專利名稱：制備鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質的方法
技術領域：
本發明屬于生物技術中色素蛋白質材料領域，具體涉及新型鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質的制備方法。
背景技術：
藻膽蛋白(phycobiliprotein)是藍藻和紅藻光合作用捕光復合物的功能組分。根據其吸收光譜和熒光光譜特征，藻膽蛋白可以分為藻紅蛋白(phycoerythrin，簡稱CPE)、藻紅藍蛋白(phycoerythrocyanin，簡稱PEC)、藻藍蛋白(phycocyanin，簡稱CPC)和變藻藍蛋白(allophycocyanin，簡稱APC)。CPE、PEC、CPC和APC含alpha和beta亞基，每個亞基中藻膽色素(phycobilin)通過硫醚鍵與藻膽蛋白脫輔基蛋白(apo-phycobiliprotein)半胱氨酸殘基的巰基共價結合，其種類及其與脫輔基蛋白的相互作用決定藻膽蛋白的光譜性質。藻膽色素與脫輔基蛋白共價結合形成特定的構象，使得CPE主要吸收約560nm的可見光，發射約580nm的熒光；PEC吸收約570nm的可見光，發射約630nm的熒光；CPC吸收約620nm的可見光，發射約640nm的熒光；APC吸收約650～660nm的可見光，發射約660～670nm的熒光。CPE結合的輔基色素為藻紅膽素(phycoerythrobilin，簡稱PEB)；PEC的alpha亞基結合的輔基色素為藻紫膽素(phycoviolobilin，簡稱PVB)；PEC的beta亞基結合的輔基色素為藻藍膽素(phycocyanobilin，簡稱PCB)；CPC和APC結合的輔基色素都為藻藍膽素PCB。
鏈霉親和素可以跟生物素特異結合，通過鏈霉親和素-生物素系統，可以實現信號放大作用，提高檢測靈敏度。目前鏈霉親和素-生物素系統已經廣泛應用于生物學檢測和醫療檢測等領域。目前主要是通過化學交聯實現鏈霉親和素對目標的標記。
PEC的alpha亞基可以通過大腸桿菌基因工程菌來生產(Tooley AJ，Glazer AN.Biosynthesis of the cyanobacterial light-harvesting polypeptidephycoerythrocyanin holo-alpha subunit in a heterologous host.J Bacteriol.2002；184(17)4666～4671)。PCB生物合成基因由hol和pcyA組成，可以通過大腸桿菌基因工程菌來生產PCB(F.T.Landgraf，C.Forreiter，et al.Recombinant holophytochrome inEcherichia col i[J].FEBS Letters，2001，508459-462)。與前人的方法不同，我們發現Anabaena sp.PCC7120中alr0617基因和Synechocystis sp.PCC6803中slr2049基因分別編碼beta裂合酶，在其它藍藻中也存在同源的beta裂合酶。這些beta裂合酶能催化PCB與PEC的beta亞基及其同源蛋白質共價結合，從而生成具有優良熒光性質的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質。通過基因工程技術，把鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白亞基脫輔基蛋白基因拼接后克隆于表達載體，可以在大腸桿菌內表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白亞基脫輔基蛋白的融合蛋白，直接實現鏈鏈霉親和素和藻紅藍蛋白亞基脫輔基蛋白的連接，而不需要通過化學交聯等方法來實現鏈霉親和素標記。
藻膽蛋白類熒光蛋白質可以應用于食品、化妝品、醫藥和生物工程領域。藻紅藍蛋白類熒光蛋白質具有優良的熒光性質，通過直接實現鏈鏈霉親和素和藻紅藍蛋白亞基脫輔基蛋白的連接，可用于生物學檢測以及醫療檢測領域。本發明為藻紅藍蛋白類色素蛋白質功能材料應用于醫藥和生物工程領域，特別是檢測領域奠定了基礎。
發明內容
本發明的目的在于提供一種制備鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質的方法，它是應用beta裂合酶催化藻藍膽素與鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白共價結合，從而制備鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質；將含有beta裂合酶基因、鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白拼接的基因、藻藍膽素生物合成酶基因的表達質粒依次轉入宿主菌，得到相應的工程菌，通過這種方法得到的基因工程菌生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質。
本發明的目的是這樣實現的一種制備鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質的方法，包括以下步驟 (1)采用基因工程方法，將beta裂合酶基因或其同源基因克隆于表達載體中，得到beta裂合酶表達質粒； (2)用基因工程方法將藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因或其同源基因和鏈霉親和素基因拼接后克隆于第二個表達載體中，可以表達鏈霉親和素和藻紅藍蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白表達質粒； (3)用基因工程方法將PCB生物合成酶基因hol和pcyA或其同源基因同時克隆于第三個表達載體中或分別克隆于第三、第四個表達載體中，得到PCB合成質粒； (4)將beta裂合酶表達質粒、鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白表達質粒、PCB生物合成酶質粒依次轉入配套的宿主菌，當這些表達質粒都轉入宿主菌后，得到相應的工程菌，應用此工程菌發酵后，按常規蛋白質提純技術，提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質。
上述的制備鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質的方法中所述的宿主菌為大腸桿菌。所述的beta裂合酶基因是指與Anabaena sp.PCC7120中alr0617基因或Synechocystis sp.PCC6803中slr2049基因同源的基因。所述的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因是指與Anabaena sp.PCC7120或Synechocystis sp.PCC 6803或M.laminosussp.PCC7603中pecB同源的基因。
本發明與現有技術相比，具有以下優點 1、不使用藻類為原料而是利用大腸桿菌生產藻紅藍蛋白類熒光蛋白質，大腸桿菌繁殖快，可以大大縮短周期； 2、與藻類相比，大腸桿菌細胞壁容易破碎，純化過程中可節省能源； 3、通過大腸桿菌生產，目標蛋白含量高，有His-tag標記，且體系中幾乎沒有性質類似的蛋白，提取方便； 4、產物中鏈霉親和素與熒光藻膽蛋白類色素蛋白質直接結合，不需額外進行處理，有利于發展熒光藻膽蛋白類色素蛋白質在檢測領域的應用。
圖1為本發明中Alr0617或Alr2049催化下生成的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質的吸收與熒光光譜；其中實線為吸收光譜，而虛線為熒光光譜。
具體實施例方式 下面以實例對本發明作進一步詳細的說明。
