一種山豆根組織培養育苗方法
【專利摘要】本發明針對山豆根人工繁育難度大，成苗率低的問題，提供一種組織培養育苗方法，具體包括采種、培養無菌苗、誘導培養基、誘導叢生芽、叢生芽繼代增殖、誘導生根、試管苗的移栽等具體步驟，具有取材方便，叢生芽誘導率達50%～80%，成苗達85%以上，可以滿足人工大面積栽培對山豆根苗的需要的有益效果，而且經過薄層色譜技術鑒定，培養出的試管苗具有生物合成藥用有效成分苦參堿和氧化苦參堿的能力。
【專利說明】一種山根組織培養育苗方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及中草藥材栽培技術，具體涉及一種山豆根育苗的方法，尤其是山豆根的組織培養育苗方法，屬于中藥材栽培【技術領域】。
【背景技術】
[0002]山豆根，拉丁名為:Radix Sophorae Tonkinensis,也叫廣豆根、南豆根，為雙子葉植物綱豆科植物越南槐，屬于野生藥材，藥用部位為根及根莖，秋季采挖，具有清熱解毒，消腫止痛的功能，用于治療咽喉腫痛、齒齦腫痛、喘滿熱咳、肝炎、便秘、黃疸、下痢、疥癬及蚊、蟲叮咬等，植物形態為灌木，高I~2米，野生山豆根生于石灰巖山地或巖石縫中，主產廣西，云南和貴州也有分布，但產量較小。
[0003]山豆根的藥用部位是根系和根莖，除了作為傳統的中藥材使用外，醫藥工業還以山豆根作為原料，大量研制開發治療肝炎的針劑、咽喉腫痛的片劑以及抗腫的中成藥，因此山豆根的需求量越來越大，但山豆根的地域分布范圍相當有限，常零星生長于石山巖縫之中，在自然條件下，山豆根開花結莢期的病蟲害嚴重、種子成熟時容易自然脫落，因此自然繁殖系數極低，且為了滿足市場需求，獲得經濟利益，人們大量采挖野生山豆根資源，致使野生山豆根資源瀕臨滅絕，為滿足需要，人們不得不發展人工栽培技術，而開展山豆根人工栽培，首先要解決山豆根育苗問題。而山豆根不僅自然繁殖系數低，通過采收種子進行人工繁殖難度也很大，成苗率不到20%，幾乎失敗。
【發明內容】
[0004]發明目的:本發明的目的是針對現有技術中山豆根人工繁育難度大，成苗率低的問題，提供一種組織培養育苗方法，提高山豆根育苗成苗率，而且能保持山豆根藥用成分，移栽后生長快，可大面積進行山豆根人工栽培。
[0005]技術方案:本發明所述的一種山豆根組織培養育苗方法，具體包括以下步驟:
1.采種，選健壯、無病蟲害的野生山豆根植株作采種母株，每年霜降節氣過后，種子成熟，即可采種；
2.無菌苗的培養，將山豆根種子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15分鐘，在超凈工作臺上用無菌水浸洗5次，每次浸洗3分鐘，然后將種子播種于培養基，在室內自然散射光照下培養;
3.誘導培養基，以MS為基本培養基，加入不同濃度的植物激素進行誘導培養，植物激素用芐基嘌呤(BA)和奈乙酸(NAA)，芐基嘌呤(BA)濃度為1.0~2.5mg/L，優選為2.0mg/L，奈乙酸(NAA)濃度為0.1~0.3mg/L,優選為0.2mg/L,同時加入2.5%的蔗糖和0.7%的瓊脂，培養基溫度保持24°C~26°C，PH值5.9~6.2 ;
4.叢生芽誘導，當步驟2培養的無菌苗長至5~6厘米后，切取上部2.6~2.9厘米長的頂芽莖段，接入誘導過的培養基培養28天后即有叢生芽形成；
5.叢生芽繼代增殖，叢生芽誘導50天后，平均高達3.5~4.5厘米時，將叢生芽切成3芽一簇，轉至另一誘導過的培養基，25天~30天后，每簇增殖至45~50個叢生芽；
6.誘導生根，當繼代增殖的叢生芽有70%長至3~4厘米時，將健壯的芽單切，并轉到新的誘導過的培養基上誘導生根，18天后基部切口開始分化出根；
7.試管苗的移栽，將發育良好，具有2~3張展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置于室溫下煉苗3~4天后取出小苗，用清水洗去根部了培養基，在有75%~80%遮蔭度的大棚內，移栽到苗床或營養杯中，澆透水，并用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣45分鐘，噴水霧保持空氣濕度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常規管理。
