專利名稱：陰道加德納菌的選擇性培養基及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種陰道加德納菌的選擇性培養基及其制備方法。
背景技術：
陰道加德納菌(Gardnerella vaginalis, GV)是女性細菌性陰 道炎(Bacterial Vaginosis, BV)最常見病原體，性接觸傳播疾病的 病原菌之一，自1955年由Gardner與Dukes從非特異性陰道炎患者 的標本中分離出該菌株以來，國內外不斷有該菌引起的泌尿生殖系統 感染的報道。目前，由于陰道加德納菌營養要求較高，首次分離需要 提供C02或無氧環境，給實驗室常規分離帶來困難，為此，國內開展 陰道加德納菌培養的醫院并不多，不利于陰道病的治療。
培養基組分是人為提供給微生物的最重要的培養環境，是影響微 生物生長繁殖和代謝產物合成的重要因素。
目前所用的培養基國外(1)陰道瓊脂培養基BBL公司的哥 倫比亞基礎培養基中，加入1%蛋白胨，高壓滅菌后加入5%人血。(2) 鑒別培養基Difco公司戈司曼培養基中，加際蛋白胨，高壓滅菌后加 入萘啶酸30mg/L，多粘菌素B 20mg/L，新霉素40 mg/L。
國內(1)分離培養基牛肉湯100ml，蛋白胨lg， NaC10.5g， 吐溫80 0.02ml ，瓊脂1.2g，混合溶解調pH 7. 3， 12rC20min滅 菌。冷至50'C時，加入新鮮人血5 ml。 (2)改良人血哥倫比亞選擇 性培養基取哥倫比亞瓊脂19. 5 g，多蛋胨2. 5 g， 10 g/L膠木浸
膏溶于450ml蒸餾水，加熱溶解調整pH為7. 0 7. 4.高壓滅菌，冷卻 至5(TC左右加入無菌人血30ml 、組合抑菌劑一瓶(含慶大霉素2. 0 mg、 二性霉素B 1.0 mg、萘啶酮酸15.0 mg)混勻傾注平板。
國外(1)陰道瓊脂培養基和國內(1)分離培養基共同的缺點是 沒有加細菌和霉菌的抑菌劑，由于陰道分泌物中有大量的雜菌，且生 長較快，培養過程中與加德納菌爭奪營養，致使加德納菌生長不佳而 不易分離。
國外(2)鑒別培養基和國內(2)改良人血哥倫比亞選擇性培養基， 雖培養基配方有所改進，但由于慶大霉素、萘啶酮酸對陰道加德納菌 有抑制作用；慶大霉素對陰道加德納菌的敏感率為80. 4%。本發明過 程中65株加德納菌藥敏試驗結果慶大霉素敏感率為32. 3%，喹諾酮類 如環丙沙星敏感率為38. 5%。因此不利于加德納菌的生長。
發明內容
為了解決上述問題，本發明的目的在于提供了一種陰道加德納菌 的選擇性培養基及其制備方法，具有能有效的將加德納菌從革蘭陽性 的葡萄球菌、鏈球菌、革蘭陽性桿菌及各種霉菌中分離出來，從而快 速對加德納菌進行檢測，該培養基具備營養豐富、價格低廉、配制方 便的優點。
為達到上述的目的，本發明采用如下技術方案， 一種陰道加德納菌的選擇性培養基，配制1000ml培養基的配方
如下
營養肉湯粉15-20g; 哥倫比亞瓊脂35-44g; 吐溫80 0. 2-0. 4ml
革蘭染色l液(結晶紫液)0.05-0.075ml;
5氟胞嘧啶0. 02-0. 03g;
人血 50-80ml;
血漿 30-50ml;
蒸餾水加至1000ml 。
所述的配制1000ml培養基的優選配方如下
營養肉湯粉18g; 哥倫比亞瓊脂39g; 吐溫 80 0.3ml
革蘭染色1液(結晶紫液)0. 05-0. 075ml; 5氟胞嘧啶0.03g; 人血50ml; 血漿50ml;
蒸餾水加至1000ml 。
所述的陰道加德納菌的選擇性培養基的制備方法，包括以下步
(1) 將營養肉湯，哥倫比亞瓊脂，吐溫80，革蘭染色1液(結 晶紫液)，蒸餾水加的一起攪拌，并在12rC高壓滅菌20min。
(2) 冷卻到45 5(TC，然后加入5氟胞嘧啶，人血，血槳搖勻，
將培養基倒入平板中，冷卻后倒置放于4 8"C冰霜中備用，保存時 間不能超過3周。
使用時，只需要將陰道分泌物涂布于該培養養基上，置含5% 1(FoC02環境35。C 37。C培養24 48小時，加德納菌形成菌落為0. 5 0.8mm，淡紫色,光滑凸起，半透明，產生^溶血。
