一種丹參人工栽培方法
【專利摘要】本發明提供一種丹參人工栽培方法，利用丹參內生真菌對宿主植物丹參生長的影響，采用真菌發酵液浸種法，丹參種子的發芽勢和發芽率均顯著高于對照；采用丹參苗與真菌進行共培養法，促進丹參苗生長；采用真菌發酵液噴灑，促進丹參生長及品質提高，本發明在丹參人工栽培中有效地利用內生真菌，促進丹參種子的萌發和丹參苗生長，顯著地提高人工栽培丹參生長狀態，為丹參的人工種植和移栽奠定基礎。
【專利說明】一種丹參人工栽培方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于丹參栽培領域，具體涉及一種丹參人工栽培方法。
【背景技術】
[0002]內生真菌(endophytic fungi)是指在生活史中的某一個階段存在于健康植物組織內部，不會引起宿主明顯病癥或者對宿主造成明顯傷害的真菌。研究發現植物內生真菌可以通過改善植物的營養條件，促進植物生長，表現在增加植物的總生物量、提高種子發芽率、幼苗存活率以及抑制病原菌等多個方面；還可以通過產生次生代謝物及快速激活宿主的逆境反應系統，增強宿主對環境的生態適應能力。內生真菌在生物制藥、農業生產、工業發酵等方面上表現出美好的應用前景，已受到世界各國專家的廣泛關注。
[0003]原料藥丹參為唇形科植物丹參Salvia mihiorrhiza Bunge的干燥根及根莖,用于治療冠心病、腦血管疾病和誘導各種癌細胞凋亡等，隨著丹參新藥的不斷研制開發及市場需求量的增加，對丹參需求量亦明顯攀升。丹參的需求量逐漸增加，野生資源不能滿足需要，人工栽培成為解決藥源的根本途徑。丹參繁殖方法有種子繁殖、分根繁殖、扦插繁殖和蘆頭繁殖等，由于分根繁殖、扦插繁殖和蘆頭繁殖能夠縮短丹參生長周期而為人們所常用，但種植的丹參由于長期的無性繁殖，有效成分含量極不穩定、感染病毒病等現象導致品質和產量的下降，嚴重影響了臨床應用和制藥工業的發展。丹參以種子繁殖能很好的解決由于長期的無性繁殖導致品質和產量下降等問題。然而在自然條件下丹參種子萌發率低，不耐貯藏，常溫干燥貯藏丹參種子，每放置30天種子發芽率就下降10%，貯藏時間超過半年，其發芽率低于40%，從而嚴重影響了丹參的人工栽培。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于提供一種丹參人工栽培方法。
[0005]為達到上述目的，本發明采用了以下技術方案。
[0006]一種丹參人工栽培方法，該丹參人工栽培方法包括以下步驟:
[0007]I)浸種:將丹參種子消毒后置于經過滅菌的丹參內生真菌發酵液中浸泡10_12h ；
[0008]2)萌發:浸種后用無菌水沖洗丹參種子，然后用無菌濾紙吸干丹參種子表面水分，然后放在超凈工作臺內晾干，將晾干后的丹參種子靜置于平皿中的襯墊物上，襯墊物包括鋪于平皿底部的經無菌水浸潤的若干層濾紙以及鋪于所述若干層濾紙上的若干層紗布，靜置過程中定時向平皿中噴無菌水以保持襯墊物濕潤；
[0009]3)萌發后的丹參種子經過育苗后移栽。
[0010]所述丹參種子為當年的新種子或者貯藏一年至兩年的種子。
[0011]所述靜置過程中采用全天光照，溫度控制在25_27°C。
[0012]所述育苗包括以下步驟:
[0013]將萌發后的丹參種子轉接到MS培養基中進行培養得丹參苗，培養條件為:溫度為晝 / 夜=23-25°C /16-18°C，光照周期為 12/12h，照度為 1800_2000Lx。[0014]所述丹參人工栽培方法還包括以下步驟:
[0015]在育苗階段，待丹參苗生長至株高2~3cm后，將丹參內生真菌打成菌餅，將菌餅接種于與丹參苗相距l_2cm處的培養基上進行共培養，共培養條件為:溫度為晝/夜=23-250C /16-18°C，光照周期為 12/12h，照度為 1800_2000Lx。
[0016]所述丹參內生真菌為茴香裸胞殼(Emericella foeniculicola)。
[0017]所述丹參內生真菌為茴香裸胞殼(Emericella foeniculicola)TR21菌株、茴香裸胞殼(Emericella foeniculicola) N157 菌株、茴香裸胞殼(Emericella foeniculicola)NUl52 菌株或茴香裸胞殼(Emericella foeniculicola) U104 菌株。
[0018]移栽15-20天后用丹參內生真菌發酵液進行噴灑處理，每4-5株苗一次噴灑10-15mL丹參內生真菌發酵液，每周噴灑一次。
[0019]用于噴灑處理的丹參內生真菌發酵液為茴香裸胞殼(Emericellafoeniculicola) TR21 菌株、茴香裸胞殼(Emericella foeniculicola) N157 菌株或茴香裸胞殼(Emericella foeniculicola) U104 菌株的發酵液。
[0020]所述丹參內生真菌發酵液的制備方法包括以下步驟:將丹參內生真菌接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養基中，然后置于恒溫搖床中于25-28°C、130-160r/min條件下振蕩培養三到四周得菌培養液，將菌培養液中的菌絲體經真空抽濾除去，然后以4000-5000r/min離心20-30min，得丹參內生真菌發酵液。
[0021]本發明的有益效果體現在:本發明在丹參人工栽培中有效地利用內生真菌，促進丹參種子的萌發，并且可 以進一步促進丹參苗生長以及顯著地提高人工栽培丹參生長狀態和品質，為丹參的高效人工種植奠定基礎。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0022]圖1為各菌株對2010年丹參種子發芽勢的影響；
