專利名稱：激酶法生產培養用動物血清的方法
技術領域：
本發明屬于生物技術與生物制品領域，具體涉及通過給供血動物注射 激酶的關鍵途徑生產出培養用動物血清的方法。
背景技術：
培養用動物血清是生物技術研究及生物制品生產行業必不可少的原輔 材料之一。目前，人們對培養物(尤其是體外培養的動物細胞、組織等) 所需要的營養成分還研究的很不透徹，尤其是對這些培養物生長發育以及 發揮生物學功能所必需的具有生物活性的微量營養成分(如激素、細胞因 子、短鏈肽類等)更是知之甚少，且單一獲取這些物質的成本還極其高昂， 而動物血清一尤其是生長發育早期的動物血清中則大量含有這類物質，因 此在目前情況下，體外培養物質量的好壞與操作者在培養基中所使用的血 清質量的好壞有著極其密切的關系。
培養用動物血清的質量取決于血清中所含有的能刺激細胞生長的微量 細胞因子有效含量、血清營養成分的含量以及其可被細胞利用的程度，而 這些性狀一方面與提供血清的動物本身生理機能有著一定的關系，而更主 要的是與血清的獲取和加工過程有著極其密切的關系。現行的培養用動物
血清的生產工藝流程如下供血動物(如胎牛、新生牛、兔等)一 無菌 條件下采血一~ 分離血清—作為原料血清暫時凍存—在成品加工廠解;條^
多重粗濾—除菌過濾—滅活或不滅活—檢觀'"作為成品凍存—解凍使 用。在這樣的加工程序中，凝血是必然會出現的過程，在凝血過程中，纖 維蛋白原被分解成纖維蛋白，大量的纖維蛋白相互交聯，網絡血清中其他
營養成分形成凝血塊。凝血塊的形成不僅使血清產出量減少約10%，而且
使血清的營養含量一尤其是決定血清營養價值的微量細胞因子的含量大大 降低，但如若采取抗凝方法阻止凝血塊形成，則血清中又會保留大量的纖 維蛋白原的大分子物質，這些物質對動物細胞、組織類的體外培養物不僅 沒有營養價值，而且會影響培養物的生長、發育與生物學功能的發揮。因 此，采用恰當的技術盡量減少血清中的營養物質參與凝血塊形成，盡量使 血清中的大分子蛋白質降解為短鏈蛋白質將會極大的提高血清對培養物的 營養品質
發明內容
產培養用動物血清的方法，本發明是利用某些激酶激活供血動物體內降解 纖維蛋白的酶體系，以達到盡量減少血清成分參與血凝塊的形成，提高血 清營養物質含量，同時降低血清平均分子量、降低血清粘滯度等。
本發明技術方案為A、本發明的技術路線供血動物—靜脈推注或肌 肉注射由尿激酶或蟲引激酶與肝素或肝素鈉組成的混合制劑~^等待一定時 間《血一卡分離血清-—原料血清凍存~^竿凍—多級粗濾"> 除菌過濾 檢測—成品血清。
B、 技術路線說明
激酶法生產培養用動物血清的方法，按以下步驟進行(1)、當用于采 血的供血動物運輸到采血場地后，稱出供血動物的體重并記錄其體重；(2 )、 按每公斤體重250-500單位尿激酶或500-1000單位的封l激酶和100單位肝 素或肝素鈉的劑量，用無菌注射用水將尿激酶或蚓激酶和肝素或肝素鈉配 制成混合注射液，混合注射液體積量根據動物大小按每100公斤體重為30 毫升，將該混合注射液通過靜脈推注或肌肉注射方式注射入供血動物體內， 3分鐘內注射完成，等待O. 5-l小時，將動物保定在采血架上，按無菌操 作進行頸動脈采血；(3)、將采出的血液分裝于離心機的經消毒處理后的離 心杯中，無菌條件下離心分離血清，將分離出的血清分裝于容器中，如 玻璃瓶、塑料袋等，作為原料血清放于-2(TC條件下凍存；(4)、當需要精 加工時，將原料血清放置在室溫下讓其自然解凍，送入血清精加工生產線 上，在無菌條件下，依次通過孔徑為1.2、 0.8、 0.65、 0.45、 0.2、 0. 1微 米的濾膜逐級過濾，終端濾出的血清分裝于滅菌容器中，如玻璃瓶、塑 料袋等，制得成品血清，成品血清經檢測合格后直接使用或凍存備用。
C、 本發明的創新點在供血動物采血之前，先給動物注射用尿激酶或 封l激酶和肝素或者肝素鈉配制而成的混合注射液，該注射液能夠激活血液 中降解纖維蛋白的酶體系。
