用于腫瘤診斷和治療的組合物和方法

專利名稱：用于腫瘤診斷和治療的組合物和方法
技術領域：
本發明致力于可用于診斷和治療哺乳動物中的腫瘤的物質組合物，及使用那些物 質組合物來診斷和治療哺乳動物中的腫瘤的方法。
背景技術：
惡性腫瘤(癌)是在美國位居心臟病之后的第二位致死原因(Boring et al.，CA Cancel J. Clin. 43 :7 (1993))。癌的特征為衍生自正常組織的異常或腫瘤性細胞的數量增 加，所述細胞增殖形成腫瘤塊；這些贅生性腫瘤細胞侵入鄰近組織；及產生惡性細胞，所述 惡性細胞最終經血液或淋巴系統傳播到局部淋巴結并經稱為轉移的過程傳播到遠處。在癌 性狀態，細胞在正常細胞不生長的條件下增殖。癌自身表現為多種形式，特征為不同程度的 侵襲力和進攻性。在尋找癌癥診斷和治療的有效細胞靶物的嘗試中，研究人員試圖鑒定在一種或多 種特定類型的癌細胞的表面上與一種或多種正常非癌性細胞相比特異性表達的跨膜多肽 膜相關多肽。通常，此類膜相關多肽在癌細胞的表面上比在非癌性細胞的表面上表達的量 更大。此類腫瘤相關細胞表面抗原多肽的鑒定導致了經基于抗體的療法特異性靶向破壞癌 細胞的能力。在這點上，注意到基于抗體的療法已經證明在某些癌癥的治療中是非常有效 的。例如，HERCEPTIN 和 RITUXAN (都來自 Genentech Inc. , South San Francisco, California)是已經分別成功用于治療乳腺癌和非何杰金氏(Hodgkin)淋巴瘤的抗體。更 具體的說，HERCEPTIN .是從重組DNA衍生的人源化單克隆抗體，其選擇性結合人表皮生長 因子受體2(HER2)原癌基因的胞外結構域。HER2蛋白過表達在25-30%的原發性乳腺癌中 觀察到。RITUXAN 是遺傳工程嵌合鼠/人單克隆抗體，其針對在正常的和惡性的B淋巴細 胞的表面上發現的⑶20抗原。這兩種抗體都是在CHO細胞中重組生產的。盡管在哺乳動物癌癥療法中有了上述進展，對于能夠分別檢測哺乳動物中腫瘤的 存在和有效抑制腫瘤性細胞生長的另外的診斷和治療劑仍然存在很大的需要。因此，本發 明的目標之一是鑒定在一種或多種類型的癌細胞上與正常細胞上或其它不同癌細胞上相 比表達更大量的細胞膜相關多肽，及使用那些多肽及其編碼核酸來生成可用于哺乳動物中 的癌癥的治療性處理和診斷性檢測的物質組合物。
發明概述A.實施方案在本說明書中，申請人首次描述了如下所述的細胞多肽(及其編碼核酸或其片 段)的鑒定，所述細胞多肽在一種或多種類型癌細胞表面上表達的程度高于它們在一種或 多種類型正常非癌細胞表面上表達的程度。這些多肽在本文中稱為腫瘤相關抗原性靶多肽 (Tumor-associated Antigenic Targetpolyp印tides，“TAT” 多肽)，它們有望充當哺乳動 物中癌癥治療和診斷的有效靶物。因此，在本發明的一個實施方案中，本發明提供了分離的核酸分子，其具有編碼腫 瘤相關抗原性靶多肽或其片段(“TAT”多肽)的核苷酸序列。在某些方面，所述分離的核酸分子包含與下述各項具有至少約80%的核酸序列同 一性，或者至少約 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的核酸序列同一性的核苷酸序列(a)編碼具有本文所公開的氨基酸序列的全長TAT多肽、本文所公開的缺少信號肽的TAT多肽氨基酸序列、本文所公開的有或沒有信號肽的跨膜TAT多肽的胞外域、或本文所公開的全長TAT多肽氨基酸序列的任何其它具體定義的片段的DNA分子； 或者(b) (a)的 DNA 分子的互補分子(complement)。在其它方面，所述分離的核酸分子包含與下述各項具有至少約80%的核酸序列同 一性，或者至少約 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的核酸序列同一性的核苷酸序列(a)包含本文所公開的全長TAT多肽cDNA的編碼序列、本文所公開的缺少信號肽的TAT多肽的編碼序列、本文所公開的有或沒有信號肽的跨膜TAT多肽的胞外域的編碼序列、或本文所公開的全長TAT多肽氨基酸序列的任何其它具體定義的片段的編碼序列的DNA分子；或者(b) (a)的DNA分子的互補分子。在其它方面，本發明涉及分離的核酸分子，其包含與下述各項具有至少約80 %的 核酸序列同一性，或者至少約 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的核酸序列同一性的核苷酸序列(a)與本文所公開的保藏于ATCC的任何人類蛋白質cDNA的全長編碼區編碼相同 成熟多肽的DNA分子；或者(b) (a)的DNA分子的互補分子。本文的另一個方面提供了分離的核酸分子，其包含如下核苷酸序列，所述核苷酸 序列編碼跨膜域刪除的或跨膜域滅活的TAT多肽，或者與此類編碼核苷酸序列互補，其中， 本文中公開了此類多肽的跨膜域。因此，設想了本文中所描述的TAT多肽的可溶性胞外域。在其它方面，本發明致力于分離的核酸分子，其與下述各項雜交
