專利名稱：厭氧菌菌株的連續培養方法
技術領域：
本發明涉及一種厭氧菌菌株的連續培養方法，尤其是采用聚乙烯 醇復合凝膠作為包埋材料連續培養己酸菌的方法。
背景技術：
厭氧菌在有氧的情況下不能生長，要培養厭氧菌，必須創造一個 無氧的環境。通常采用在培養基中加入還原劑，或用物理、化學方法去除環境 中的游離氧，以降低氧化還原電勢。如硫基乙酸鈉培養基，牛心腦浸液培養基 等。常用的厭氧培養方法有厭氧缸法、厭氧袋、厭氧箱、生物耗氧法等，可根 據實際情況選用。
近年來，人工老窖泥的培養技術雖日臻成熟，但總體來看，經過人工培養 的發酵池在短時間內是達不到優質高產的效果。其主要原因有微生物馴化、增 長速度慢，有益微生物數目較低
發明內容
本發明目的是提供一種采用聚乙烯醇復合凝膠作為包埋材料的厭 氧菌菌株的連續培養方法。 本發明它包括下列步驟
a) 、混合在厭氧箱中將5 15mL己酸菌菌懸浮液加入到90mL聚乙烯醇復 合凝膠溶液中，攪拌均勻后倒入培養皿中鋪成平板；其中己酸菌菌懸浮液的用 量優選為10mL，己酸菌菌懸浮液包埋量為10mL。
b) 、冷凍、切塊 在-2(TC下冷凍處理48h，成型后取出切成塊狀，外形 尺寸為12mmX10mmX12mm;
c) 、培養然后在乙酸鈉培養基中進行培養，培養溫度為37"C。 本發明是采用固定化細胞原理對厭氧菌己酸菌經過包埋，主要利用己酸菌被
固定在凝膠中形成相對厭氧的環境，達到厭氧培養的效果。同時，在培養的過 程中固定化己酸菌載體沉積于容器底部或懸浮于液體中，起到隔離氧的作用； 并且其抗雜菌能力增強，可實現連續培養、操作簡單，具有明顯"增己降乳" 的作用。適合于粗放的工業化大生產。
具體實施方式
下面的實施例可以使本專業技術人員更全面地理解本發明，
但不以任何方式限制本發明。
實施例1固定化細胞的載體——聚乙烯醇(PVA)復合凝膠的合成方法如下將9
克聚乙烯醇緩慢溶解到100毫升85'C 95X:的熱水中，邊加邊攪拌，待聚乙烯 醇完全溶解后，加入4毫升的丙三醇，攪拌均勻，然后在不斷攪拌的同時加入 已溶解好的1克的硼砂(用1:1的熱水溶解)，邊加邊攪拌，進行凝膠化處理， 交聯時間為2 15分鐘，然后緩慢地加入1克的順丁烯二酸酐(用1:1的熱水溶 解)，不斷攪拌，直至凝膠溶液中無絮狀凝固物為止，所得透明、略帶乳白色的 粘稠溶膠，即為聚乙烯醇復合凝膠。
在厭氧箱中將10mL己酸菌菌懸浮液加入到90mL上述聚乙烯醇復合凝膠溶 液中，攪拌均勻后倒入培養皿中鋪成平板，其中己酸菌菌懸浮液包埋量為10mL。 然后在-2(TC下冷凍處理48h，成型后取出切成塊狀，外形尺寸為 12mmX10mmX12ram，然后在乙酸鈉培養基中進行培養，溫度為37°C。增殖液中 己酸菌菌數達到1. 5X 1(f個/mL，產酸度達到0. 6g/100mL。 實施例2
重復實施例1，有以下不同點在厭氧箱中將5mL己酸菌菌懸浮液加入到復 合凝膠溶液中，制成固定化己酸菌，然后在乙酸鈉培養基中進行培養，溫度為 37°C。增殖液中己酸菌菌數達到0.8Xl()9個/mL，產酸度達到0. lg/100mL。 實施例3
重復實施例l，有以下不同點在厭氧箱中將15mL己酸菌菌懸浮液加入到 上述復合凝膠溶液中，制成固定化己酸菌，然后在乙酸鈉培養基中進行培養， 溫度為37°C。增殖液中己酸菌菌數達到1.2X 109個/mL，產酸度達到 0. 46g/100mL。
權利要求
1、 一種厭氧菌菌株的連續培養方法，其特征在于它包括下列步驟a) 、混合在厭氧箱中將5 15mL己酸菌菌懸浮液加入到90mL聚乙烯醇復 合凝膠溶液中，攪拌均勻后倒入培養皿中鋪成平板；b) 、冷凍、切塊 在-2(TC下冷凍處理48h，成型后取出切成塊狀，外形 尺寸為12腿X10mmX12mm;c) 、培養然后在乙酸鈉培養基中進行培養，培養溫度為37。C。
2. 按照權利要求l的方法，其中己酸菌菌懸浮液的用量為10mU己酸菌菌 懸浮液包埋量為10mL。
全文摘要
本發明公開了一種采用聚乙烯醇復合凝膠作為包埋材料的厭氧菌菌株的連續培養方法。它包括下列步驟a)混合，在厭氧箱中將5～15mL己酸菌菌懸浮液加入到90mL聚乙烯醇復合凝膠溶液中，攪拌均勻后倒入培養皿中鋪成平板；b)冷凍、切塊，在-20℃下冷凍處理48h，成型后取出切成塊狀，外形尺寸為12mm×10mm×12mm；c)培養然后在乙酸鈉培養基中進行培養，培養溫度為37℃。本發明可實現連續培養、操作簡單，具有明顯“增已降乳”的作用。適合于粗放的工業化大生產。
文檔編號C12N1/20GK101311261SQ20071001801
公開日2008年11月26日 申請日期2007年5月25日 優先權日2007年5月25日
發明者周劍平, 暉 楊, 王治業, 魏甲乾 申請人:周劍平