在有用的轉基因植物中產生花生四烯酸和/或二十碳五烯酸的方法

專利名稱：：在有用的轉基因植物中產生花生四烯酸和/或二十碳五烯酸的方法專利說明在有用的轉基因植物中產生花生四烯酸和/或二十碳五烯酸的方法本發明涉及通過向植物中導入編碼具有Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶或者Δ5-去飽和酶活性的多肽的核酸，在轉基因的有用植物中產生花生四烯酸和/或二十碳五烯酸的方法。此外，有利地在所述有用的植物中表達編碼ω3-去飽和酶的基因。在該方法的另一有利的實施方案中，編碼脂肪酸或者脂類代謝生物合成中的多肽的其他核酸序列可以在植物中表達。這里尤其有利的核酸序列是編碼Δ8-去飽和酶、Δ12-去飽和酶、Δ15-去飽和酶、Δ4-去飽和酶、Δ9-延伸酶和/或Δ5-延伸酶活性的那些核酸序列。本發明還涉及根據本發明的方法中產生的油、脂類和/或脂肪酸在飼料或者食品、化妝品或者藥物中的用途。脂肪酸和三酰甘油酯在食品工業、動物營養、化妝品和制藥領域有許多應用。取決于它們是否是游離的飽和和不飽和的脂肪酸或者具有升高含量的飽和的或者不飽和脂肪酸的三酰甘油酯，它們適于多種不同的應用。多不飽和的ω3脂肪酸和ω6脂肪酸是動物飼料和人類食品的重要成分。多不飽和的長鏈ω3-脂肪酸如二十碳五烯酸(＝EPA，C20:5Δ5，8，11，14，17)或者二十二碳六烯酸(＝DHA，C22:6Δ4，7，10，13，16，19)由于它們在健康方面的多種作用而是人類營養的重要組分，所述作用包括兒童腦的發育、眼的功能性、激素和其他信號物質的合成，和心血管疾病、癌癥和糖尿病的預防(Poulos，ALipids301-14，1995；Horrocks，LAandYeoYKPharmacolRes40211-225，1999)。因此需要生產多不飽和的長鏈脂肪酸。由于當前人類食物的習慣組成，向食物中加入多不飽和ω3脂肪酸是尤其重要的，所述多不飽和ω3脂肪酸優先在魚油中發現。從而，例如，將多不飽和脂肪酸，如二十二碳六烯酸(＝DHA，C22:6Δ4，7，10，13，16，19)或者二十碳五烯酸(＝EPA，C20:5Δ5，8，11，14，17)加入嬰兒配方中以提高營養價值。下文中，將多不飽和脂肪酸稱作PUFA、PUFAs、LCPUFA或者LCPUFAs(多不飽和脂肪酸(polyunsaturatedfattyacids)，PUFA，長鏈多不飽和脂肪酸(longchainpolyunsaturatedfattyacids)，LCPUFA)。多種脂肪酸和甘油三酯主要從微生物如被孢霉屬(Mortierella)或者Schizochytrium或者從產油植物，如大豆、油籽油菜、藻類，如Crypthecodinium或者Phaeodactylum等得到，通常以它們的三酰甘油(＝甘油三酯＝三甘油)的形式得到。然而，它們還可以從動物，例如從魚得到。有利地通過水解制備游離脂肪酸。然而，極長鏈多不飽和脂肪酸如EPA、二高-γ-亞麻酸(C20:3Δ8，11，14)或花生四烯酸(ARA，C20:4Δ5，8，11，14)不在油料作物如油籽油菜、大豆、向日葵和紅花中合成。這些脂肪酸的常規天然來源為魚，如鯡、鮭魚、沙丁魚、平鲉、鰻魚、鯉魚、鱒魚、大比目魚、鯖、梭鱸或者鮪魚，或者藻類。取決于預期的用途，優選含有飽和或者不飽和脂肪酸的油。在人類營養中，例如，優選含有不飽和脂肪酸，特別是多不飽和脂肪酸的脂類。據稱多不飽和ω3脂肪酸對血液中的膽固醇水平有積極作用并且從而可能預防心臟病。通過向食物中加入這些ω3脂肪酸可以顯著減小心臟病、中風或者高血壓的風險。而且，ω3脂肪酸對與免疫學疾病如類風濕性關節炎有關的炎性、特別是慢性炎性過程有積極作用。因此將它們加入食品中，特別是加入飲食食品中，或者用于藥物。ω3-和ω6-脂肪酸是稱作類二十烷酸的組織激素(如前列腺素)的前體，所述組織激素衍生自二高-γ-亞麻酸、花生四烯酸和二十碳五烯酸、血栓烷和白三烯，血栓烷和白三烯衍生自花生四烯酸和二十碳五烯酸。從ω6-脂肪酸形成的類二十烷酸(稱作PG2系列)通常促進炎癥反應，而來自ω3-脂肪酸的類二十烷酸(稱作PG3系列)有很小或者沒有促炎效果。由于多不飽和脂肪酸的積極特征，過去已經嘗試利用涉及這些脂肪酸或者甘油三酯的合成的基因在多種生物中產生改變含量的不飽和脂肪酸。從而，WO91/13972和其美國同族專利描述了Δ9-去飽和酶。WO93/11245要求保護Δ15去飽和酶，WO94/11516要求保護Δ12去飽和酶。其他去飽和酶在例如EP-A-0550162，WO94/18337，WO97/30582，WO97/21340，WO95/18222，EP-A-0794250，Stukey等人，J.Biol.Chem.，265，199020144-20149，Wada等人，Nature347，1990200-203或Huang等人，Lipids34，1999649-659中描述。通常，通過導入合適的生物并隨后通過分析起始材料和產物而分析酶活性來表征膜結合的去飽和酶。Δ6-去飽和酶在WO93/06712、US5,614,393、WO96/21022、WO00/21557和WO99/27111中描述。該酶在轉基因生物中生產的應用描述于WO98/46763、WO98/46764和WO98/46765。在該上下文中，多種去飽和酶的表達和多不飽和脂肪酸的形成也在WO99/64616或者WO98/46776中描述和要求保護。可以將多不飽和脂肪酸根據它們的飽和模式分成兩大類ω6或ω3脂肪酸，它們具有代謝和功能上不同的活性。ω6或ω3脂肪酸花生四烯酸和EPA通過多種生物合成途徑在微生物如酵母中的合成描述于例如WO0159128、WO0012720、WO02077213和WO0208401中。ω6-代謝途徑的起始物質是脂肪酸亞油酸(18:2Δ9，12)，而ω3-途徑通過亞麻酸(18:3Δ9，12，15)進行。通過ω3去飽和酶的活性產生亞麻酸(Tocher等人1998，Prog.LipidRes.37，73-117；Domergue等人2002，Eur.J.Biochem.269，4105-4113)。哺乳動物，從而人，沒有對應的去飽和酶活性(Δ12-和ω3-去飽和酶)并且必須通過食物攝入這些脂肪酸(必需脂肪酸)。以這些前體開始，生理上重要的多不飽和的脂肪酸花生四烯酸(＝ARA，20:4Δ5，8，11，14)、一種ω6-脂肪酸和ω3-脂肪酸二十碳五烯酸(＝EPA，20:5Δ5，8，11，14，17)通過去飽和酶和延伸酶反應順序合成。在這方面，ω3-脂肪酸的施用在心血管疾病(Shimikawa2001，WorldRev.Nutr.Diet.88，100-108)、炎癥(Calder2002，Proc.Nutr.Soc.61，345-358)和關節炎(Cleland和James2000，J.Rheumatol.27，2305-2307)的治療中顯示出上述治療效果。迄今已知的產生花生四烯酸和/或二十碳五烯酸的方法具有一些缺點。所述方法通常產生兩種脂肪酸的混合物。唯一已知的用于產生具有低比例EPA的花生四烯酸的方法是真菌發酵方法。這是油來源，其對于營養生理學是次優的，因為它包含在人類食品中不存在的脂肪酸。花生四烯酸的另一種可能的來源是卵脂類。然而，這些包含高比例的磷脂和膽固醇，它們在食品中廣泛使用是不利的。高等植物包含多不飽和脂肪酸如亞油酸(C18:2)和亞麻酸(C18:3)。ARA和/或EPA在高等植物的種子油中根本沒有發現或者以僅僅以極小量存在(E.UccianiNouveauDictionnairedesHuilesVégétales.Technique&Documentation-Lavoisier，1995.ISBN2-7430-0009-0)。然而，在高等植物，優選在油料作物如油菜(oilseedrape)、亞麻子、向日葵和大豆中產生LCPUFA將是有利的，因為食品工業、動物營養和制藥目的所需的較大量的高質量LCPUFA可以經濟地得到。作為實例，DE10219203(VerfahrenzurHerstellungmehrfachinPflanzen[在植物中產生多不飽和脂肪酸的方法])首次描述了包含并且表達編碼LCPUFA生物合成酶并且因此產生LCPUFA的第一種轉基因植物。然而，這些植物產生的LCPUFA的量需要進一步優化以加工所述植物中存在的油。因此，為了在食品和/或動物飼料中富集這些多不飽和脂肪酸，仍然非常需要用于產生花生四烯酸和/或二十碳五烯酸的簡單的廉價方法。因此，目的是開發用于產生花生四烯酸和/或二十碳五烯酸的簡單、廉價、經濟的方法，其不具有上述缺點。此外，這種方法應該能夠以劃算的方式合成幾乎任何量的所述脂肪酸。除了有價值的產品外，花生四烯酸和/或二十碳五烯酸應該盡可能地與少數其他PUFA一樣包含僅僅ω3或ω6脂肪酸，有利地僅僅ω3脂肪酸。通過本發明的方法實現了該目的，該方法用于在轉基因有用的植物中產生花生四烯酸或者二十碳五烯酸或者花生四烯酸和二十碳五烯酸，其含量基于所述轉基因有用的植物的總脂類含量為按重量計至少4％，其中所述方法包括下面的步驟a)向所述有用的植物中導入至少一種編碼Δ6-去飽和酶的核酸序列，和b)向所述有用的植物中導入至少一種編碼Δ6-延伸酶的核酸序列，和c)向所述有用的植物中導入至少一種編碼Δ5-去飽和酶的核酸序列，和其中借助至少一種組成型啟動子和終止子在所述植物中表達步驟(a)到(c)中指出的序列。有利地，用于本發明的方法中并且編碼具有Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶或Δ5-去飽和酶活性的多肽的上述核酸序列選自由下面組成的組a)具有SEQIDNO1、SEQIDNO3、SEQIDNO5或SEQIDNO7中所示序列的核酸序列，或者b)由于遺傳密碼簡并性，可以從SEQIDNO2、SEQIDNO4、SEQIDNO6或SEQIDNO8中所示的氨基酸序列衍生的核酸序列，或者c)SEQIDNO1、SEQIDNO3、SEQIDNO5或SEQIDNO7中所示核酸序列的衍生物，其編碼在氨基酸水平上與SEQIDNO2、SEQIDNO4、SEQIDNO6或SEQIDNO8至少40％同源并且具有Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶或Δ5-去飽和酶活性的多肽。在該方法的優選實施方案中，將編碼ω3-去飽和酶的核酸序列額外導入有用的植物中。所述編碼ω3-去飽和酶的核酸序列有利地選自a)具有SEQIDNO9中所示序列的核酸序列，或者b)由于遺傳密碼簡并性可以從SEQIDNO10中所示的氨基酸序列衍生的核酸序列，或者c)SEQIDNO9中所示核酸序列的衍生物，其編碼在氨基酸水平上與SEQIDNO10至少40％同源并且具有ω3-去飽和酶活性的多肽。有利地，根據本發明的方法產生的多不飽和脂肪酸ARA和/或EPA包含ω3或ω6脂肪酸系列的具有至少兩個、有利地三個、四個或五個雙鍵的其他LCPUFAS。在該方法中產生的脂肪酸有利地在脂肪酸鏈中有18或20個碳原子，并且優選在脂肪酸鏈中包含20個碳原子。有利地，使用用于該方法中并且編碼Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶或Δ5-去飽和酶和/或ω3-去飽和酶的核酸在小程度上轉化或者根本不轉化、有利地根本不轉化飽和脂肪酸。在小程度上指與多不飽和脂肪酸相比，所述飽和脂肪酸以小于5％的活性，有利地小于3％、尤其有利地小于2％、非常尤其優選小于1、0.5、0.25或0.125％的活性被轉化。除了該方法中產生的脂肪酸ARA和/或EPA外，這些可以額外地在所述方法中作為單獨的脂肪酸產生或者可以以脂肪酸混合物存在。有利地，上述編碼Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶或Δ5-去飽和酶和/或ω3-去飽和酶的核酸序列與脂肪酸和/或脂類代謝的其他基因，如編碼具有Δ12-去飽和酶、Δ9-延伸酶、Δ8-去飽和酶、Δ5-延伸酶和/或Δ4-去飽和酶活性的多肽的核酸序列組合表達。用于本發明方法中的核酸有利地在營養組織(＝體細胞組織)中表達。對于本發明的目的，營養組織指組織的特征是通過有絲分裂增殖。該類型的組織也可以通過無性生殖(＝單性生殖)和繁殖產生。如果個體的數目在連續世代增殖，那么使用術語繁殖。通過無性生殖產生的這些個體與它們的親本基本上相同。此類組織的實例為葉、花、根、莖干、地上或者地下纖匐枝(側枝、匍匐莖)、根莖、芽、塊莖，如塊根或者塊莖、生殖球、繁殖體、繁殖芽、小鱗莖或者具鱗根出條。此類組織也可以通過假胎萌、真胎萌或者人工引起的胎萌產生。但是其中有利地發生表達的營養組織也包括無配子種子生殖產生的種子，典型如菊科(Asteraceae)、禾本科((Poaceae)或者薔薇科((Rosaceae)。用于根據本發明方法中的核酸在生殖組織(種系組織)中以小程度表達(如果表達)。此類組織的實例是有性生殖，即減數分裂細胞產生的組織，如由于有性過程產生的種子。小程度是指在RNA和/或蛋白質水平測量的表達與營養組織相比小于5％、有利地小于3％、尤其有利地小于2％、非常尤其優選小于1、0.5、0.25或0.125％。對于本發明的目的，生殖組織指由于減數分裂形成的組織。方法中產生的多不飽和脂肪酸有利地結合在磷脂和/或三酰甘油酯中，但是也可以在生物中作為游離脂肪酸或者以其他脂肪酸酯的形式存在。它們可以作為“純產品”或者有利地以多種脂肪酸的混合物或者不同磷脂如磷脂酰甘油、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺和/或磷脂酰絲氨酸和/或三酰甘油、單酰甘油和/或二酰甘油的混合物的形式存在。該方法中產生的LCPUFAS——ARA和/或EPA有利地以磷脂酰膽堿和/或磷脂酰乙醇胺和/或三酰甘油存在。所述三酰甘油可以還包含其他脂肪酸，如具有4到6個碳原子的短鏈脂肪酸、具有8到12個碳原子的中等鏈脂肪酸或者具有14到24個碳原子的長鏈脂肪酸，并且優選包含長鏈脂肪酸，長鏈脂肪酸尤其優選為C18或C20脂肪酸的LCPUFA。根據本發明的方法有利地產生具有多不飽和的C18和/或C20脂肪酸分子的脂肪酯，在脂肪酯中具有至少兩個雙鍵，有利地在脂肪酯中具有至少3、4或者5個雙鍵，尤其有利地在脂肪酯中具有4或者5個雙鍵，這有利地導致合成亞油酸(＝LA，C18:2Δ9，12)、γ-亞麻酸(＝GLA，C18:3Δ6，9，12)、十八碳四烯酸(＝SDA，C18:4Δ6，9，12，15)、二高-γ-亞麻酸(＝DGLA，20:3Δ8，11，14)、花生四烯酸(ARA，C20:4Δ5，8，11，14)或者二十碳五烯酸(EPA，C20:4Δ5，8，11，14)或者它們的混合物，優選ARA和/或EPA。非常尤其優選產生ω3脂肪酸EPA。具有多不飽和的C18和/或C20脂肪酸分子的脂肪酯可以以油或者脂類的形式，例如，以諸如鞘脂類、磷酸甘油酯、脂類、糖脂例如糖鞘脂類、磷脂，如磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇或者雙磷脂酰甘油、單酰基甘油酯、二酰基甘油酯、三酰甘油酯，或者其他脂肪酸酯，如乙酰輔酶A酯的化合物形式從用于產生脂肪酸酯的植物分離，所述化合物包含具有至少2、3、或4、優選3或4個雙鍵的多不飽和脂肪酸，并且有利地以它們的二酰基甘油酯、三酰甘油酯和/或以磷脂酰酯，特別優選以三酰甘油酯、磷脂酰膽堿和/或磷脂酰絲氨酸的形式分離。除了這些酯，植物還包含作為游離脂肪酸存在或者結合其他化合物的多不飽和脂肪酸。通常，多種上述化合物(脂肪酸酯和游離脂肪酸)存在于生物中，大概分布為按重量計80到90％甘油三酯，按重量計2到5％甘油二酯，按重量計5到10％甘油一酯，按重量計1到5％游離脂肪酸，按重量計2到8％磷脂，多種化合物的總量為按重量計100％。根據本發明的方法產生的LCPUFAs以按重量計至少4％，有利地按重量計至少5、6、7、8、9或10％，優選按重量計至少11、12、13、14或15％，尤其優選按重量計至少16、17、18、19或20％，非常尤其優選按重量計至少25、30、35或40％的含量產生，所述含量是基于轉基因植物中的總脂肪酸。在該上下文中，三酰甘油和/或磷脂酰甘油、有利地磷脂酰膽堿和/或磷脂酰絲氨酸包含根據本發明的方法產生的脂肪酸ARA和/或EPA，基于總脂肪酸，含量為按重量計至少10％、優選按重量計至少11、12、13、14或15％，尤其優選按重量計至少16、17、18、19或20％，非常尤其優選按重量計至少25、26、27、28、29、30或31％，最優選按重量計至少32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44或45％。脂肪酸有利地以結合的形式產生。借助用于本發明方法中的核酸，可能將這些不飽和脂肪酸連接到有利地產生的甘油三酯的sn1、sn2和/或sn3位置。有利地，至少11％的三酰甘油是雙取代的，即，在sn1和sn2或者sn1和sn3位被取代。三取代的三酰甘油也是可檢測到的。因為本發明方法中的起始化合物亞油酸(C18:2)和亞麻酸(C18:3)分別進行多種反應步驟，所以該方法的最后產物如花生四烯酸或者二十碳五烯酸(EPA)不以絕對純的產物得到，而是最終產物總是也含有痕量或者較大量的前體。例如，如果起始植物含有亞油酸和亞麻酸，那么最終產物如ARA或者EPA將作為混合物存在。基于具體最終產物的量，前體將有利地構成按重量計不超過20％，優選按重量計不超過15％，尤其優選按重量計不超過10％，非常尤其優選按重量計不超過5％。有利地，在根據本發明的方法中，轉基因植物僅僅產生作為最終產物的ARA或者EPA，其為結合的或者游離酸的形式。根據本發明方法產生的脂肪酸酯或者脂肪酸混合物有利地包含6到15％棕櫚酸、1到6％硬脂酸；7-85％油酸；0.5到8％異油酸、0.1到1％花生酸、7到25％飽和脂肪酸、8到85％單不飽和脂肪酸，和60到85％多不飽和脂肪酸，每種情況下都基于100％和生物的總脂肪酸含量。有利地，脂肪酸酯或者脂肪酸混合物中存在的多不飽和脂肪酸優選為至少0.1；0.2；0.3；0.4；0.5；0.6；0.7；0.8；0.9或1％花生四烯酸(基于總脂肪酸含量)。