專利名稱：一種nob1基因在腦膠質瘤疾病中的應用的制作方法
技術領域：
本發 明涉及腦膠質瘤發病機制的研究領域，具體涉及一種NOBl基因在腦膠質瘤 疾病中的應用。
背景技術：
膠質瘤是來源于中樞神經系統支持細胞的具有高侵襲性和致死性的實體腫瘤，可 分為星形細胞瘤、少突膠質細胞瘤和少肢星形細胞瘤。星形細胞瘤占膠質瘤的80 85%， 根據病理可分為I級至IV級。IV級膠質瘤又稱膠質母細胞瘤，是膠質瘤中最常見的病理類 型，預后很差。雖然在膠質瘤治療方面研究者做了大量的工作，但是部分膠質母細胞瘤的患 者生存期仍然低于15個月。雖然在膠質瘤的病因和預后方面有大量的研究，但是在膠質瘤 的基因水平的研究仍然處于起步階段。在真核細胞中，蛋白酶體26S是一種蛋白水解復合物，可以將多泛素化的蛋白降 解為小的多肽。蛋白酶體26S由兩個亞復合體組成起催化作用的20S蛋白酶體和起調節 作用的19S顆粒。19S調節顆粒又由分別起底和蓋作用的兩個亞復合體組成。底由6個有 蛋白酶體活性的ATP酶(Rptl-Rpt6)和2個非ATP酶的亞基(Rpnl和Rpn2)組成。蓋則由 Rpn3，5，6，7，8，9，10，11，12組成。以Rpn 12為誘餌進行的雙雜合測試，第一次將酵母菌的 Nobl蛋白(Noblp)分離出來。越來越多的證據表明在酵母菌中，Noblp在蛋白酶體形成和 RNA代謝中起重要作用。Noblp通過起分子伴侶的作用將20S蛋白酶體催化亞復合物和19S 調節顆粒結合在一起，從而形成26S蛋白媒體，同時降解Umplp。Noblp的基因缺失嚴重抑 制20S pre-rRNA向成熟的18S rRNA轉化，提示Noblp參與rRNA的加工。另外，Nobl蛋白 的PIN域可以結合18S rRNA的單鏈切割位點D。26S蛋白酶體通過泛素-蛋白酶體途徑催化蛋白質的降解，從而從多方面調節真 核生物細胞周期，包括通過檢查點和細胞外環境調控細胞周期不同期間間的進程。已有的 數據表明多種參與催化20S蛋白酶體、19S調節子組成26S蛋白酶體的酶在細胞周期和細 胞生存期中扮演重要角色。Thaker等人應用干擾RNA篩選到55個對于人類膠質母細胞瘤 的存活具有重要作用的基因，其中22% (12/55)的基因組成20S和26S蛋白酶體亞基。它 們參與到細胞的多種過程中，包括蛋白質泛素化，嘌呤和嘧啶的代謝，核苷的切除修復，以 及NF-kappaB信號通路。雖然以上各種調控通路的異常在惡性細胞中都已觀察到，但蛋白 酶體功能缺陷與人類膠質瘤相關方面還缺乏研究。人類NOBl的同源基因已于數年前克隆出來。人NOBl基因編碼一個50KDa大小的 蛋白，包含一個PIN域(PilT amino terminus)和zinc ribbon域，主要在肝臟、肺和脾臟 表達。但是NOBl基因的具體功能還不清楚，到目前為止國際上無文獻報道有關NOBl基因 在腦膠質瘤疾病中應用的內容。
發明內容
本發明所要解決的技術問題之一是提供一種NOBl基因在腦膠質瘤疾病中的應用，不論在體內還是體外，NOBl對腦膠質瘤的發生都是必須的，并且根據NOBl基因在腦膠質瘤組織中的表達結果，為今后膠質瘤的生物靶向治療提供強有力手段。本發明涉及一種NOBl基因在腦膠質瘤疾病中的應用。所述的NOBl基因調控人神經膠質瘤細胞周期，降低NOBl水平導致細胞周期的Gl
期停滯。所述的NOBl基因調控人神經膠質瘤細胞的增殖，抑制NOBl使膠質瘤細胞生長遲滯。所述的NOBl基因對人神經膠質瘤細胞體外和體內的腫瘤形成有關，NOBl的減少 阻抑人神經膠質瘤細胞腫瘤的發生。相對于低級別膠質瘤和正常腦組織，所述的NOBl在高級別膠質瘤組織中表達水 平明顯增高。所述的高級別和低級別膠質瘤組織中NOBl表達水平具有顯著性差異，即P = 0.049。與正常腦組織相比，所述的NOBl基因在高級別的膠質瘤中的平均表達增加至近4 倍水平，即P = 0. 017，而在低級別膠質瘤中僅增加1. 5倍，即P = 0. 032。表達低水平NOBl即P = 0. 