本發明的有益效果是本發明利用加德納菌對結晶紫液和5氟胞 嘧啶的抵抗，以及在人血平板上產生^溶血環和在5% 10%<:02環境生 長，可有效的將其從革蘭陽性的葡萄球菌、鏈球菌、革蘭陽性桿菌及 各種霉菌中分離出來，從而快速對加德納菌進行檢測，克服現有培養 基所加入的抗菌素不利于加德納菌生長，而不利于加德納菌從陰道分 泌物中分離出來，以及加二性霉素B，多粘菌素B價格較高等缺點， 本發明是一種既有利于加德納菌生長又能抑制其他細菌和霉菌生長 的選擇性培養基，該培養基具備營養豐富、價格低廉、配制方便的優 占。
具體實施例方式
實施例1
培養基組成營養肉湯粉15g;哥倫比亞瓊脂39 g;吐溫80
0.3ml;革蘭染色l液(結晶紫液)0.05ml;蒸餾水920ml; 5氟胞嘧 啶0.03g;人血50ml;血漿30ml (人、羊、兔均可)。將營養肉湯；
哥倫比亞瓊脂；吐溫80 ;革蘭染色1液(結晶紫液)；蒸餾水加在
一起攪拌混勻，并在12rC高壓滅菌20min。冷卻到45 50。C，然后 加入5氟胞嘧啶，人血，血漿，搖勻，將培養基倒入平板中，冷卻后 倒置放于4 8'C冰霜中備用；保存時間不能超過3周。
將含有加德納菌、葡萄球菌、白色含珠菌、革蘭陽性球菌、霉菌 的陰道分泌物涂布于上述制備的培養基上，置含5% 10%0)2環境35 。C 37。C培養24 48小時，加德納菌生長良好，為0. 5 0. 8mm，淡 紫色，光滑凸起，半透明，產生^溶血的菌落。葡萄球菌生長不良，白 色含珠菌、革蘭陽性球菌、霉菌不生長。
實施例2
培養基組成營養肉湯18 g;哥倫比亞瓊脂44 g;吐溫80 0. 3ml; 革蘭染色1液(結晶紫液)O. 0625ml;蒸餾水910ml;5氟胞嘧啶0. 02g; 人血50ml;血漿40ml (人、羊、兔均可)。將營養肉湯；哥倫比亞瓊 脂；吐溫80 ;革蘭染色1液(結晶紫液)；蒸餾水加在一起攪拌混
勻，并在12rC高壓滅菌20min。冷卻到45 50。C，然后加入5氟胞 嘧啶，人血，血漿，搖勻，將培養基倒入平板中，冷卻后倒置放于4 8"C冰霜中備用；保存時間不能超過3周。
將含有加德納菌、葡萄球菌、白色含珠菌、革蘭陽性球菌、霉菌 的陰道分泌物涂布于上述制備的培養基上，置含5% 10%0)2環境35 37"培養24 48小時，加德納菌生長良好，為0.5 0.8mm，淡紫色， 光滑凸起，半透明，產生^溶血的菌落，葡萄球菌、白色含珠菌、革蘭 陽性球菌、霉菌不生長。
實施例3
培養基組成營養肉湯18g;哥倫比亞瓊脂39 g;吐溫80 0. 3ml 革蘭染色1液(結晶紫液)0. 05ml;蒸餾水900ml; 5氟胞嘧啶0. 03g;
人血50 ml;血漿50ml (人、羊、兔均可)。將營養肉湯；哥倫比亞 瓊脂；吐溫80 ;革蘭染色1液(結晶紫液)；蒸餾水加在一起攪拌 混勻，并在12rC高壓滅菌20min。冷卻到45 50。C，然后加入5氟 胞嘧啶，人血，血漿，搖勻，將培養基倒入平板中，冷卻后倒置放于 4 8'C冰霜中備用；保存時間不能超過3周。
將含有加德納菌、葡萄球菌、白色含珠菌、革蘭陽性球菌、霉菌 的陰道分泌物涂布于上述制備的培養基上，置含5% 10%0)2環境 35 37。C培養24 48小時，加德納菌生長良好，為0. 5 0. 8mm，淡 紫色，光滑凸起，半透明，產生》溶血的菌落，葡萄球菌、白色含珠菌、 革蘭陽性球菌、霉菌不生長。
實施例4
培養基組成營養肉湯粉16.5g;哥倫比亞瓊脂40 g;吐溫80
0.2ml;革蘭染色l液(結晶紫液)0.06ml;蒸餾水890ml; 5氟胞嘧 啶0.028g;人血80ral;血漿30ml (人、羊、兔均可)。將營養肉湯；
哥倫比亞瓊脂；吐溫80 ;革蘭染色1液(結晶紫液)；蒸餾水加在
一起攪拌混勻，并在12rC高壓滅菌20min。冷卻到45 50。C，然后 加入5氟胞嘧啶，人血，血漿，搖勻，將培養基倒入平板中，冷卻后 倒置放于4 8'C冰霜中備用；保存時間不能超過3周。