此外，根據本發明方法產生的脂肪酸酯或者脂肪酸混合物有利地包含選自下面脂肪酸的芥酸(13-二十二碳烯酸)、蘋婆酸(9，10-亞甲基十八碳-9-烯酸)、錦葵酸(8，9-亞甲基十七碳-8-烯酸)、大風子油酸(環戊烯十二烷酸)、呋喃脂肪酸(9，12-環氧十八碳-9，11-二烯酸)、斑鳩菊酸(9，10-環氧十八碳-12-烯酸)、果脂酸(6-十八碳炔酸)、6-十九碳炔酸、santalbicacid(反11-十八碳烯-9-炔酸)、6，9-十八碳烯炔酸、pyrulicacid(反10-十七烯-8-炔酸)、crepenyninicacid(9-十八烯-12-炔酸)、13，14-二氫oropheicacid、十八碳-13-烯-9，11-二炔酸、傘形花子油酸(順-6-十八烯酸)、9順，12反-十八碳二烯酸、金盞花素酸(calendulicacid)(8反10反12順-十八碳三烯酸)、梓甙酸(catalpicacid)(9反11反13順-十八碳三烯酸)、桐酸(9順11反13反-十八碳三烯酸)、jacaricacid(8順10反12順-十八碳三烯酸)、石榴酸(9順11反13順-十八碳三烯酸)、麥餅樹酸(9順11反13反15順-十八碳四烯酸)、皮諾斂酸(pinolenicacid)(全-順-5，9，12-十八碳三烯酸)、laballenicacid(5，6-十八碳二烯丙二烯酸)、蓖麻油酸(12-羥油酸)和/或革蓋菌素酸(coriolicacid)(13-羥-9順，11反-十八碳二烯酸)的脂肪酸。上面提到的脂肪酸通常有利地在根據本發明的方法產生的脂肪酸酯或者脂肪酸混合物中以痕量發現，也就是說，基于總脂肪酸，它們的存在小于30％，優選小于25％、24％、23％、22％或21％、特別優選小于20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％或5％、非常特別優選小于4％、3％、2％或1％。在本發明的另一優選形式中，這些上面提到的脂肪酸基于總脂肪酸小于0.9％、0.8％、0.7％、0.6％或0.5％，特別優選小于0.4％、0.3％、0.2％、0.1％。根據本發明的方法產生的脂肪酸酯或者脂肪酸混合物有利地基于總脂肪酸占小于0.1％，和/或者沒有丁酸，沒有膽固醇，沒有魚酸(＝二十二碳五烯酸，C22:5Δ4，8，12，15，21)并且沒有尼生酸(二十四碳六烯酸，C23:6Δ3，8，12，15，18，21)。用于根據本發明方法的核酸序列相對于非轉基因的有用植物可以增加多不飽和脂肪酸的產量至少50％，有利地至少80％，尤其有利地至少100％，非常尤其有利地至少150％，見實施例。化學上純的多不飽和脂肪酸或者脂肪酸組合物也可以通過上述方法合成。為此，以已知方式從植物分離脂肪酸或者脂肪酸組合物，所述方式為例如通過提取、蒸餾、結晶、層析或者這些方法的組合。這些化學純的脂肪酸或者脂肪酸組合物有利地用于食品工業、化妝品領域和特別是制藥工業領域。原則上，所有雙子葉或者單子葉有用的植物都適于根據本發明的方法。有用的植物指用于人和動物的食物生產、奢侈消費品、纖維和藥品生產的植物，如谷物，如谷類、稻、小麥、大麥、粟、燕麥、黑麥、蕎麥；如塊莖，如馬鈴薯、樹薯、batate、山藥等，如糖類植物，例如，甘蔗或者甜菜；如豆類，例如豆、豌豆、蕓豆等等；如油和脂肪植物，如大豆、油籽油菜、向日葵、紅花、亞麻子、camelina等等。有利的植物選自下面科的植物科槭樹科(Aceraceae)、獼猴桃科(Actinidiaceae)、漆樹科(Anacardiaceae)、傘形科(Apiaceae)、檳榔科(Arecaceae)、菊科(Asteraceae)、、樺木科(Betulaceae)、紫草科(Boraginaceae)、十字花科(Brassicaceae)、鳳梨科(Bromeliaceae)、大麻科(Cannabaceae)、美人蕉科(Cannaceae)、忍冬科(Caprifoliaceae)、藜科(Chenopodiaceae)、旋花科(Convolvulaceae)、葫蘆科(Cucurbitaceae)、薯蕷科(Dioscoreaceae)、胡頹子科(Elaeagnaceae)、杜鵑花科(Ericaceae)、大戟科(Euphorbiaceae)、豆科(Fabaceae)、山毛櫸科(Fagaceae)、醋栗科(Grossulariaceae)、胡桃科(Juglandaceae)、樟科(Lauraceae)、百合科(Liliaceae)、亞麻科(Linaceae)、錦葵科(Malvaceae)、桑科(Moraceae)、芭蕉科(Musaceae)、木犀科(Oleaceae)、酢漿草科(Oxalidaceae)、罌粟科(Papaveraceae)、禾本科(Poaceae)、蓼科(Polygonaceae)、石榴科(Punicaceae)、薔薇科(Rosaceae)、茜草科(Rubiaceae)、蕓香科(Rutaceae)、玄參科(Scrophulariaceae)、茄科(Solanaceae)、梧桐科(Sterculiaceae)和敗醬科(Valerianaceae)。可以提及的實例是下面的植物，其選自漆樹科如黃連木屬(Pistacia)、芒果屬(Mangifera)、腰果屬(Anacardium)例如阿月混子(Pistaciavera[阿月混子實])、芒果(Mangiferindica[芒果])或腰果(Anacardiumoccidentale[腰果])的屬和種、菊科如金盞花屬(Calendula)、紅藍花屬(Carthamus)、矢車菊屬(Centaurea)、菊苣屬(Cichorium)、菜薊屬(Cynara)、向日葵屬(Helianthus)、萵苣屬(Lactuca)、Locusta、萬壽菊屬、纈草屬(Valeriana)例如金盞花(Calendulaofficinalis[普通金盞花])、紅花(Carthamustinctorius[紅花])、矢車菊(Centaureacyanus[矢車菊])、菊苣(Cichoriumintybus[菊苣])、洋薊(Cynarascolymus[朝鮮薊])、向日葵(Helianthusannus[向日葵])、萵苣(Lactucasativa)、皺葉萵苣(Lactucacrispa)、芋(Lactucaesculenta)、毒萵苣的某些種(LactucascariolaL.ssp.Sativa)、LactucascariolaL.var.integrata、LactucascariolaL.var.integrifolia、萵苣romana亞種(Lactucasativasubsp.Romana)、Locustacommunis、萵苣纈草(Valerianalocusta[沙拉蔬菜])、香葉萬壽菊(Tageteslucida)、萬壽菊(Tageteserecta)或細葉萬壽菊(Tagetestenuifolia)[非洲或法國金盞花]的屬和種、傘形科如胡蘿卜屬(Daucus)例如胡蘿卜(Daucuscarota[胡蘿卜])的屬和種、樺木科如榛屬(Corylus)例如歐洲榛(Corylusavellana)或榛子(Coryluscolurna[榛子])的屬和種、紫草科如Borago，例如，如下的屬和種Boragoofficinalis[琉璃苣]，十字花科如蕓苔屬(Brassica)、亞麻薺屬(Camelina)、Melanosinapis、白芥屬(Sinapis)、擬南芥屬(Arabadopsis)例如歐洲油菜(Brassicanapus)、蕪青屬某些種(Brassicarapassp.[油菜])、野生歐白芥(Sinapisarvensis)、芥菜(Brassicajuncea)、Brassicajunceavar.juncea、皺葉芥菜(Brassicajunceavar.crispifolia)、大葉芥菜(Brassicajunceavar.foliosa)、黑芥(Brassicanigra)、Brassicasinapioides、亞麻薺(Camelinasativa)、芥菜(Melanosinapiscommunis[芥菜])、甘藍(Brassicaoleracea[飼用甜菜])或擬南芥(Arabidopsisthaliana)的屬和種、鳳梨科如鳳梨屬(Anana)、Bromelia(菠蘿)例如菠蘿(Ananacomosus)、Ananasananas或Bromeliacomosa[菠蘿]的屬和種、番木瓜科如番木瓜屬(Carica)例如番木瓜(Caricapapaya[番木瓜])的屬和種、大麻科如大麻屬(Cannabis)例如大麻(Cannabissativa[大麻])的屬和種、旋花科如番薯屬(Ipomea)、旋花屬(Convolvulus)例如甘薯(Ipomoeabatatus)、提琴葉牽牛花(Ipomoeapandurata)、Convolvulusbatatas、Convolvulustiliaceus、Ipomoeafastigiata、Ipomoeatiliacea、三裂葉薯(Ipomoeatriloba)或Convolvuluspanduratus[甜薯、番薯]的屬和種、藜科如甜菜屬(Betavulgaris)例如甜菜(Betavulgaris)、Betavulgarisvar.altissima、甜菜普通變種(Betavulgarisvar.vulgaris)、Betamaritima、甜菜宿根變種Betavulgarisvar.perennis、Betavulgarisvar.Conditiva或Betavulgarisvar.esculenta[甜菜]的屬和種、葫蘆科如南瓜屬(Cucurbita)例如筍瓜(Cucurbitamaxima)、灰子南瓜(Cucurbitamixta)、西葫蘆(Cucurbitapepo)或南瓜(Cucurbitamoschata[西葫蘆/南瓜])的屬和種、胡頹子科如胡頹子屬(Elaeagnus)例如油橄欖(Oleaeuropaea[橄欖])的屬和種、杜鵑花科如山月桂屬(Kalmia)例如闊葉山月桂(Kalmialatifolia)、狹葉山月桂(Kalmiaangustifolia)、小葉山月桂(Kalmiamicrophylla)、沼澤山月桂(Kalmiapolifolia)、西洋山月桂(Kalmiaoccidentalis)、Cistuschamaerhodendros或山月桂(Kalmialucida[山月桂])的屬和種、大戟科如木薯屬(Manihot)、Janipha、麻風樹屬(Jatropha)、蓖麻屬(Ricinus)例如木薯(Manihotutilissima)、Janiphamanihot、Jatrophamanihot、Manihotaipil、甜木薯(Manihotdulcis)、Manihotmanihot、Manihotmelanobasis、木薯(Manihotesculenta[木薯])或蓖麻(Ricinuscommunis[蓖麻])的屬和種、豆科如豌豆屬(Pisum)、合歡屬(Albizia)、Cathormion、Feuillea、Inga、Pithecolobium、金合歡屬(Acacia)、含羞草屬(Mimosa)、Medicajo、大豆屬(Glycine)、扁豆屬(Dolichos)、菜豆屬Phaseolus、大豆屬(Soybean)例如豌豆(Pisumsativum)、飼料豌豆(Pisumarvense)、Pisumhumile[豌豆]、Albiziaberteriana、合歡(Albiziajulibrissin)、闊莢合歡(Albizialebbeck)、Acaciaberteriana、Acacialittoralis、Albiziaberteriana、Albizziaberteriana、Cathormionberteriana、Feuilleaberteriana、Ingafragrans、Pithecellobiumberterianum、Pithecellobiumfragrans、Pithecolobiumberterianum、Pseudalbizziaberteriana、Acaciajulibrissin、Acacianemu、Albizianemu、Feuilleeajulibrissin、Mimosajulibrissin、Mimosaspeciosa、Sericanrdajulibrissin、闊莢金合歡(Acacialebbeck)、Acaciamacrophylla、大葉合歡(Albizialebbeck)、Feuilleealebbeck、大葉含羞草(Mimosalebbeck)、Mimosaspeciosa、紫苜蓿(Medicagosativa)、野苜蓿(Medicagofalcata)、雜交苜蓿(Medicagovaria)[紫花苜蓿]、大豆(Glycinemax)、鐮扁豆(Dolichossoja)、寬葉蔓豆(Glycinegracilis)、大豆(Glycinehispida)、大菜豆(Phaseolusmax)、Sojahispida或Sojamax[大豆]的屬和種、牻牛兒苗科(Geraniaceae)如天竺葵屬(Pelargonium)、椰子屬(Cocos)、Oleum例如椰子(Cocosnucifera)、茶麋子天竺葵(Pelargoniumgrossularioides)或椰子油(Oleumcocois[椰子])的屬和種、禾本科如甘蔗屬(Saccharum)例如甘蔗(Saccharumofficinarum)的屬和種、胡桃科如胡桃屬(Juglans)、Wallia例如胡桃(Juglansregia)、Juglansailanthifolia、山核桃(Juglanssieboldiana)、灰核桃(Juglanscinerea)、Walliacinerea、Juglansbixbyi、加州黑核桃(Juglanscalifornica)、印度黑核桃(Juglanshindsii)、Juglansintermedia、Juglansjamaicensis、大核桃(Juglansmajor)、Juglansmicrocarpa、黑核桃(Juglansnigra)或胡桃(Wallianigra)[胡桃]的屬和種、樟科如鱷梨屬(Persea)、月桂屬(Laurus)例如月桂(Laurusnobilis[bay])、鱷梨(Perseaamericana)、鱷梨油(Perseagratissima)或Perseapersea[avocado]的屬和種、豆科如落花生屬(Arachis)例如落花生(Arachishypogaea[花生])的屬和種、亞麻科如亞麻屬(Linum)、Adenolinum屬例如亞麻(Linumusitatissimum)、Linumhumile、奧地利亞麻(Linumaustriacum)、Linumbienne、窄葉亞麻(Linumangustifolium)、瀉亞麻(Linumcatharticum)、金黃亞麻(Linumflavum)、大花亞麻(Linumgrandiflorum)、Adenolinumgrandiflorum、劉易斯亞麻(Linumlewisii)、那旁亞麻(Linumnarbonense)、宿根亞麻(Linumperenne)、宿根亞麻劉易斯變種(Linumperennevar.lewisii)、Linumpratense或亞麻子(Linumtrigynum[亞麻子])的屬和種、Lythrarieae如石榴屬(Punica)例如石榴(Punicagranatum[pomegranate])的屬和種、錦葵科(Malvaceae)如棉屬(Gossypium)例如陸地棉(Gossypiumhirsutum)、樹棉(Gossypiumarboreum)、海島棉(Gossypiumbarbadense)、草棉(Gossypiumherbaceum)或瑟伯棉(Gossypiumthurberi[棉])的屬和種、芭蕉科(Musaceae)如芭蕉屬(Musa)例如香蕉(Musanana)、小果野蕉(Musaacuminata)、大蕉(Musaparadisiaca)、芭蕉屬的某些種(Musaspp.[banana])的屬和種、柳葉菜科(Onagraceae)如Camissonia屬、月見草屬(Oenothera)例如月見草(Oenotherabiennis)或夜來香(Camissoniabrevipes[月見草])的屬和種、棕櫚科(Palmae)如油棕屬(Elaeis)，例如以下的屬和種油棕(Elaeisguineensis[油棕櫚])、罌粟科(Papaveraceae)如罌粟屬(Papaver)，例如以下的屬和種東方罌粟(Papaverorientale)、虞美人(Papaverrhoeas)、長莢罌粟(Papaverdubium[罌粟])、胡麻科(Pedaliaceae)如胡麻屬(Sesamum)例如胡麻(Sesamumindicum[sesame])的屬和種、胡椒科(Piperaceae)如胡椒屬(Piper)、Artanthe、草胡椒屬(Peperomia)、Steffensia例如樹胡椒(Piperaduncum)、Piperamalago、狹葉胡椒(Piperangustifolium)、大胡椒(Piperauritum)、萎葉(Piperbetel)、蓽澄茄(Pipercubeba)、蓽菝(Piperlongum)、胡椒(Pipernigrum)、假蓽拔(Piperretrofractum)、Artantheadunca、Artantheelongata、長胡椒(Peperomiaelongata)、Piperelongatum、Steffensiaelongata[cayennepepper]的屬和種、禾本科(Poaceae)如大麥屬(Hordeum)、黑麥屬(Secale)、燕麥屬(Avena)、高梁屬(Sorghum)、須芒草屬(Andropogon)、絨毛草屬(Holcus)、黍屬(Panicum)、稻屬(Oryza)、玉蜀黍屬(Zea(maize))、小麥屬(Triticum)例如大麥(Hordeumvulgare)、芒穎大麥草(Hordeumjubatum)、鼠大麥草(Hordeummurinum)、短芒大麥草(Hordeumsecalinum)、栽培二棱大麥(Hordeumdistichon)、Hordeumaegiceras、六列大麥(Hordeumhexastichon)、六棱大麥(Hordeumhexastichum)、不規則大麥(Hordeumirregulare)、大麥(Hordeumsativum)、短芒大麥草(Hordeumsecalinum)[大麥]、黑麥(Secalecereale[黑麥])、燕麥(Avenasativa)、野燕麥(Avenafatua)、地中海紅燕麥(Avenabyzantina)、Avenafatuavar.sativa、雜種燕麥(Avenahybrida[燕麥])、二色高梁(Sorghumbicolor)、石茅高梁(Sorghumhalepense)、甜高梁(Sorghumsaccharatum)、高梁(Sorghumvulgare)、Andropogondrummondii、二色絨毛草(Holcusbicolor)、Holcussorghum、Sorghumaethiopicum、Sorghumarundinaceum、Sorghumcaffrorum、垂穗高梁草(Sorghumcernuum)、工藝高梁(Sorghumdochna)、Sorghumdrummondii、硬高粱草(Sorghumdurra)、Sorghumguineense、Sorghumlanceolatum、多脈高粱草(Sorghumnervosum)、甜高梁(Sorghumsaccharatum)、Sorghumsubglabrescens、垂葉高梁草(Sorghumverticilliflorum)、高梁(Sorghumvulgare)、石茅高梁(Holcushalepensis)、Sorghummiliaceum、黍粟(Panicummilitaceum[millet])、稻(Oryzasativa)、Oryzalatifolia[稻]、玉米(Zeamays[maize])、小麥(Triticumaestivum)、硬粒小麥(Triticumdurum)、圓柱小麥(Triticumturgidum)、Triticumhybernum、馬卡小麥(Triticummacha)、普通小麥(Triticumsativum或Triticumvulgare)[小麥]、紫球藻科(Porphyridiaceae)如Chroothece屬、Flintiella屬、Petrovanella屬、紫球藻屬(Porphyridium)、Rhodella、Rhodosorus、Vanhoeffenia例如紫球藻(Porphyridiumcruentum)的屬和種、山龍眼科(Proteaceae)如澳洲堅果屬(Macadamia)例如全緣葉澳洲堅果(Macadamiaintergrifolia[macadamia])的屬和種，茜草科(Rubiaceae)如咖啡屬(Coffea)例如咖啡屬(Coffea)某些種、小果咖啡(Coffeaarabica)、中果咖啡(Coffeacanephora)或大果咖啡(Coffealiberica[coffee])、玄參科(Scrophulariaceae)如毛蕊花屬(Verbascum)例如以下的屬和種毛瓣毛蕊花(Verbascumblattaria)、東方毛蕊花(Verbascumchaixii)、密葉毛蕊花(Verbascumdensiflorum)、Verbascumlagurus、長葉毛蕊花(Verbascumlongifolium)、Verbascumlychnitis、Verbascumnigrum、奧林匹克毛蕊花(Verbascumolympicum)、Verbascumphlomoides、紫毛蕊花(Verbascumphoenicum)、Verbascumpulverulentum或毛蕊花(Verbascumthapsus[verbascum])、茄科(Solanaceae)如辣椒屬(Capsicum)、煙草屬(Nicotiana)、茄屬(Solanum)、番茄屬(Lycopersicon)例如以下的屬和種辣椒(Capsicumannuum)、Capsicumannuumvar.glabriusculum、五色椒(Capsicumfrutescens[pepper])、紅椒(Capsicumannuum[paprika])、煙草(Nicotianatabacum)、花煙草(Nicotianaalata)、長頭煙草(Nicotianaattenuata)、光煙草(Nicotianaglauca)、Nicotianalangsdorffii、Nicotianaobtusifolia、Nicotianaquadrivalvis、Nicotianarepanda、黃花煙草(Nicotianarustica)、Nicotianasylvestris[煙草]、馬鈴薯(Solanumtuberosum[番茄])、茄(Solanummelongena[eggplant])、番茄(Lycopersiconesculentum)、Lycopersiconlycopersicum、梨形番茄(Lycopersiconpyriforme)、紅茄(Solanumintegrifolium)或番茄(Solanumlycopersicum)[番茄]、梧桐科(Sterculiaceae)如可可樹屬(Theobroma)例如可可樹(Theobromacacao[可可])的屬和種或山茶科(Theaceae)如山茶屬(Camellia)例如大葉茶(Camelliasinensis[茶])的屬和種。在該方面的有利的實施方案中，使用的有用的植物是包含大量脂類化合物的油料植物，如花生、油菜、卡諾拉油菜、向日葵、紅花(Carthamustinctoria)、罌粟、芥菜、大麻、蓖麻、橄欖、芝麻、金盞花、石榴、月見草、毛蕊花、大薊、野玫瑰、榛子、杏仁、澳洲堅果、鱷梨、月桂、西葫蘆、亞麻子、大豆、阿月混子、琉璃苣、樹(油棕櫚樹、椰子樹或胡桃樹)或作物例如玉米、小麥、黑麥、燕麥、小黑麥、稻、大麥、棉、木薯(manioc)、胡椒、萬壽菊、茄科例如馬鈴薯、煙草、茄子和番茄、蠶豆屬的種、豌豆、紫花苜蓿或灌木(咖啡、可可、茶)、柳屬的種和多年生牧草及飼料作物。有利的植物根據本發明是油料植物如花生、油菜、蕓苔、向日葵、紅花、罌粟、芥菜、大麻、蓖麻、橄欖、金盞花、石榴、月見草、西葫蘆/南瓜、亞麻子、大豆、琉璃苣、樹(油棕櫚樹、可可樹)。尤其優選富含C18:2和/或C18:3脂肪酸的植物，如向日葵、紅花、煙草、毛蕊花、芝麻、棉、西葫蘆/南瓜、罌粟、月見草、胡桃、亞麻子、大麻、大薊或者紅花。非常尤其優選紅花、向日葵、罌粟、月見草、胡桃、亞麻子或大麻。對于根據本發明所述的方法有利的是除了在方法步驟(a)到(c)中導入的核酸外，還向植物中導入編碼脂肪酸或脂類代謝的其他核酸，并且任選導入編碼ω3-去飽和酶的核酸序列。原則上，可能有利地組合使用脂肪酸或者脂類代謝的任何基因與用于根據本發明方法中的核酸序列，所述核酸序列編碼Δ6-延伸酶、Δ6-去飽和酶、Δ5-去飽和酶和/或ω3-去飽和酶[為了本發明目的，將復數形式理解為包含單數，并且反之亦然]；選自酰基輔酶A脫氫酶、酰基ACP[＝酰基載體蛋白]去飽和酶、酰基ACP硫酯酶、脂肪酸酰基轉移酶、酰基-輔酶A溶血磷脂酰基轉移酶、脂肪酸合酶、脂肪酸羥化酶、乙酰基-輔酶A羧化酶、酰基輔酶A氧化酶、脂肪酸去飽和酶、脂肪酸炔屬酶(acetylenase)、脂加氧酶、三酰甘油脂肪酶、氧化丙二烯合酶、氫過氧化物裂合酶或脂肪酸延伸酶的脂肪酸和脂類代謝中的基因有利地與所述Δ6-延伸酶、Δ6-去飽和酶、Δ5-去飽和酶和/或ω3-去飽和酶組合使用。尤其優選使用選自Δ4-去飽和酶、Δ8-去飽和酶、Δ9-去飽和酶、Δ12-去飽和酶、Δ5-延伸酶或Δ9-延伸酶的基因與上述所述Δ6-延伸酶、Δ6-去飽和酶、Δ5-去飽和酶和/或ω3-去飽和酶的基因組合，可能組合使用單種基因或者多種基因。用于根據本發明方法中的ω3-去飽和酶應該有利地使得ω6生物合成途徑可能向ω3生物合成途徑偏轉，有利地導致C18:2-向C18:3脂肪酸的偏轉。ω3-去飽和酶的這些性質有利地使得生物、有利地植物或者真菌中的脂肪酸譜從ω6脂肪酸偏向ω3脂肪酸。還有利地的是所述ω3-去飽和酶轉變多種磷脂，如磷脂酰膽堿(＝PC)、磷脂酰肌醇(＝PIS)或磷脂酰乙醇胺(＝PE)。最后，在中性脂類(＝NL)，如在甘油三酯中也可以見到去飽和產物。由于用于本發明方法中核酸的酶活性(所述核酸編碼具有Δ6-延伸酶、Δ6-去飽和酶、Δ5-去飽和酶和/或ω3-去飽和酶活性的多肽)，有利地組合編碼脂肪酸或者脂類代謝的多肽，如具有Δ4-、Δ-5-、Δ-6-、Δ8-、Δ12-去飽和酶或Δ5-、Δ-6-或Δ9-延伸酶活性的其他多肽的核酸序列，在本發明的方法中可以產生多種多不飽和脂肪酸。取決于用于根據本發明的方法的有用植物的選擇，可以以游離或者結合的形式產生多種多不飽和脂肪酸的混合物或者單種多不飽和脂肪酸如EPA或者ARA。取決于起始植物中主要的脂肪酸組成(C18:2-或C18:3脂肪酸)，所產生的脂肪酸來自C18:2脂肪酸，如GLA、DGLA或ARA，或者來自C18:3脂肪酸，如SDA、ETA或EPA。如果用于該方法的植物中存在的唯一不飽和的脂肪酸是亞油酸(＝LA，C18:2Δ9，12)，那么所述方法可以僅僅產生GLA、DGLA和ARA，其可以是游離脂肪酸或者結合的形式。如果用于該方法的植物中存在的唯一不飽和的脂肪酸是α-亞麻酸(＝ALA，C18:3Δ9，12，15)，如亞麻子中的情況，那么該方法可以僅僅產生SDA、ETA和/或者EPA，它們都可以作為脂肪酸或者以結合形式存在，如上述。通過修飾該方法中使用并且涉及合成的酶Δ6-延伸酶、Δ6-去飽和酶、Δ5-去飽和酶和/或ω3-去飽和酶的活性，有利地組合脂類或脂肪酸代謝的其他基因，可能在植物中特異產生僅僅個別產物。有利地，取決于生物或者植物中存在的脂肪酸，合成僅僅ARA或者EPA或者其混合物，其用作合成的起始物質。因為所述合成涉及生物合成鏈，所以生物中存在的各自的最終產物不是純的物質。在終產物中也總是存在少量前體化合物。基于EPA或者ARA終產物或者它們的混合物，這些少量達到按重量計小于20％，有利地按重量計小于15％，尤其有利地按重量計小于10％，非常尤其有利地按重量計小于5、4、3、2或1％。除了直接在植物內部產生本發明方法的起始脂肪酸外，脂肪酸在原則上還可以從外界喂飼。在植物內產生優選是由于經濟的原因。ω3-去飽和酶的優選底物是亞油酸(C18:2Δ9，12)、γ-亞麻酸(C18:3Δ6，9，12)、二十碳二烯酸(C20:2Δ11，14)、二高-γ-亞麻酸(C20:3Δ8，11，14)和花生四烯酸(C20:4Δ5，8，11，14)。為了在上述用于產生多不飽和脂肪酸含量有利地得到升高的油和/或甘油三酯的方法中提高產量，增加合成脂肪酸的起始產物的量是有利的；這可以例如通過向生物中導入編碼Δ12去飽和酶多肽的核酸實現。在包含油酸的有用植物如產油生物如十字花科如蕓苔屬，例如油菜；胡頹子科如胡頹子屬，例如油橄欖的屬和種或豆科如大豆屬，例如具有高的油酸的大豆的屬和種中這種方法尤其有利。因為這些生物僅有低的亞油酸(Mikoklajczak等，JournaloftheAmericanoilsChemicalSociety，38，1961，678-681)，以上提到的Δ12去飽和酶用于產生起始物質亞油酸是有利的。本發明方法中所用的核酸有利地來自植物如藻類，例如草綠藻科的藻類如異毛藻屬(Heteromastix)、Mammella、Mantoniella、微單藻屬(Micromonas)、腎藻屬、Ostreococcus、綠枝藻屬(Prasinocladus)、Prasinococcus、Pseudoscourfielda、Pycnococcus、塔胞藻屬(Pyramimonas)、Scherffelia、扁藻屬例如Heteromastixlongifillis、Mamiellagilva、Mantoniellasquamata、Micromonaspusilla、綠腎藻(Nephroselmisolivacea)、Nephroselmispyriformis、圓形腎藻(Nephroselmisrotunda)、Ostreococcustauri、Ostreococcussp.、Prasinocladusascus、Prasinocladuslubricus、Pycnococcusprovasolii、Pyramimonasamylifera、Pyramimonasdisomata、Pyramimonasobovata、Pyramimonasorientalis、Pyramimonasparkeae、Pyramimonasspinifera、Pyramimonassp.、Tetraselmisapiculata、Tetraselmiscarteriaformis、周氏扁藻(Tetraselmischui)、皺葉扁藻(Tetraselmisconvolutae)、Tetraselmisdesikacharyi、纖細扁藻(Tetraselmisgracilis)、Tetraselmishazeni、Tetraselmisimpellucida、Tetraselmisinconspicua、Tetraselmislevis、有斑扁藻(Tetraselmismaculata)、Tetraselmismarina、Tetraselmisstriata、Tetraselmissubcordiformis、Tetraselmissuecica、Tetraselmistetrabrachia、Tetraselmistetrathele、Tetraselmisverrucosa、Tetraselmisverrucosafo.Rubens或Tetraselmissp.的屬和種或選自裸藻科的藻類如囊胞藻屬(Ascoglena)、變胞藻屬(Astasia)、膠柄藻屬、Cyclidiopsis、裸藻屬、擬裸藻屬(Euglenopsis)、Hyalophacus、克氏藻屬(Khawkinea)、鱗孔藻屬、扁裸藻屬、陀螺藻屬(Strombomonas)或囊裸藻屬例如梭形裸藻(Euglenaacus)、膝曲裸藻(Euglenageniculata)、細小裸藻、Euglenamixocylindracea、喙狀裸藻(Euglenarostrifera)、綠色裸藻(Euglenaviridis)、Colaciumstentorium、圓柱囊裸藻(Trachelomonascylindrica)或旋轉囊裸藻(Trachelomonasvolvocina)的屬和種。所用核酸有利地來自裸藻屬、Mantoniella或Ostreococcus屬的藻類。其他有利的植物是藻類如等鞭金藻屬(Isochrysis)或隱甲藻屬、藻類/硅藻如海鏈藻屬或褐指藻屬、蘚類如劍葉蘚屬或角齒蘚屬、或者高等植物如報春花科(Primulaceae)例如Aleuritia、Calendulastellata、刺狀骨籽菊(Osteospermumspinescens)或Osteospermumhyoseroides、微生物如真菌例如曲霉屬(Aspergillus)、破囊壺菌屬、疫霉屬、蟲霉屬、毛霉屬或被孢霉屬，細菌如希瓦氏菌，酵母或動物如線蟲例如隱桿線蟲、昆蟲、蛙、海參或魚。本發明經分離的核酸序列有利地源自脊椎動物目的動物。所述核酸序列優選地源自下面的綱脊椎動物綱；Euteleostomi，輻鰭魚綱(Actinopterygii)；新鰭魚亞綱(Neopterygii)；硬骨魚類(Teleostei)；Euteleostei、原鰭魚總目(Protacanthopterygii)、鮭形目(Salmoniformes)；鮭科(Salmonidae)或大馬哈魚屬(Oncorhynchus)或脊椎動物(Vertebrata)、兩棲綱(Amphibia)、無尾兩棲目(Anura)、負子蟾科(Pipidae)、非洲爪蟾屬或無脊椎動物(Evertebrata)例如原索動物門(Protochordata)、被囊亞門(Tunicata)、海參綱(Holothuroidea)、海鞘科(Cionidae)例如Amarouciumconstellatum、Botryllusschlosseri、玻璃海鞘、Molgulacitrina、Molgulamanhattensis、Perophoraviridis或Styelapartita。所述核酸尤其有利地源自真菌、動物、或源自植物如藻類或蘚類，優選地源自鮭形目如鮭科，如鮭屬，例如來自虹鱒、Truttatrutta或亞東鮭(Salmotruttafario)的屬和種，源自藻類如Mantoniella或Ostreococcus，或源自硅藻如海鏈藻屬或褐指藻屬或者源自藻類如隱甲藻屬。上述核酸序列或者它們衍生物或者同源物在本發明的方法中變得有利，所述衍生物或者同源物編碼的多肽保留所述所述核酸序列編碼的蛋白質的酶促活性。將所述序列單獨或者與編碼Δ12-去飽和酶、Δ4-去飽和酶、Δ5-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ5-延伸酶、Δ6-延伸酶和/或ω3-去飽和酶的核酸序列組合克隆到表達構建體中并用于導入生物中并在該生物中表達。由于它們的構建，這些表達構建體使得能夠以有利的和最佳的方式合成將在本發明的方法中產生的多不飽和脂肪酸。在優選實施方案中，該方法還包括得到細胞或者全植物的步驟，所述細胞或者全植物包含用于所述方法中的核酸序列，其編碼Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶、Δ5-去飽和酶和/或ω3-去飽和酶，其中所述細胞和/或有用的植物還可以包含脂類或者脂肪酸代謝的其他核酸序列。優選用于該方法的這些核酸序列有利地單獨或者與編碼脂肪酸或者脂類代謝蛋白質的其他核酸序列組合摻入到至少一種基因構建體和/或載體中用于表達，并且最后轉化到細胞或者植物中。在另一優選實施方案中，所述方法還包括從有用的植物得到油、脂類或者游離脂肪酸的步驟。以這種方式產生的細胞或者以這種方式產生的有用植物有利地是產油植物、蔬菜植物、生菜植物或觀賞植物的細胞，或者植物自身，如上文解釋。例如，對于植物細胞、植物組織或者植物器官的情況，培養指在培養基上或內培養，或者在基質，例如以溶液培養、盆栽或者在耕地上培養完整植物。對于本發明，“轉基因的”或“重組的”意指如核酸序列、表達盒(＝基因構建體)或載體，其包含用于根據本發明方法的核酸序列，或者用用于根據本發明方法的核酸序列、表達盒或者載體轉化的植物，例如，通過遺傳工程方法產生的所有那些構建體，其中a)所述核酸序列，或b)功能連接于所述核酸序列的遺傳控制序列，例如啟動子，或c)a)和b)均不處于它們天然的遺傳環境中或均已經通過遺傳工程方法修飾，對這種修飾而言可采取例如一個或多個核苷酸殘基的替代、添加、缺失、倒位或插入。將天然遺傳環境理解為意指源生物中的天然基因組位點或染色體位點或在基因組文庫中的存在。在為基因組文庫的情況下，優選至少部分保留所述核酸序列的天然遺傳環境。所述環境位于所述核酸序列的至少一側并且具有至少50bp、優選地至少500bp、尤其優選地至少1000bp、最為優選地至少5000bp的序列長度。天然存在的表達盒-例如用于本發明方法的所述核酸序列(其序列編碼具有對應的Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶、Δ5-去飽和酶和/或ω3-去飽和酶活性的蛋白質)的天然啟動子與編碼具有Δ12-去飽和酶、Δ4-去飽和酶、Δ8-去飽和酶、Δ9-延伸酶和/或Δ5-延伸酶活性的核酸序列有利地組合，當經過非天然、合成的(“人工的”)方法例如通過誘變處理修飾后變成了轉基因的表達盒。合適的方法在美國5,565,350或WO001/15815中描述。如上述，用于本發明目的的轉基因植物意指方法中所用的核酸不處于它們在所述植物的基因組中的天然位點處，對這類核酸而言可同源或異源性地表達。