028的患者生存期超過24個月，表達較高水平NOBl即 P <0.01的患者存期短于24個月。所述的表達較高水平NOBl的膠質瘤患者預后較差。酵母NOBl可與19S調節子相互作用，在26S蛋白酶體的成熟過程中是必須的。本 發明預先用NOBl siRNA處理的人類膠質瘤細胞的細胞周期分布情況。在U373和A172膠 質瘤細胞系中，NOBl蛋白的下降導致S期的減少、Gl期的增加。在RNA干擾下U373、A172 細胞系中NOBl蛋白表達水平下降，細胞增殖也顯著延遲。這種生長抑制作用在瓊脂糖克隆 形成試驗和裸鼠異中移植試驗中也觀察到，提示NOBl在體外、體內試驗中對于人類膠質瘤 的形成都具有關鍵作用。通過對膠質瘤患者樣本NOBl表達水平的研究發現，隨著膠質瘤的 生長，NOBl表達上調。隨著膠質瘤惡性程度的增加、生存期的縮短，NOBl表達水平上調，提 示NOBl參與膠質瘤的生長、發展。已有研究顯示蛋白酶體通過調節細胞周期蛋白影響細胞周期進程。在細胞周期進 程中，蛋白酶體還影響⑶C25A、⑶C25B和⑶C25C的穩定性。有序的、暫時的降解調節分子 對于細胞的生長來說是必須的。因此，NOBl蛋白下降可能通過抑制蛋白酶體介導的細胞周 期蛋白的降解來阻止細胞增殖。此外，蛋白酶體還可通過影響半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶、 BCL2、NF-kB的活性來增強或降低細胞凋亡。本發明的研究說明了無論在體外還是體內， NOBl都參與膠質瘤的腫瘤形成中。而且，NOBl的表達水平高低還與腫瘤病理級別、膠質瘤 患者的預后相關。有益效果本發明通過研究，發現不論在體內還是體外NOBl對腦膠質瘤的發生都是必須的， 并且根據NOBl基因在腦膠質瘤組織中的表達結果，為今后膠質瘤的生物靶向治療提供強 有力手段。
圖 IWestern blot 和 RT-PCR 證實 NOBl siRNA 起作用；
圖2N0B1的降低后細胞群眾各細胞在細胞周期中所占比例；圖3人膠質瘤細胞轉染NOBl siRNA后的細胞活性及增值情況檢測；圖4A172和U373轉染NOBl siRNA后的體內及體外腫瘤生成試驗；圖5膠質瘤陽平中的NOB1 mRNA的表達；圖6檢測下游的分子無顯著變化。
具體實施方式
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明 而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人 員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定 的范圍。實施例1材料和方法細胞培養HEK293T 細胞以及膠質瘤細胞 A172 和 U373 購自 American Type Culture Collection (ATCC)公司。采用DMEM培養基，另外加入10 %胎牛血清、lOOU/mL青霉素和 100μ g/mL鏈霉素。細胞在孵化箱中培養，條件為37°C，濕化，含5% C02。RNA 提取人腦膠質瘤組織和正常腦組織在手術取樣后立即置于液氮中，后保存于-80°C冰 箱至RNA抽提。按Trizol reagent操作說明書抽提總RNA。細胞系A172和U373采用同樣 方法抽提RNA。RNA 逆轉錄和 Real-time PCR取2 μ g RNA參照M-MuLV逆錄酶操作說明書合成cDNA。取合成的cDNA (20 μ g)與 SYBR GreenMasterMix混合，在CFX96實時監測系統中進行擴增。每個樣本重復3次。NOBl 基因的相對表達量通過與內參β -Actin或者GAPDH比較得到。NOB1 基因，上游引物5 ‘ -ATCTGCCCTACAAGCCTAAAC-3，下游引物5 ‘ -TCCTCCTCCTCCTCCTCAC-3 ；β -Actin，上游引物5 ‘ -GGCGGCACCACCATGTACCCT-3，下游引物5 ‘ -AGGGGCCGGACTCGTCATACT-3 ‘；GAPDH,上游引物5 ‘ -GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3 ‘，下游引物5 ‘ -GAAGATGGTGATGGGATTTC-3 ‘。