專利名稱：：富含促進啤酒酵母發酵生物活性肽的水解物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及食品生物
技術領域：
，具體涉及一種富含促進啤酒酵母發酵生物活性肽的水解物，其制備方法及應用。技術背景谷氨酸棒狀桿菌，革蘭氏陽性菌，嚴格好氧，不產生孢子，是谷氨酸發酵后經超濾分離所得廢棄物的主要成分。谷氨酸棒狀桿菌含有豐富的蛋白質、核酸、碳水化合物、灰分、維生素以及微生物生長必需的微量元素，以干基計，其蛋白質含量在70%以上。谷氨酸棒狀桿菌蛋白質的氨基酸組成具明顯的特色，其中谷氨酸含量占總蛋白的30.60%，天冬氨酸占8.47%，丙氨酸占7.45%，甘氨酸占3.92%，，共計50.44%,這四種氨基酸均為酵母細胞非常容易吸收的有機氮源。然而，由于谷氨酸棒狀桿菌細胞壁較厚，破壁困難，開發利用難度較大，目前谷氨酸棒桿菌主要用于肥料生產，效益和生物利用價值都較低。常規啤酒發酵過程比較長，同時乙醇產量低，發酵液中殘糖含量較高，影響了生產廠家的生產效率和產品的質量。尋找一種成:ffi低的物質和方法來促進啤酒酵母發酵十分迫切。
發明內容本發明的目的是提供一種以谷氨酸棒狀桿菌為原料制備得到促進啤酒酵母發酵的生物活性肽。本發明的另一個目的是提供所述生物活性肽的制備方法。本發明還有一個目的是提供戶，生物活性肽的應用。本發明的技術方案是提供一種促進啤酒酵母發酵的生物活性肽，以谷氨酸棒狀桿菌為原料制備得到，所述生物活性肽的分子量主要集中在500Da2000Da，肽占總氮的50%60%質量。本發明提供了所述促進啤酒酵母發酵的生物活性肽的制備方法，縣用兩種內切蛋白酶限制性水解谷氨酸棒狀桿菌菌體得到。所述兩種內切蛋白酶為木瓜蛋白酶或堿性蛋白酶與胰凝乳蛋白酶或胰蛋白酶，選用食品級蛋白酶。所述i腿啤酒酵母發酵的生物活性肽的制備方、跑括以下步驟(1)將谷氨酸棒狀桿菌與水以l:l質量比例混合，攪拌均勻制備谷氨酸棒狀桿菌液；(2)采用高壓均質機對谷氨酸棒狀桿菌液進行均質預處理，以改變谷氨酸棒狀桿菌細胞壁的M性；(3)在55°C65°C，pH6.07.5條件下先采用木瓜蛋白酶或堿性蛋白酶(Alcalase)進行水解，水解度達到5%6。%后，添加胰蛋白酶^l夷凝乳蛋白酶進行水解；(4)當水解度達到1012%之間時，滅酶終止水解；(5)將水解液離心除去谷氨酸棒狀桿菌細胞壁；(6)將水解液過5000Da的超濾膜除去大分子量多S太和蛋白質，干燥得富含促進啤酒酵母發酵生物活性肽的水解物。其中，步驟(2)所述的均質處理條件為30MPa45MPa，均質兩次；(4)所述滅酶條件為8590'C溫度，時間為15min20min，所述水解度的測定采用pH-Stat法；步驟(5)所述離心條件是6000r/m，時間為15min。本發明提供了所述促進啤酒酵母發酵的生物活性肽的應用，以O.1%0.3%質量的濃度添加到酵母發酵液中，應用于P卑酒生產。本發明與現有技目比具有如下優點1、為谷氨酸發酵后超濾分離后所得廢棄物谷氨酸棒狀桿菌提供了新的、市場前景廣泛的應用。2、提供了一種新的富含生物活性肽的水解物，可顯著縮短酵母發酵時間，提高乙醇產量，降低發酵液中殘糖含量，從而大大提高啤酒生產廠家的生產效率和經濟效益。具體實施方式實施例1(1)將谷氨酸棒狀桿菌與水各lkg,即以l:l重量比例混合，攪拌均勻制備谷氨酸棒狀桿菌液；(2)采用高壓均質;feW谷氨酸棒狀桿菌進行均質處理，30MPa均質處理2次；(3)在55'C，用氫氧化鈉溶液調pH至6.0后，先采用木瓜蛋白酶進行水解，用pH-Stat法控制水解度達到5.0%后，添加胰凝乳蛋白酶進行水解，采用pH-Stat法控制7夂解度至10.2%，得酶解液；(4)將酶解液在85。C保持18min，使蛋白酶失活；(5)將酶解液6000r/m離心15min，除去谷氨酸棒狀桿菌細胞壁；(6)將水解液過5000Da的超濾膜除去大分子量多肽和蛋白質，獲得富含促進酵母菌發酵生物活性月太的酶解物。生物活性月太分子量范圍為500Da2000Da，生物活性肽占總氮的54.3%。所述生物活性肽促進酵母菌發酵機能與其它發^M源實驗數據比較見表l。