(a)編碼具有本文所公開的全長氨基酸序列的TAT多肽、本文所公開的缺少信號肽的TAT多肽氨基酸序列、本文所公開的有或沒有信號肽的跨膜TAT多肽的胞外域、或本文所公開的全長TAT多肽氨基酸序列的任何其它具體定義的片段的核苷酸序 列，或者(b) (a)的核苷酸序列的互補分子。在這點上，本發明的一個實施方案致力于本文所公開的全長TAT多肽編碼序列的 片段或其互補序列，它們可用作例如雜交探針，所述雜交探針可用作例如診斷探針、PCR引 物、反義寡核苷酸探針，或者用于編碼全長TAT多肽的片段，可任選編碼包含抗TAT多肽抗 體、TAT結合寡肽、或其它結合TAT多肽的有機小分子的結合位點的多肽。此類核酸片段 的長度通常為至少約5個核苷酸，或者長度為至少約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、 95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、 190、195、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、 370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、 560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、 750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、 940、950、960、970、980、990或1000個核苷酸，其中在此語境中，術語“約，，意指所述核苷酸 序列長度加上或減去所述長度的10%。此外，此類核酸片段經常包含衍生自TAT多肽全長 編碼序列或其互補序列的連續核苷酸。注意到TAT多肽編碼核苷酸序列或其互補序列的新 片段可以常規方式確定，即使用多種眾所周知的序列對比程序中的任一種將TAT多肽編碼 核苷酸序列與其它已知核苷酸序列對比，并確定哪個(些)TAT多肽編碼核苷酸序列或其互 補序列是新的。本文設想了 TAT多肽編碼核苷酸序列或其互補序列的所有此類新片段。還 設想了由這些核苷酸分子片段編碼的TAT多肽片段，優選那些包含抗TAT多肽抗體、TAT結 合寡肽、或其它結合TAT多肽的有機小分子的結合位點的TAT多肽片段。在另一個實施方案中，本發明提供了分離的TAT多肽，其由上文鑒定的任何分離 的核酸序列編碼。在某一個方面，本發明涉及分離的TAT多肽，其包含與具有本文所公開的全長氨 基酸序列的TAT多肽、本文所公開的缺少信號肽的TAT多肽氨基酸序列、本文所公開的有或 沒有信號肽的跨膜TAT多肽的胞外域、由本文所公開的任何核酸序列編碼的氨基酸序列、 本文所公開的全長TAT多肽氨基酸序列的任何其它具體定義的片段具有至少約80%的氨 基酸序列同一性，或者至少約 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、 91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,100% 的氨基酸序列同一性的氨基酸 序列。在另一個方面，本發明涉及分離的TAT多肽，其包含與任何本文所公開的保藏于 ATCC的人類蛋白質cDNA所編碼的氨基酸序列具有至少約80%的氨基酸序列同一性，或者 至少約 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%或100%的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