質粒構建、轉染和Western blot將NOBl的開放閱讀框序列插入pEGFP-Nl的NheI和SalI位點之間獲得FLAG標 記的真核細胞NOBl基因表達載體，pEGFP-FLAG-NOBl。另將4個NOBl基因的候選RNA干擾 序列以及1個負性對照RNA干擾序列插入到pLKD4. 0載體內，pLKD4. 0-siN0BlopEGFP-FLAG-NOBl 和 pLKD4. 0-siN0Bl 共轉染入 HEK293T 細胞。48 小時后，使用低 溫細胞溶解液(IOmM Tris-HCl,pH 7. 4, ImM EDTA,0. 1% Tritron X-100,0. 1%SDS)處理細 胞，并力口入蛋白酶抑制齊[J (2 μ g/mL aprotinin ； 10 μ g/mL antipain, 2 μ g/ml ρ印statin, and 2mM benzamide)。細胞溶解液離心分層(10，OOOg, 10min,4°C )，取上清 SDS-PAGE 電泳，轉移至PVDF膜，進行免疫標記。抗-FLAG抗體(1:10，000 ;Sigma)4°C孵化過夜。二抗(抗 辣根過氧化物酶抗體)室溫孵化lh。Western結果表明針對NOBl基因311-329位核苷酸 的NOBl-siRNA干擾效果最明顯。病毒包裝重組病毒包裝采用Lentivector 表達系統(PREI Co. LTD Sha nghai)。1· 2 X IO6 個 HEK293T細胞共轉染入15 μ g pLKD4. O-siNOBl或者負性對照siRNA載體，以及2個分別表 達Gag/Pol前體蛋白和糖蛋白VSV-G的包裝載體，劑量為10 μ g。轉染48小時后，取上清并 通過孔徑為0. 45 μ m的篩板篩選。流式細胞儀分析細胞周期細胞在不同周期(G1，S or G2/M期)，DNA成分不同。熒光染料propidium iodide (PI)與DNAl :1結合，因此檢測PI的熒光強度可以反映細胞內DNA含量。通過無血清培養基培養24小時，使得細胞周期同步化。然后將培養基換成加入生 長因子的完全培養基。48小時后，用胰蛋白酶-EDTA收細胞，冷PBS液沖洗兩次，70%乙醇 在-20°C固定2小時。固定的細胞壓制后在？1/1 妝86^^3(10(^8/1^ propidium iodide 和10 μ g/mLRNase Α)液中37°C避光復懸浮30分鐘，然后用尼龍過濾網過濾。1 X IO6個細 胞在FACscaliber II sorter和Cell Quest FACS系統中檢測。實驗重復三次，取平均值。 每次實驗均超過10，000個細胞。FACS Calibur自動分析出各周期的細胞所占百分比。集落形成能力的檢測軟瓊脂分析方法如先前描述[12]。準備了 6個培養皿，每皿中包含0. 5mL 0. 8% 瓊脂培養基。NOBl shRNA組及陰性對照慢病毒轉染組細胞在0.4%瓊脂培養基(0.8%高 瓊脂培養基等體積)中用胰蛋白酶消化，分離，再懸浮，并且每皿接種200個細胞。細胞在 37°C環境下培養14天。用GIEMSA(Chemic0n)染色后，在顯微鏡下觀察細胞集落數量并計數。細胞增殖的檢測A172或U373細胞分別給予2小時的4毫克/毫升的沖擊量BrdU(Sigma)。貼壁 培養細胞的間接免疫組化顯示，使用了抗核苷抗體(anti-BrdU)與辣根過氧化物酶二抗結 合后我們可以觀察細胞有無新DNA的合成。這些抗體是通過TMB過氧化物酶底物試劑盒生 產的。采用96孔讀板測定在550納米波長的吸收率。細胞活性通過轉換活細胞中MTT為 彩色的formazan化合物來檢測。簡單地說，用PBS洗滌細胞，并使細胞最終濃度為2 X IO4/ 毫升時懸浮。