專利名稱：一種緩慢葡萄球菌選擇性培養基及其制備方法
技術領域：
本發明涉及醫學檢驗領域，具體涉及ー種緩慢葡萄球菌選擇性培養基及其制備方法。
背景技術：
緩慢葡萄球菌(Staphylococcuslentus)屬于葡萄球菌屬(Staphylococcus)。該菌由Schleifer K H等在1983年將其劃分為葡萄球菌屬的ー個獨立的種，即緩慢葡萄球菌(S. lentus)。緩慢葡萄球菌曾被認為不具有致病性，但越來越多的資料表明S.1entus是人類或許多動物不可忽視的致病菌，可引起人類疾病并在醫院感染中占據重要地位，尤其對于新生幼兒、存在嚴重基礎疾病或長期接受醫院治療的病人等免疫力低下的人群更容易導致嚴重的后果。由于S.1entus的多重耐藥問題日益嚴重，S.1entus引起的感染在國內 外呈顯著増加的趨勢。所謂微生物培養是ー種用人工方法使微生物生長繁殖的技木，而選擇性選擇性培養基是用來促進或抑制一定類型的生物體(如細胞或細菌等)而設計的選擇性培養基，利用這種選擇性培養基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。目前臨床上普遍使用的葡萄球菌選擇性培養基為甘露醇高鹽瓊脂(Manitol SaltAgar)，用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養。培養基成分為蛋白胨、雞蛋蛋白液、D-甘露醇、氯化鈉、酚紅、瓊脂。金黃色葡萄球菌菌落為黃色，大腸桿菌和沙門氏菌菌落為無色。但是，該種培養基并不能選擇性培養緩慢葡萄球菌，其原因在于在目前的選擇性培養基中金黃色葡萄球菌比緩慢葡萄球菌生長更快，很快覆蓋了培養基，緩慢葡萄球菌無法生長。
發明內容
本發明的技術任務是針對以上現有技術的不足，提供ー種對緩慢葡萄球菌分離率高的選擇性培養基。本發明解決其技術問題的技術方案是一種緩慢葡萄球菌選擇性培養基，其特征在，配制1000ml選擇性培養基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ；枸櫞酸鎂0.5g;瓊脂15g;假細錐甲素8 12mg;N-こ酰基-D-葡萄糖胺3.6 g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;蒸餾水加至1000ml。優化方案中，每1000ml選擇性培養基還含有硫酸銅5mg。優化方案中，每1000ml選擇性培養基還含有L-半胱氨酸0. lg。優化方案中，每1000ml選擇性培養基還含有濃度200g/L的百合水煮液200 300ml。最優化方案中，姆IOOOrnl選擇性培養基還含有硫酸銅5mg ；L-半胱氨酸0.1g ;濃度200g/L的百合水煮液20(T300ml。一種緩慢葡萄球菌選擇性培養基的制備方法，其特征在于包括以下步驟
(I)取百合加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得百合水煮液；(2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細錐甲素；N-こ酰基-D-葡萄糖胺；磷酸ニ氫鉀山-半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得百合水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min,滅菌后分裝。其中所述的麥芽浸粉、雞蛋蛋白液提供碳氮源和能量；枸櫞酸鎂和磷酸ニ氫鉀為緩沖劑，并可以抑制雜菌生長山-半胱氨酸屬氨基酸類，為營養劑；瓊脂是選擇性培養基的凝固劑；假細錐甲素對于金葡菌具有特異的抑菌作用，對于緩慢葡萄球菌無效；N_こ酰基-D-葡萄糖胺為緩慢葡萄球菌特異性營養劑，可以特異性的促進緩慢葡萄球菌繁殖。雞蛋蛋白液含有各種多肽、脂肪、生長因子、激素等，這些物質對促進緩慢葡萄球菌的繁殖和生長都是很重要的因素，此外雞蛋蛋白液還具有維持選擇性培養基PH值恒定的作用。銅離子屬于重金屬離子，在5mg/L這個濃度劑量下，沉積于金葡菌內部，導致胞壁消失或變薄，核糖體聚集成團塊，最終導致細菌變形及破裂，呈現重金屬源性損傷，而緩慢葡萄球菌對重金屬的運輸能力和滲透能力低于金葡菌，也即重金屬的抗性較高，故而加入硫酸銅可以有效地抑制金葡菌生長。百合為百合科植物卷丹Lilium lancifolium Thunb 、百合Lilium brown ii F. E. Brown var. viridulum Baker 或細葉百合 Lilium pumilum DC.的干燥肉質鱗葉，含有蛋白質、脂肪、淀粉、還元糖、維生素B1、B2、泛酸、維生素C、￠-胡蘿卜素等多種成分，可以提供能量代謝、細胞發育、新陳代謝因子，有助于促進緩慢葡萄球菌生長，尤其是重金屬環境下菌落的生長。本發明與現有技術相比較，具有檢出可靠、緩慢葡萄球菌分離率高的特點。