在又一個方面，本發明涉及分離的TAT多肽，其包含與編碼(a)具有本文所公開的全長氨基酸序列的TAT多肽、(b)本文所公開的缺少信號肽的TAT多肽氨基酸序列、(c)本文所公開的有或沒有信號肽的跨膜TAT多肽的胞外域、(d)本文所公開的任何核酸序列編碼的氨基酸序列、或(e)本文所公開的全長TAT多肽氨基酸序列的任何其它具體定義的片段的DNA分 子的互補序列雜交的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。在一個具體的方面，本發明提供了分離的TAT多肽，其沒有N-末端信號序列和/ 或沒有起始甲硫氨酸，且由編碼上文所述氨基酸序列的核苷酸序列所編碼。本文還描述了 用于產生它的方法，其中所述方法包括在適于表達TAT多肽的條件下培養包含如下載體 的宿主細胞，所述載體包含適宜的編碼核酸分子，并從細胞培養物回收TAT多肽。本發明的另一個方面提供了分離的TAT多肽，其是跨膜域刪除的或跨膜域滅活 的。本文還描述了用于產生它的方法，其中所述方法包括在適于表達TAT多肽的條件下培 養包含如下載體的宿主細胞，所述載體包含適宜的編碼核酸分子，并從細胞培養物回收TAT 多肽。在本發明的其它實施方案中，本發明提供了包含編碼任何本文所述多肽的DNA的 載體。還提供了包含任何此類載體的宿主細胞。舉例而言，所述宿主細胞可以是CHO細胞、 大腸桿菌(E. coli)細胞或酵母細胞。還提供了用于產生任何本文所述多肽的方法，包括在 適于表達期望多肽的條件下培養宿主細胞并從細胞培養物回收期望多肽。在其它實施方案中，本發明提供了分離的嵌合多肽，其包含與異源(非TAT)多肽 融合的任何本文所述TAT多肽。此類嵌合分子的例子包括與異源多肽諸如例如表位標簽序 列或免疫球蛋白Fc區融合的任何本文所述TAT多肽。在另一個實施方案中，本發明提供了抗體，其結合，優選特異性結合任何前述或后 述多肽。任選的是，所述抗體是單克隆抗體、抗體片段、嵌合抗體、人源化抗體、單鏈抗體、或 競爭性抑制抗TAT多肽抗體與其各自抗原性表位結合的抗體。本發明的抗體可任選偶聯 生長抑制劑或細胞毒劑諸如毒素包括例如美登木素生物堿(maytansinoid)或加利車霉素 (calicheamicin)、抗生素、放射性同位素、溶核酶(nucleolytic enzyme)或諸如此類。本 發明的抗體可任選在CHO細胞或細菌細胞中產生，且優選抑制其所結合的細胞生長或增殖 或者誘導其所結合的細胞死亡。為了診斷目的，本發明的抗體可以被可檢測地標記，附著于 固相支持物，等等。在本發明的其它實施方案中，本發明提供了包含編碼任何本文所述抗體的DNA的 載體。還提供了包含任何此類載體的宿主細胞。舉例而言，所述宿主細胞可以是CHO細胞、 大腸桿菌細胞或酵母細胞。還提供了用于產生任何本文所述抗體的方法，包括在適于表達 期望抗體的條件下培養宿主細胞并從細胞培養物回收期望的抗體。在另一個實施方案中，本發明提供了寡肽(“TAT結合寡肽”)，其結合，優選特異性 結合任何前述或后述TAT多肽。任選的是，本發明的TAT結合寡肽可偶聯生長抑制劑或細 胞毒劑諸如毒素包括例如美登木素生物堿或加利車霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶或 諸如此類。本發明的TAT結合寡肽可任選在CHO細胞或細菌細胞中產生，且優選抑制其所 結合的細胞生長或增殖或者誘導其所結合的細胞死亡。為了診斷目的，本發明的TAT結合寡肽可以被可檢測地標記，附著于固相支持物，等等。在本發明的其它實施方案中，本發明提供了包含編碼任何本文所述TAT結合寡肽 的DNA的載體。還提供了包含任何此類載體的宿主細胞。舉例而言，所述宿主細胞可以是 CHO細胞、大腸桿菌細胞或酵母細胞。還提供了用于產生任何本文所述TAT結合寡肽的方 法，包括在適于表達期望的TAT結合寡肽的條件下培養宿主細胞并從細胞培養物回收期望 的TAT結合多肽。在另一個實施方案中，本發明提供了有機小分子(“TAT結合有機分子”)，其結合， 優選特異性結合任何前述或后述TAT多肽。任選的是，本發明的TAT結合有機分子可偶聯 生長抑制劑或細胞毒劑諸如毒素包括例如美登木素生物堿或加利車霉素、抗生素、放射性 同位素、溶核酶或諸如此類。本發明的TAT結合有機分子優選抑制其所結合的細胞生長或 增殖或者誘導其所結合的細胞死亡。為了診斷目的，本發明的TAT結合有機分子可以被可 檢測地標記，附著于固相支持物，等等。在又一個實施方案中，本發明涉及物質組合物，其包含與載體組合的如本文所述 的TAT多肽、如本文所述的嵌合TAT多肽、如本文所述的抗TAT抗體、如本文所述的TAT結 合寡肽、或如本文所述的TAT結合有機分子。任選的是，所述載體是藥學可接受的載體。