然而如上述，轉基因也意指即便本發明的核酸處于植物基因組中它們的天然位置上，這種序列相對于天然序列已經過了修飾，和/或天然序列的調節序列已經過了修飾。轉基因優選指本發明方法中使用的核酸在基因組內非天然位點處的表達，即發生了這種核酸的同源表達，或優選地異源表達。優選的轉基因生物是有用的植物，如產油植物、蔬菜植物、生菜植物或觀賞植物，它們都有利地選自植物科，其選自下面的科槭樹科(Aceraceae)、獼猴桃科(Actinidiaceae)、漆樹科(Anacardiaceae)、傘形科(Apiaceae)、檳榔科(Arecaceae)、菊科(Asteraceae)、檳榔科、樺木科(Betulaceae)、紫草科(Boraginaceae)、十字花科(Brassicaceae)、鳳梨科(Bromeliaceae)、大麻科(Cannabaceae)、美人蕉科(Cannaceae)、忍冬科(Caprifoliaceae)、藜科(Chenopodiaceae)、旋花科(Convolvulaceae)、葫蘆科(Cucurbitaceae)、薯蕷科(Dioscoreaceae)、胡頹子科(Elaeagnaceae)、杜鵑花科(Ericaceae)、大戟科(Euphorbiaceae)、豆科(Fabaceae)、山毛櫸科(Fagaceae)、醋栗科(Grossulariaceae)、胡桃科(Juglandaceae)、樟科(Lauraceae)、百合科(Liliaceae)、亞麻科(Linaceae)、錦葵科(Malvaceae)、桑科(Moraceae)、芭蕉科(Musaceae)、木犀科(Oleaceae)、酢漿草科(Oxalidaceae)、罌粟科(Papaveraceae)、禾本科(Poaceae)、蓼科(Polygonaceae)、石榴科(Punicaceae)、薔薇科(Rosaceae)、茜草科(Rubiaceae)、蕓香科(Rutaceae)、玄參科(Scrophulariaceae)、茄科(Solanaceae)、梧桐科(Sterculiaceae)和敗醬科(Valerianaceae)。用于本發明方法的核酸、表達盒或者載體的合適的宿主植物原則上并且有利地是能夠合成脂肪酸、特別是不飽和脂肪酸，或者適于表達重組基因的任何有用的植物。可以提到的實例是植物如擬南芥屬、菊科，如金盞花屬，或者有用的植物如大豆、花生、蓖麻、向日葵、玉米、棉、亞麻、油籽油菜、椰子、油椰、紅花或可可豆。其他有利的植物在本申請的別處列出。通常使用微生物作為中間宿主制備轉基因有用的植物。此類可使用的中間宿主細胞在Goeddel，GeneExpressionTechnologyMethodsinEnzymology185，AcademicPress，SanDiego，CA(1990)中提及。用于該目的的有利的可使用的表達菌株為例如具有較低蛋白酶活性的那些菌株。它們描述于例如Gottesman，S.，GeneExpressionTechnologyMethodsinEnzymology185，AcademicPress，SanDiego，California(1990)119-128。包含根據本發明的方法中合成的多不飽和脂肪酸的轉基因植物可以有利地直接上市，不需要分離合成的油、脂類或者脂肪酸。該類型的上市是尤其有利的。在根據本發明方法中的植物中是如上述的完整植物和任何植物部分、植物器官或者植物部分，如葉、莖、種子、根、塊莖、花藥、纖維、根毛、莖、胚、愈傷組織、子葉、葉柄、所收獲的材料、植物組織、可繁殖的組織和來自實際轉基因植物的細胞培養物和/或可用于產生轉基因植物的細胞培養物。在本上下文中，種子包含種子的所有部分如種皮、表皮細胞、種子細胞、胚乳或胚組織。然而，本發明方法中產生的化合物可以從植物以它們的油、脂肪、脂類和/或游離脂肪酸的形式分離。該方法中產生的多不飽和脂肪酸可以通過從它們生長的培養物或者從田間收獲植物或者植物細胞來獲得。這可以通過壓榨或者提取植物部分，優選地植物種子來分離。在本上下文中，油、脂類或者游離脂肪酸通過公知的冷敲打(cold-beating)或冷榨獲得，由于壓榨而無需加熱。為了更容易地破裂植物部分尤其種子，它們事先經過粉碎、蒸熱或烘烤。隨后經如此方式預處理的種子可用溶劑如溫己烷壓榨或提取。然后去除溶劑。以這種方式，可以分離96％以上的該方法中產生的化合物。然后可以進一步處理如精煉以這種方法得到的產物。這包括首先除去例如植物粘液和懸浮物。“除去礦泥“可通過酶或例如通過加入酸如磷酸而化學/物理地完成。此后游離脂肪酸用堿例如氫氧化鈉溶液處理去除。得到的產物用水徹底洗滌以去除產物中殘留的堿，然后干燥。為了除去產物中殘留的色素，利用濾土或活性碳漂白產物。最后例如利用蒸汽使產物脫臭。通過該方法所產生的PUFA或LCPUFA優選是C18和/或C20脂肪酸分子，有利地是C20脂肪酸分子，這些脂肪酸分子具有至少兩個雙鍵，優選地具有三、四或五個雙鍵。這些C18-和/或C20脂肪酸分子可以以油、脂類或游離脂肪酸的形式從植物中分離。合適的轉基因植物的實例是上述那些。因此本發明的一個實施方案是通過以上描述的方法產生的所述油、脂類或脂肪酸或它們的級分，用于生產飼料、食品、化妝品或者藥物。如以上所描述，在每一情況下，以100％為基礎并且以植物的總脂肪酸含量為基礎，以這種方式得到的所述油、脂類或脂肪酸有利地包含6至15％的棕櫚酸、1至6％的硬脂酸、7-85％的油酸、0.5至8％的異油酸、0.1至1％的花生酸、7至25％的飽和脂肪酸、8至85％的單不飽和脂肪酸和60至85％的多不飽和脂肪酸。以總脂肪酸含量為基礎，這些脂肪酸酯或脂肪酸混合物，如磷脂酰脂肪酸酯或者甘油三酯優選地包含按重量計至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％的花生四烯酸和/或按重量計至少20、21、22、23、24或25、有利地至少26、27、28、29或30、尤其有利地至少31、32、33、34、35、36、37、38、39或40、非常尤其有利地至少41、42、43、44、45％二十碳五烯酸作為有利的多不飽和脂肪酸。而且通過本發明方法產生的脂肪酸酯或脂肪酸混合物有利地包含選自如下的脂肪酸芥酸(二十二碳烯-13酸)、蘋婆酸(9，10-亞甲基十八碳-9-烯酸)、錦葵酸(8，9-亞甲基十七碳-8-烯酸)、大風子油酸(環戊烯十二烷酸)、呋喃脂肪酸(9，12-環氧十八碳-9，11-二烯酸)、斑鳩菊酸(9，10-環氧十八碳-12-烯酸)、果脂酸(6-十八碳炔酸)、6-十九碳炔酸、santalbicacid(反11-十八碳烯-9-炔酸)、6，9-十八碳烯炔酸、pyrulicacid(反10-十七烯-8-炔酸)、crepenyninicacid(9-十八烯-12-炔酸)、13，14-二氫oropheicacid、十八碳-13-烯-9，11-二炔酸、傘形花子油酸(順-6-十八烯酸)、9順，12反-十八碳二烯酸、金盞花素酸(8反10反12順-十八碳三烯酸)、梓甙酸(9反11反13順-十八碳三烯酸)、石榴酸(9順11反13順-十八碳三烯酸)、jacaricacid(8順10反12順-十八碳三烯酸)、石榴酸(9順11反13順-十八碳三烯酸)、麥餅樹酸(9順11反13反15順-十八碳四烯酸)、皮諾斂酸(全-順-5，9，12-十八碳三烯酸)、laballenicacid(5，6-十八碳二烯丙二烯酸)、蓖麻油酸(12-羥油酸)和/或革蓋菌素酸(13-羥-9順，11反-十八碳二烯酸)。通常上面提到的脂肪酸有利地僅在本發明方法產生的脂肪酸酯或脂肪酸的混合物中痕量地存在，也就是說以總脂肪酸為基礎，它們的含量小于30％，優選地小于25％、24％、23％、22％或21％，尤其優選地小于20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％或5％、非常尤其優選地小于4％、3％、2％或1％。在本發明更優選的形式中，以總脂肪酸為基礎，以上這些提到的脂肪酸的含量小于0.9％、0.8％、0.7％、0.6％或0.5％，尤其優選地小于0.4％、0.3％、0.2％、0.1％。以總脂肪酸為基礎，由本發明方法所產生的脂肪酸酯或脂肪酸混合物有利地包含小于0.1％和/或無丁酸、無膽固醇、魚酸(＝二十二碳五烯酸，C22:5Δ4，8，12，15，21)以及無尼生酸(二十四碳六烯酸，C23:6Δ3，8，12，15，18，21)。根據本發明的另一實施方案是根據本發明的方法產生的油、脂類、脂肪酸和/或脂肪酸組合物在飼料、食品、化妝品或者藥品中的用途。根據本發明的方法得到的油、脂類、脂肪酸或脂肪酸混合物可以以技術人員已知的方式與動物來源的其他油、脂類、脂肪酸或脂肪酸混合物如魚油混合。以這種方式產生并且由植物和動物成分組成的這些油、脂類、脂肪酸或脂肪酸混合物也可以用于生產飼料、食品、化妝品或者藥品。術語“油”、“脂類”或“脂肪”理解為意指包含不飽和的、飽和的，優選地已酯化的脂肪酸的脂肪酸混合物。油、脂類或脂肪優選地具有高的多不飽和的游離脂肪酸或有利地具有高的酯化的脂肪酸，特別是亞油酸、γ-亞麻酸、二高γ-亞麻酸、花生四烯酸、α-亞麻酸、十八碳四烯酸、二十碳四烯酸或二十碳五烯酸。不飽和酯化的脂肪酸的含量優選地占約30％含量，50％的含量更為優選，60％、70％、80％或更高的含量尤其優選。為了分析，脂肪酸的含量例如可在脂肪酸經酯轉換轉化為甲酯后通過氣相色譜測定。油、脂類或脂肪可包含多種其它飽和或不飽和的脂肪酸，例如金盞花素酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸等。在油或脂肪中的多種脂肪酸含量可變化，這尤其取決于起始生物。在方法中所產生的有利地具有至少2、3、4或者5個雙鍵，尤其有利地具有4或5個雙鍵的多不飽和脂肪酸如上所述是脂肪酸酯，例如鞘脂類、磷酸甘油酯、脂類酯、糖脂、磷脂酯、單酰甘油酯、二酰甘油酯、三酰甘油酯或其它脂肪酸酯，優選磷脂酯和/或三酰甘油酯。從通過本發明方法制備的有利地具有至少三、四或五個雙鍵的多不飽和脂肪酸酯開始，所存在的多不飽和脂肪酸經堿例如KOH或NaOH水溶液處理，或者有利地于存在醇例如甲醇或乙醇時經酸水解，或者經酶切割釋放并且通過例如相分離及隨后例如H2SO4的酸化作用而分離。這類脂肪酸也可無需以上描述的處理步驟直接釋放。它們導入植物或植物細胞后，用于方法中的核酸可以存在于單獨的質粒上，或者有利地整合到宿主細胞的基因組中。對于整合到基因組的情況，整合可以是隨機的或者通過重組實現，使得天然基因被導入的拷貝替代，其中細胞對希望的化合物的產生被調節或者通過使用反式基因，使得該基因有效連接功能表達單位，該功能表達單位包含確保基因表達的至少一種序列和確保功能轉錄的基因的多聚腺苷酸化的至少一種序列。有利地通過多表達盒或者構建體將核酸導入生物中用于多平行表達，有利地導入植物中用于基因的多平行種子特異的表達。蘚類和藻類是唯一已知的產生大量多不飽和脂肪酸如花生四烯酸(ARA)和/或二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)的植物系統。蘚類在膜脂中包含PUFA；而藻類、與藻類有關的生物及少數真菌也在三酰甘油級分中積累大量的PUFA。這是為什么從三酰甘油級分中積累PUFA的株系所分離的核酸分子尤其有利地適用于本發明方法并且因此用于修飾植物如有用的植物，如油料植物，例如油菜、卡諾拉油菜、亞麻子、大麻、大豆、向日葵和琉璃苣中脂類和PUFA產生系統的原因。因此這類核酸分子可有利地用于本發明的方法。用于本發明方法中的核酸(其編碼具有Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶，Δ5-去飽和酶和/或ω3-去飽和酶活性的多肽)和/或使用的其他核酸，如編碼脂肪酸或脂類代謝的多肽的核酸的合適的底物有利地是C16-、C18-或C20脂肪酸。其中所述脂肪酸或脂類代謝的多肽選自酰基-輔酶A脫氫酶、酰基ACP[＝酰基載體蛋白]去飽和酶、酰基ACP硫酯酶、脂肪酸酰基轉移酶、酰基-輔酶A溶血磷脂酰基轉移酶、脂肪酸合酶、脂肪酸羥化酶、乙酰基輔酶A羧化酶、酰基輔酶A氧化酶、脂肪酸去飽和酶、脂肪酸炔屬酶、脂加氧酶、三酰甘油脂肪酶、氧化丙二烯合酶、氫過氧化物裂合酶或脂肪酸延伸酶。方法中作為底物轉化的脂肪酸優選地以它們酰基輔酶A酯形式和/或它們的磷脂酯形式轉化。為產生本發明的長鏈PUFA，飽和的、單不飽和的C16脂肪酸和/或多不飽和C18脂肪酸取決于底物首先必須通過去飽和酶和/或延伸酶的酶活性去飽和和/或延伸或者僅僅去飽和然后通過延伸酶延伸至少兩個碳原子。在一次延伸循環后，延伸酶的酶活性從C16脂肪酸產生了C18脂肪酸或者從C18脂肪酸產生了C20脂肪酸，并且經過兩輪延伸循環后，從C16脂肪酸產生了C20脂肪酸。本發明方法中所用的去飽和酶和延伸酶的活性優選地產生C18和/或C20脂肪酸，在脂肪酸分子中有利地具有至少兩個雙鍵，優選地具有三、四或五個雙鍵，尤其優選地產生C20脂肪酸，在脂肪酸分子中具有至少四個雙鍵。根據本發明方法的特別優選的產物是二高-γ-亞麻酸、花生四烯酸、和/或二十碳五烯酸。在脂肪酸中有至少兩個雙鍵的C18脂肪酸可以以游離脂肪酸或者酯，如磷脂、糖脂、鞘脂、磷酸甘油酯、單酰基甘油、二酰基甘油或者三酰甘油的形式通過本發明的酶促活性延長。脂肪酸、油、脂類或脂肪在有利使用的植物中優選的生物合成部位例如通常是種子或種子的細胞層，因此對方法中所用的核酸進行種子特異性表達是有意義的。然而，顯然脂肪酸、油或脂類的生物合成不必限定于種子組織，而是也可在植物的所有其它部分例如在表皮細胞或在塊莖中以組織特異性方式進行。有利地，通過本發明方法的合成在營養(體細胞)組織中發生。原則上，可以兩種不同方式增加在方法所用的植物中由本發明方法產生的多不飽和脂肪酸。游離的多不飽和脂肪酸庫和/或由方法產生的酯化多不飽和脂肪酸比例可以有利地擴大。轉基因植物中酯化的多不飽和脂肪酸庫通過本發明方法有利地擴大，有利地以磷脂酰酯和/或三酰基酯的形式擴大。方法中得到的脂肪酸也適于作為其他有價值產物的化學合成的起始物質。它們可以例如相互組合或者單獨用于制備藥品、食品、動物飼料或者化妝品。用于方法中的編碼具有Δ6-去飽和酶活性多肽的有利的核酸序列是分離的核酸序列，其選自a)具有SEQIDNO1中所示序列的核酸序列，b)由于遺傳密碼簡并性可以從SEQIDNO2中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或者c)SEQIDNO1中所示核酸序列的衍生物，其編碼的多肽在氨基酸水平上與SEQIDNO2至少40％同源并且具有Δ6-去飽和酶活性。用于方法中的編碼具有Δ6-延伸酶活性的多肽的有利的核酸序列是分離的核酸序列，其選自a)具有SEQIDNO3或7中所示序列的核酸序列，b)由于遺傳密碼簡并性可以從SEQIDNO4或8中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或者c)SEQIDNO3或7中所示核酸序列的衍生物，其編碼的多肽在氨基酸水平上與SEQIDNO4或8至少40％同源并且具有Δ6-延伸酶活性。用于方法中的編碼具有Δ5-去飽和酶活性多肽的有利的核酸序列是分離的核酸序列，其選自a)具有SEQIDNO5中所示序列的核酸序列，b)由于遺傳密碼簡并性可以從SEQIDNO6中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或者c)SEQIDNO5中所示核酸序列的衍生物，其編碼的多肽在氨基酸水平上與SEQIDNO6至少40％同源并且具有Δ5-去飽和酶活性。有利地，編碼具有ω3-去飽和酶活性的多肽的其他核酸序列與上述編碼Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶和/或Δ5-去飽和酶的核酸組合使用，是選自下面的分離的核酸序列a)具有SEQIDNO9中所示序列的核酸序列，b)由于遺傳密碼簡并性可以從SEQIDNO10中所示氨基酸序列衍生的核酸序列，或者c)SEQIDNO9中所示核酸序列的衍生物，其編碼的多肽在氨基酸水平上與SEQIDNO10至少60％同源并且具有ω3-去飽和酶活性。有利地，將上述核酸序列導入用于表達的基因構建體，所述核酸功能地連接到一種或多種調節信號。此外，基因構建體可以包含脂肪酸或者脂類代謝的其他生物合成基因，包括選自下面組成的組酰基輔酶A脫氫酶、酰基ACP[＝酰基載體蛋白]去飽和酶、酰基ACP硫酯酶、脂肪酸酰基轉移酶、酰基-輔酶A溶血磷脂酰基轉移酶、脂肪酸合酶、脂肪酸羥化酶、乙酰基-輔酶A羧化酶、酰基輔酶A氧化酶、脂肪酸去飽和酶、脂肪酸炔屬酶(acetylenase)、脂加氧酶、三酰甘油脂肪酶、氧化丙二烯合酶、氫過氧化物裂合酶或者脂肪酸延伸酶。有利地，還存在選自Δ4-去飽和酶、Δ8-去飽和酶、Δ9-去飽和酶、Δ12-去飽和酶、Δ5-延伸酶、Δ9-延伸酶和/或Δ15-去飽和酶的脂肪酸或者脂類代謝的生物合成基因。有利地，用于本發明方法中的所有核酸序列都來自真核生物，如植物、微生物或者動物。優選來自鮭目(Salmoniformes)、非洲爪蟾屬(Xenopus)或海鞘(Ciona)，藻類，如Mantoniella、隱甲藻屬(Crypthecodinium)、裸藻屬(Euglena)或者Ostreococcus，真菌，如Phytophtora，或者來自硅藻如Thalassiosira或Phaeodactylum屬的核酸序列。將用于該方法中的編碼具有ω3-去飽和酶、Δ5-去飽和酶、Δ6-去飽和酶和/或Δ6-延伸酶活性的蛋白質的核酸序列有利地單獨或者優選組合導入表達盒(＝核酸構建體)中，所述表達盒使得所述核酸在植物中表達。核酸構建體可以包含酶活性如Δ12-去飽和酶、Δ4-去飽和酶、Δ5-去飽和酶、Δ8-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ5-延伸酶、Δ6-延伸酶、Δ9-延伸酶和/或ω3-去飽和酶的一種以上的核酸序列。為了向該方法中導入核酸，有利地以已知的方式擴增和連接核酸。優選地，按照遵循PfuDNA聚合酶或者Pfu/TaqDNA聚合酶混合物方案的步驟。考慮待擴增的序列選擇引物。應該有利地以這樣的方式選擇引物使得擴增物包含從起始密碼子到終止密碼子的整個編碼序列。擴增后，方便地分析擴增物。例如，可以進行凝膠電泳分離，接著進行定量和定性分析。之后，可以按照標準方案(例如，Qiagen)純化擴增物。然后可以得到經純化擴增物的等分試樣用于隨后的克隆步驟。合適的克隆載體一般是技術人員已知的。這些尤其包括能夠在微生物系統中復制的載體，即主要是保證在酵母或者真菌中有效克隆并且使得可能穩定轉化植物的載體。必須提及的那些是適于T-DNA介導的轉化的多種雙元或者共整合載體系統。