具體實施例方式以下結合實際情況，對本發明的具體實施方式
作詳細說明。實施例1，配制IOOOml選擇性培養基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細錐甲素8mg ；N-こ酰基-D-葡萄糖胺3. 6g ;憐酸~■龜!鐘0. 2g ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥牙浸粉；雞蛋蛋白液；氣化納；構櫞酸鎂；瓊脂；假細錐甲素；N-こ酰基-D-葡萄糖胺；磷酸ニ氫鉀溶于蒸餾水中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，毎次45 min,滅菌后分裝。實施例2，配制IOOOml選擇性培養基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細錐甲素12mg ；N-こ酰基-D-葡萄糖胺3. 6g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;硫酸銅5mg ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細錐甲素；N-こ酰基-D-葡萄糖胺；磷酸ニ氫鉀；硫酸銅溶于蒸餾水中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，毎次45 min，滅菌后分裝。實施例3，配制IOOOml選擇性培養基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細錐甲素IOmg ；N-こ酰基-D-葡萄糖胺3. 6g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ；L-半胱氨酸0.1g ;蒸懼水加至1000ml。制備方法取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細錐甲素；N-こ酰基-D-葡萄糖胺；磷酸ニ氫鉀山-半胱氨酸溶于蒸餾水中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，毎次45 min，滅菌后分裝。實施例4，配制IOOOml選擇性培養基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細錐甲素9mg ；N-こ酰基-D-葡萄糖胺3. 6g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;濃度200g/L的百合水煮液200ml ;蒸餾水加至1000ml。制備方法(1)取百合加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得百合水煮液；
(2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細錐甲素；N-こ酰基-D-葡萄糖胺；磷酸ニ氫鉀；溶于步驟I所得百合水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，毎次45 min，滅菌后分裝。實施例5，配制IOOOml選擇性培養基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂0. 5g ;瓊脂15g ;假細錐甲素Ilmg ；N-こ酰基-D-葡萄糖胺3. 6g ;磷酸ニ氫鉀0. 2g ;硫酸銅5mg ；L-半胱氨酸0.1g ;濃度200g/L的百合水煮液300ml ;蒸餾水加至1000ml。制備方法為