在又一個實施方案中，本發明涉及制品，其包括容器及該容器中容納的物質組合 物，其中所述物質組合物可包含如本文所述的TAT多肽、如本文所述的嵌合TAT多肽、如本 文所述的抗TAT抗體、如本文所述的TAT結合寡肽、或如本文所述的TAT結合有機分子。該 制品可任選還包括附于所述容器的標簽或所述容器中包括的包裝插頁，其涉及所述物質組 合物在腫瘤的治療性處理或診斷性檢測中的用途。本發明的另一個實施方案致力于如本文所述的TAT多肽、如本文所述的嵌合TAT 多肽、如本文所述的抗TAT多肽抗體、如本文所述的TAT結合寡肽、或如本文所述的TAT結 合有機分子用于制備藥物的用途，所述藥物可用于治療對所述TAT多肽、嵌合TAT多肽、抗 TAT多肽抗體、TAT結合寡肽、或TAT結合有機分子有響應的狀況。本發明的其它實施方案致力于任何分離的抗體，其包含本文所公開的HVR-L1、 HVR-L2、HVR-L3、HVR-Hl、HVR-H2和HVR-H3序列中的一種或多種，或是與任何此類抗體結合 相同表位的任何抗體。B.另外的實施方案本發明的另一個實施方案致力于用于抑制表達TAT多肽的細胞生長的方法，其中 該方法包括使所述細胞接觸與所述TAT多肽結合的抗體、寡肽或有機小分子，且其中所述 抗體、寡肽或有機小分子與所述TAT多肽的結合引起所述表達TAT多肽的細胞的生長抑制。 在優選的實施方案中，所述細胞是癌細胞，且所述抗體、寡肽或有機分子與所述TAT多肽的 結合引起表達所述TAT多肽的所述細胞死亡。任選的是，所述抗體是單克隆抗體、抗體片 段、嵌合抗體、人源化抗體、或單鏈抗體。本發明方法中所采用的抗體、TAT結合寡肽和TAT 結合有機分子可任選偶聯生長抑制劑或細胞毒劑諸如毒素包括例如美登木素生物堿或加 利車霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶或諸如此類。本發明方法中所采用的抗體和TAT 結合寡肽可任選在CHO細胞或細菌細胞中產生。本發明的又一個實施方案致力于治療性處理具有癌性腫瘤的哺乳動物的方法，所 述癌性腫瘤包含表達TAT多肽的細胞，其中該方法包括給所述哺乳動物施用治療有效量的結合所述TAT多肽的抗體、寡肽或有機小分子，由此所述腫瘤得到有效的治療性處理。任選 的是，所述抗體是單克隆抗體、抗體片段、嵌合抗體、人源化抗體或單鏈抗體。本發明方法中 所采用的抗體、TAT結合寡肽和TAT結合有機分子可任選偶聯生長抑制劑或細胞毒劑諸如 毒素包括例如美登木素生物堿或加利車霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶或諸如此類。 本發明方法中所采用的抗體和寡肽可任選在CHO細胞或細菌細胞中產生。本發明的又一個實施方案致力于測定懷疑含有TAT多肽的樣品中該TAT多肽的存 在的方法，其中該方法包括使所述樣品暴露于結合所述TAT多肽的抗體、寡肽或有機小分 子，并測定所述樣品中所述抗體、寡肽或有機小分子與所述TAT多肽的結合，其中此類結合 的存在表明所述樣品中存在所述TAT多肽。任選的是，所述樣品可包括懷疑表達TAT多肽 的細胞(可以是癌細胞)。本發明方法中所采用的抗體、TAT結合寡肽或TAT結合有機分子 可任選被可檢測地標記、附著于固相支持物，或諸如此類。本發明的又一個實施方案致力于診斷哺乳動物中腫瘤的存在的方法，其中該方法 包括檢測(a)從所述哺乳動物獲得的組織細胞的測試樣品中和(b)相同組織來源或類型的 已知正常非癌性細胞的對照樣品中編碼TAT多肽的基因的表達水平，其中所述TAT多肽在 測試樣品中的表達水平高于對照樣品表明獲取該測試樣品的哺乳動物中存在腫瘤。本發明的又一個實施方案致力于診斷哺乳動物中腫瘤的存在的方法，其中該方法 包括(a)使包含從所述哺乳動物獲得的組織細胞的測試樣品接觸結合TAT多肽的抗體、寡 肽或有機小分子，并(b)檢測所述測試樣品中所述抗體、寡肽或有機小分子和所述TAT多肽 之間復合物的形成，其中復合物的形成表明所述哺乳動物中存在腫瘤。任選的是，所采用的 抗體、TAT結合寡肽或TAT結合有機分子被可檢測地標記，附著于固相支持物，或諸如此類， 和/或所述組織細胞的測試樣品是從懷疑具有癌性腫瘤的個體獲得的。本發明的又一個實施方案致力于治療或預防與改變的，優選提高的TAT多肽表達 或TAT多肽活性有關的細胞增殖性紊亂(病癥)的方法，該方法包括給需要此類治療的受 試者施用有效量的TAT多肽的拮抗劑。優選的是，所述細胞增殖性紊亂是癌癥，且所述TAT 多肽的拮抗劑是抗TAT多肽抗體、TAT結合寡肽、TAT結合有機分子或反義寡核苷酸。