實施例1 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC 6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因；通過基因工程方法，將Anabaena sp.PCC7120中的alr0617基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-alr0617，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將Anabaena sp.PCC7120中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因(hol和pcyA)克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol-pcyA，在大腸桿菌中能同時表達HOl和PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因alr0617在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，它們在同一個載體pACYCDuet-1中，hol處于第一個多克隆位點，在Nco I和Pst I之間，pcyA在第二個多克隆位點，在Nde I和Xho I之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-alr0617、pET30-sa-pecB和pACYCDuet-hol-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophylthio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。其吸收與熒光光譜見圖1中所示，其中實線為吸收光譜，而虛線為熒光光譜。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式如下 從新鮮涂布的平板上挑取大腸桿菌菌株BL21(DE3)單菌落，接種于5mL LB培養基，37℃振蕩培養過夜；取100μL飽和培養物，無菌轉接至5mL LB培養基，37℃振蕩培養至OD600＝0.3～0.4時，將菌液轉移至5mL無菌離心管中，冰上放置10分鐘；離心1分鐘(10000g，4℃)棄去上清，收集沉淀菌體；用1mL預冷的0.1mol/L CaCl2無菌溶液重懸菌體，離心30s(10000g，4℃)去上清，菌體沉淀用100μL預冷的0.1mol/L CaCl2重懸，放置于冰上，加入一定量的構建好的質粒，混勻后冰浴放置30分鐘，42℃熱休克90s，冰浴5分鐘后加入300μL LB培養基，37℃低速振蕩培養45分鐘，無菌涂布在含有相應抗生素的LB培養基平板上，倒置于37℃培養箱至形成可見的單克隆菌斑。
提取3個左右菌落，分別接種到5ml含相應抗生素的LB培養基中，振蕩培養至飽和；分別從中取100μL轉接至5ml含相應抗生素的LB培養基中；37℃振蕩培養至OD600＝0.5-0.7時，冰浴約30分鐘，加入IPTG誘導表達；避光、20℃、150轉/分，表達約12小時。離心收集細胞，細胞加入緩沖液重懸；通過光譜儀測其產物熒光量，選取熒光產量高的菌株進行大量表達。
實施例2 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC 6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因；通過基因工程方法，將Anabaena sp.PCC7120中的alr0617基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-alr0617，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將Anabaena sp.PCC7120中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB(C155I)和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB(C155I)，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因(hol和pcyA)克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol-pcyA，在大腸桿菌中能同時表達HOl和PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB(C155I)在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因alr0617在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，它們在同一個載體pACYCDuet-1中，hol處于第一個多克隆位點，在Nco I和PstI之間，pcyA在第二個多克隆位點，在Nde I和Xho I之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-alr0617、pET30-sa-pecB(C155I)和pACYCDuet-hol-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophyl thio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式與實施例1相同。
實施例3 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因；通過基因工程方法，將Synechocystis sp.PCC6803中slr2049基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-slr2049，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將Anabaena sp.PCC7120中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因(hol和pcyA)克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol-pcyA，在大腸桿菌中能同時表達HOl和PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因slr2049在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，它們在同一個載體pACYCDuet-1中，hol處于第一個多克隆位點，在Nco I和Pst I之間，pcyA在第二個多克隆位點，在Nde I和Xho I之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-slr2049、pET30-sa-pecB和pACYCDuet-hol-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophylthio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。其吸收與熒光光譜見圖1中所示，其中實線為吸收光譜，而虛線為熒光光譜。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式與實施例1相同。
實施例4 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因；通過基因工程方法，將Anabaena sp.PCC7120中的slr2049基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-slr2049，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將Anabaena sp.PCC7120中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB(C155I)和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB(C155I)，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因(hol和pcyA)克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol-pcyA，在大腸桿菌中能同時表達HOl和PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB(C155I)在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因slr2049在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，它們在同一個載體pACYCDuet-1中，hol處于第一個多克隆位點，在Nco I和PstI之間，pcyA在第二個多克隆位點，在Nde I和Xho I之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-slr2049、pET30-sa-pecB(C155I)和pACYCDuet-hol-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophyl thio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式與實施例1相同。
