專利名稱：一種用于養殖水質調控的乳酸菌微生態制劑的生產方法
技術領域：
本發明涉及一種乳酸菌的生產方法，尤其涉及一種用于養殖水質調控的乳酸菌微生 態制劑的生產方法。
背景技術：
乳酸菌與人類的關系密切，其應用范圍廣泛，于臨床醫學方面，乳酸菌作為微生態 制劑可以治療腸道功能紊亂，維持腸道菌體平衡等。應用于飼料中，可促進生長發育， 防治疾病和改善禽產品的品質；可作為食品添加劑，提高酸度改善風味，增加養分提高 營養價值，延長食品保質期，防止腐敗的作用。于集約化對蟲下養殖過程中大量使用，其 調控藻相、凈化水質的作用明顯，提高了對蝦養殖的成功率。
現有的培養乳酸菌制劑的工藝一般是將培養基配料后混合攪拌，然后放置在發酵裝 置中并加入菌種進行培養，現在常用的是微生物發酵行業內的標準發酵罐進行發酵。標 準發酵罐內部有夾層，主要利用水蒸汽或冷水進行加熱或降溫，這種培養罐對環境條件 要求高，消毒滅菌必須徹底，培養成本高，而且設備投資大。
另一方面，對蝦養殖池塘潑灑使用的乳酸桿菌微生態制劑使用量大，若能降低產品 的生產成本就能大大降低水產養殖投入成本。
發明內容
本發明目的是提供一種用于養殖水質調控的乳酸菌微生態制劑的生產方法，該方法 采用全開放的培養方式進行乳酸菌微生態菌劑的生產，具有設備投資少，能耗小、工藝 簡單、生產成本低的特點。
本發明的目的是通過以下技術方案來實現的 一種用于養殖水質調控的乳酸菌微生 態制劑的生產方法，包括以下步驟-
(1) 試管培養將乳酸菌菌種接種于裝有培養基的試管中，在28 30'C溫度活化培
養；
(2) 搖瓶培養將菌種的活化培養液接種于裝有培養基的三角瓶中，28 3(TC溫度
靜置培養；
(3) 種子罐培養將三角瓶中的培養液接種于裝有培養基的種子罐中，溫度25 35 。C靜置培養；
(4) 發酵罐培養將種子罐中的培養液接種入裝有培養基的發酵罐中，溫度25 35 'C靜置培養24 36小時；當發酵液最終pH為3. 0 4. 0，菌密度為50億/ml時停止發 酵；
所述步驟(3)和步驟(4)中的培養基的pH為5. 5 6. 5;所述的培養基為1000重量份 水中包含以下重量份的組分糖蜜3 5、酵母膏3 5、玉米漿O. 8 1、 KH2P04 0. l 0.3、 MgS04 0 . 3 0. 5、 NaCl 3 5、葡萄糖8 10、蛋白胨0. 8 1。
所述歩驟(2)的活化培養液、步驟(3)和步驟(4)中的培養液的接種量為培養基總重量 的3~5%。
所述的步驟(1)和步驟(2)中的培養基為改進的MRS培養基，其pH為5. 5 6. 5;所述 的MRS培養基為1000重量份水中包含以下重量份的組分蛋白胨8 10、酵母膏3 5、 葡萄糖13 15、 KH2P04 1.5 2、 MgS04 0 . 3 0. 5、 MnS04 0. 20 0. 25、 CH3COONa 3 5。
所述的MRS培養基在12rC下高壓滅菌20分鐘。
步驟(3)所述的種子培養是先進行一級種子培養，然后再進行二級種子培養。所述 的一級種子培養為乳酸菌菌種在較小體積的種子罐進行培養；所述的二級種子乳酸菌菌 種在較大體積的種子罐進行培養。
所述步驟(4)種子罐中的培養液以3 5%的接種量接入裝有培養基的發酵罐中后，攪 拌均勻，分裝在小口瓶的塑料罐中進行靜置培養。
本發明與現有技術相比具有以下優點試管培養、搖瓶培養兩階段的培養基滅菌， 種子罐、發酵罐生產階段培養基不滅菌，釆用靜置培養方式，從而大大降低能耗；可采 用塑料罐代替微生物培養正式的發酵罐，從而大幅度降低生產成本的投入。以糖蜜、玉 米漿作為生產發酵培養基的主要原料，以降低生產成本，變廢為寶實現資源再次利用。
具體實施例方式
以下結合實施例和對比對本發明進行闡述，然而本發明的保護范圍并非僅僅局限于 以下實施例。所屬技術領域的普通技術人員依據本發明公開的內容，均可實現本發明的目的。
實施例一
一種用于養殖水質調控的乳酸菌微生態制劑的生產方法，包括以下步驟
(1) 試管培養將兩株乳酸菌菌種分別接種于兩個裝有MRS培養基的試管中，在28
。C溫度活化培養；然后合并所得培養液；
(2) 搖瓶培養:將菌種的活化培養液以培養基總重量的5%的接種量接種于裝有MRS
培養基的三角錐瓶中，28。C溫度靜置培養；