本發明的有益效果1、使血清產出率提高10%以上。2、使血清的平 均分子量降低5-10%。 3、使血清的粘滯度降低10%,平均每個濾芯過濾原 料血清的極限量提高30%以上。
具體實施例方式
結合實施例對本發明作進一步的描述。 實施例1
激酶法生產培養用動物血清的方法，按以下步驟進行(1)、當用于采 血的初生奶公牛運輸到采血場地后，稱出其體重為40公斤；(2)、用注射 器吸取總含量為10000單位的尿激酶濃縮液和總含量為4000單位的肝素鈉 濃縮液(此前已將尿激酶和肝素鈉按工作濃度配置成10倍的濃縮液)，兩者混合于新的試劑瓶中，再補加無菌注射用水至12毫升成為混合注射液， 將該混合注射液通過靜脈推注的方式注射入牛體內，3分鐘內注射完成，
等待l小時，將牛保定在采血架上，按無菌操作進行頸動脈采血2000ml; (3)、采血管直接將采出的血液分裝于離心機的離心杯中，無菌條件下離 心分離得1170 ml原料血清，將分離出的原料血清分裝于500ml規格的玻 璃瓶中，放于-20。C條件下凍存；(4)、當需要精加工時，將原料血清從凍 存條件下取出，放置在室溫下讓其自然解凍，送入血清精加工生產線上， 在無菌條件下，依次通過孔徑為1.2、 0.8、 0.65、 0.45、 0.2、 0. 1微米的 濾膜逐級過濾，終端濾出的血清分裝于滅菌血清瓶中，制得1160 ml成品 血清，成品血清直接使用或凍存備用。整個加工過程，成品血清產出率為 58% (相對于采出的全血)，精加工后的血清的平均分子量為61KD。精加工 后的血清的粘滯度為1. 31mpa. s。生產線無換芯極限加工量32萬毫升。 實施例2
激酶法生產培養用動物血清的方法，按以下步驟進行(1)、當用于采 血的初生奶公牛運輸到采血場地后，稱出其體重為40公斤；(2)、用注射 器吸取總含量為20000單位的封l激酶濃縮液和總含量為4000單位的肝素鈉 濃縮液(此前已將封l激酶和肝素鈉按工作濃度配置成10倍的濃縮液)，兩 者混合于新的試劑瓶中，再補加無菌注射用水至12毫升成為混合注射液， 將該混合注射液通過靜脈推注的方式注射入牛體內，3分鐘內注射完成， 等待1小時，將牛保定在采血架上，按無菌操作進行頸動脈采血2200ml;
(3)、采血管直接將采出的血液分裝于離心機的離心杯中，無菌條件下離 心分離得1247ml原料血清，將分離出的原料血清分裝于500ml規格的玻璃 瓶中，放于-20。C條件下凍存；(4)、當需要精加工時，將原料血清從凍存 條件下取出，放置在室溫下讓其自然解凍，送入血清精加工生產線上，在 無菌條件下，依次通過孔徑為1.2、 0.8、 0.65、 0.45、 0.2、 0. 1微米的濾 膜逐級過濾，終端濾出的血清分裝于滅菌血清并瓦中，制得1232 ml成品血 清，成品血清直接使用或凍存備用。整個加工過程，成品血清產出率為56%
(相對于采出的全血)，精加工后的血清的平均分子量為64KD。精加工后 的血清的粘滯度為1. 36mpa. s。生產線無換芯極限加工量26萬毫升。 實施例3
激酶法生產培養用動物血清的方法，按以下步驟進行(1)、當用于采 血的初生奶公牛運輸到采血場地后，稱出其體重為40公斤；(2)、用注射 器吸取總含量為40000單位的賴激酶濃縮液和總含量為4000單位的肝素濃 縮液(此前已將圳激酶和肝素按工作濃度配置成10倍的濃縮液)，兩者混 合于新的試劑瓶中，再補加無菌注射用水至12毫升成為混合注射液，將該
5混合注射液通過靜脈推注的方式注射入牛體內，3分鐘內注射完成，等待
0. 5小時，將牛保定在采血架上，按無菌操作進行頸動脈采血得2400ml; (3)、采血管直接將釆出的血液分裝于離心機的離心杯中，無菌條件下離 心分離得1355ml原料血清，將分離出的原料血清分裝于500ml規格的玻璃 瓶中，放于-20。C條件下凍存；(4)、當需要精加工時，將原料血清從凍存 條件下取出，放置在室溫下讓其自然解凍，送入血清精加工生產線上，在 無菌條件下，依次通過孔徑為1.2、 0.8、 0.65、 0.45、 0.2、 0. 1微米的濾 膜逐級過濾，終端濾出的血清分裝于滅菌血清瓶中，制得1344ml成品血清， 成品血清直接使用或凍存備用。整個加工過程，成品血清產出率為56% (相 對于采出的全血)，精加工后的血清的平均分子量為64KD。精加工后的血 清的粘滯度為1. 36mpa. s。生產線無換芯極限加工量26萬毫升 實施例4