實施例5 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因，M.laminosus sp.PCC7603已經部分測序，所用到基因序列在GeneBank中編號為M34254；通過基因工程方法，將Anabaena sp.PCC7120中的alr0617基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-alr0617，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將M.laminosus sp.PCC7603中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因(hol和pcyA)克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol-pcyA，在大腸桿菌中能同時表達HOl和PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因alr0617在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，它們在同一個載體pACYCDuet-1中，hol處于第一個多克隆位點，在Nco I和Pst I之間，pcyA在第二個多克隆位點，在Nde I和XhoI之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-alr0617、pET30-sa-pecB和pACYCDuet-hol-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophylthio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式與實施例1相同。
實施例6 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC 6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因，M.laminosus sp.PCC7603已經部分測序，所用到基因序列在GeneBank中編號為M34254；通過基因工程方法，將Anabaena sp.PCC7120中的alr0617基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-alr0617，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將M.laminosus sp.PCC7603中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB(C155I)和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB(C155I)，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因(hol和pcyA)克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol-pcyA，在大腸桿菌中能同時表達HOl和PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB(C155I)在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因alr0617在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，它們在同一個載體pACYCDuet-1中，hol處于第一個多克隆位點，在Nco I和PstI之間，pcyA在第二個多克隆位點，在Nde I和Xho I之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-alr0617、pET30-sa-pecB(C155I)和pACYCDuet-hol-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophyl thio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式與實施例1相同。
實施例7 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC 6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因，M.laminosus sp.PCC7603已經部分測序，所用到基因序列在GeneBank中編號為M34254；通過基因工程方法，將Synechocystis sp.PCC 6803中slr2049基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-slr2049，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將M.laminosus sp.PCC7603中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因(hol和pcyA)克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol-pcyA，在大腸桿菌中能同時表達HOl和PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因slr2049在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，它們在同一個載體pACYCDuet-1中，hol處于第一個多克隆位點，在Nco I和Pst I之間，pcyA在第二個多克隆位點，在Nde I和Xho I之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-slr2049、pET30-sa-pecB和pACYCDuet-hol-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophylthio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式與實施例1相同。