[0023]圖2為各菌株對2010年丹參種子發芽率的影響；
[0024]圖3為各菌株對2011年丹參種子發芽勢的影響；
[0025]圖4為各菌株對2011年丹參種子發芽率的影響；
[0026]圖5為各菌株對2012年丹參種子發芽勢的影響；
[0027]圖6為各菌株對2012年丹參種子發芽率的影響；
[0028]圖中:**表示與對照組(CK)比較極顯著，*表示與對照組(CK)比較顯著。
【具體實施方式】
[0029]下面結合附圖對本發明作詳細說明。
[0030]在本發明的前期工作中，分離出一株產丹參酮II A內生真菌TR21，以TR21為出發菌株通過誘變方法誘變出3株能夠高產丹參酮II A的內生真菌(參見文獻I)，本發明旨在觀察這4株菌對丹參生長的影響作用，從內源角度解決丹參人工栽培品質下降等問題。
[0031]文獻(I) Caixia Ma, Dongliang Jiang, Xiying We1.Mutation breeding ofEmericella foeniculicola TR21for improved production of tanshinone IIA.ProcessBiochemistry, 2011, 46(10):2059 ~2063.[0032]I材料與方法[0033]1.1 材料
[0034]1.1.1 培養基
[0035]馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA):馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂18g，蒸餾水1000mL, pH自然(即不做PH的調整)；
[0036]馬鈴薯葡萄糖液體培養基(PDB):馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蒸餾水lOOOmL，pH自然；
[0037]MS培養基:配方見表1，調pH為5.7~6。
[0038]表1
[0039]
【權利要求】
1.一種丹參人工栽培方法，其特征在于:該丹參人工栽培方法包括以下步驟: 1)浸種:將丹參種子消毒后置于經過滅菌的丹參內生真菌發酵液中浸泡10-12h； 2)萌發:浸種后用無菌水沖洗丹參種子，然后用無菌濾紙吸干丹參種子表面水分，然后放在超凈工作臺內晾干，將晾干后的丹參種子靜置于平皿中的襯墊物上，靜置過程中定時向平皿中噴無菌水以保持襯墊物濕潤； 3)萌發后的丹參種子經過育苗后移栽。
2.根據權利要求1所述一種丹參人工栽培方法，其特征在于:所述丹參種子為當年的新種子或者貯藏一年至兩年的種子。
3.根據權利要求1所述一種丹參人工栽培方法，其特征在于:所述靜置過程中采用全天光照，溫度控制在25-27 °C。
4.根據權利要求1所述一種丹參人工栽培方法，其特征在于:所述育苗包括以下步驟: 將萌發后的丹參種子轉接到MS培養基中進行培養得丹參苗，培養條件為:溫度為晝/夜=23-25°C /16-18°C，光照周期為 12/12h，照度為 1800_2000Lx。
5.根據權利要求4所述一種丹參人工栽培方法，其特征在于:所述丹參人工栽培方法還包括以下步驟: 在育苗階段，待丹參苗生長至株高2~3cm后，將丹參內生真菌打成菌餅，將菌餅接種于與丹參苗相距l_2cm處的培養基上進行共培養，共培養條件為:溫度為晝/夜=23-250C /16-18°C，光照周期為 12/12h，照度為 1800_2000Lx。
6.根據權利要求1或5所述一種丹參人工栽培方法，其特征在于:所述丹參內生真菌為茴香裸胞殼(Emericella foeniculicola)。
7.根據權利要求1或5所述一種丹參人工栽培方法，其特征在于:所述丹參內生真菌為茵香裸胞殼(Emericella foeniculicola) TR21菌株、茵香裸胞殼(Emericellafoeniculicola)N157 菌株、茴香裸胞殼(Emericella foeniculicola)NU152 菌株或茴香裸胞殼(Emericella foeniculicola) U104 菌株。
8.根據權利要求1所述一種丹參人工栽培方法，其特征在于:移栽15-20天后用丹參內生真菌發酵液進行噴灑處理，每4-5株苗一次噴灑10-15mL丹參內生真菌發酵液，每周噴灑一次。
9.根據權利要求8所述一種丹參人工栽培方法，其特征在于:用于噴灑處理的丹參內生真菌發酵液為茴香裸胞殼(Emericella foeniculicola) TR21菌株、茴香裸胞殼(Emericella foeniculicola)NI57 菌株或茴香裸胞殼(Emericella foeniculicola)U104菌株的發酵液。
10.根據權利要求1或8所述一種丹參人工栽培方法，其特征在于:所述丹參內生真菌發酵液的制備方法包括以下步驟:將丹參內生真菌接種于馬鈴薯葡萄糖液體培養基中，然后置于恒溫搖床中于25-28°C、130-160r/min條件下振蕩培養三到四周得菌培養液，將菌培養液中的菌絲體經真空抽濾除去，然后以4000-5000r/min離心20_30min，得丹參內生真菌發酵液。
【文檔編號】A01G1/00GK103733829SQ201310655949
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年12月5日 優先權日:2013年12月5日
【發明者】魏希穎, 王鳳霞, 馬彩霞, 萬陜寧, 井明博, 劉穎, 王喆之 申請人:陜西師范大學