(3) 種子罐培養將三角瓶中的培養液以培養基總重量的5%的接種量接種于裝有
4500ml的培養基的聚乙烯瓶中，在溫度35。C靜置24小時進行一級種子培養，裝滿瓶； 然后再將一級種子培養液按培養基總重量的5%的接種量接種于500L的塑料罐中，按一 級種子培養的條件進行二級種子培養；
(4) 發酵罐培養:將種子罐中的培養液以培養基總重量的5%的接種量接入裝有培養 基的1000L發酵罐中，溫度35"靜置培養24小時；當發酵液最終pH為4. 0，菌密度為 50億/ml時停止發酵。
所述步驟(3)和步驟(4)中的培養基的pH為6. 5;所述的培養基為每升水中包含以下 重量份的組分糖蜜5g、酵母膏5 g、玉米漿1 g、 KH2P04 0. 3 g、 MgS04 0. 5 g、 NaCl 5 g、葡萄糖IO g、蛋白胨l g。
所述的步驟(1)和步驟(2)中的培養基為改進的MRS培養基，其pH為6. 5;所述的MRS 培養基為每升水中包含以下重量份的組分蛋白胨10 g、酵母膏5 g、葡萄糖15 g、 KH2P04 2 g、 MgS04 0. 5 g、 MnS04 0.25 g、 CH3COONa 5 g。所述的MRS培養基在121。C下高壓滅 菌20分鐘。
實施例二
一種用于養殖水質調控的乳酸菌微生態制劑的生產方法，包括以下步驟
(1) 試管培養將兩株乳酸菌菌種分別接種于兩個裝有MRS培養基的試管中，在29 "C溫度活化培養；然后合并所得培養液；
(2) 搖瓶培養:將菌種的活化培養液以培養基總重量的4%的接種量接種于裝有MRS 培養基的三角瓶中，29。C溫度靜置培養；(3)種子罐培養將三角瓶中的培養液以培養基總重量的4%的接種量接種于裝有 4500ml的培養基的聚乙烯瓶中，在溫度30。C靜置30小時進行一級種子培養，裝滿瓶； 然后再將一級種子培養液按培養基總重量的4%的接種量接種于500L的塑料罐中，按一 級種子培養的條件進行二級種子培養；
(4)發酵罐培養將種子罐中的培養液以培養基總重量的4%的接種量接入裝有培 養基的1000L發酵罐后，攪拌均勻，分裝在5個小口瓶的塑料罐中，在溫度3(TC靜置培 養30小時；當發酵液最終pH為3.5，菌密度為50億/ml時停止發酵。
所述步驟(3)和步驟(4)中的培養基的pH為5. 5;所述的培養基為每升水中包含以下 重量份的組分糖蜜3g、酵母膏3 g、玉米漿0. 8 g、 KH2P04 0. 1 g、 MgS04 0. 3 g、 NaCl 3 g、葡萄糖8 g、蛋白胨0.8 g。
所述的步驟(1)和步驟(2)中的培養基為改進的MRS培養基，其pH為5. 5;所述的MRS 培養基為每升水中包含以下重量份的組分蛋白胨8 g、酵母膏3 g、葡萄糖13 g、 KH2P04 1.5 g、 MgS04 0.3 g、 MnS04 0. 20 g、 CH3C00Na 3 g。所述的MRS培養基在121°<3下高壓 滅菌20分鐘。
實施例三
一種用于養殖水質調控的乳酸菌微生態制劑的生產方法，包括以下步驟
(1) 試管培養將兩株乳酸菌菌種分別接種于兩個裝有MRS培養基的試管中，在30
"C溫度活化培養；然后合并所得培養液；
(2) 搖瓶培養:將菌種的活化培養液以培養基總重量的3%的接種量接種于裝有MRS
培養基的三角瓶中，3(TC溫度靜置培養；
(3) 種子罐培養將三角瓶中的培養液以培養基總重量的3%的接種量接種于裝有
4500ml的培養基的聚乙烯瓶中，在溫度25。C靜置36小時進行一級種子培養，裝滿瓶； 然后再將一級種子培養液按培養基總重量的3%的接種量接種于500L的塑料罐中，按一 級種子培養的條件進行二級種子培養；
(4)發酵罐培養將種子罐中的培養液以培養基總重量的3%的接種量接入裝有 培養基的1000L發酵罐中，溫度25'C靜置培養36小時；當發酵液最終PH為3. 0，菌密 度為50億/ml時停止發酵。
所述步驟(3)和步驟(4)中的培養基的PH為6;所述的培養基為每升水中包含以下重
量份的組分糖蜜4g、酵母膏4 g、玉米漿0. 9 g、 KH2P04 0 . 2 g、 MgS04 0 . 4 g、 NaCl 4 g、葡萄糖9 g、蛋白胨0.9 g。
