專利名稱：巨噬細胞體外誘導培養方法
技術領域：
本發明涉及一種細胞的培養方法。
背景技術：
巨唾細胞是機體重要免疫細胞之一，巨唾細胞不僅是病原微生物、壞死組織的主要清理細胞，巨噬細胞還具有抗原遞呈和分泌多種細胞因子的功能，在特異性免疫反應的誘發和免疫調節過程中起關健作用，巨噬細胞具有較高的研究價值和良好的應用前景，尤其在腫瘤或病毒疫苗的制備、及某些天然細胞因子的分離純化方面有極大的應用前景。目前巨噬細胞的培養主要采用直接培養法或誘導培養法。直接培養法即直接分離巨噬細胞進行培養，此方法操作比較繁瑣，巨噬細胞回收率不高，且分離到的細胞大多是成熟的巨噬細胞，在體外不再分裂增殖。誘導培養法騍利用外源性細胞因子將干細胞、單核細胞等前體細胞誘導成巨噬細胞的培養方法，前體細胞在誘導培養過程中可以分裂增殖，此培養方法雖可獲得大量的巨噬細胞，但存在前體細胞分離困難、培養費用較高的弊端。
發明內容
本發明的目的在于提供一種在外周血、新鮮組織和腹腔積液中的細胞直接誘導、激活巨唾細胞的巨噬細胞體外誘導培養方法，將從血液、組織或腹腔積液中分離到的單個核細胞用PRMI1640培養基調成2×106個細胞/ml后，置于37℃、5％CO2孵箱中，當培養基的PH值降至4或以下，所有培養細胞體積縮小、胞漿內顆粒增多、折光形變弱后，繼續培養至有少量細胞出現細胞體積逐漸變大、胞漿內顆粒減少、折光形變強，此時開始每天少量換液，待這些細胞進入快速分裂增殖時，再按常規方法換液、傳代即可。本發明方法將血液、組織或腹腔積液中分離到的單個核細胞直接培養，在細胞代謝所造成的酸性條件下，死亡細胞或其釋放的內容物可將巨噬細胞或前體細胞直接誘導激活為成熟的巨噬細胞，不需要特殊分離巨噬細胞或其前體細胞，同時也不需要加入任何外源性細胞因子，因此它具有如下優點1.本方法不需特殊分離巨噬細胞或其前體細胞，因而操作簡便，易于實施；2.本方法細胞分裂增殖活躍，細胞增殖倍數高，易于獲得足量的巨噬細胞；3.本方法不需加入外源性細胞因子，細胞培養成本低，利于實際推廣應用。
具體實施例方式本實施方式是利用從血液、組織或腹腔積液中分離到的單個核細胞直接進行誘導培養的方法，在培養過程中其他細胞全部死亡，而巨噬細胞前體細胞可活化增殖并成為成熟的巨噬細胞。巨噬細胞體外誘導培養方法為，將從血液、組織或腹腔積液中分離到的單個核細胞用PRMI1640培養基調成2×106個細胞/ml后，置于37℃、5％CO2孵箱中，此時不需換液、不傳代培養，當培養基極度變酸，即它的PH值降至4或以下，待所有培養細胞體積縮小、胞漿內顆粒增多、折光性變弱后，這說明其他培養細胞幾乎全部死亡，然后繼續培養，直至有少量細胞出現細胞體積逐漸變大、胞漿內顆粒減少、折光性變強，此時開始每天少量換液，這些細胞可進入快速分裂增殖狀態，并開始吞噬死亡細胞，隨著死亡細胞的減少，巨大吞噬細胞出現，再按常規方法換液、傳代即可。
權利要求
1.一種巨噬細胞體外誘導培養方法，其特征在于將從血液、組織或腹腔積液中分離到的單個核細胞用PRMI1640培養基調成2×106個細胞/ml后，置于37℃、5％CO2孵箱中，當培養基的PH值降至4或以下，所有培養細胞體積縮小、胞漿內顆粒增多、折光形變弱后，繼續培養至有少量細胞出現細胞體積逐漸變大、胞漿內顆粒減少、折光形變強，此時開始每天少量換液，待這些細胞進入快速分裂增殖時，再按常規方法換液、傳代即可。
全文摘要
巨噬細胞體外誘導培養方法，它涉及一種細胞的培養方法。現有的巨噬細胞培養方法存在細胞回收率低、前體細胞分離困難、培養費用較高的弊端。本發明巨噬細胞體外誘導培養方法為，將從血液、組織或腹腔積液中分離到的單個核細胞用PRMI1640培養基調成2×10
文檔編號C12N5/0786GK1609199SQ20041004406
公開日2005年4月27日 申請日期2004年11月17日 優先權日2004年11月17日
發明者袁小林, 李殿俊 申請人:哈爾濱醫科大學