專利名稱：人腦和胸腺內的新基因－－709b1、hft02和hft05的制作方法
技術領域：
本發明涉及分子生物學一切生命活動的本質都是蛋白質之間的相互作用，這些復雜而有序的過程無不受制于基因的表達和調控。因此，要知道生命現象的奧秘，首先就得研究基因，就得破譯隱藏在四種核苷酸的無限排列組合中的無窮信息。據推測，人類基因組約含有10萬條不同的基因，而目前已知基因的數量遠遠少于未知基因，還有大部分基因及其功能不為人知。腦是人體內的高級中樞器官，也是功能最為奧秘的器官。因此，克隆腦內的基因將有助于對腦組織功能的認識。胸腺是人體內的重要免疫器官，克隆胸腺內的基因將有助于了解胸腺的功能。目前，從人腦和胸腺中得到的基因有幾千種，還有大部分基因未被人們發現。
本發明的目的是采用分子生物學技術，從人腦cDNA文庫和胸腺cDNA文庫克隆新基因，得到了三個含有完整讀框的新基因709B1、HFT02和HFT05。
本發明的技術方案1.兩端錨定引物PCR擴增腦和胸腺的cDNA文庫在50ul反應體系中，模板cDNA 200ng，dNTP各200μmol/L，Taq DNA聚合酶3U，接頭引物為20pmol。反應參數為94℃ 30s，68℃退火5min，72℃延伸90s，35個循環。將PCR產物在1.2％瓊脂糖凝膠中進行電泳。2.回收PCR產物從膠中回收PCR產物3.克隆用T4DNA連接酶1u，連接酶緩沖液1μl，Teasy載體25ng，片段6μl，終體積10μl，16℃連接過夜。將連接產物與100μl JM109感受態細胞混勻，冰上放20min，42℃水浴90s進行熱休克，加400μl無氨芐青霉素的LB培養基37℃培養1h，鋪含氨芐青霉素的瓊脂糖平板，于37℃培養過夜。挑取單個的克隆加入5ml含氨芐青霉素的LB，于37℃搖床內震蕩培養12～16h，提取質粒，用EcoRI酶切鑒定。4.測序陽性克隆進行測序PCR，質粒150ng，引物10pmol，Mix 4μl，終體積10μl，94℃ 5s，50℃ 10s，64℃ 4min，25個循環。將PCR反應產物用310 Genetic Analyzer自動測序。新基因709BI1 tctggaggag cagcttttta aaaggtcatt gtaattttaa cacattctta ctaaagaaat61 acatactatc agtgaccgat ctgaaactct gtaacaggtg aagggagact tacgatgaat121 atctgagcat aggttcgcta gcatcttcac actcatacat aaacattctt aaagggaata181 agaatgattt caaattcaaa acaacaacaa caacaaaaaa acaaatttgg tcaaactttc241 ttcatcatac cattcattgc tatcacaatc ctagtttgct ggtaggttta agaaaggaat301 agaaagtttt tgaaatcctt ttaatttcta ccagtcttag ggcctcttga gtaggccact361 ttggaagcaa actgattaaa cagcaccatc aagtccgtat ctcaacaaac cattgcataa421 tttctgtcaa tgttctcaaa ggttaaaaca agttgtatag aagaatatct ttcctccagg481 tggatggcac aggagctgac acaatgagtg acacgagttc tgtaagcttg gaagtgagcc541 ctggcagccg ggagacttca gctgccacac tgtcacctgg ggcgagcagc cgtggctggg601 atgacggtga cacccgcagc gagcacagct acagcgagtc aggtgccagc ggctcctctt661 ttgaggagct ggacttggag ggcgaggggc ccttagggga gtcacggctg gaccctggga721 ctgagcccct ggggactacc aagtggctct gggagcccac tgcccctgag aagggcaagg781 agtaacccat ggcctgcacc ctcctgcagt gcagttgctg aggaactgag cagactctcc841 agcagactct ccagccctct tcctccttcc tctgggggag gaggggttcc tgagggacct901 gacttcccct gctccagact tcttaaaaag atgctcctcc aga新基因HFT021 ggaatctgga ggaaaactga ccaggtggct tgttaacagt cagtgggaat ttgaaagaag61 aaaaccagat ggaacaagaa gactgggact tccccatcct gtggatccca ttgtaggaga121 gccagaatac tgccctatga gactgggaat gacaactgga agacttcagt ctggagtgaa181 tattctgcag gggttcaaag aggataaaag gaacaaagta actccagggt tatatttgaa241 ttatggaccc tggagttctt atgtaccgca ttatgactcc acatttatga atatcaagca301 aggataattc agatttaatc tatgcaatct atgggggaag actgatcttc caagcaattt361 cagcaaccat gagtttctgg ccccatgcca agattaccca tatgttatga cagataagtt421 tgcttggatg ttttaacaaa aggaggggat tccagg新基因HFT051 ggccgacttg gcaggtcaaa cacaaaacaa cgatgtacaa cagaggggaa atatgctctt61 ggtcaacaga ccttgcagaa aagactggct tgtttccaag tggatgagaa cgccagtgtg121 tggccagagt ccagcaatga ctgaccggcc ctggtcagag gctggcaggg accacagaag181 ggccaaggcg ctgccggggc tcatcccagg ctccaacccc aacctggaag cttgtggaca241 ccaggctctg tgcagcagct ccgtggctag cgtccagggc ccctggccac tactcccaaa301 tgcttctagt ccacccaccc ctggccagcc ccaaccttga catcactgtg gatgccatca361 gggtggtctg gttcacttat acaacatgat ccatgggaaa accccttccg t本發明的優點兩端錨定引物多聚酶鏈反應法可快速克隆基因的全長cDNA。
