一種甲基營養型芽孢桿菌可濕性粉劑的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物農藥與微生物肥料領域，具體涉及一種含芽孢萌發劑的甲基營養 型芽孢桿菌可濕性粉劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 我國每年使用大量的化學農藥制劑與化肥，極易造成農藥殘留超標，生物富集，不 僅污染生態環境，還影響人類的健康。而生物農藥副作用小，對人無害，是一種具有廣闊前 景的綠色農藥，日益成為全球農藥發展的一種趨勢。
[0003] 芽孢桿菌是目前生物農藥與微生物肥料中研究最多的一種微生物，它具有廣譜抗 菌活性和極強的抗逆能力，其營養細胞能在真菌性病原菌絲體表面繁衍定殖，有效抑制病 菌生長，因此，在控制病害發生、促進植株生長，提高作物產量等方面顯示出了廣闊的應用 前景。
[0004] 甲基營養型芽孢桿菌是一種嗜溫、好氧、產芽孢的桿狀細菌，其生理特征多樣，該 菌在自然界中廣泛存在，具有獨特的一碳代謝途徑，能夠將自然界中取之不盡的一碳化合 物如甲醇、甲醛等轉變為菌體自身所需的營養物質，同時又會產生多種有益的代謝副產物 絲氨酸、維生素 B12、聚P羥基丁酸鹽等。對人畜無毒無害，不污染環境，具備生命力強，能產 生多種抗菌素和酶，具有抗菌活性和極強的抗高溫，抗強酸強堿能力，甲基營養型芽孢桿菌 不僅可以在土壤、植物根際體表等外界環境中廣泛存在，而且是植物體內常用見內生細菌， 尤其是在植物的根、莖內部。甲基營養型芽孢桿菌通過成功定植于煙草、水稻等植物根際、 體表或體內，改變其周圍菌群環境和種類，與病原菌競爭植物周圍的位點，并且分泌多種抗 菌物質以抑制病原菌生長，同時誘導植物防御系統抵御病原菌入侵，從而達到改良土壤和 生防的目的，具有防病和促生作用。因此國內這幾年對其研究較多，如呂倩等在南海深海分 離一株甲基型營養型芽孢桿菌具有較強抑制黃瓜炭疽病菌、立枯絲核菌、黃瓜枯萎病菌等 植物病原真菌的活性，有防治作物真菌病害的研發價值。
[0005] 王洪梅從土壤中分離篩選出一株對番茄青枯病病原菌有較強抑菌效果的甲基營 養型芽孢桿菌株N5。菌株N5具有產生鐵載體、β-1，3_葡聚糖酶、纖維素酶、蛋白酶以及多種 脂肽類抗菌物質的能力。菌體發酵后與有機肥(豬糞:氨基酸肥料=1:1)混合后進行二次發 酵制成生物有機肥，并用盆栽試驗驗證其生防和促生效果。結果表明：利用菌株Ν5制備的生 物有機肥可以促進番茄的生長，提高根系的活力。生物有機肥可有效防治番茄青枯病，其中 營養缽使用生物有機肥的處理其生防效果優于大盆使用生物有機肥的處理，特別是營養缽 和大盆均使用生物有機肥的處理其生防效果達69%，而使用有機肥并不能有效防治番茄青 枯病。使用生物有機肥顯著增加根際土壤中細菌、放線菌的數量，減少真菌和青枯勞爾氏菌 的數量。
[0006] 趙月菊等在專利號201410601775.4中公開了一株甲基營養型芽孢桿菌及其在防 治禾谷鐮刀菌方面的應用，用于防治赤霉病，穗腐病或根腐病等。
[0007] 云利等(馮云利，2011)在研究烤煙品種NC297內生細菌種群組成時，發現該菌是煙 草內生細菌的優勢種群，且對煙草黑腔病菌有抑制作用;Munusamy Madhai yan從水稻根際 土壤中獲得具有利用甲醇和促生作用的新型細菌甲基營養型芽孢桿菌（Munusamy 1&1(11^丨7&11，2010);劉偉從煙草土壤中分離一株甲基營養型芽孢桿菌1^-6，采用溫室盆栽試 驗測定LW-6的抑菌和促生作用，結果顯示該菌處理的煙草植株在接種煙草青枯病菌后防 治效果為70.37%;其可定植于煙草根際土壤，具有良好的定植能力；其對煙草有明顯促生 作用。菌株LW-6在煙草青枯病防治中具有潛在的利用價值。