通常，此類載體系統的特征是它們包含至少農桿菌介導的轉化所需的vir基因和T-DNA定界序列(T-DNA邊界)。這些載體系統優選還包含其他順式調節區，如啟動子和終止子序列和/或選擇標記，通過它們可以鑒定被適當轉化的生物。盡管對于共整合的載體系統的情況，vir基因和T-DNA序列在同一載體上排列，但是雙元系統是基于至少兩種載體，其一具有vir基因，但是沒有T-DNA，而第二種載體具有T-DNA，但是沒有vir基因。由于該事實，最后提及的載體相對較小并且容易操作和在大腸桿菌和農桿菌中復制。這些雙元載體包括來自pBIB-HYG、pPZP、pBecks、pGreen系列的載體。根據本發明，優選使用Bin19、pBI101、pBinAR、pGPTV和pCAMBIA。雙元載體和它們的用途綜述見Hellensetal，TrendsinPlantScience(2000)5，446-451。為了制備載體，載體首先以限制性核酸內切酶線性化并且然后按照合適的方式進行酶修飾。此后純化載體并且將一份純化的載體用于克隆步驟。在克隆步驟中，使用連接酶將已經酶切割并且根據需要已純化的擴增物與已按類似方式制備的載體片段克隆。在本上下文中，具體的核酸構建體、或載體或質粒構建體可具有一個或超過一個的編碼性基因片段。將編碼性基因片段在這些構建體中優選地與調節性序列有效連接。調節性序列尤其包括植物序列，如上述啟動子和終止子序列。這類構建體可在微生物，特別在大腸桿菌和根癌農桿菌中于選擇性條件下穩定增殖并且有可能向植物中轉移異源DNA。方法中所用的核酸、本發明核酸和核酸構建體可有利地使用克隆載體向微生物和之后有利地植物中導入，并且因此用于轉化植物，如那些在PlantMolecularBiologyandBiotechnology(CRCPress，BocaRaton，Florida)，Chapter6/7，p.71-119(1993)；F.F.White，VectorsforGeneTransferinHigherPlants；inTransgenicPlants，Vol.1，EngineeringandUtilization，Ed.KungandR.Wu，AcademicPress，1993，15-38；B.Jenes等人，TechniquesforGeneTransfer，inTransgenicPlants，Vol.1，EngineeringandUtilization，Ed.KungandR.Wu，AcademicPress(1993)，128-143；Potrykus，Annu.Rev.PlantPhysiol.PlantMolec.Biol.42(1991)，205-225中發表和引用的植物。因此方法中所用的核酸、核酸構建體和/或載體可用于重組性修飾廣泛類型的植物，因此經重組性修飾的植物成為更好和/或更高效的PUFA生產者。由于向植物中單獨導入ω3-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶和/或Δ5-去飽和酶基因或與其它基因組合導入細胞中，不但有可能增加指向終產物的生物合成流，而且還有可能增加或從頭產生相應三酰甘油和/或磷脂酰酯組合物。同樣，可增加其它基因的數目或活性，其中所述的其它基因參與為一種或多種脂肪酸、油、極性和/或中性脂類的生物合成所需的營養物的輸入，由此增加這些前體、輔因子或中間體在細胞中或貯存區室中的濃度，從而如以下描述可進一步增強細胞產生PUFA的能力。通過優化參與這些化合物生物合成的一種或多種ω3-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶和/或Δ5-去飽和酶基因的活性或數目，或通過破壞參與這些化合物降解的一種或多種基因的活性，有可能在生物中，有利地在植物中增加脂肪酸和脂類分子的產量、生產和/或生產效率。用于本發明方法中的核酸分子編碼蛋白質或者它們的部分，其中所述蛋白質或者單種蛋白質或者其部分包含與SEQIDNO2、SEQIDNO4、SEQIDNO6、SEQIDNO8或SEQIDNO10中顯示的氨基酸序列具有足夠同源性的氨基酸序列，使得所述蛋白質或者其部分保留ω3-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶和/或Δ5-去飽和酶活性。所述核酸分子編碼的所述的蛋白質或者其部分在生物中，有利地在植物中優選保留了它/它們的基本酶活性以及參與細胞膜或脂肪體合成所需的化合物代謝的能力，或參與跨越這類膜運輸的能力。所述核酸分子編碼的蛋白質有利地具有與SEQIDNO2、SEQIDNO4、SEQIDNO6、SEQIDNO8或SEQIDNO10中所示氨基酸序列至少約40％、優選地至少約50％或60％并且更優選地至少約70％、80％或90％，最優選至少約85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性。為了本發明目的，將同源性或同源的理解為意指同一性或同一的。在整個氨基酸或者核酸序列區域上計算同源性。為了比較不同序列，技術人員可以利用基于多種算法的一系列程序。這里，Needleman和Wunsch或者Smith和Waterman的算法給出尤其可靠的結果。為了進行序列比對，使用程序PileUp(J.Mol.Evolution.，25，351-360，1987，Higgins等人，CABIOS，51989151-153)或者程序Gap和BestFit[Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48；443-453(1970)和Smith和Waterman(Adv.Appl.Math.2；482-489(1981)]，其是GCG軟件包[GeneticsComputerGroup，575ScienceDrive，Madison，Wisconsin，USA53711(1991)]的部分。使用程序GAP使用下面的設置在整個序列區上確定上面給出的序列同源性值(以％表示)缺口權重50，長度權重3，平均匹配10.000和平均錯配0.000。除非另外指出，這些設置總是還用作序列比對的標準設置。用于本發明方法中的ω3-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶，和/或Δ5-去飽和酶的基本酶活性指它們與序列SEQIDNO1、SEQIDNO3、SEQIDNO5、SEQIDNO7或SEQIDNO9和它們的衍生物編碼的蛋白質/酶相比保留至少10％、優選20％、尤其優選30％和非常尤其40％的酶促活性并且因此可以參與植物或植物細胞中脂肪酸、有利地脂肪酸酯如磷脂酰酯和/或三酰甘油酯的合成或者分子跨膜運輸所需的化合物的代謝，所述分子指在脂肪酸分子中的C18或C20碳鏈，在至少兩個、有利地三個或者四個位置具有雙鍵。有利地用于方法的核酸可源自細菌、真菌、硅藻、動物如隱桿線蟲或大馬哈魚屬或者植物，如藻類或者蘚類，如希瓦氏菌屬、劍葉蘚屬、破囊壺菌屬、鐮孢屬(Fusarium)、疫霉屬、角齒蘚屬、Pytiumirregulare、Mantoniella、Ostreococcus、等鞭金藻屬、Aleurita、Muscarioides、被孢霉屬、琉璃苣屬、褐指藻屬、隱甲藻屬，尤其來自Pytiumirregulare、虹鱒、非洲爪蟾、玻璃海鞘、假矮海鏈藻、Mantoniellasquamata、Ostreococcussp.、Ostreococcustauri、細小裸藻、展葉劍葉蘚、致病疫霉、Fusariumgraminaeum、寇氏隱甲藻、角齒蘚(Ceratodonpurpureus)、球等鞭金藻(Isocrydidgalbana)、Aleuritafarinosa、破囊壺菌屬的種、Muscarioidesviallii、高山被孢霉、玻璃萵苣、三角褐指藻、秀麗線蟲的屬和種或尤其有利地來自Pytiumirregulare、破囊壺菌或假矮海鏈藻。備選地，編碼Δ12-去飽和酶、Δ9-延伸酶、Δ8-去飽和酶、Δ5-延伸酶或Δ4-去飽和酶的核苷酸序列也可以用于本發明的方法中。有利地將用于該方法中的核酸序列導入表達盒中，該表達盒使得所述核酸序列在植物中表達。這涉及功能連接編碼Δ12-去飽和酶、ω3-去飽和酶、Δ9-延伸酶、Δ6-去飽和酶、Δ8-去飽和酶、Δ6-延伸酶、Δ5-去飽和酶、Δ5-延伸酶或Δ4-去飽和酶的核酸序列與一種或多種調節信號，有利地用于增強基因表達。所述調節序列意在使得所述基因和蛋白質表達特異表達。取決于植物，這指例如基因僅在誘導后表達和/或過表達或者立即表達和/或過表達。有利地，用于表達的序列使得在盡可能多的植物組織中組成型表達，如CaMV35S、CaMV36S、CaMV35Smas、nos、mas、ubi、stpt、lea或超級啟動子。優選在如上述的營養組織中表達。所述調節序列為例如誘導物或者阻抑物結合的序列，以這種方式調節核酸的表達。除了這些新的調節序列外，或者代替這些序列，這些序列的天然調節可以存在于實際的結構基因上游并且可以任選地以這樣的方式被遺傳修飾使得所述天然調節已經被消除并且已經增強了基因的表達。此外，基因構建體可以有利地還包含功能連接啟動子的一種或多種“增強子序列”，其使得可能增強核酸序列的表達。還可以在DNA序列的3’末端插入額外有利的序列，如其他調節元件或者終止子序列，有利的終止子序列的實例是病毒終止子序列，如35S終止子序列或者其他終止子序列。表達盒(＝基因構建體)可以包含用于本發明方法中的所述酶或者編碼這些酶的核酸的一個或多個拷貝。有利地，在每種情況中，在表達盒中僅僅存在所述基因的一個拷貝。可以同時或者連續導入該基因構建體或多個基因構建體到植物中并且在宿主生物中一起表達。在該上下文中，可以將基因構建體插入一個或多個載體中并且可以以游離形式存在于細胞中，或者插入到基因組中。如果待表達的基因一起存在于單個基因構建體中，有利地是將其他基因插入植物中。在該上下文中，如上述的調節序列或者因子優選對于導入的基因的基因表達具有積極效果，從而增強所述基因的表達。從而，調節元件有利地在轉錄水平上的增強可以通過使用強轉錄信號如啟動子和/或增強子來進行。此外，然而，例如，通過提高mRNA的穩定性也可以增強翻譯。該新方法的有利的調節序列存在于例如啟動子如植物啟動子CaMV/35S[Franck等人，Cell21(1980)285-294]，PRP1[Ward等人，Plant.Mol.Biol.22(1993)]，SSU、OCS、lib4、usp、STLS1、B33、nos或者存在于泛蛋白或者菜豆球蛋白啟動子中。該方法有利地使用組成型啟動子。然而，在該方法中可以使用誘導型啟動子，如EP-A-0388186(苯磺酰胺-可誘導的)，PlantJ.2，1992397-404(Gatz等人，四環素-可誘導的)，EP-A-0335528(脫落酸可誘導的)或WO93/21334(乙醇或者環己烯醇可誘導的)中描述的啟動子。其他合適的植物啟動子是馬鈴薯的胞質溶膠FBP酶啟動子或者ST-LSI啟動子(Stockhaus等人，EMBOJ.8，1989，2445)、大豆磷酸核糖焦磷酸酰氨基轉移酶啟動子(GenbankAccessionNo.U87999)或在EP-A-0249676中所描述的結節特異性啟動子。尤其有利的啟動子是有可能使得在參與脂肪酸生物合成的組織中表達的啟動子。非常尤其有利的是上述組成型啟動子CaMV35S、CaMV36S、CaMV35Smas、nos、mas、ubi、stpt、lea、或超級啟動子。此外，還可能使用種子特異性啟動子，如USP(＝未知種子蛋白)啟動子和豌豆球蛋白啟動子(蠶豆)[等人，Mol.Gen.Genet.，1991，225(3)]、油菜籽蛋白啟動子(油籽油菜)[US5,608,152]、酰基載體蛋白(油籽油菜)[US5,315,001和WO92/18634]、油質蛋白啟動子(擬南芥)[WO98/45461和WO93/20216]、菜豆球蛋白啟動子(菜豆)[US5,504,200]、Bce4啟動子[WO91/13980]、豆B4啟動子(LegB4啟動子)[等人，PlantJ.，2，2，1992]、Lpt2和lpt1(大麥)[WO95/15389和WO95/23230]、來自稻、玉米和小麥的種子特異性啟動子[WO99/16890]、Amy32b、Amy6-6和aleurain啟動子[US5,677,474]，Bce4(油籽油菜)[US5,530,149]、大豆球蛋白啟動子(大豆)[EP571741]、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶啟動子(大豆)[JP06/62870]、ADR12-2(大豆)[WO98/08962]、異檸檬酸裂合酶啟動子(油籽油菜)[US5,689,040]或α-淀粉酶啟動子(大麥)[EP781849]，以及其他啟動子，如LeB4啟動子、DC3、菜豆球蛋白啟動子或者油菜籽蛋白啟動子。其他有利的啟動子是種子特異性啟動子，其可用于單子葉或者雙子葉植物并且描述于US5,608,152(油籽油菜的油菜籽蛋白啟動子)，WO98/45461(擬南芥油質蛋白啟動子)，US5,504,200(菜豆的菜豆球蛋白啟動子)，WO91/13980(蕓苔Bce4啟動子)，Baeumlein等人，PlantJ.，2，2，1992233-239(豆科植物LeB4啟動子)，這些啟動子適于雙子葉植物。適于單子葉植物的啟動子的實例是大豆lpt-2或lpt-1啟動子(WO95/15389和WO95/23230)、大麥的大麥醇溶蛋白啟動子和WO99/16890中描述的其他合適的啟動子。原則上，可以使用所有天然的有利的組成型啟動子以及它們的調節序列，如用于該新方法的上述那些。還可能和有利地額外或者單獨使用合成啟動子。植物基因表達也可通過化學可誘導啟動子促進(見于綜述Gatz1997，Annu.Rev.PlantPhysiol.PlantMol.Biol.，4889-108)。在需要以時間特異性方式進行基因表達時，這種化學可誘導啟動子尤其合適。此類啟動子的例子是水楊酸可誘導啟動子(WO95/19443)、四環素可誘導啟動子(Gatz等(1992)PlantJ.2，397-404)和乙醇可誘導啟動子。為確保這類生物合成基因經多個世代后仍然穩定地在轉基因植物中整合，編碼ω3-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶或Δ5-去飽和酶并且用于方法中的每種核酸應當在一個獨立的啟動子控制下表達，所述啟動子可以有利地是相同或不同的。有利地，使用不同的啟動子，因為重復序列基序可導致T-DNA不穩定或導致重組事件。在本上下文中，表達盒有利地按如此方式構建從而啟動子后是適宜的切割位點，這個切割位點有利地位于多位點接頭中以便插入將要表達的核酸，并且根據需要使終止子序列位于這個多位點接頭的后面。這種序列重復多次，優選地重復三、四或五次，由此多達五個基因可在一個構建體中組合并導入轉基因植物中以便表達。這種序列有利地重復了多達四次。為了表達核酸序列，核酸序列通過例如多位點接頭中的合適切割位點在啟動子后面插入。每種核酸序列有利地具有自身的啟動子并且根據需要具有自身的終止子序列(見圖1)。然而，還可能在啟動子后插入多個核酸序列并且，如果合適，在終止序列之前。這里表達盒中所插入核酸的插入位點或其序列并不特別重要，也就是說核酸序列可在表達盒中最先的位置或最末的位置插入而不顯著地影響這種核酸序列的表達。在有利的實施方案中，不同的啟動子例如USP、LegB4或DC3啟動子和不同的終止子序列可有利地在表達盒中使用。在進一步有利的實施方案中，也可使用相同的啟動子，如CaMV35S啟動子(見圖1)。如以上所述，已導入基因的轉錄應當通過位于已導入的生物合成基因3’端的合適終止子序列有利地終止(在終止密碼子之后)。在本上下文中，可使用序列的例子是OCS1終止子序列。如同啟動子的情況，對每種基因應該使用不同的終止子序列。如以上所述，基因構建體還可包含欲導入生物的其它基因。向宿主植物中導入并且因此表達調節基因如誘導物、阻抑物或酶基因是可能并且有利的，其中這些誘導物、阻抑物或酶因其活性參與了生物合成途徑中一種或多種基因的調節。這類調節基因可為異源或同源。而且脂肪酸或脂類代謝中的其它生物合成基因可在核酸構建體或基因構建體中有利地存在；然而這些基因還可以存在于一種或多種其它核酸構建體中。優選使用的脂肪酸或脂類代謝中的生物合成基因是選自酰基輔酶A脫氫酶、酰基ACP[＝酰基載體蛋白]去飽和酶、酰基ACP硫酯酶、脂肪酸酰基轉移酶、酰基輔酶A溶血磷脂酰基轉移酶、脂肪酸合酶、脂肪酸羥化酶、乙酰基輔酶A羧化酶、酰基輔酶A氧化酶、脂肪酸去飽和酶、脂肪酸炔屬酶、脂加氧酶、三酰甘油脂肪酶、氧化丙二烯合酶、氫過氧化物裂合酶或脂肪酸延伸酶或它們組合的基因。尤其有利的核酸序列是脂肪酸或脂類代謝中的生物合成基因，這些生物合成基因選自酰基輔酶A溶血磷脂酰基轉移酶、Δ4-去飽和酶、Δ8-去飽和酶、Δ9-去飽和酶、Δ12-去飽和酶、Δ5-延伸酶和/或Δ9-延伸酶。在本上下文中，以上提到的核酸或基因可與其它延伸酶和去飽和酶組合在以上提及的表達盒中克隆并在農桿菌屬協助下轉化植物。本說明書中使用的術語“載體”指這樣的核酸分子，其能夠運輸與這種核酸分子所結合的其它核酸。載體的一個類型是“質粒”，即可連接額外的DNA片段的環狀雙鏈DNA環。載體的另一個類型是病毒載體，對額外的DNA片段而言有可能向這種病毒的基因組內連接。某些載體能夠在已導入這些載體的宿主細胞中自主復制(例如具有細菌復制原點的細菌載體)。其它載體當向宿主細胞導入時有利地在宿主細胞的基因組內整合并且因此隨宿主基因組一起復制。而且某些載體能夠控制與這些載體功能性連接的基因的表達。這些載體在本上下文中稱為“表達載體”。通常適用于DNA重組技術的表達載體采用了質粒的形式。在本說明書中由于質粒是最常用的載體形式，故“質粒”和“載體”可交換使用。然而本發明還將覆蓋具有類似功能的其它形式的表達載體如病毒載體。而且術語“載體”還將包含技術人員熟知的其它載體如噬菌體、病毒如SV40、CMV、TMV、轉座子、IS元件、噬粒、噬菌粒、粘粒、線形或環形DNA。有利地在方法中使用的重組表達載體包含用于該方法中的核酸序列或者上述基因構建體，其為適于在宿主細胞中表達核酸的形式，即所述重組表達載體包含基于用于表達的宿主細胞所選擇的一種或多種調節序列，其中這種(類)調節序列功能地與將要表達的核酸序列連接。在重組表達載體中，“功能連接”意指將目的核苷酸序列與調節序列以如此方式連接，即有可能使這種核苷酸序列表達并且它們彼此連接而使這兩類序列(例如在體外轉錄/翻譯系統中，或如果載體導入了宿主細胞，在宿主細胞中)都執行了屬于該序列的預期功能。術語“調節序列”旨在包含啟動子、增強子和其它表達控制元件(例如多聚腺苷酸化信號)。