[0006]有益效果:本發明與現有技術相比，其有益效果是:
本發明的山豆根育苗方法,取材方便,叢生芽誘導率達50%~80%，成苗達85%以上，可以滿足人工大量栽培的需要，而且經過薄層色譜技術鑒定，本方法培養出的試管苗具有生物合成藥用有效成分苦參堿和氧化苦參堿的能力。
[0007]【具體實施方式】
下面結合具體實施事例對本發明技術方案進行詳細說明。
[0008]實施例1:一種山豆根組織培養育苗，其具體步驟如下:
1.采種，選健壯、無病蟲害的野生山豆根植株作采種母株，每年霜降節氣過后，種子成熟，即可采種；
2.無菌苗的培養，將山豆根種子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15分鐘，在超凈工作臺上用無菌水浸洗5次，每次浸洗3 分鐘，然后將種子播種于培養基，在室內自然散射光照下培養;
3.誘導培養基，以MS為基本培養基，加入植物激素進行誘導培養，植物激素用芐基嘌呤(BA)和奈乙酸(NAA)，芐基嘌呤(BA)濃度為1.0/L，奈乙酸(NAA)濃度為0.lmg/L，同時加入2.5%的蔗糖和0.7%的瓊脂，培養基溫度保持24°C~26°C，PH值5.9~6.2 ;
4.叢生芽誘導，當步驟2培養的無菌苗長至5~6厘米后，切取上部2.6~2.9厘米長的頂芽莖段，接入誘導過的培養基培養28天后即有叢生芽形成，叢生芽誘導率為50% ；
5.叢生芽繼代增殖，叢生芽誘導50天后，平均高達3.5~4.5厘米時，將叢生芽切成3芽一簇，轉至另一誘導過的培養基，25天~30天后，每簇增殖至45~50個叢生芽；
6.誘導生根，當繼代增殖的叢生芽有70%長至3~4厘米時，將健壯的芽單切，并轉到新的誘導過的培養基上誘導生根，18天后基部切口開始分化出根；
7.試管苗的移栽，將發育良好，具有2~3張展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置于室溫下煉苗3~4天后取出小苗，用清水洗去根部了培養基，在有75%~80%遮蔭度的大棚內，移栽到苗床或營養杯中，澆透水，并用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣45分鐘，噴水霧保持空氣濕度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常規管理。
[0009]實施例2:—種山豆根組織培養育苗，其具體步驟如下:
1.采種，選健壯、無病蟲害的野生山豆根植株作采種母株，每年霜降節氣過后，種子成熟，即可采種；
2.無菌苗的培養，將山豆根種子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15分鐘，在超凈工作臺上用無菌水浸洗5次，每次浸洗3分鐘，然后將種子播種于培養基，在室內自然散射光照下培養;
3.誘導培養基，以MS為基本培養基，加入不同濃度的植物激素進行誘導培養，植物激素用芐基嘌呤(BA)和奈乙酸(NAA)，芐基嘌呤(BA)濃度為2.0mg/L，奈乙酸(NAA)濃度為0.2mg/L,同時加入2.5%的蔗糖和0.7%的瓊脂，培養基溫度保持24°C~26°C，PH值5.9~6.2 ；
4.叢生芽誘導，當步驟2培養的無菌苗長至5~6厘米后，切取上部2.6~2.9厘米長的頂芽莖段，接入誘導過的培養基培養28天后即有叢生芽形成，叢生芽誘導率為85% ；
5.叢生芽繼代增殖，叢生芽誘導50天后，平均高達3.5~4.5厘米時，將叢生芽切成3芽一簇，轉至另一誘導過的培養基，25天~30天后，每簇增殖至45~50個叢生芽； 6.誘導生根，當繼代增殖的叢生芽有70%長至3~4厘米時，將健壯的芽單切，并轉到新的誘導過的培養基上誘導生根，18天后基部切口開始分化出根；
7.試管苗的移栽，將發育良好，具有2~3張展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置于室溫下煉苗3~4天后取出小苗，用清水洗去根部了培養基，在有75%~80%遮蔭度的大棚內，移栽到苗床或營養杯中，澆透水，并用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣45分鐘，噴水霧保持空氣濕度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常規管理。