實施例8 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC 6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因，M.laminosus sp.PCC7603已經部分測序，所用到基因序列在GeneBank中編號為M34254；通過基因工程方法，將Anabaena sp.PCC7120中的slr2049基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-slr2049，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將M.laminosus sp.PCC7603中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB(C155I)和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB(C155I)，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因(hol和pcyA)克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol-pcyA，在大腸桿菌中能同時表達HOl和PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB(C155I)在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因slr2049在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，它們在同一個載體pACYCDuet-1中，hol處于第一個多克隆位點，在Nco I和PstI之間，pcyA在第二個多克隆位點，在Nde I和Xho I之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-slr2049、pET30-sa-pecB(C155I)和pACYCDuet-hol-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophyl thio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式與實施例1相同。
實施例9 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC 6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因；通過基因工程方法，將Anabaena sp.PCC7120中的alr0617基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-alr0617，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將Anabaena sp.PCC7120中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因之一hol克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol，在大腸桿菌中能表達HOl。
將藻藍膽素生物合成酶基因之一pcyA克隆于Novagen公司的pETDuet-1中，所得質粒叫pETDuet-pcyA，在大腸桿菌中能表達PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因alr0617在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，hol在pACYCDuet-1中，處于第一個多克隆位點，在Nco I和Pst I之間，pcyA在pETDuet-1中第二個多克隆位點，在Nde I和Xho I之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-alr0617、pET30-sa-pecB和pACYCDuet-hol、pETDuet-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophyl thio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式與實施例1相同。
實施例10 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC 6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因；通過基因工程方法，將Anabaena sp.PCC7120中的alr0617基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-alr0617，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將Anabaena sp.PCC7120中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB(C155I)和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB(C155I)，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因之一hol克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol，在大腸桿菌中能表達HOl。
將藻藍膽素生物合成酶基因之一pcyA克隆于Novagen公司的pETDuet-1中，所得質粒叫pETDuet-pcyA，在大腸桿菌中能表達PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB(C155I)在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因alr0617在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，hol在pACYCDuet-1中，處于第一個多克隆位點，在Nco I和Pst I之間，pcyA在pETDuet-1中第二個多克隆位點，在Nde I和Xho I之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-alr0617、pET30-sa-pecB(C155I)和pACYCDuet-hol、pETDuet-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophyl thio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式與實施例1相同。
實施例11 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC 6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因；通過基因工程方法，將Synechocystis sp.PCC 6803中slr2049基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-slr2049，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將Anabaena sp.PCC7120中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因之一hol克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol，在大腸桿菌中能表達HOl。
將藻藍膽素生物合成酶基因之一pcyA克隆于Novagen公司的pETDuet-1中，所得質粒叫pETDuet-pcyA，在大腸桿菌中能表達PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因slr2049在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，hol在pACYCDuet-1中，處于第一個多克隆位點，在Nco I和Pst I之間，pcyA在pETDuet-1中第二個多克隆位點，在Nde I和Xho I之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-slr2049、pET30-sa-pecB和pACYCDuet-ho l、pETDuet-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophyl thio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式與實施例1相同。