激酶法生產培養用動物血清的方法，按以下步驟進行(1)、當用于采 血的初生奶公牛運輸到采血場地后，稱出其體重為40公斤；(2)、用注射 器吸取總含量為20000單位的尿激酶濃縮液和總含量為4000單位的肝素濃 縮液(此前已將尿激酶和肝素按工作濃度配置成10倍的濃縮液)，兩者混 合于新的試劑瓶中，再補加無菌注射用水至12毫升成為混合注射液，將該 混合注射液通過靜脈推注的方式注射入牛體內，3分鐘內注射完成，等待1 小時，將牛保定在采血架上，按無菌操作進行頸動脈采血2200ml, (3)、 采血管直接將采出的血液分裝于離心機的離心杯中，無菌條件下離心分離 得1186ml原料血清，將分離出的原料血清分裝于500ml規格的玻璃瓶中， 放于-2(TC條件下凍存；(4)、當需要精加工時，將原料血清從凍存條件下 取出，放置在室溫下讓其自然解凍，送入血清精加工生產線上，在無菌條 件下，依次通過孔徑為1.2、 0.8、 0.65、 0.45、 0.2、 0. 1樣i米的濾膜逐級 過濾，終端濾出的血清分裝于滅菌血清瓶中，制得1276ml成品血清，成品 血清直接使用或凍存備用。整個加工過程，成品血清產出率為58%(相對 于采出的全血)，精加工后的血清的平均分子量為61KD。精加工后的血清 的粘滯度為1. 31mpa. s。生產線無換芯極限加工量32萬毫升。
權利要求
1、激酶法生產培養用動物血清的方法，按以下步驟進行(1)、當用于采血的供血動物運輸到采血場地后，稱出供血動物的體重并記錄其體重；(2)、按每公斤體重250-500單位尿激酶或500-1000單位的蚓激酶和100單位肝素或肝素鈉的劑量，用無菌注射用水將尿激酶或蚓激酶和肝素或肝素鈉配制成混合注射液，混合注射液體積量根據動物大小按每100公斤體重為30毫升，將該混合注射液通過靜脈推注或肌肉注射方式注射入供血動物體內，3分鐘內注射完成，等待0.5-1小時，將動物保定在采血架上，按無菌操作進行頸動脈采血；(3)、將采出的血液分裝于離心機的經消毒處理后的離心杯中，無菌條件下離心分離血清，將分離出的血清分裝于容器中，作為原料血清放于-20℃條件下凍存；(4)、當需要精加工時，將原料血清放置在室溫下自然解凍，送入血清精加工生產線上，在無菌條件下，依次通過孔徑為1.2、0.8、0.65、0.45、0.2、0.1微米的濾膜逐級過濾，終端濾出的血清分裝于滅菌容器中，制得成品血清。
全文摘要
本發明涉及激酶法生產培養用動物血清的方法，按以下步驟進行稱出供血動物的體重，按每公斤250-500單位尿激酶或500-1000單位的蚓激酶和100單位肝素或肝素鈉的劑量，用無菌注射用水配制成混合注射液，將混合注射液通過靜脈推注或肌肉注射入供血動物體內，等0.5-1小時，按無菌操作進行頸動脈采血；將采出的血液裝于離心機的離心杯中，無菌條件下離心分離血清，將分離出的血清分裝于容器中作為原料血清放于-20℃條件下凍存；當需要精加工時，將原料血清放置在室溫自然解凍，在無菌條件下進行血清精加工，依次通過孔徑為1.2、0.8、0.65、0.45、0.2、0.1微米的濾膜逐級過濾，制得成品血清。本發明制得的血清產出率提高10％以上，血清的平均分子量降低5-10％，血清的粘滯度降低10％。
文檔編號C12N5/06GK101525591SQ20091006167
公開日2009年9月9日 申請日期2009年4月21日 優先權日2009年4月21日
發明者艷 劉, 敏 向, 錢運國, 陶弼菲, 韋文英, 高其雙, 黃海軍 申請人:武漢雙博亞農業生物科技有限公司