細胞 增殖性紊亂TAT多肽的有效治療或預防可以是直接殺死表達TAT多肽的細胞或抑制其生長 的結果，或者通過拮抗TAT多肽的細胞生長促進活性。本發明的又一個實施方案致力于使抗體、寡肽或有機小分子與表達TAT多肽的細 胞結合的方法，其中該方法包括在適于所述抗體、寡肽或有機小分子與所述TAT多肽結合 的條件下使表達TAT多肽的細胞接觸所述抗體、寡肽或有機小分子，并容許它們之間的結 合。在優選的實施方案中，所述抗體用可定性和/或定量測定所述抗體、寡肽或有機小分子 結合所述細胞的位置和/或量的分子或化合物標記。本發明的其它實施方案致力于(a)TAT多肽、(b)編碼TAT多肽的核酸或包含該核 酸的載體或宿主細胞、(c)抗TAT多肽抗體、(d) TAT結合寡肽、或(e) TAT結合有機小分子在 制備可用于(i)癌癥或腫瘤的治療性處理或診斷性檢測或(ii)細胞增殖性紊亂(病癥) 的治療性處理或預防的藥物中的用途。本發明的另一個實施方案致力于抑制癌細胞生長的方法，其中所述癌細胞的生長 至少部分依賴于TAT多肽的生長促進效果(其中所述TAT多肽可以是由癌細胞自身表達 的，或者是由產生對癌細胞具有生長促進效果的多肽的細胞表達的)，其中該方法包括使所述TAT多肽接觸結合所述TAT多肽的抗體、寡肽或有機小分子，由此拮抗所述TAT多肽的生 長促進活性，繼而抑制所述癌細胞的生長。優選完全抑制癌細胞的生長。甚至更優選的是， 所述抗體、寡肽或有機小分子與所述TAT多肽的結合誘導所述癌細胞的死亡。任選的是，所 述抗體是單克隆抗體、抗體片段、嵌合抗體、人源化抗體或單鏈抗體。本發明方法中所采用 的抗體、TAT結合寡肽和TAT結合有機分子可任選偶聯生長抑制劑或細胞毒劑諸如毒素包 括例如美登木素生物堿或加利車霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶或諸如此類。本發明 方法中所使用的抗體和TAT結合寡肽可任選在CHO細胞或細菌細胞中產生。本發明的又一個實施方案致力于治療性處理哺乳動物中的腫瘤的方法，其中所述 腫瘤的生長至少部分依賴于TAT多肽的生長促進效果，其中所述方法包括給所述哺乳動物 施用治療有效量的結合所述TAT多肽的抗體、寡肽或有機小分子，由此拮抗所述TAT多肽的 生長促進活性并使所述腫瘤得到有效的治療性處理。任選的是，所述抗體是單克隆抗體、抗 體片段、嵌合抗體、人源化抗體或單鏈抗體。本發明方法中所采用的抗體、TAT結合寡肽和 TAT結合有機分子可任選偶聯生長抑制劑或細胞毒劑諸如毒素包括例如美登木素生物堿或 加利車霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶或諸如此類。本發明方法中所采用的抗體和寡 肽可任選在CHO細胞或細菌細胞中產生。C.更多另外的實施方案在其它實施方案中，本發明致力于如下這套本申請可能的
權利要求
1.分離的核 酸，其具有與下述各項具有至少80%核酸序列同一性的核苷酸序列(a) DNA分子，其編碼SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)DNA分子，其編碼SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相關信號肽；(C)DNA分子，其編碼SEQ ID NO :2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；(d)DNA分子，其編碼SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；(e) SEQ ID NO 1所示核苷酸序列；(f) SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼序列；或(g) (a)，(b)，(C)，(d)，(e)或(f)的互補序列。2.分離的核酸，其具有(a)核苷酸序列，其編碼SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)核苷酸序列，其編碼SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相關信號肽；(c)核苷酸序列，其編碼SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；(d)核苷酸序列，其編碼SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；(e) SEQ ID NO 1所示核苷酸序列；(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區；或(g) (a)，(b)，(C)，(d)，(e)或(f)的互補序列。