<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>實施例2(1)將谷氨酸棒狀桿菌與水各lkg，混合，攪拌均勻制備谷氨酸棒狀桿菌液;(2)采用高壓均質纟;W谷氨酸棒狀桿菌液在35MPa下均質處理2次；(3)在60。C，采用氫氧化鈉溶液調pH至6.8，先采用堿性蛋白酶進行水解，當7]C解度達到5.5X后(pH-Stat法)，添加胰蛋白酶進行水解，采用pH-Stat法控制水解度至11.2%,得酶解液；(4)將(3)酶解液在88'C保持15min，使蛋白酶失活；(5)將酶解液6000r/m離心操作15min，除去谷氨酸棒狀桿菌細胞壁；(6)將水解液過5000Da的超濾膜除去大分子量多肽和蛋白質，獲得富含促進酵母菌發酵生物活性月太的水解物。經凝膠過濾色譜法測定得出生物活性肽分子量范圍在500Da-2000Da，生物活性肽占總氮的56.3%。實施例3(1)將谷氨酸棒狀桿菌與水以l:1質量比混合均勻制備谷氨酸棒狀桿菌液;(2)采用高壓均質機對谷氨酸棒狀桿菌液進行均質處理，45MPa條件下均質處理2次；(3)在65。C，采用氫氧化鈉溶液調pH至7.5，先采用木瓜蛋白酶進行水解，用pH-Stat法控制水解度達到5.8X后，添加胰蛋白酶進行水解，采用pH-Stat法控制水解度至11.8%;(4)將(3)酶解液在9(TC保持15min，使蛋白酶失活；(5)將水解液在6000r/m離心操作15min，除去谷氨酸棒狀桿菌細胞壁；(6)將水解液過5000Da的超濾膜除去大分子量多肽和蛋白質，獲得富含促進酵母菌發酵生物活性肽的水解物。經凝膠過濾色譜測定水解物中生物活性肽分子量集中在500-2000Da，生物活性肽占總氮的58.2%。權利要求1、一種富含促進啤酒酵母發酵生物活性肽的水解物，其特征是以谷氨酸棒狀桿菌為原料制備得到，所述生物活性肽的分子量集中在500Da～2000Da，生物活性肽占總氮的50％～60％質量。2、一種權禾腰求l所述富含促進啤酒酵母發酵生物活性肽的水解物的制備方法，其特征是采用兩種內切蛋白酶限制性水解谷氨酸棒狀桿菌菌體得到。3、根據權利要求2所述的制備方法，其特征是所述所述兩種內切蛋白酶為木瓜蛋白酶或堿性蛋白酶與胰凝乳蛋白酶或胰蛋白酶。4、根據權禾腰求3所述的帝lJ備方法，其特征是包括以下步驟-(1)將谷氨酸棒狀桿菌與水以1:1質量比例混合均勻，制備谷氨酸棒狀桿菌液；(2)對谷氨酸棒狀桿菌液進行均質預處理；(3)在55°C65°C，pH6.07.5下先用木瓜蛋白酶或堿性蛋白酶(Alcalase)進行水解，水解度達到5%6%后，添加胰蛋白酶劍夷凝乳蛋白酶進行水解；(4)當7乂解度達到1012%之間時，滅酶終止水解；(5)將水解液離心除去谷氨酸棒狀桿菌細胞壁；(6)將7K解液過5000Da的超濾膜除去大分子多肽和蛋白質，千燥，得富含促進啤酒酵母發酵生物活性妝的水解物。5、根據權利要求4所述的制備方法，其特征是步驟(2)所述的均質是在30MPa45MPa下均質兩次。6、根據權利要求4所述的制備方法，其特征是步驟(4)所述滅酶條件為8590。CMit，時間為1520min。7、根據權利要求4所述的制備方法，其特征是步驟(5)所述離心是在轉速6000r/m下離心15min。8、一種權利要求1所述富含促進啤酒酵母發酵生物活性B太的水解物的應用，其特征是以其0.1%0.3%質量的濃度添加到酵母發酵液中，應用于啤酒生產。全文摘要本發明公開了一種富含促進啤酒酵母發酵生物活性肽的水解物及其制備方法和應用，水解物是以谷氨酸棒狀桿菌為原料制備得到，所述生物活性肽的分子量集中在500Da～2000Da，生物活性肽占總氮的50％～60％質量。該水解物應用于啤酒生產，可顯著縮短發酵時間，提高發酵液中乙醇含量，降低發酵液中殘糖含量。文檔編號C12C11/00GK101148637SQ20071002967公開日2008年3月26日申請日期2007年8月10日優先權日2007年8月10日發明者春崔,徐正康,趙謀明,黃立新申請人:華南理工大學;廣州雙橋股份有限公司