境，由開小口到完全敞開約需6-10天，在開瓶口后加入少量的水，使用玻璃罩扣住在陽光下馴化6-8天后移栽到花盆，移栽前把附著于幼苗根部的培養基沖洗干凈；任選地，在移栽到花盆之前使用一定濃度的多菌靈溶液泡洗；移栽到花盆后仍然用玻璃罩扣養，逐步揭開玻璃罩，直到苗木在花盆中發芽生長再移入大田；灰楊組培苗移栽時，幼苗期空氣相對濕度控制在80%以上，溫度為18 25°C，以及適宜的光照強度。
2.根據權利要求1所述的方法，所述的步驟(I)的培養基為MS+Kinetin0.1mg/L+NAA0.3mg/L+2,4-D0.5mg/L。
3.根據權利要求1所述的方法，所述的步驟⑵的培養基為l/2MS+AgN034mg/L+NAA0.05mg/L。`
全文摘要
本發明公開了灰楊組培體系的建立方法，以灰楊莖段為外植體材料，通過誘導生根，移栽等步驟，為灰楊生產走上工廠化、產業化之路提供依據。通過本發明的方法，達到了無性系建立、快速繁殖、工廠化育苗的目的。
文檔編號A01H4/00GK103202231SQ201310145050
公開日2013年7月17日 申請日期2013年4月25日 優先權日2013年4月25日
發明者代惠萍, 趙樺, 霍科科, 薛小榮, 賈根良, 魏安智 申請人:陜西理工學院