3.分離的核酸，其與下述任一項雜交(a)核酸，其編碼SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)核酸，其編碼SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相關信號肽；(c)核酸，其編碼SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；(d)核酸，其編碼SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；(e)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列；
(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區；或(g) (a)，(b)，(C)，(d)，(e)或(f)的互補序列。4.權利要求3的核酸，其中所述雜交在嚴格條件下發生。5.權利要求3的核酸，其長度為至少約5個核苷酸。6.表達載體，其包含權利要求1、2或3的核酸。7.權利要求6的表達載體，其中所述核酸與控制序列可操作連接，所述控制序列 受到用該載體轉化的宿主細胞的識別。8.宿主細胞，其包含權利要求7的表達載體。9.權利要求8的宿主細胞，其是CHO細胞、大腸桿菌細胞或酵母細胞。10.用于生產多肽的方法，包括在適于表達所述多肽的條件下培養權利要求8的 宿主細胞，并從細胞培養物回收所述多肽。11.分離的多肽，其與下述各項具有至少80%的氨基酸序列同一性(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相關信號肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；(e) SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的多肽。12.分離的多肽，其具有(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關信號肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的氨基酸序列。13.嵌合多肽，其包含與異源多肽融合的權利要求11或12的多肽。14.權利要求13的嵌合多肽，其中所述異源多肽是表位標簽序列或免疫球蛋白的 Fc區。15.分離的抗體，其結合與下述各項具有至少80%氨基酸序列同一性的多肽(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相關信號肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；(e) SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的多肽。16.分離的抗體，其結合具有下述任一項的多肽(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關信號肽序列；
(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(e)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的氨基酸序列。17.權利要求15或16的抗體，其是單克隆抗體。18.權利要求15或16的抗體，其是抗體片段。19.權利要求15或16的抗體，其是嵌合或人源化抗體。20.權利要求15或16的抗體，其與生長抑制劑偶聯。21.權利要求15或16的抗體，其與細胞毒劑偶聯。22.權利要求21的抗體，其中所述細胞毒劑選自毒素、抗生素、放射性同位素和溶 核酶。23.權利要求21的抗體，其中所述細胞毒劑是毒素。24.權利要求23的抗體，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。25.權利要求23的抗體，其中所述毒素是美登木素生物堿。