細胞懸浮液(2，000 cells ； 100 μ L)分配到96個培養皿中，并在37°C濕化CO2 溫箱中培養l-5d。為使細胞染色，每皿中加入10 μ L MTT(5mg/mL)并在37°C下培養4h，再 加入10%二甲基亞砜(DMS0，100 μ L)。后采用采用96孔讀板測定在550納米波長的吸收 率。每項試驗重復三遍。裸鼠移植試驗五六周大雌性BALB/C-nu/nu無菌鼠從上海的癌癥研究中心購買。這些動物在復 旦大學的動物研究中心層流架下的特殊無菌環境中養育。雌性BALB/C-nu/nu無菌鼠7-8 周大時，每只鼠在前肢皮下接種0.2mL的1.5 X IO7腫瘤細胞。每星期兩次使用輪尺在二個 維度上測量腫瘤大小，并且使用公式ν = 0. 5*長徑*短徑2計算其體積(mm3)。21天后腫 瘤從老鼠身上切除并且稱量，所有程序都由復旦大學動物護養使用委員會批準。
病人樣本
這項研究的神經膠質瘤標本由神經外科學上海學院提供。所有患者根據組織倫理 委員會批準的研究文件給予知情同意。組織從25名低級別神經膠質瘤(LGG，世界衛生組 織等級I-II)患者和30名高級別神經膠質瘤患者的手術中獲得。在患者的家庭都表示了 同意的情況下，從7名創傷患者的顱內減壓外科切除部分的正 常腦組織中獲得。用于這研 究的所有樣品都根據中國的臨床采樣規章執行。所有患者病理診斷由二位不同病理學家證 實。神經膠質瘤組織樣品的總核糖核酸進行了提取，并用實時PCR進行了 NOBl表達的檢測。 2010年3月對病人進行電話隨訪，并且確定其存活時間。統計分析t檢驗進行不同神經膠質瘤細胞系統計分析。對于神經膠質瘤組織樣品的實 驗，每個小組的NOBl mRNA的相對表達水平(正常腦、LGG和HGG)用MEAN士SE來表示， Mann-Whitney檢驗用于比較小組之間的差異。當研究NOBl的表達和患者的預后之間的關 系，我們首先編組了所有等級的神經膠質瘤患者分成存活時間長于及短于24個月的組，然 后用Marm-Whitney U測試比較這兩個小組之間NOBl表達的差異。然后分別分析在低級神 經膠質瘤和高級神經膠質瘤患者的預后。SPSS 15.0 (SPSS公司，芝加哥，美國)作為統計分 析軟件和顯著性差異的水平設定為P < 0. 05。結果si RNA干擾后人膠質瘤細胞NOBl表達降低編碼siNOBl或對照SiRNA的質粒和用flag標記的編碼NOBl質粒分別轉染入 HEK293T細胞。48h以后，這些細胞進行裂解并用含flag抗體的探針進行Western blot分 析。與對照組siRNA(圖1A)相比，NOBl蛋白質在siRNA處理以后減少了 90%。人神經膠質 瘤A172和U373細胞系皆高表達NOBl (無數據顯示)，為進一步證實siNOBl沉默對NOBl表 達的抑制作用，我們使用含NOBl siRNA和對照siRNA的慢病毒進行轉染。與非靶向siRNA 比較，如圖IB和C所顯示，使用siNOBl后80% NOBl mRNA沉默了。圖 1，(A)HEK293T 細胞用 GFP 空載體(列 1)禾Π GFP-NOB1-FLAG (列 2)禾口 GFP-NOB1 -FLAG+contro 1 siRNA(列 3)和 GFP-NOBl-FLAG+siNOBl (列 4)轉染。細胞裂解物 中的蛋白質用SDS-PAGE分離并轉移入PVDF膜中(此為FLAG抗體和GAPDH抗體)。(B, C) 通過RT-PCR證實siRNA的轉染致NOBl mRNA的減少。NOBl siRNA和非靶向siRNA慢病毒 載體都轉染如A172和U373細胞系。總RNA被提取并反轉錄成cDNA。降低的NOBl水平導致細胞周期的Gl期停滯要檢驗NOBl直接地調控細胞周期的假設，我們研究了 siNOBl轉染后，處于各個周 期的不同細胞的比例。shNOBl和陰性對照shRNA通過慢病毒轉入了 A172和U373細胞并且 通過熒光激活細胞分類(FACS)分析了其在細胞周期的作用。