權利要求
1.人腦和胸腺內的新基因——709B1、HFT02和HFT05，其特征是采用兩端錨定引物PCR擴增人腦和胸腺的cDNA文庫，再從膠中回收PCR產物，克隆，測序，共測得了三個含有完整讀框的新基因。新基因709B11 tctggaggag cagcttttta aaaggtcatt gtaattttaa cacattctta ctaaagaaat61 acatactatc agtgaccgat ctgaaactct gtaacaggtg aagggagact tacgatgaat121 atctgagcat aggttcgcta gcatcttcac actcatacat aaacattctt aaagggaata181 agaatgattt caaattcaaa acaacaacaa caacaaaaaa acaaatttgg tcaaactttc241 ttcatcatac cattcattgc tatcacaatc ctagtttgct ggtaggttta agaaaggaat301 agaaagtttt tgaaatcctt ttaatttcta ccagtcttag ggcctcttga gtaggccact361 ttggaagcaa actgattaaa cagcaccatc aagtccgtat ctcaacaaac cattgcataa421 tttctgtcaa tgttctcaaa ggttaaaaca agttgtatag aagaatatct ttcctccagg481 tggatggcac aggagctgac acaatgagtg acacgagttc tgtaagcttg gaagtgagcc541 ctggcagccg ggagacttca gctgccacac tgtcacctgg ggcgagcagc cgtggctggg601 atgacggtga cacccgcagc gagcacagct acagcgagtc aggtgccagc ggctcctctt661 ttgaggagct ggacttggag ggcgaggggc ccttagggga gtcacggctg gaccctggga721 ctgagcccct ggggactacc aagtggctct gggagcccac tgcccctgag aagggcaagg781 agtaacccat ggcctgcacc ctcctgcagt gcagttgctg aggaactgag cagactctcc841 agcagactct ccagccctct tcctccttcc tctgggggag gaggggttcc tgagggacct901 gacttcccct gctccagact tcttaaaaag atgctcctcc aga新基因HFT021 ggaatctgga ggaaaactga ccaggtggct tgttaacagt cagtgggaat ttgaaagaag61 aaaaccagat ggaacaagaa gactgggact tccccatcct gtggatccca ttgtaggaga121 gccagaatac tgccctatga gactgggaat gacaactgga agacttcagt ctggagtgaa181 tattctgcag gggttcaaag aggataaaag gaacaaagta actccagggt tatatttgaa301 aggataattc agatttaatc tatgcaatct atgggggaag actgatcttc caagcaattt361 cagcaaccat gagtttctgg ccccatgcca agattaccca tatgttatga cagataagtt421 tgcttggatg ttttaacaaa aggaggggat tccagg新基因HFT051 ggccgacttg gcaggtcaaa cacaaaacaa cgatgtacaa cagaggggaa atatgctctt61 ggtcaacaga ccttgcagaa aagactggct tgtttccaag tggatgagaa cgccagtgtg121 tggccagagt ccagcaatga ctgaccggcc ctggtcagag gctggcaggg accacagaag181 ggccaaggcg ctgccggggc tcatcccagg ctccaacccc aacctggaag cttgtggaca241 ccaggctctg tgcagcagct ccgtggctag cgtccagggc ccctggccac tactcccaaa301 tgcttctagt ccacccaccc ctggccagcc ccaaccttga catcactgtg gatgccatca361 gggtggtctg gttcacttat acaacatgat ccatgggaaa accccttccg t
全文摘要
人腦和胸腺內的新基因—709B1、HFT02和HFT05,涉及分子生物學。人們現今已得到的人腦和胸腺內的基因有幾千種,還有大部分新基因未被人們發現,本發明采用兩端錨定引物多聚酶鏈反應(PCR)法,從正常人腦和胸腺的cDNA文庫中克隆到了含有完整讀框的新基因—709B1、HFT02和HFT05,使人們對自身基因的探索又加深了認識。
文檔編號C12N15/11GK1335396SQ0011388
公開日2002年2月13日 申請日期2000年7月21日 優先權日2000年7月21日
發明者鄧艷春, 藥立波, 劉新平, 王吉村, 韓華, 王國華 申請人:中國人民解放軍第四軍醫大學