實施例12 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC 6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因；通過基因工程方法，將Anabaena sp.PCC7120中的slr2049基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-slr2049，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將Anabaena sp.PCC7120中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB(C155I)和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB(C155I)，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因之一hol克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol，在大腸桿菌中能表達HOl。
將藻藍膽素生物合成酶基因之一pcyA克隆于Novagen公司的pETDuet-1中，所得質粒叫pETDuet-pcyA，在大腸桿菌中能表達PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB(C155I)在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因slr2049在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，hol在pACYCDuet-1中，處于第一個多克隆位點，在Nco I和Pst I之間，pcyA在pETDuet-1中第二個多克隆位點，在Nde I和Xho I之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-slr2049、pET30-sa-pecB(C155I)和pACYCDuet-hol、pETDuet-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophyl thio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式與實施例1相同。
實施例13 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC 6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因，M.laminosus sp.PCC7603已經部分測序，所用到基因序列在GeneBank中編號為M34254；通過基因工程方法，將Anabaena sp.PCC7120中的alr0617基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-alr0617，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將M.laminosus sp.PCC7603中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因之一hol克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol，在大腸桿菌中能表達HOl。
將藻藍膽素生物合成酶基因之一pcyA克隆于Novagen公司的pETDuet-1中，所得質粒叫pETDuet-pcyA，在大腸桿菌中能表達PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因alr0617在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，hol在pACYCDuet-1中，處于第一個多克隆位點，在Nco I和Pst I之間，pcyA在pETDuet-1中第二個多克隆位點，在Nde I和Xho I之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-alr0617、pET30-sa-pecB和pACYCDuet-hol、pETDuet-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophyl thio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式與實施例1相同。
實施例14 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC 6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因，M.laminosus sp.PCC7603已經部分測序，所用到基因序列在GeneBank中編號為M34254；通過基因工程方法，將Anabaena sp.PCC7120中的alr0617基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-alr0617，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將M.laminosus sp.PCC7603中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB(C155I)和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB(C155I)，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因之一hol克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol，在大腸桿菌中能表達HOl。
將藻藍膽素生物合成酶基因之一pcyA克隆于Novagen公司的pETDuet-1中，所得質粒叫pETDuet-pcyA，在大腸桿菌中能表達PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB(C155I)在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因alr0617在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，hol在pACYCDuet-1中，處于第一個多克隆位點，在Nco I和Pst I之間，pcyA在pETDuet-1中第二個多克隆位點，在Nde I和Xho I之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-alr0617、pET30-sa-pecB(C155I)和pACYCDuet-hol、pETDuet-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophyl thio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式與實施例1相同。
實施例15 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC 6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因，M.laminosus sp.PCC7603已經部分測序，所用到基因序列在GeneBank中編號為M34254；通過基因工程方法，將Synechocystis sp.PCC 6803中slr2049基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-slr2049，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將M.laminosus sp.PCC7603中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因之一hol克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol，在大腸桿菌中能表達HOl。