比較野生型和shRNA-轉染后 的細胞，在U373細胞(圖2B)和A172細胞(圖2A)中，shNOBl組都顯示了在S-期細胞的 顯著減少和在Gl期細胞數量的增加。圖2，轉染siNOBl組，對照siRNA組和不轉染組中(A)A172和(B)U373細胞群中 GLG2/M和S期在細胞周期中的比例。抑制NOBl使膠質瘤細胞生長遲滯為評價NOBl在人的神經膠質瘤細胞生存中的作用，A172和U373的細胞增長與減少的NOBl蛋白質表達進行了 MTT分析。如圖3A和B所顯示，減少NOBl導致了 A172和U373 大量細胞生長延緩，與在此非處理對照組在轉然后第三天即有差異(P < 0. 05)。第五天，減 少NOBl表達的A172細胞系的生長速度只相當于對照組的一半。siRNA陰性對照組細胞與 非處理對照組細胞比較沒有重大區別。進一步使用BrdU聯合分析證實了 NOBl在人神經膠質瘤細胞繁殖中的作用。24小 時后未觀察到siNOBl組與對照siRNA組有明顯區別。然而，72小時后siNOBl組由于NOBl 表達降低而明顯減少了 BrdU的攝取，與非處理對照相差較大。在U373細胞(圖3C和D) 也觀察到相似結果。總之，這些數據表明NOBl或許能調控人神經膠質瘤細胞的增殖。圖3，轉染siNOBl組，對照siRNA組和不轉染組中72小時候(A)A172和(B)U373 細胞群的MTT檢測情況。從第三天開始，各細胞群增殖情況便出現差異。(C)、(D)圖分別 為A172 and U373進行BrdU培養后的情況。數據皆為 均數士SD形式。各組間統計差異用 雙側 Student' s t-test (*P < 0. 05)檢測差別。NOBl的減少阻抑人神經膠質瘤細胞腫瘤發生為研究NOBl在人膠質瘤細胞中體外腫瘤發生作用，我們檢驗了 A172和U373在軟 瓊脂培養基上的細胞集落形成能力。在軟瓊脂培養基上，A172和U373細胞系NOBl的減少 導致了細胞集落形成能力的降低(P < 0. 01 ；圖4A-D)。為進一步證實降低NOBl水平在神 經膠質瘤細胞中腫瘤發生的作用，轉染NOBl shRNA或對照shRNA的A172細胞系被接種入裸 鼠側背。在腫瘤體積的變化監測了三周(圖4E)。21天后(圖4F)，siNOBl平均瘤體積是 697. 02mm3，用無轉染處理和陰性對照的shRNA瘤體積為分別為919. 56mm3、1077. 27mm3 (P =0. 006,P = 0. 005)。因此，與無轉染處理組比較，減少的NOBl蛋白質會強烈抑制人神經 膠質瘤細胞的腫瘤形成。這些數據表明NOBl對人神經膠質瘤細胞體外和體內的腫瘤形成 力是很重要的。圖4，(A，B)體外軟瓊膠平板上檢測NOBl的腫瘤生成作用。轉染siNOBl組，對照 siRNA組和不轉染組中A172被瓊脂包埋培養。37°C培養3周后，進行染色，并計數集落形成 數。(C，D)同樣方式處理的U373細胞的腫瘤生成作用。數據皆為均數士SD形式。各組間 統計差異用雙側Student' s t-test (*P < 0. 05)檢測差別。(E，F)體內移植物分析檢測 NOBl的腫瘤生成作用。腫瘤體積進行了連續的二維測量。并且使用公式ν = 0.5*長徑* 短徑2計算其體積(mm3)。數據皆為均數士SD形式。用單向ANOVA進行組間差異分析(*P < 0. 05)。NOBl在膠質瘤組織樣本中過表達且與不良預后相關通過實時定量RT-PCR的方法研究NOBl在膠質瘤患者樣本中的表達情況。納入研 究的患者其基本特點已列入表1。正如圖5A中所示，與正常腦組織相比，高級別的膠質瘤 中NOBl的平均表達增加至近4倍水平(P = 0. 017)，而低級別膠質瘤中僅增加1. 5倍(P = 0. 032)。高級和低級膠質瘤中NOBl表達水平具有顯著性差異(P = 0. 049)。鑒于NOBl在 膠質瘤患者中過表達，且與病理級別分類具有顯著性關聯，NOBl可能參與到腦腫瘤的發生 中。本試驗驗證了 NOBl表達情況與膠質瘤患者預后間的關系。