這些調節序列描述于例如GoeddelGeneExpressionTechnologyMethodsinEnzymology185，AcademicPress，SanDiego，CA(1990)一書中或參見Gruber和Crosby，MethodsinPlantMolecularBiologyandBiotechnolgy，CRCPress，BocaRaton，Florida，Glick和Thompson編著，Chapter7，89-108，包括其中引用的參考文獻。調節序列包含那些在多種類型的宿主細胞中控制核苷酸序列組成型表達的調節序列和那些控制核苷酸序列僅僅在特定的宿主細胞中于特定條件下直接表達的調節序列。技術人員知道表達載體的設計可依賴多種因素，如待轉化的宿主細胞的選擇、蛋白質的目的表達水平及其它因素。使用的重組表達載體可以設計為以這樣的方式在該方法中表達核酸序列，使得它們可以被轉化到原核生物中間宿主中并且最后在導入到植物中后，允許在其中表達。為方便起見，載體構建的中間步驟常在微生物中進行，因此這樣設計是有利的。例如ω3-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶和/或Δ5-去飽和酶基因可使用載體按照如WO98/01572中所描述的轉化方法在細菌細胞、昆蟲細胞(使用桿狀病毒表達載體)、酵母和其它真菌細胞(見Romanos，M.A.等(1992)“Foreigngeneexpressioninyeastareview”，Yeast8423-488vandenHondel、C.A.M.J.J.等.(1991)“Heterologousgeneexpressioninfilamentousfungi”，inMoreGeneManipulationsinFungi，J.W.Bennet和L.L.Lasure編輯，第396-428頁AcademicPressSanDiego和vandenHondel、C.A.M.J.J.&Punt，P.J.(1991)”Genetransfersystemsandvectordevelopmentforfilamentousfungi，inAppliedMolecularGeneticsofFungi，Peberdy，J.F.等編輯，第1-28頁CambridgeUniversityPressCambridge)、藻類(Falciatore等，1999，MarineBiotechnology.1，3239-251)、纖毛蟲，并且優選地在多細胞植物的細胞中(見Schmidt，R.和Willmitzer，L.(1988)“HighefficiencyAgrobacteriumtumefaciens-mediatedtransformationofArabidopsisthalianaleafandcotyledonexplants”PlantCellRep.583-586；PlantMolecularBiologyandBiotechnology，CPress，BocaRaton，Florida，Chapter6/7，pp.71-119(1993)；F.F.White，B.Jenes等，TechniquesforGeneTransfer，inTransgenicPlants，第一卷，EngineeringandUtilization，Ed.Kung和R.Wu，AcademicPress(1993)，128-43；Potrykus，Annu.Rev.PlantPhysiol.PlantMolec.Biol.42(1991)，205-225(和其中所引用的參考文獻))表達。合適的宿主細胞在Goeddel，GeneExpressionTechnologyMethodsinEnzymology185，AcademicPress，SanDiego，CA(1990)中詳細討論。作為備選，重組表達載體可例如使用T7-啟動子調節序列和T7-聚合酶體外轉錄和翻譯。在大多數情況下，蛋白質在原核生物中的表達設計使用包含組成型或者誘導型啟動子的載體，所述啟動子控制融合或非融合蛋白質的表達。典型的融合表達載體的實例為pGEX(PharmaciaBiotechInc；Smith，D.B.和Johnson，K.S.(1988)Gene6731-40)、pMAL(NewEnglandBiolabs，Beverly，MA)和pRIT5(Pharmacia，Piscataway，NJ)，其中谷胱甘肽S-轉移酶(GST)、麥芽糖E結合蛋白和蛋白A分別與重組靶蛋白融合。合適的可誘導的非融合大腸桿菌表達載體的例子尤其為pTrc(Amann等(1988)Gene69301-315)和pET11d(1990年加利福尼亞圣迭哥AcademicPress出版社《MethodsinEnzymology》185的Studier等《GeneExpressionTechnology》第60-89頁)。靶基因自pTrc載體的表達是基于宿主RNA聚合酶自雜合trp-lac融合啟動子的轉錄。靶基因自pET11d載體的表達是基于經共表達的病毒RNA聚合酶(T7-gn1)所介導的T7-gn10-lac融合啟動子的轉錄。這種病毒RNA聚合酶由宿主菌株BL21(DE3)或HMS174(DE3)的定居λ-原噬菌體提供，其中所述定居λ-原噬菌體攜帶了受lacUV5啟動子轉錄控制的T7gn1基因。其它適用于原核生物的載體為技術人員所知，這類載體是例如大腸桿菌的pLG338、pACYC184、pBR系列如pBR322、pUC系列如pUC18或pUC19、M113mp系列、pKC30、pRep4、pHS1、pHS2、pPLc236、pMBL24、pLG200、pUR290、pIN-III113-B1、λgt11或pBdCI，鏈霉菌中的pIJ101、pIJ364、pIJ702或pIJ361，芽孢桿菌屬中的pUB110、pC194或pBD214，棒桿菌屬中的pSA77或pAJ667。在另一個實施方案中，表達載體是酵母表達載體。用于釀酒酵母中表達的載體的例子包含pYeDesaturasec1(Baldari等.(1987)EmboJ.6229-234)、pMFa(Kurjan和Herskowitz(1982)Cell30933-943)、pJRY88(Schultz等(1987)Gene54113-123)和pYES2(InvitrogenCorporation，SanDiego，CA)。用于構建適用于其它真菌如絲狀真菌的載體和構建方法包含在1991年劍橋大學的劍橋大學出版社J.F.Peberdy等編輯的《AppliedMolecularGeneticsoffungi》第1-28頁，vandenHondel、C.A.M.J.J；和Pun，P.J.的“Genetransfersystemsandvectordevelopmentforfilamentousfungi”中或在《MoreGeneManipulationsinFungi》[圣迭哥AcademicPress出版社J.W.Bennet和L.L.Lasure編輯，第396-428頁]中所詳細描述的那些載體和方法。其它合適的酵母載體為例如pAG-1、YEp6、YEp13和pEMBLYe23。作為備選，用于本發明方法中的核酸序列可用桿狀病毒載體在昆蟲細胞中表達。可用于在培養的昆蟲細胞(例如Sf9細胞)中表達蛋白質的桿狀病毒載體包含pAc系列(Smith等(1983)Mol.CellBiol.32156-2165)和pVL系列(Lucklow和Summers(1989)Virology17031-39)。以上提到的載體僅概略回顧了可能適合的載體。其它的質粒為技術人員所知并且在例如《Cloningvector》(1985年阿姆斯特旦-紐約-牛津Elsevier出版社，Pouwels，P.H.等編輯，ISBN0444904018)中描述。對于其它合適用于原核及真核細胞的表達系統，見1989年紐約冷泉港ColdSpringHarborLaboratory出版社，Sambrook，J.、Fritsch，E.F.和Maniatis，T.的《MolecularCloningALaboratoryManual》第二版第16和第17章中的描述。用于該方法中的基因可以在單細胞植物細胞(如藻類)中表達，見Falciatore等人，1999，MarineBiotechnology1(3)239-251和其中引用的參考文獻，也可以在高等植物(例如，種子植物，如可耕種的作物)的植物細胞中表達。植物表達載體的實例包含在Becker，D.，Kemper，E.，Schell，J.，andMasterson，R.(1992)“Newplantbinaryvectorswithselectablemarkerslocatedproximaltotheleftborder”，PlantMol.Biol.201195-1197；andBevan，M.W.(1984)“BinaryAgrobacteriumvectorsforplanttransformation”，Nucl.AcidsRes.128711-8721；VectorsforGeneTransferinHigherPlants；inTransgenicPlants，Vol.1，EngineeringandUtilization，Eds.KungandR.Wu，AcademicPress，1993，p.15-38中詳述的那些表達載體。植物表達盒優選地包含能夠在植物細胞中控制基因表達并且功能連接的調節序列，如此使每一種序列能夠實現它的功能，例如多聚腺苷酸化信號的轉錄終止功能。優選的多聚腺苷酸化信號是來自根癌農桿菌T-DNA如Ti質粒pTiACH5(1984年Gielen等，EMBOJ.3期，835等)的基因3的那些多聚腺苷酸化信號，其中已知基因3是章魚堿合酶，或者是那些多聚腺苷酸化信號的功能等同物，但是所有其它在植物中具有功能活性的終止子同樣合適。由于植物基因表達通常不限于在轉錄水平，植物表達盒優選地包含其它功能連接的序列，如翻譯增強子例如超驅動序列，所述的超驅動序列包含煙草花葉病毒5’-非翻譯前導序列，這種前導序列提高了蛋白質/RNA比(Gallie等，1987，Nucl.AcidsResearch158693-8711)。如以上所述，植物基因表達必須與合適啟動子功能地連接，其中這種啟動子以正確的時間過程或以細胞或組織特異性方式引發基因表達。可使用的啟動子有利地是組成型啟動子(Benfey等，EMBOJ.8(1989)2195-2202)，例如那些來自植物病毒如35SCaMV(Franck等，Cell21(1980)285-294)、19SCaMV(也見US5352605和WO84/02913)的啟動子或植物啟動子，如在US4,962,028中所描述小Rubisco亞單位的啟動子。用于在植物基因表達盒中功能連接的其它優選的序列是靶向序列，其中這種靶向序列為基因產物向該基因產物對應的細胞區室中(見Kermode，Crit.Rev.PlantSci.15，4(1996)285-423的綜述及其引用的參考文獻)例如向液泡、細胞核、所有類型質體如造粉體、葉綠體、色質體、胞外空間、線粒體、內質網、油質體、過氧化物酶體和植物細胞的其它區室中導入所需。對生物性或非生物應激條件反應的啟動子如病原誘導的PRP1基因啟動子(Ward等，Plant.Mol.Biol.22(1993)361-366)、熱誘導的番茄hsp80啟動子(US5,187,267)、冷凍誘導的馬鈴薯α淀粉酶啟動子(WO96/12814)或外傷誘導的pinII啟動子(EP-A-0375091)同樣適合。具體地，可以希望引起用于該方法中的ω3-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶和/或Δ5-去飽和酶的多平行表達。可以通過同時轉化多個單獨的表達構建體，或者優選通過在一個構建體中組合多個表達盒導入此類表達盒。而且，在每種情況下用多個表達盒轉化多個載體然后轉移到宿主細胞。因為質體是合成脂類生物合成的前體和某些終產物的區室，同樣尤其適合的是那些引起質體特異性表達的其他啟動子。這類合適的啟動子如病毒RNA聚合酶啟動子在WO95/16783和WO97/06250中描述以及來自擬南芥的clpP啟動子在WO99/46394中描述。載體DNA可通過常規的轉化或轉染技術向原核和真核細胞內導入。術語“轉化”和“轉染”、接合和轉導如在本上下文中所用，旨在包含本領域眾知的用于向宿主細胞內導入外源核酸(如DNA)的多種方法，包括磷酸鈣或氯化鈣共沉淀、DEAE葡聚糖介導的轉染、脂轉染、天然感受態、化學介導的轉移、電穿孔或粒子轟擊。適用于轉化或轉染包括植物細胞在內的宿主細胞的方法可在Sambrook等(1989年紐約冷泉港ColdSpringHarborLaboratory出版社《MolecularCloningALaboratoryManual》第二版)和其它的實驗室手冊如1995年新澤西Totowa的HumanaPress出版社《MethodsinMolecularBiology》第44卷Gartland和Davey編輯的《Agrobacteriumprotocols》中找到。在一個有利的實施方案中，術語“核酸(分子)”如在本上下文中所用還包含位于編碼基因區的3’端和5’端的非翻譯序列位于編碼區5’端上游序列的至少500個，優選200個，尤其優選100個核苷酸的序列和位于編碼基因區的3’端下游序列的至少100個，優選50個，特別優選20個核苷酸的序列。“經分離的”核酸分子與在這種核酸的天然來源中存在的其它核酸分子分離。“經分離的”核酸優選地不具備這種核酸所來源的生物的基因組DNA中天然分布于這種核酸側翼的序列(例如位于這種核酸的5’端和3’端的序列)。在多種實施方案中，用于該方法中的經分離的ω3-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶或Δ5-去飽和酶分子可包含例如小于約5kb、4kb、3kb、2kb、1kb、0.5kb或0.1kb的核苷酸序列，而這些核苷酸序列在所述核酸分子所來源的細胞的基因組DNA中天然地分布在所述核酸分子的兩側。方法中使用的核酸序列可以使用分子生物學標準技術和這里提供的序列信息分離。DNA或氨基酸水平的同源序列或同源的保守序列區域例如還可在比較性算法的協助下鑒定。這些序列區可用作雜交探針和用于標準雜交技術(例如在1989年紐約冷泉港ColdSpringHarborLaboratory出版社《MolecularCloningALaboratoryManual》第二版所描述的那些探針和標準雜交技術)以分離可用于方法的其它核酸序列。而且，用于該方法中的核酸分子或者其部分可通過聚合酶鏈反應分離，其中使用基于這種序列或其部分的寡核苷酸引物(例如包含完整序列或其部分的核酸分子通過以相同的序列為基礎所產生的寡核苷酸引物進行的聚合酶鏈反應分離)。例如mRNA可從細胞中分離(如通過Chirgwin等(1979)Biochemistry185294-5299的硫氰酸胍提取方法)和通過逆轉錄酶獲得cDNA(例如可以用從Gibco/BRL，Bethesda，MD獲得的莫洛尼MLV逆轉錄酶或可以用從SeikagakuAmerica，Inc.，St.Petersburg，FL獲得的AMV逆轉錄酶)。用于聚合酶鏈反應擴增的合成寡核苷酸引物可基于SEQIDNO1、SEQIDNO3、SEQIDNO5、SEQIDNO7或SEQIDNO9中所示的一種序列產生或在SEQIDNO2、SEQIDNO4、SEQIDNO6、SEQIDNO8或SEQIDNO10中詳述的氨基酸序列協助下產生。本發明的核酸可使用cDNA或備選地使用基因組DNA作為模板并且使用合適的寡核苷酸引物通過標準PCR擴增技術擴增。所擴增的核酸因此可向合適的載體克隆并且通過DNA序列分析表征。與去飽和酶核苷酸序列對應的寡核苷酸可通過標準合成方法如使用自動DNA合成儀產生。使用的具有序列SEQIDNO1、SEQIDNO3、SEQIDNO5、SEQIDNO7或SEQIDNO9的ω3-去飽和酶，Δ6-去飽和酶，Δ6-延伸酶，orΔ5-去飽和酶核酸序列的同源物指例如，與SEQIDNO1、SEQIDNO3、SEQIDNO5、SEQIDNO7或SEQIDNO9中所示核苷酸序列或其同源物、衍生物或類似物或者部分具有至少約40、50或60％，優選地具有至少約60或70％，更為優選地具有至少約70或80％、90％或95％并且甚至更為優選地具有至少約85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性或同源性的等位基因變體。此外，分離的核酸分子的核苷酸序列例如在嚴格條件下與SEQIDNO1、SEQIDNO3、SEQIDNO5、SEQIDNO7或SEQIDNO9中所示核苷酸序列之一或者其部分雜交。根據本發明，在上下文中，將部分理解為意指至少25個堿基對(＝bp)、50bp、75bp、100bp、125bp或150bp，優選至少175bp、200bp、225bp、250bp、275bp或300bp，尤其優選350bp、400bp、450bp、500bp或更多的堿基對為雜交所用。還可能并且有利地，可以使用全長序列。等位基因變體尤其包含功能性變體，這種功能性變體可自/向SEQIDNO1、SEQIDNO3、SEQIDNO5、SEQIDNO7或SEQIDNO9中所示序列通過核苷酸的缺失、插入或替代而獲得，然而對于一個或多個基因的插入，預期合成的所得蛋白質的酶活性有利地被保留。保留了ω3-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶和/或Δ5-去飽和酶的酶活性的蛋白質，即酶活性基本上未減少的蛋白質意指與SEQIDNO2、SEQIDNO4、SEQIDNO6、SEQIDNO8或SEQIDNO10所編碼的蛋白質比較，具有至少10％，優選地具有20％，尤其優選地具有30％，非常尤其優選地具有40％的最初酶活性。計算了涵蓋整個氨基酸或核酸序列區域的同源性。技術人員可獲得用于不同序列比較的多種算法的一系列程序。這里Needleman和Wunsch或Smith和Waterman的算法給出了尤其可靠的結果。這里PileUp程序(J.Mol.Evolution.，25，351-360，1987，Higgins等，CABIOS，51989151-153)或作為GCG軟件包[GeneticsComputerGroup，575ScienceDrive，Madison，Wisconsin，USA53711(1991)]的部分的Gap和BestFit程序[Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48；443-453(1970)和Smith及Waterman(Adv.Appl.Math.2；482-489(1981))用于序列比對。