所述的步驟(1)和步驟(2)中的培養基為改進的MRS培養基，其pH為6;所述的MRS 培養基為每升水中包含以下重量份的組分蛋白胨9 g、酵母膏4 g、葡萄糖14 g、 KH2P04 1.8 g、 MgS04 0.4 g、 MnS04 0.2 g、 CH3COONa 4 g。所述的MRS培養基在121。C下高壓 滅菌20分鐘。
本發明提供的產品乳酸菌微生態制劑施用于養殖水體，使用時每lOOOral菌劑兌塘 水10公斤，攪拌均勻，全塘潑灑，依水質情況，每10 15天投加菌劑一次。施用乳酸 菌微生態制劑能顯著性改善養殖水體水質，促進有益藻類的生長，調控藻相，水色鮮活， 不暗淡，提高養殖水體溶解氧，降解有機污染物，降低有害物質N02—-N、 NH4—-N的量， 提高養殖成功率。
權利要求
1、一種用于養殖水質調控的乳酸菌微生態制劑的生產方法，包括以下步驟(1)試管培養將乳酸菌菌種接種于裝有培養基的試管中，在28～30℃溫度活化培養；(2)搖瓶培養將菌種的活化培養液接種于裝有培養基的三角瓶中，28～30℃溫度靜置培養；(3)種子罐培養將三角瓶中的培養液接種于裝有培養基的種子罐中，溫度25～35℃靜置培養；(4)發酵罐培養將種子罐中的培養液接種入裝有培養基的發酵罐中，溫度25～35℃靜置培養24～36小時；當發酵液最終pH為3.0～4.0，菌密度為50億/ml時停止發酵；所述步驟(3)和步驟(4)中的培養基的pH為5.5～6.5；所述的培養基為1000重量份水中包含以下重量份的組分糖蜜3～5、酵母膏3～5、玉米漿0.8～1、KH2PO4 0.1～0.3、MgSO4 0.3～0.5、NaCl 3～5、葡萄糖8～10、蛋白胨0.8～1。
2、 根據權利要求1所述的用于養殖水質調控的乳酸菌微生態制劑的生產方法，其 特征是，所述步驟(2)的活化培養液、步驟(3)和步驟(4)中的培養液的接種量為培養基總 重量的3~5%。
3、 根據權利要求1所述的用于養殖水質調控的乳酸菌微生態制劑的生產方法，其 特征是，所述的步驟(1)和步驟(2)中的培養基為改進的MRS培養基，其pH為5. 5 6. 5; 所述改進的MRS培養基為IOOO重量份水中包含以下重量份的組分蛋白胨8 10、酵母 膏3 5、葡萄糖13 15、 KH2P041. 5 2、 MgS04 0. 3 0. 5、 MnS04 0. 20 0. 25、 CH3COONa 3 5。
4、 根據權利要求3所述的用于養殖水質調控的乳酸菌微生態制劑的生產方法，其 特征是，所述的MRS培養基在12rC下高壓滅菌20分鐘。
5、 根據權利要求1所述的用于養殖水質調控的乳酸菌微生態制劑的生產方法，其 特征是，步驟(3)所述的種子培養是先進行一級種子培養，然后再進行二級種子培養。
6、 根據權利要求1所述的用于養殖水質調控的乳酸菌微生態制劑的生產方法，其 特征是，所述步驟(4)種子罐中的培養液以3 5%的接種量接入裝有培養基的發酵罐中 后，攪拌均勻后靜置培養，或分裝在小口瓶的塑料罐中進行靜置培養。
全文摘要
本發明公開了一種用于養殖水質調控的乳酸菌微生態制劑的生產方法，包括以下步驟(1)試管培養；(2)搖瓶培養；(3)種子罐培養；(4)發酵罐培養將種子罐中的培養液接種入裝有培養基的發酵罐中，溫度25～35℃靜置培養24～36小時；當發酵液最終pH為3.0～4.0，菌密度為50億/ml時停止發酵；所述步驟(3)和步驟(4)中的培養基的pH為5.5～6.5；所述的培養基為每升水中包含以下重量份的組分糖蜜3～5、酵母膏3～5、玉米漿0.8～1、KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> 0.1～0.3、MgSO<sub>4</sub> 0.3～0.5、NaCl 3～5、葡萄糖8～10、蛋白胨0.8～1。該方法采用全開放的培養方式進行用于養殖水質調控的乳酸菌微生態菌劑的生產，具有設備投資少，能耗小、工藝簡單、生產成本低的特點。
文檔編號C12R1/225GK101353636SQ20081019847
公開日2009年1月28日 申請日期2008年9月11日 優先權日2008年9月11日
發明者文國樑, 曹煜成, 李佳卓, 楊鶯鶯, 梁曉華, 洪敏娜, 陳永青 申請人:中國水產科學研究院南海水產研究所