在全部研究對象中，生存期 超過24個月的患者(共23人，包括13名LGG、10名HGG)表達低水平NOBl，而生存期短于 24個月的患者(共32人，包括12名LGG、20名HGG)表達較高水平的NOBl (P < 0. 01，圖 5B)。分別對低級別和高級別膠質瘤患者進行統計也得到了相似的結果，在低級別膠質瘤患者中P = 0. 028，在高級別膠質瘤患者中P < 0. 01 (圖5C、5D)。這些結果表明表達較高水 平的NOBl mRNA可能與相對較短的生存期相關。圖5，(A)實時RT-PCR顯示NOBl mRNA在LGG和HGG組織中都有上調(P = 0. 017 andP = 0.032)。(B)膠質瘤病人中，生存期超過24個月(23人，占41. 8%)的病人NOBl 的低表達，低于24個月(32人，58. 2%)的顯示NOBl高表達(P <0.01)。(C) LGG病人，生 存期超過24個月(13人，占52%)的病人NOBl的低表達，低于24個月(12人，48%)的顯 示NOBl高表達(P = 0. 028)。(D)HGG病人，生存期超過24個月(10人，占33%)的病人 NOBl的低表達，低于24個月(20人，67% )的顯示NOBl高表達(P < 0. 01)。NOBlmRNA的 相對表達量用均數士SD形式，用Marm-Whitney U test進行組間差異分析(*P < 0. 05. **P < 0. 01)。表1.納入研究病人的人口統計資 料
權利要求
一種NOB1基因在腦膠質瘤疾病中的應用。
2.根據權利要求1所述的一種NOBl基因在腦膠質瘤疾病中的應用，其特征在于所述 的NOBl基因調控人神經膠質瘤細胞周期，降低NOBl水平導致細胞周期的Gl期停滯。
3.根據權利要求1所述的一種NOBl基因在腦膠質瘤疾病中的應用，其特征在于所述 的NOBl基因調控人神經膠質瘤細胞的增殖，抑制NOBl使膠質瘤細胞生長遲滯。
4.根據權利要求1所述的一種NOBl基因在腦膠質瘤疾病中的應用，其特征在于所述 的NOBl基因對人神經膠質瘤細胞體外和體內的腫瘤形成有關，NOBl的減少阻抑人神經膠 質瘤細胞腫瘤的發生。
5.根據權利要求1所述的一種NOBl基因在腦膠質瘤疾病中的應用，其特征在于相對 于低級別膠質瘤和正常腦組織，所述的NOBl在高級別膠質瘤組織中表達水平明顯增高。
6.根據權利要求3所述的一種NOBl基因在腦膠質瘤疾病中的應用，其特征在于所述 的高級別和低級別膠質瘤組織中NOBl表達水平具有顯著性差異，即P = 0. 049。
7.根據權利要求1所述的一種NOBl基因在腦膠質瘤疾病中的應用，其特征在于與正 常腦組織相比，所述的NOBl基因在高級別的膠質瘤中的平均表達增加至近4倍水平，即P =0. 017，而在低級別膠質瘤中僅增加1. 5倍，即P = 0. 032。
8.根據權利要求1所述的一種NOBl基因在腦膠質瘤疾病中的應用，其特征在于表達 低水平NOBl即P = 0. 028的患者生存期超過24個月，表達較高水平NOBl即P < 0. 01的 患者存期短于24個月。
9.根據權利要求6所述的一種NOBl基因在腦膠質瘤疾病中的應用，其特征在于所述 的表達較高水平NOBl的膠質瘤患者預后較差。
全文摘要
本發明涉及一種NOB1基因在腦膠質瘤疾病中的應用，NOB1基因調控人神經膠質瘤細胞周期，降低NOB1水平導致細胞周期的G1期停滯；且調控人神經膠質瘤細胞的增殖，抑制NOB1使膠質瘤細胞生長遲滯；同時NOB1的減少可阻抑人神經膠質瘤細胞腫瘤的發生。本發明通過研究，發現不論在體內還是體外NOB1對腦膠質瘤的發生都是必須的，并且根據NOB1基因在腦膠質瘤組織中的表達結果，為今后膠質瘤的生物靶向治療提供強有力手段。
文檔編號C12N5/09GK101948921SQ20101028076
公開日2011年1月19日 申請日期2010年9月14日 優先權日2010年9月14日
發明者盧亦成, 周勁旭, 孫克華, 陳菊祥 申請人:中國人民解放軍第二軍醫大學