將藻藍膽素生物合成酶基因之一pcyA克隆于Novagen公司的pETDuet-1中，所得質粒叫pETDuet-pcyA，在大腸桿菌中能表達PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因slr2049在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，hol在pACYCDuet-1中，處于第一個多克隆位點，在Nco I和Pst I之間，pcyA在pETDuet-1中第二個多克隆位點，在Nde I和Xho I之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-slr2049、pET30-sa-pecB和pACYCDuet-hol、pETDuet-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophyl thio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式與實施例1相同。
實施例16 (1)從GeneBank中可以查到，藻種Anabaena sp.PCC7120和Synechocystis sp.PCC6803的全序列已經測定完成。Anabaena sp.PCC7120在GeneBank中編號為BA000019，Synechocystis sp.PCC 6803在GeneBank中編號為BA000022，可從全序列中找到所需基因，M.laminosus sp.PCC7603已經部分測序，所用到基因序列在GeneBank中編號為M34254；通過基因工程方法，將Anabaena sp.PCC7120中的slr2049基因克隆于Novagen公司的pCDFDuet-1中，所得質粒叫pCDFDuet-slr2049，在大腸桿菌中能表達beta裂合酶。
根據GeneBank中查到的基因序列，設計了引物，利用相應的藻種提取總DNA作為模板，通過PCR擴增得到所需片段，通過上下游引物中設計的酶切位點，把目標片段轉入相應質粒中同樣的酶切位點上。
(2)將M.laminosus sp.PCC7603中的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因pecB(C155I)和鏈霉親和素基因(簡稱sa)拼接后克隆于Novagen公司的表達載體pET30中，所得質粒叫pET30-sa-pecB(C155I)，鏈霉親和素基因和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因拼接后，在大腸桿菌中能表達得到鏈霉親和素和藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白藻紅藍蛋白B。
鏈霉親和素基因可以從GeneBank中查到，編號為AF283893，通過全基因合成得到。
(3)將藻藍膽素生物合成酶基因之一hol克隆于Novagen公司的pACYCDuet-1中，所得質粒叫pACYCDuet-hol，在大腸桿菌中能表達HOl。
將藻藍膽素生物合成酶基因之一pcyA克隆于Novagen公司的pETDuet-1中，所得質粒叫pETDuet-pcyA，在大腸桿菌中能表達PcyA。
即脫輔基蛋白基因pecB(C155I)在pET30中是在EcoR V和Xho I兩個酶切位點之間，鏈霉親和素基因sa在Kpn I和Bgl II兩個酶切位點之間；裂合酶基因slr2049在pCDFDuet中，處于第二個多克隆位點，酶切位點是Nde I和Xho I；PCB合成酶基因是2個(hol和pcyA)，hol在pACYCDuet-1中，處于第一個多克隆位點，在Nco I和Pst I之間，pcyA在pETDuet-1中第二個多克隆位點，在Nde I和Xho I之間。
基因插入載體的步驟為根據基因序列設計引物，分上下游，一對；上游下游引物分別帶有酶切位點；利用相應的藻種提取總DNA作為模板；經過PCR擴增得到所需基因片段，把所得基因片段進行電泳，回收；所得片段用設計的限制性內切酶進行酶切，同時把載體用同樣的限制性內切酶進行酶切，分別回收基因片段和載體；基因片段和載體大致11混合，在T4連接酶作用下連接一定時間(一般4～6小時)；連接產物轉化進入大腸桿菌，利用含抗生素的平板篩選，挑取克隆，驗證正確即可。
(4)將pCDFDuet-slr2049、pET30-sa-pecB(C155I)和pACYCDuet-hol、pETDuet-pcyA轉入大腸桿菌，當這些質粒都轉入大腸桿菌后得到大腸桿菌工程菌；將此工程菌接種于pH 7.0的LB培養基中，37℃振蕩培養至OD600為0.5至0.8，加入異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isoprophyl thio-β-D-galactoside，簡稱IPTG)至終濃度為1mmol/L，20℃至37℃振蕩表達約12小時，生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B；離心收集菌體細胞，加入緩沖液、破碎細胞后，離心收集上清液，通過Ni2+親和層析，可提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質藻藍膽素-藻紅藍蛋白B。
將所用到的質粒的組合轉入大腸桿菌中的轉化方式與實施例1相同。
上述制備方法適用于采用各種藍藻中的beta裂合酶、藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白和PCB生物合成酶基因或其同源基因來制備藻紅藍蛋白類熒光蛋白質，但涉及到微生物菌種公開的問題，本發明只選用了GenBank中已公開全序列的藍藻Anabaena sp.PCC7120、Synechocystis sp.PCC 6803和已公開部分序列的藍藻M.laminosus sp.PCC7603為例對本發明方法加以說明，本領域的技術人員可以根據上述公開的內容采用其它原料實施本發明。
權利要求
1.一種制備鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質的方法，其特征在于包括下述步驟
(1)采用基因工程方法，將beta裂合酶基因或其同源基因克隆于表達載體中，得到beta裂合酶表達質粒；
(2)用基因工程方法將藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因或其同源基因和鏈霉親和素基因拼接后克隆于第二個表達載體中，可以表達鏈霉親和素和藻紅藍蛋白的融合蛋白，得到鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白表達質粒；
(3)用基因工程方法將PCB生物合成酶基因hol和pcyA或其同源基因同時克隆于第三個表達載體中或分別克隆于第三、第四個表達載體中，得到PCB合成質粒；
(4)將beta裂合酶表達質粒、鏈霉親和素標記的脫輔基蛋白表達質粒、PCB生物合成酶質粒依次轉入配套的宿主菌，當這些表達質粒都轉入宿主菌后，得到相應的工程菌，應用此工程菌發酵后，按常規蛋白質提純技術，提純得到相應的鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的宿主菌為大腸桿菌。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的beta裂合酶基因是指與Anabaenasp.PCC7120中alr0617基因或Synechocystis sp.PCC6803中slr2049基因同源的基因。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白基因是指與Anabaena sp.PCC7120或Synechocystis sp.PCC6803或M.laminosus sp.PCC7603中pecB同源的基因。
全文摘要
本發明公開了一種分子設計新型鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質的方法，通過應用藻膽蛋白beta裂合酶催化藻藍膽素與鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類脫輔基蛋白共價結合，制備鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質。本發明的方法應用生物過程生產鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質，是一種環境友好的生產方法。鏈霉親和素標記的藻紅藍蛋白類熒光蛋白質能應用于生物學和醫藥功能材料領域，特別是應用為生物學和醫學檢測領域的熒光探針。
文檔編號C12N1/21GK101397556SQ20071003060
公開日2009年4月1日 申請日期2007年9月28日 優先權日2007年9月28日
發明者坤 夏, 佟順剛 申請人:廣州天寶頌原生物科技開發有限公司