使用GAP程序并如下設置缺口權重50，長度權重3，平均匹配10.000和平均錯配0.000確定如以上以百分率所示的涵蓋全長序列的序列同源性值。除非另有說明，這些設置總是作為標準設置用于序列比對。脂類合成可劃分為兩個階段脂肪酸的合成和它們與sn-甘油-3-磷酸的結合及極性首基如磷脂酰殘基的添加或修飾。通常用于膜中的脂類包含磷脂類、糖脂類、鞘脂類和磷酸甘油酯。脂肪酸的合成始于通過乙酰基輔酶A羧化酶將乙酰基輔酶A轉化為丙二酸單酰輔酶A或通過乙酰基轉酰基酶將乙酰基輔酶A轉化為乙酰基ACP。這兩種產物分子在縮合反應后共同形成了乙酰乙酰基ACP，這種分子經一系列縮合、還原和脫水反應轉化，因而獲得了具有所需鏈長度的飽和脂肪酸分子。從這些分子產生不飽和脂肪酸的過程由特異性去飽和酶通過分子氧有氧性地催化，或者無氧性地催化(關于在微生物中脂肪酸合成，見F.C.Neidhardt等(1996)E.coliandSalmonella.ASMPressWashington，D.C.第612-636頁和其中所引用的參考文獻；Lengeler等(Ed.)(1999)BiologyofProcaryotes.ThiemeStuttgart，NewYork和其中的參考文獻及Magnuson，K.，等(1993)MicrobiologicalReviews57522-542和其中的參考文獻)。為經歷進一步的延伸步驟，所得的與磷脂結合的脂肪酸必須從磷脂返回至脂肪酸輔酶A酯庫。通過酰基輔酶A溶血磷脂酰基轉移酶實施此步驟。而且這些酶能夠將已延伸的脂肪酸從輔酶A酯再次轉移至磷脂。根據需要可以重復這種反應順序。用于生物合成PUFA的前體的例子是油酸、亞油酸和亞麻酸。必須將這些C18碳的脂肪酸延伸至C20脂肪酸以獲得ARA和EPA。在方法中所用的去飽和酶如ω3-，Δ5-和Δ6-去飽和酶和/或Δ6-延伸酶的協助下，可以產生花生四烯酸和/或二十碳五烯酸，并隨后可在涉及食品、飼料、化妝品或藥品方面的多種領域中應用。以上提到的酶可用于制備脂肪酸分子中具有至少兩個雙鍵，有利地具有至少三、四、五個雙鍵的C20脂肪酸，優選地產生在脂肪酸分子中有利地具有四個或五個雙鍵的C20脂肪酸。去飽和可在延伸所討論的脂肪酸之前或之后發生。這是為什么去飽和酶活性的產物和其它可能的去飽和和延伸步驟的產物產生了具有更高去飽和程度的脂肪酸的優選PUFA的原因，如γ-亞麻酸、二高γ-亞麻酸、花生四烯酸、十八碳四烯酸、二十碳四烯酸或二十碳五烯酸。本發明方法中所用的去飽和酶和延伸酶的底物是C16或C18脂肪酸例如亞油酸、γ-亞麻酸、α-亞麻酸、二高γ-亞麻酸、二十碳四烯酸或十八碳四烯酸。優選的底物是油酸、亞油酸、γ-亞麻酸和/或α-亞麻酸。脂肪酸中具有至少二、三、四或五個雙鍵的所合成的C20脂肪酸在本發明的方法中以游離脂肪酸形式或以其酯形式，如以其甘油酯或磷脂形式有利地獲得。將術語“甘油酯”理解為意指用一、二或三個羧基所酯化的甘油(單酰甘油、二酰甘油或三酰甘油)。將“甘油酯”理解為意指多種甘油酯的混合物。甘油酯有利地是甘油三酯。甘油酯或甘油酯的混合物可以包含其它添加物，例如游離脂肪酸、抗氧化劑、蛋白質、糖類、維生素和/或其它物質。為了本發明的目的，也將“甘油酯”理解為意指甘油衍生物。除以上所描述的脂肪酸甘油酯以外，這些甘油衍生物還包括甘油磷脂和甘油糖脂。可提到的優選的例子為甘油磷脂如卵磷脂(磷脂酰膽堿)、心磷脂、磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸和烷基酰基甘油磷脂。而且隨后脂肪酸必須轉運至不同的修飾位點并且摻入三酰甘油貯藏脂。脂類合成的又一個重要步驟是例如通過甘油脂肪酸酰基轉移酶將脂肪酸轉移至極性首基(見Frentzen，1998，Lipid，100(4-5)161-166)。關于植物脂肪酸生物合成和去飽和、脂類新陳代謝和脂類化合物的跨膜運輸、β氧化、脂肪酸修飾和輔因子、三酰甘油貯藏和三酰甘油組裝的出版物，包括其中的參考文獻參見如下文章1997年JKSetlow編輯的《GeneticEngeneering》19第149-166頁Kinney；Ohlrogge和Browse，1995，PlantCell7957-970；Shanklin和Cahoon，1998，Annu.Rev.PlantPhysiol.PlantMol.Biol.49611-641；1996年JKSetlow編輯的《GeneticEngeneering》18第111-13頁Voelker；Gerhardt，1992，Prog.LipidR.31397-417；Gühnemann-和Kindl，1995，Biochim.BiophysActa1256181-186；Kunau等，1995，Prog.LipidRes.34267-342；Rockville美國植物生理學學會1993年Murata和Somerville編輯的《BiochemistryandMolecularBiologyofMembraneandStorageLipidsofPlants》第150-158頁Stymne等；Murphy和Ross1998，PlantJournal.13(1)1-16。方法中所產生的PUFA包含高等動物不再能合成并且因此必須攝入的一組分子或者高等動物不再能自行足量地產生并且因此必須攝入額外量的一組分子，雖然這類PUFA易于由其它生物例如細菌合成，但是貓不再能合成花生四烯酸。對于本發明，將磷脂理解為指磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油和/或磷脂酰肌醇，有利地磷脂酰膽堿和/或磷脂酰絲氨酸。術語生產量或者生產力是本領域已知的并且包括在植物細胞或植物中的生產力，即基于該細胞或植物中所有脂肪酸的含量，在該方法中產生的目的脂肪酸的含量。術語生產效率包括得到特定生產量所需的時間(例如，細胞建立精細化學品的某個通量率所需的時間)。術語生物合成或者生物合成途徑是本領域已知的并且包括例如在多步或者受到強烈調節的過程中，細胞從中間體合成化合物、優選有機化合物。術語分解代謝或者分解代謝途徑是本領域已知的并且包括例如在多步或者受到強烈調節的過程中，細胞切割化合物，優選有機化合物以得到分解代謝產物(在更一般的術語中，較小或者較不復雜的分子)。術語代謝是本領域已知的并且包括在生物中發生的生物化學反應的全體。從而某種化合物的代謝(例如，脂肪酸的代謝)包括細胞中該化合物的涉及該化合物的生物合成途徑、修飾途徑和分解代謝途徑的全體。由于它們與這里公開的ω3-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ5-去飽和酶，和/或Δ6-延伸酶核酸的同源性，對于本發明的方法有利的核酸分子可以按照標準雜交技術在嚴格雜交條件下使用所述序列或者其部分作為雜交探針進行分離。在該上下文中，例如，可能使用分離的核酸分子，其長為至少15個核苷酸并且在嚴格條件下與包含SEQIDNO1、SEQIDNO3、SEQIDNO5、SEQIDNO7或SEQIDNO9的核苷酸序列的核酸分子雜交。也可以使用具有至少25、50、100、250或更多核苷酸的核酸。如本上下文中使用的術語“在嚴格條件下雜交”意在描述雜交和洗滌條件，在所述條件下相互具有至少60％同源性的核苷酸序列通常保持相互雜交。優選使得相互具有至少約65％、優選至少約70％并且特別優選至少75％或更高同源性的序列通常保持相互雜交的條件。這些嚴格條件是技術人員已知的并且描述于例如CurrentProtocolsinMolecularBiology，JohnWiley&Sons，N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6。嚴格雜交條件的優選的非限制性實例是在45℃下6x氯化鈉/檸檬酸鈉(＝SSC)中雜交，接著是在50到65℃下0.2xSSC，0.1％SDS中的一個或多個洗滌步驟。技術人員已知這些雜交條件取決于核酸的類型而不同，例如，當存在有機溶劑時，溫度和緩沖液濃度不同。在“標準雜交條件”下，例如，取決于核酸類型，在濃度為0.1到5xSSC的水性緩沖液中(pH7.2)，雜交溫度為42℃到58℃。如果在上述緩沖液中存在有機溶劑，例如，50％甲酰胺，那么在標準條件下的溫度為約42℃。DNA:DNA雜合分子的優選的雜交條件為例如，0.1xSSC和20℃到45℃，優選30℃到45℃。優選地，DNA:RNA雜合分子的雜交條件為例如，0.1xSSC和30℃到55℃，優選45℃到55℃。對長度為約100bp(＝堿基對)并且G+C含量為50％的核酸，在不存在甲酰胺的條件下，確定上述雜交溫度。技術人員已知怎樣根據教科書如Sambrook等人，“MolecularCloning”，ColdSpringHarborLaboratory，1989；HamesandHiggins(Ed.)1985，“NucleicAcidsHybridizationAPracticalApproach”，IRLPressatOxfordUniversityPress，Oxford；Brown(Ed.)1991，“EssentialMolecularBiologyAPracticalApproach”，IRLPressatOxfordUniversityPress，Oxford確定所需的雜交條件。為了確定兩種氨基酸序列(例如，SEQIDNO2、SEQIDNO4、SEQIDNO6、SEQIDNO8或SEQIDNO10的序列之一)或者兩種核酸(例如，SEQIDNO1、SEQIDNO3、SEQIDNO5、SEQIDNO7或SEQIDNO9)的同源性(＝同一性)百分數，將一條序列寫在另一條的下面用于最佳比較(例如，可以在蛋白質或者核酸的序列中引入缺口以便與另一蛋白質或者另一核酸產生最佳比對)。然后，比較對應氨基酸位置或者核苷酸位置處的氨基酸殘基或者核苷酸。如果序列中的位置被與另一序列中對應位置相同的氨基酸殘基或者相同核苷酸占據，那么這兩個分子在該位置是同源的(即，本上下文中所用的氨基酸或者核酸“同源性”對應于氨基酸或核酸“同一性”)。兩種序列之間同源性百分數是這兩種序列共有相同位置數的函數(即，％同源性＝相同位置數/位置總數x100)。因此認為術語同源性和同一性是同義的。使用的程序和算法如上述的那些。用于該方法中的編碼與SEQIDNO2、SEQIDNO4、SEQIDNO6、SEQIDNO8或SEQIDNO10的蛋白質同源的ω3-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ5-去飽和酶，和/或Δ6-延伸酶的分離的核酸分子可以如下產生向SEQIDNO1、SEQIDNO3、SEQIDNO5、SEQIDNO7或SEQIDNO9的核苷酸序列中引入一個或多個核苷酸替代、添加或者缺失，使得向其編碼的蛋白質中引入一個或多個氨基酸替代、添加或者缺失。SEQIDNO1、SEQIDNO3、SEQIDNO5、SEQIDNO7或SEQIDNO9的序列之一中的突變可以通過標準技術如位點特異的誘變和PCR-介導的誘變導入。優選在一個或多個預測的非必需氨基酸殘基中產生保守氨基酸替代。在“保守氨基酸替代”中，將氨基酸殘基用具有相似側鏈的氨基酸殘基替代。本領域中已經定義了具有相似側鏈的氨基酸殘基家族。這些家族包括具有堿性側鏈的氨基酸(例如，賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、具有酸性側鏈的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不帶電極性側鏈的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非極性側鏈的氨基酸(例如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β分枝側鏈的氨基酸(例如，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和具有芳香族側鏈的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)。從而，ω3-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ5-去飽和酶，和/或Δ6-延伸酶中預測的非必需氨基酸殘基優選被來自側鏈的同一家族的另一氨基酸殘基替換。在另一實施方案中，突變可以備選地例如通過飽和誘變在編碼ω3-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ5-去飽和酶，和/或Δ6-延伸酶的序列的全長或者部分序列上隨機導入，并且所得突變體可以通過重組表達本文所述的ω3-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ5-去飽和酶或Δ6-延伸酶活性來篩選以便鑒定保留了ω3-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ5-去飽和酶，和/或Δ6-延伸酶活性的突變體。誘變后，可以重組表達所編碼的蛋白質，并且可以例如使用本文本中所述的測試測定蛋白質的活性。本發明通過以下實施例更詳細地說明，這不得解釋為作為限制。本專利申請中所引用的參考文獻、專利申請、專利和已公布的專利申請的全部內容此處引用作為參考。實施例實施例1通用的克隆方法克隆方法例如限制性切割、瓊脂糖凝膠電泳、純化DNA片段、核酸轉移至硝酸纖維素膜和尼龍膜、連接DNA片段、轉化大腸桿菌細胞、細菌培養和重組DNA的序列分析按照Sambrook等(1989)(ColdSpringHarborLaboratoryPressISBN0-87969-309-6)所描述實施。實施例2重組DNA的序列分析重組DNA分子以ABI激光熒光DNA測序儀按照Sanger(Sanger等(1977)Proc.Natl.Acad.Sci.USA74，5463-5467)的方法測序。通過聚合酶鏈反應獲得的片段經過測序和驗證以避免待表達的構建體中的聚合酶偏差。實施例3用于在植物中表達的表達質粒的克隆為了轉化植物，基于pGPTV-35S產生轉化載體，pGPTV-35S是基于pBIN19-35S的質粒(BevanM.(1984)BinaryAgrobacteriumvectorsforplanttransformation.Nucl.AcidsRes.18203)。為此，在pUC載體中裝配包含啟動子元件CaMV35S(SEQIDNO11)和35S終止子序列(SEQIDNO12；Franck，A.，Guilley，H.，Jonard，G.，Richards，K.andHirth，L.(1980)NucleotidesequenceofcauliflowermosaicvirusDNACell21(1)，285-294)的表達盒。通過SalI/XbaI限制性切割位點在這里插入啟動子并且通過BamHI/SmaI插入終止子序列。這涉及將具有XhoI切割位點的多聚接頭連接到終止子序列(“三元連接”)。然后將所得的質粒pUC19-35S用于克隆PUFA基因。將d6Des(Pir，SEQIDNO1)，d5Des(Tc，SEQIDNO5)和d6Elo(Tc，SEQIDNO3)序列的可讀框通過EcoRV平行地導入pUC19-35S載體中。所得質粒pUC-D6、pUC-D5、pUC-E6(Tc)用于產生雙元載體pGPTV-35S_D6D5E6(Tc)。為此，用酶SalI消化pGPTV載體，并用SalI/XhoI消化pUC-D6質粒，并連接正確的片段。隨后用SalI消化所得的質粒pGPTV-D6，用SalI/XhoI消化pUC-D5質粒，并連接正確的片段。然后再次用SalI消化所得質粒pGPTV-D6-D5，用SalI/XhoI消化pUC-E6(Tc)質粒，并連接正確的片段。這些順序克隆步驟產生了雙元載體pGPTV-D6D5E6(Tc)，其用于轉化。在進一步的實施方案中，將d6Elo(Tp)[SEQIDNO7]的序列而不是序列d6Elo(Tc)插入到pUC19-35S載體中。所得的質粒pUC-E6(Tp)用于制備雙元載體pGPTV-35S_D6D5E6(Tp)。在另一實施方案中，將ω3Des(Pi，SEQIDNO9)的可讀框克隆到pUC19-35S中。所得的質粒pUC-ω3Pi通過SalI/XhoI轉移到雙元載體pGPTV-D6D5E6(Tc)和pGPTV-D6D5E6(Tp)中。所得的載體pGPTV-D6D5E5(Tc)ω3Pi和pGPTV-D6D5E5(Tp)ω3Pi用于植物轉化。圖1給出了所產生的構建體的概貌。根據生產商的信息將所有雙元載體轉化到大腸桿菌DH5α細胞(Invitrogen)中。通過PCR鑒定陽性克隆并分離質粒DNA(QiagenDneasy)。PCR混合物(50μL)的組成5.00μLcDNA模板5.00μL10x緩沖液(Advantage聚合酶)+25mMMgCl25.00μL2mMdNTP1.25μL每種引物(10pmol/μL)0.50μLAdvantage聚合酶使用來自Clontech的Advantage聚合酶。檢查載體然后通過電穿孔轉化到根癌農桿菌GC3101中并在含有2％YEB培養基+卡那霉素的瓊脂板上平板接種。選擇卡那霉素耐受細胞并用于轉化芥菜和擬南芥或者可以用于轉化其他植物物種。實施例4轉基因植物的產生a)產生轉基因油菜植物(芥菜，根據Radke等人，TransformationandregenerationofBrassicarapausingAgrobacteriumtumefaciens.PlantCellRep.11，499-505，1992修改)。通過將雙元載體如實施例3中產生的雙元質粒/載體轉化到根癌農桿菌GC3101中產生轉基因油菜植物(Deblaereetal，1984，Nucl.Acids.Res.13，4777-4788)。為了轉化油菜植物(Var.Drakkar，NPZNordeutschePflanzenzucht，Hohenlieth，Germany)，將陽性轉化的農桿菌菌落在補加3％蔗糖(3MS培養基)的Murashige-Skoog培養基(Murashige和Skoog1962Physiol.Plant.15，473)中的過夜培養物1∶50稀釋后使用。將新近發芽的無菌油菜植物的葉柄或下胚軸(在每一情況下約1cm2)與1∶50的農桿菌稀釋物在培養皿中共同溫育5-10分鐘。然后這些葉柄或下胚軸在補加了0.8％Bacto瓊脂的3MS培養基上黑暗中25℃共溫育3天。然后培養在16小時光照/8小時黑暗中持續3天，并按照每周節律繼續在補加了500mg/LClaforan(頭孢噻肟鈉)、50mg/L卡那霉素、20μM芐氨基嘌呤(BAP)、1.6g/L葡萄糖的MS培養基上繼續。