(1)取百合加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得百合水煮液；
(2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細錐甲素；N-こ酰基-D-葡萄糖胺；磷酸ニ氫鉀山-半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得百合水煮液中，混勻過濾后，蒸 餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min,滅菌后分裝。所述的百合水煮液濃度為200g/L，指的是每升百合水煮液中含有生藥200g。本發明所得緩慢葡萄球菌選擇性培養基具有檢出可靠、緩慢葡萄球菌分離率高的特點，為臨床資料充分證明，有關資料如下。I對象與方法。1.1選擇性培養基制備共設3組，分別為對照組、實施例1方案組、實施例5方案組。對照組為葡萄球菌選擇性瓊脂110 (CHAPMAN瓊脂)，配方為胰酪蛋白胨、酵母浸粉、明膠、D-甘露醇、乳糖、氯化鈉、磷酸氫ニ鉀、瓊脂。實施例1方案組、實施例5方案組的配方和制備方法見實施例。1. 2方法將30份經由PCR確定緩慢葡萄球菌陽性的標本中混入金色葡萄球菌，接種于培養基上，在37°C下孵育24小吋。1. 3統計學分析用SPSS 13. 0進行統計分析，Pく 0. 05表示有顯著性意義。2結果在30份接種標本中，細菌培養分離并鑒定為緩慢葡萄球菌的，實施例1方案組為25例，實施例5方案組為26例。對照組CHAPMAN瓊脂培養基菌落經鑒定最后被證實均為金葡菌，經統計學處理，本發明各實施例組與對照組比較具有明顯差異(P〈0. 001)。結果表明，本發明實施例緩慢葡萄球菌分離率明顯高于現有的選擇性培養基。
權利要求
1.一種緩慢葡萄球菌選擇性培養基，其特征在，配制IOOOml選擇性培養基的配方中含有麥芽浸粉15g ;雞蛋蛋白液150ml ;氯化鈉5g ;枸櫞酸鎂O. 5g ;瓊脂15g ;假細錐甲素8 12mg ；N-乙酰基-D-葡萄糖胺3. 6 g ;磷酸二氫鉀O. 2g ;蒸餾水加至1000ml。
2.根據權利要求1所述的一種緩慢葡萄球菌選擇性培養基，其特征在每IOOOml選擇性培養基還含有硫酸銅5mg。
3.根據權利要求1所述的一種緩慢葡萄球菌選擇性培養基，其特征在每IOOOml選擇性培養基還含有L-半胱氨酸O. lg。
4.根據權利要求1所述的一種緩慢葡萄球菌選擇性培養基，其特征在每IOOOml選擇性培養基還含有濃度200g/L的百合水煮液20(T300ml。
5.根據權利要求1所述的一種緩慢葡萄球菌選擇性培養基，其特征在每IOOOml選擇性培養基還含有硫酸銅5mg ；L-半胱氨酸O.1g ;濃度200g/L的百合水煮液20(T300ml。
6.一種緩慢葡萄球菌選擇性培養基的制備方法，其特征在于包括以下步驟 (1)取百合加水煮沸I小時，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得百合水煮液； (2)取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細錐甲素；N-乙酰基-D-葡萄糖胺；磷酸二氫鉀；L-半胱氨酸及硫酸銅溶于步驟I所得百合水煮液中，混勻過濾后，蒸餾水定容，低溫滅菌2次，每次45 min,滅菌后分裝。
全文摘要
本發明公開了一種緩慢葡萄球菌選擇性培養基及其制備方法。其特征在于，配制1000ml選擇性培養基的配方中含有麥芽浸粉15g；雞蛋蛋白液150ml；氯化鈉5g；枸櫞酸鎂0.5g；瓊脂15g；假細錐甲素8～12mg；N-乙酰基-D-葡萄糖胺3.6g；磷酸二氫鉀0.2g；蒸餾水加至1000ml。最佳優化配方制備方法為取麥芽浸粉；雞蛋蛋白液；氯化鈉；枸櫞酸鎂；瓊脂；假細錐甲素；N-乙酰基-D-葡萄糖胺；磷酸二氫鉀；L-半胱氨酸及硫酸銅溶于百合水煮液中，混勻，定容，滅菌后分裝。本發明與現有技術相比較，具有檢出可靠、緩慢葡萄球菌分離率高的特點。
文檔編號C12Q1/14GK103014127SQ201310010750
公開日2013年4月3日 申請日期2013年1月13日 優先權日2013年1月13日
發明者候素君 申請人:候素君