將含有加德納菌、葡萄球菌、白色含珠菌、革蘭陽性球菌、霉菌 的陰道分泌物涂布于上述制備的培養基上，置含5% 10%0)2環境35 37。C培養24 48小時，加德納菌生長良好，為0.5 0.8mm，淡紫色， 光滑凸起，半透明，產生-溶血的菌落，未見其他雜菌生長。 實施例5
培養基組成營養肉湯粉17.2g;哥倫比亞瓊脂39g;吐溫80
0.3ml;革蘭染色l液(結晶紫液)0.075ml;蒸餾水885ml; 5氟胞 嘧啶0.03g;人血72 ml;血漿43ml (人、羊、兔均可)。將營養肉 湯；哥倫比亞瓊脂；吐溫80 ;革蘭染色1液(結晶紫液)；蒸餾水 加在一起攪拌混勻，并在12rC高壓滅菌20min。冷卻到45 50。C， 然后加入5氟胞嘧啶，人血，血槳，搖勻，將培養基倒入平板中，冷 卻后倒置放于4 8。C冰霜中備用；保存時間不能超過3周。
將含有加德納菌、葡萄球菌、白色含珠菌、革蘭陽性球菌、霉菌 的陰道分泌物涂布于上述制備的培養基上，置含5% 10%0)2環境35 。C 37t:培養24 48小時，加德納菌生長良好，為0. 5 0. 8mm，淡 紫色，光滑凸起，半透明，產生"溶血的菌落，未見其他雜菌生長。
實施例6
培養基組成營養肉湯20g;哥倫比亞瓊脂39 g;吐溫80 0. 3ml 革蘭染色1液(結晶紫液)0. 05ml;蒸餾水905ml; 5氟胞嘧啶0. 02g; 人血65 ml;血漿30ml (人、羊、兔均可)。將營養肉湯；哥倫比亞 瓊脂；吐溫80 ;革蘭染色1液(結晶紫液)；蒸餾水加在一起攪拌 混勻，并在12rC高壓滅菌20min。冷卻到45 50。C，然后加入5氟 胞嘧啶，人血，血漿，搖勻，將培養基倒入平板中，冷卻后倒置放于 4 8。C冰霜中備用；保存時間不能超過3周。
將含有加德納菌、葡萄球菌、白色含珠菌、革蘭陽性球菌、霉菌的陰道分泌物涂布于上述制備的培養基上，置含5% 10%0)2環境35 37。C培養24 48小時，加德納菌生長良好，為0.5 0.8mm，淡紫色， 光滑凸起，半透明，產生"溶血的菌落，未見其他雜菌生長。
權利要求
1、一種陰道加德納菌的選擇性培養基，其特征在于配制1000ml培養基的配方如下營養肉湯粉 15-20g；哥倫比亞瓊脂 35-44g；吐溫80 0.2-0.4ml；革蘭染色1液(結晶紫液) 0.05-0.075ml；5氟胞嘧啶 0.02-0.03g；人血 50-80ml；血漿 30-50ml；蒸餾水 加至1000ml。
2、 如權利要求1所述的陰道加德納菌的選擇性培養基，其特征 在于配制lOOOml培養基的配方如下營養肉湯18g; 哥倫比亞瓊脂39g; 吐溫80 0. 3ml革蘭染色l液(結晶紫液)0.05ml; 5氟胞嘧啶0.03g; 人血50ml; 血漿50ml;蒸餾水加至1000ml。
3、 一種如權利要求1所述的陰道加德納菌的選擇性培養基的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)將營養肉湯，哥倫比亞瓊脂，吐溫80，革蘭染色1液(結晶紫液)，蒸餾水加的一起攪拌，并在12rC高壓滅菌20min;(2)冷卻到45 50。C，然后加入5氟胞嘧啶，人血，血漿搖勻， 將培養基倒入平板中，冷卻后倒置放于4 8"冰霜中備用，保存時 間不能超過3周。
全文摘要
本發明公開了一種陰道加德納菌的選擇性培養基，配制1000ml培養基的配方如下營養肉湯粉15-20g；哥倫比亞瓊脂35-44g；吐溫80 0.2-0.4；革蘭染色1液(結晶紫液)0.05-0.075ml；5氟胞嘧啶0.02-0.03g；人血50-80ml；血漿30-50ml；蒸餾水加至1000ml；以及其制備方法。具有能有效的將加德納菌從革蘭陽性的葡萄球菌、鏈球菌、革蘭陽性桿菌及各種霉菌中分離出來，從而快速對加德納菌進行檢測，該培養基具備營養豐富、價格低廉、配制方便的優點。
文檔編號C12N1/20GK101173236SQ20071015702
公開日2008年5月7日 申請日期2007年11月22日 優先權日2007年11月22日
發明者呂旭軍, 吳先華, 夏景洋, 遐 朱, 茅利明, 靜 陳, 陳建江 申請人:中國醫科大學紹興華宇醫院