[0008] 周登博等在專利號201210247234.7中公開了一種防控香蕉枯萎病的甲基營養型 芽孢桿菌菌株4-L-16,還公開了該菌株在制備具有防控香蕉枯萎病作用的藥物中的用途以 及含該菌株的微生物制劑，該制劑不僅對多種香蕉病原菌具有更好的拮抗作用，還對植株 生長具有促進作用。
[0009] 唐滿倉等在專利號201410654499.8公開了一種含甲基營養型芽孢桿菌與葉枯唑 的殺細菌組合物及其在防治煙草青枯病，水稻白葉枯病或大白菜的軟腐病的應用。在專利 號201210579898.3中公開了一種甲基營養型芽孢桿菌的可濕性粉劑，其可濕性粉劑是采用 特定的方法制得的甲基營養型芽孢桿菌的原粉，輕質碳酸鈣，十二烷基苯磺酸鈉，磷酸二氫 鉀，磷酸氫二鉀和分散劑亞甲萘磺酸鈉組成，能較好的防治柑潰瘍病的用途。在專利號 201210579899.8中公開了一種甲基營養型芽孢桿菌的生物菌劑及其制備方法。在專利號 201410654587.8中公開了一種甲基營養型芽孢桿菌的水分散粒劑及其制備方法和應用。 [0010] 林克明等在專利號201210550128.6中公開了一種甲基營養型芽孢桿菌三炬-04及 在防治辣椒的青枯病，柑橘的炭疽病上的應用。
[0011]姬廣海等在專利號201210241442.6中公開了一種甲基營養型芽孢桿菌BWJ及其在 十字花科蔬菜根腫病防治的應用。楊德昌等在專利號201410303095.4中公開了一種甲基營 養型芽孢桿菌可濕性粉劑及其制備方法和對黃瓜灰霉病和蘋果腐爛病具有較強的防治效 果。可濕性粉劑芽孢含量不低于30億/克。
[0012] 阮志勇等在專利號201310628536.3中公開了一種甲基營養型芽孢桿菌及微生物 菌劑和它們的應用。邵海鋒在專利號201410148228.5中公開了一種甲基營養型芽孢桿菌及 其制備生物型肥料增效劑的方法。
[0013] 單俊偉等在專利號201410148953.2中公開了一種耐鹽性甲基營養型芽孢桿菌菌 株LJ及其在鹽堿地改良，煙草細菌性病害、病毒性病害、真菌性病害防治上有較好的效果。
[0014] 植物病害生防甲基營養型芽孢桿菌的研究開發應用目前已取得了不少成就，但其 發展過程中仍存在不少問題。如我們生產的甲基營養型芽孢桿菌主要以芽孢數量的多少來 衡量，從上面我們發現現階段甲基營養型芽孢桿菌發酵過程中的芽孢含量不高，不到1〇〇億 cfu/ml;另外，經過我們試驗發現有芽孢桿菌產品超過50%的芽孢施入地中由于沒有及時萌 發而失去其效果。如王倩利用枯草芽孢桿菌TR21防治巴西蕉枯萎病時，前期試驗利用TR21 菌株NB發酵液灌根和葉腋接種都能有效防治枯萎病，但是利用芽孢制備可濕性粉劑的灌根 與葉腋效果卻不理想，顯示了去掉發酵液后的純芽孢可能因為萌發困難而使防效下降。
[0015] 芽孢桿菌在自然界中分布廣泛，當外部條件適合生長時，芽孢會由休眠狀態經過 一系列復雜生理生化反應成長為營養體并恢復新陳代謝作用，這個過程稱為萌發 (germination)。自然界中芽孢萌發受外源營養物質的影響，這類營養物質被稱之為"萌發 劑"，芽孢和促進萌發的芽孢萌發劑在液體中混合后數秒鐘之內，萌發劑快速跨過芽孢衣和 皮層到達芽孢內膜的表面，與位于芽孢內膜上的受體蛋白相互作用，激發芽孢進入萌發狀 態，接著啟動一連串萌發事件，之后的萌發過程不會因移走萌發劑而停止。
[0016] 在現階段，還沒有公開報道有關甲基營養型芽孢桿菌的芽孢萌發劑的文獻，也未 有在甲基營養型芽孢桿菌可濕性粉劑中加入芽孢萌發劑的研究的報道。
[0017] 另