[0010]實施例3:—種山豆根組織培養育苗，其具體步驟如下:
1.采種，選健壯、無病蟲害的野生山豆根植株作采種母株，每年霜降節氣過后，種子成熟，即可采種；
2.無菌苗的培養，將山豆根種子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒15分鐘，在超凈工作臺上用無菌水浸洗5次，每次浸洗3分鐘，然后將種子播種于培養基，在室內自然散射光照下培養;
3.誘導培養基，以MS為基本培養基，加入不同濃度的植物激素進行誘導培養，植物激素用芐基嘌呤(BA)和奈乙酸(NAA)，芐基嘌呤(BA)濃度為2.5mg/L，奈乙酸(NAA)濃度為0.3mg/L,同時加入2.5%的蔗糖和0.7%的瓊脂，培養基溫度保持24°C~26°C，PH值5.9~
6.2 ；
4.叢生芽誘導，當步驟2培養的無菌苗長至5~6厘米后，切取上部2.6~2.9厘米長的頂芽莖段，接入誘導過的培養基培養28天后即有叢生芽形成，叢生芽誘導率為67% ；
5.叢生芽繼代增殖，叢生芽誘導50天后，平均高達3.5~4.5厘米時，將叢生芽切成3芽一簇，轉至另一誘導過的培養基，25天~30天后，每簇增殖至45~50個叢生芽；
6.誘導生根，當繼代增殖的叢生芽有70%長至3~4厘米時，將健壯的芽單切，并轉到新的誘導過的培養基上誘導生根，18天后基部切口開始分化出根；
7.試管苗的移栽，將發育良好，具有2~3張展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置于室溫下煉苗3~4天后取出小苗，用清水洗去根部了培養基，在有75%~80%遮蔭度的大棚內，移栽到苗床或營養杯中，澆透水，并用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣45分鐘，噴水霧保持空氣濕度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常規管理。
【權利要求】
1.一種山豆根組織培養育苗方法，其特征在于包括以下步驟: (1)采種，選健壯、無病蟲害的野生山豆根植株作采種母株，每年霜降節氣過后，種子成熟，即可采種； (2)無菌苗的培養，將山豆根種子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒，后在超凈工作臺上用無菌水浸洗5次,每次浸洗3分鐘,然后將種子播種于培養基,在室內自然散射光照下培養; (3)誘導培養基，以MS為基本培養基，加入植物激素進行誘導培養，植物激素用芐基嘌呤(BA)和奈乙酸(NAA)，同時加入2.5%的蔗糖和0.7%的瓊脂，培養基溫度保持24°C~26°C，PH 值 5.9 ~6.2 ; (4)叢生芽誘導，當無菌苗長至5~6厘米后，切取上部2.6~2.9厘米長的頂芽莖段，接入誘導過的培養基培養叢生芽； (5)叢生芽繼代增殖，叢生芽誘導后，平均高達3.5~4.5厘米時，將叢生芽切成3芽一簇，轉至另一誘導過的培養基進行繼代增殖； (6)誘導生根，當繼代增殖的叢生芽有70%長至3~4厘米時，將健壯的芽單切，并轉到新的誘導過的培養基上誘導生根； (7)試管苗的移栽，將發育良好，具有2~3張展開葉片的試管苗瓶蓋打開，置于室溫下煉苗3~4天后取出小苗，用清水洗去根部了培養基，在有75%~80%遮蔭度的大棚內，移栽到苗床或營養杯中，澆透水，并用塑料薄膜覆蓋，每天揭開薄膜換氣45分鐘，噴水霧保持空氣濕度85%以上，8天后，可揭去薄膜，按常規管理。
2.根據權利要求1所述的山豆根組織培養育苗方法，其特征在于所述的步驟(2)山豆根種子置于0.2%升汞溶液浸泡消毒的時間為15分鐘。
3.根據權利要求1所述的山豆根組織培養育苗方法，其特征在于所述的步驟(3)的植物激素芐基嘌呤(BA)濃度為1.0~2.5mg/L，奈乙酸(NAA)濃度為0.1~0.3mg/L。
【文檔編號】A01H4/00GK103503776SQ201310475021
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2013年10月12日 優先權日:2013年10月12日
【發明者】不公告發明人 申請人:黃振忠