生長的芽轉移至補加了2％蔗糖、250mg/LClaforan和0.8％Bacto瓊脂的MS培養基中。若三周后根未發育，向培養基中加入作為生長激素用于生根的2-吲哚丁酸。已再生的苗在補加了卡那霉素和Claforan的2MS培養基上獲得；生根之后，將這些苗轉移至土壤并且在受控的環境箱或溫室中生長兩周后，允許開花，并且收獲成熟的種子及通過脂類分析法分析去飽和酶和延伸酶基因的表達，如Qiu等人2001，J.Biol.Chem.276，31561-31566所述。b)轉基因亞麻子植物的產生轉基因亞麻子植物可通過例如Bell等，1999，InVitroCell.Dev.Biol.Plant.35(6)456-465的方法經粒子轟擊產生。通常以例如Mlynarova等(1994)，PlantCellReport13282-285或Drexler等人(2003)，Mol.Breeding11，149-158的方法建立農桿菌介導的轉化。實施例5從芥菜和脂質體葉子的脂類提取遺傳修飾在植物、真菌、藻類、纖毛蟲中的作用或者對目的化合物(如脂肪酸)的產量的影響可以如下確定在合適的條件(如上述那些條件)下生長經修飾的微生物或經修飾的植物并分析培養基和/或組分中目的產物(即，脂類或脂肪酸)的升高的產量。這些分析技術是技術人員已知的并且包括光譜學、薄層層析法、多種類型的染色方法、酶和微生物學方法和分析層析法，如高效液相層析(見例如，Ullman，EncyclopediaofIndustrialChemistry，Vol.A2，p.89-90andp.443-613，VCHWeinheim(1985)；Fallon，A.，等人，(1987)“ApplicationsofHPLCinBiochemistry”inLaboratoryTechniquesinBiochemistryandMolecularBiology，Vol.17；Rehm等人(1993)Biotechnology，Vol.3，ChapterIII“Productrecoveryandpurification”，p.469-714，VCHWeinheim；Belter，P.A.，等人(1988)BioseparationsdownstreamprocessingforBiotechnology，JohnWileyandSons；Kennedy，J.F.，andCabral，J.M.S.(1992)RecoveryprocessesforbiologicalMaterials，JohnWileyandSons；Shaeiwitz，J.A.，andHenry，J.D.(1988)BiochemicalSeparations，inUllmann’sEncyclopediaofIndustrialChemistry，Vol.B3；Chapter11，p.1-27，VCHWeinheim；和Dechow，F.J.(1989)Separationandpurificationtechniquesinbiotechnology，NoyesPublications)。除了上述方法外，可以如Cahoon等人(1999)Proc.Natl.Acad.Sci.USA96(22)12935-12940和Browse等人(1986)AnalyticBiochemistry152141-145所述的從植物材料提取植物脂類。Christie，WilliamW.，AdvancesinLipidMethodology，Ayr/ScotlandOilyPress(OilyPressLipidLibrary；2)；Christie，WilliamW.，GasChromatographyandLipids.APracticalGuide-Ayr，ScotlandOilyPress，1989，Repr.1992，IX，307PP.(OilyPressLipidLibrary；1)；“ProgressinLipidResearch”，OxfordPergamonPress，1(1952)-16(1977)在標題ProgressintheChemistryofFatsandOtherLipidsCODEN中描述了脂類或脂肪酸的定性和定量分析。一個實例是脂肪酸的分析(縮寫FAME，脂肪酸甲酯；GC-MS，氣液層析/質譜法；TAG，三酰基甘油；TLC，薄層層析)。使用如在一些場合由Christie和其中的參考文獻(1997，在AdvancesonLipidMethodology，FourthEditionChristie，OilyPress，Dundee，119-169；1998，Gaschromatographie-Massenspektrometrie-Verfahren[氣相層析/質譜法]，Lipids33343-353)中所述的標準分析方法GC、GC-MS或TLC分析重組微生物，可以得到脂肪酸產物的存在的清楚的檢測。通過超聲處理、在玻璃碾磨機中碾磨、液氮處理并碾磨或者通過其他可應用的方法破碎待分析的材料。破碎后，必須將所述材料離心。將沉淀物重懸浮在蒸餾水中，在100℃加熱10分鐘，冰上冷卻并再次離心，接著在90℃下具有2％二甲氧基丙烷的0.5M硫酸溶液中提取1小時，其導致水解的油和脂類化合物，得到轉甲基的脂類。將這些脂肪酸甲酯用石油醚萃取并最后使用毛細管柱(Chrompack，WCOTFusedSilica，CP-Wax-52CB，25μm，0.32mm)在170℃到240℃的溫度梯度下20分鐘和240℃下5分鐘進行GC分析。必須使用可以從商業來源(例如，Sigma)得到的標準品確定所得的脂肪酸甲酯的身份。為了分析轉基因芥菜和擬南芥植物，將植物材料最初通過在研棒和研缽中研磨進行機械勻漿使得它更容易提取。接著在100℃加熱10分鐘，并且在冰上冷卻后，再次沉淀。將細胞沉淀物用1M硫酸甲醇溶液和2％二甲基丙烷在90℃水解1小時，并將脂類轉甲基化。用石油醚萃取所得的脂肪酸甲酯(FAME)。使用毛細管柱(Chrompack，WCOTFusedSilica，CP-Wax-52CB，25m，0.32mm)和170℃到240℃的溫度梯度20分鐘和240℃5分鐘，通過氣液色譜分析提取的FAME。通過與對應的FAME標準品(Sigma)相比較證實脂肪酸甲酯的身份。通過FAME混合物的合適的化學衍生例如，得到4，4-二甲氧基噁唑啉衍生物(Christie，1998)來通過GC-MS進一步分析雙鍵的身份和位置。用pGPTV-D6D5E6(Tc)構建體分析轉基因薺菜植物的葉材料對已經用根據實施例4的pGPTV-D6D5E6(Tc)質粒轉化的植物檢查經修飾的脂肪酸。根據上面的描述提取并通過氣相色譜分析的葉子用作起始材料。轉基因植物在這里顯示出能夠產生新的脂肪酸(表1，與對照比較)。表1可以見說明書的末尾。對多種獨立的轉基因株系的分析表明由于所用的基因的活性，在葉材料中產生了脂肪酸GLA(γ18:3)、SDA(18:4)、DGLA(20:3d8，11，14)、AA(20:4)和EPA(20:5)。所述脂肪酸不存在于未轉化的植物(對照)中。在該上下文中，花生四烯酸(AA)和二十碳五烯酸(EPA)是人營養的有價值的脂肪酸。存在分別高達8.9％和4.8％的這兩種有價值的脂肪酸。EPA是尤其有價值的脂肪酸。為此，進行增加EPA含量的嘗試。第一種方法為使用ARA特異的ω3-去飽和酶，其將ARA轉化為EPA。在另一方法中，測試18:4-特異性延伸酶與所述ω3-去飽和酶組合的用途。用pGPTV-D6D5E6(Tc)ω3Pi構建體分析轉基因薺菜植物的葉材料對已經用根據實施例4的pGPTV-D6D5E6(Tc)ω3Pi質粒轉化的植物分析經修飾的脂肪酸。根據上面的描述提取并通過氣相色譜分析的葉子用作起始材料。轉基因植物在這里顯示出能夠產生新的脂肪酸(表2，與對照比較)。表2可以見說明書的末尾。對多種獨立的轉基因株系的分析表明由于所用的基因的活性，在葉材料中產生了脂肪酸GLA(γ18:3)、SDA(18:4)、20:4d8，11，14，17和EPA(20:5)。所述脂肪酸不存在于未轉化的植物(對照)中。在該上下文中，二十碳五烯酸(EPA)是人營養的有價值的脂肪酸。存在高達12.5％的該有價值的脂肪酸。這里額外使用ω3Pi明顯降低了AA含量并且使反應偏向更有價值的產物EPA。用pGPTV-D6D5E6(Tp)ω3Pi構建體分析轉基因薺菜植物的葉材料對已經用根據實施例4的pGPTV-D6D5E6(Tp)ω3Pi質粒轉化的植物分析經修飾的脂肪酸。根據上面的描述提取并通過氣相色譜分析的葉子用作起始材料。轉基因植物在這里顯示出能夠產生新的脂肪酸(表3，與對照比較)。表3可以見說明書的末尾。對多種獨立的轉基因株系的分析表明由于所用的基因的活性，在葉材料中產生了脂肪酸GLA(γ18:3)、SDA(18:4)、20:4d8，11，14，17和EPA(20:5)。所述脂肪酸不存在于未轉化的植物(對照)中。在該上下文中，二十碳五烯酸(EPA)是人營養的有價值的脂肪酸。存在高達14.7％的該有價值的脂肪酸。這里額外使用ω3Pi明顯降低了ARA含量并且使反應偏向更有價值的產物EPA。與pGPTV-D6D5E6(Tc)ω3Pi構建體相比，實現了較高的EPA(20:5)含量。在該上下文中，對有價值的脂肪酸EPA(20:5)的合成分析表明優選在葉子中發生(表4)。在其他植物器官、種子、莖和花中，僅僅可以檢測到極低量的EPA和前體。另一實施方案研究有價值的脂肪酸EPA是否富含特定一種或多種脂類類別。為此，如上述從葉子提取總脂類，然后通過硅酸鹽PrepSep柱(FisherScientific，USA)分級分離成中性和極性脂類。在進一步的步驟中，通過薄層層析(G-25，Machery-NageI)將中性脂類級分分級分離成甘油三酯(己烷/二乙醚/乙酸70∶30∶1，體積/體積/體積)。用氯仿/甲醇/氨(65∶25∶4，體積/體積/體積/，半乳糖脂)或用氯仿/甲醇/氨/水(70∶30∶4∶1，體積/體積/體積/體積，磷脂)分級分離極性脂類級分的等分試樣。用Primuline溶液(80％丙酮中0.05％，Sigma)噴霧后，在紫外線下鑒定各脂類類別并從薄層板刮除并轉甲基用于氣相色譜分析，如上文所述。表5描述了多種脂類類別中該分析的結果。表5可以見說明書結尾。發現TAG(油級分)中EPA的明顯富集。此外，在極性級分中觀察到磷脂酰膽堿(PC)和磷脂酰絲氨酸的積累。表4非轉基因的和轉基因品系(pGPTV-D6D5E6(Tp)ω3Pi)的多種植物器官的分析。脂肪酸以百分比表示。等同方案技術人員通過簡單的常規實驗就可以鑒定或者確定根據本文所述的本發明的具體實施方案的許多等同方案。這些等同方案意在權利要求的范圍內。序列表<110>巴斯福植物科學有限公司<120>在有用的轉基因植物中產生花生四烯酸和/或二十碳五烯酸的方法<130>PF56991<140>20050640<141>2005-08-08<160>12<170>PatentIn版本3.1<210>1<211>1380<212>DNA<213>畸雌腐霉(Pythiumirregulare)<220><221>CDS<222>(1)..(1380)<223>Δ-6-去飽和酶<400>1atggtggacctcaagcctggagtgaagcgcctggtgagctggaaggag48MetValAspLeuLysProGlyValLysArgLeuValSerTrpLysGlu151015atccgcgagcacgcgacgcccgcgaccgcgtggatcgtgattcaccac96IleArgGluHisAlaThrProAlaThrAlaTrpIleValIleHisHis202530aaggtctacgacatctccaagtgggactcgcacccgggtggctccgtg144LysValTyrAspIleSerLysTrpAspSerHisProGlyGlySerVal354045atgctcacgcaggccggcgaggacgccacggacgccttcgcggtcttc192MetLeuThrGlnAlaGlyGluAspAlaThrAspAlaPheAlaValPhe505560cacccgtcctcggcgctcaagctgctcgagcagttctacgtcggcgac240HisProSerSerAlaLeuLysLeuLeuGluGlnPheTyrValGlyAsp65707580gtggacgaaacctccaaggccgagatcgagggggagccggcgagcgac288ValAspGluThrSerLysAlaGluIleGluGlyGluProAlaSerAsp859095gaggagcgcgcgcgccgcgagcgcatcaacgagttcatcgcgtcctac336GluGluArgAlaArgArgGluArgIleAsnGluPheIleAlaSerTyr100105110cgccgtctgcgcgtcaaggtcaagggcatggggctctacgacgccagc384ArgArgLeuArgValLysValLysGlyMetGlyLeuTyrAspAlaSer115120125gcgctctactacgcgtggaag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IDNO7中所示核酸序列的衍生物，其編碼在氨基酸水平上與SEQIDNO2、SEQIDNO4、SEQIDNO6或SEQIDNO8至少40％同源并且具有Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶或Δ5-去飽和酶活性的多肽。3.根據權利要求1的方法，其中向所述有用的植物中額外導入編碼ω3-去飽和酶的核酸序列。4.根據權利要求3的方法，其中所述編碼具有ω3-去飽和酶活性的多肽的核酸序列選自a)具有SEQIDNO9中所示序列的核酸序列，或者b)由于遺傳密碼簡并性可以從SEQIDNO10中所示的氨基酸序列衍生的核酸序列，或者c)SEQIDNO9中所示核酸序列的衍生物，其編碼在氨基酸水平上與SEQIDNO10至少60％同源并且具有ω3-去飽和酶活性的多肽。5.根據權利要求1到4的方法，其中所述核酸在營養組織中表達。6.根據權利要求1到4的方法，其中所述花生四烯酸或二十碳五烯酸或者花生四烯酸和二十碳五烯酸在所述有用的植物中主要以它們的酯的形式結合在磷脂或者三酰甘油酯中。7.根據權利要求6的方法，其中所述花生四烯酸或二十碳五烯酸或者花生四烯酸和二十碳五烯酸主要以它們的酯的形式結合在磷脂中并且其中所述磷脂具有基于總脂類按重量計至少10％的花生四烯酸或二十碳五烯酸含量。8.根據權利要求6的方法，其中所述花生四烯酸或二十碳五烯酸或者花生四烯酸和二十碳五烯酸主要以它們的酯的形式結合在三酰甘油酯中并且其中所述三酰甘油酯具有基于總脂類按重量計至少10％的花生四烯酸或二十碳五烯酸含量。9.根據權利要求1的方法，其中所述有用的植物是產油植物、蔬菜植物、生菜植物或者觀賞植物。10.根據權利要求9的方法，其中所述有用的植物選自由下面的科組成的植物科槭樹科(Aceraceae)、獼猴桃科(Actinidiaceae)、漆樹科(Anacardiaceae)、傘形科(Apiaceae)、檳榔科(Arecaceae)、菊科(Asteraceae)、檳榔科、樺木科(Betulaceae)、紫草科(Boraginaceae)、十字花科(Brassicaceae)、鳳梨科(Bromeliaceae)、大麻科(Cannabaceae)、美人蕉科(Cannaceae)、忍冬科(Caprifoliaceae)、藜科(Chenopodiaceae)、旋花科(Convolvulaceae)、葫蘆科(Cucurbitaceae)、薯蕷科(Dioscoreaceae)、胡頹子科(Elaeagnaceae)、杜鵑花科(Ericaceae)、大戟科(Euphorbiaceae)、豆科(Fabaceae)、山毛櫸科(Fagaceae)、醋栗科(Grossulariaceae)、胡桃科(Juglandaceae)、樟科(Lauraceae)、百合科(Liliaceae)、亞麻科(Linaceae)、錦葵科(Malvaceae)、桑科(Moraceae)、芭蕉科(Musaceae)、木犀科(Oleaceae)、酢漿草科(Oxalidaceae)、罌粟科(Papaveraceae)、禾本科(Poaceae)、蓼科(Polygonaceae)、石榴科(Punicaceae)、薔薇科(Rosaceae)、茜草科(Rubiaceae)、蕓香科(Rutaceae)、玄參科(Scrophulariaceae)、茄科(Solanaceae)、梧桐科(Sterculiaceae)和敗醬科(Valerianaceae)。11.根據權利要求7和8任一項的方法，其中所述花生四烯酸或二十碳五烯酸或者花生四烯酸和二十碳五烯酸被以它們的油、脂類或者游離脂肪酸的形式從所述有用的植物分離。12.根據權利要求1到4的方法，其中向所述有用的植物中導入脂肪酸或脂類代謝的額外的其他生物合成基因，所述基因選自酰基輔酶A脫氫酶、酰基ACP[＝酰基載體蛋白]去飽和酶、酰基ACP硫酯酶、脂肪酸酰基轉移酶、酰基-輔酶A溶血磷脂酰基轉移酶、脂肪酸合酶、脂肪酸羥化酶、乙酰基-輔酶A羧化酶、酰基輔酶A氧化酶、脂肪酸去飽和酶、脂肪酸炔屬酶(acetylenase)、脂加氧酶、三酰甘油脂肪酶、氧化丙二烯合酶、氫過氧化物裂合酶或脂肪酸延伸酶。13.根據權利要求12的方法，其中所述脂肪酸或脂類代謝的額外的生物合成基因選自Δ4-去飽和酶、Δ5-去飽和酶、Δ6-去飽和酶、Δ8-去飽和酶、Δ9-去飽和酶、Δ12-去飽和酶、Δ6-延伸酶或Δ9-延伸酶。14.根據權利要求11產生的油、脂類或游離脂肪酸用于生產飼料、食品、化妝品或者藥物的用途。全文摘要本發明涉及通過向植物中導入編碼具有Δ6-去飽和酶、Δ6-延伸酶或者Δ5-去飽和酶活性的核酸，在轉基因的有用植物中產生花生四烯酸和/或二十碳五烯酸的方法。此外，有利地在所述有用的植物中表達編碼ω3-去飽和酶的基因。在該方法的另一有利的實施方案中，編碼脂肪酸或者脂類代謝生物合成中的多肽的其他核酸序列可以在植物中表達。這里尤其有利的核酸序列是編碼Δ8-去飽和酶、Δ12-去飽和酶、Δ15-去飽和酶、Δ4-去飽和酶、Δ9-延伸酶和/或Δ5-延伸酶活性的那些核酸序列。本發明還涉及根據本發明的方法中產生的油、脂類和/或脂肪酸在飼料或者食品、化妝品或者藥物中的用途。文檔編號C12N15/82GK101238216SQ200680028565公開日2008年8月6日申請日期2006年8月1日優先權日2005年8月9日發明者P·奇爾普斯,J·鮑爾,X·邱,G·吳,N·達特拉,M·特魯克薩申請人:巴斯福植物科學有限公司