26.權利要求15或16的抗體，其在細菌中產生。27.權利要求15或16的抗體，其在CHO細胞中產生。28.權利要求15或16的抗體，其誘導與其結合的細胞死亡。29.權利要求15或16的抗體，其被可檢測地標記。30.分離的核酸，其具有編碼權利要求15或16的抗體的核苷酸序列。31.表達載體，其包含與控制序列可操作連接的權利要求30的核酸，所述控制序 列由用該載體轉化的宿主細胞識別。32.宿主細胞，其包含權利要求31的表達載體。33.權利要求32的宿主細胞，其是CHO細胞、大腸桿菌細胞或酵母細胞。34.用于生產抗體的方法，包括在適于表達所述抗體的條件下培養權利要求32的 宿主細胞，并從細胞培養物回收所述抗體。35.分離的寡肽，其結合與下述任一項具有至少80%氨基酸序列同一性的多肽(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相關信號肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；(e) SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的多肽。36.分離的寡肽，其結合具有下述任一項的多肽(a) SEQ ID NO 2任一所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關信號肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(e)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的氨基酸序列。37.權利要求35或36的寡肽，其與生長抑制劑偶聯。
38.權利要求35或36的寡肽，其與細胞毒劑偶聯。39.權利要求38的寡肽，其中所述細胞毒劑選自毒素、抗生素、放射性同位素和溶 核酶。40.權利要求38的寡肽，其中所述細胞毒劑是毒素。41.權利要求40的寡肽，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。42.權利要求40的寡肽，其中所述毒素是美登木素生物堿。43.權利要求35或36的寡肽，其誘導其所結合的細胞死亡。44.權利要求35或36的寡肽，其被可檢測地標記。45. TAT結合有機分子，其結合與下述各項具有至少80%氨基酸序列同一性的多 肽(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相關信號肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；(e) SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的多肽。46.權利要求45的有機分子，其結合具有下述任一項的多肽(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關信號肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(e)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的氨基酸序列。47.權利要求45或46的有機分子，其與生長抑制劑偶聯。48.權利要求45或46的有機分子，其與細胞毒劑偶聯。49.權利要求48的有機分子，其中所述細胞毒劑選自毒素、抗生素、放射性同位素 和溶核酶。50.權利要求48的有機分子，其中所述細胞毒劑是毒素。51.權利要求50的有機分子，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。52.權利要求50的有機分子，其中所述毒素是美登木素生物堿。53.權利要求45或46的有機分子，其誘導其所結合的細胞死亡。54.權利要求45或46的有機分子，其被可檢測地標記。55.物質組合物，其包含與載體組合的(a)權利要求11的多肽;(b)權利要求12的多肽；(c)權利要求13的嵌合多肽；(d)權利要求15的抗體；(e)權利要求16的抗體；(f)權利要求35的寡肽；
(g)權利要求36的寡肽；(h)權利要求45的TAT結合有機分子；或⑴權利要求46的TAT結合有機分子。56.權利要求55的物質組合物，其中所述載體是藥學可接受的載體。57.制品，其包括(a)容器 ’及(b)所述容器中容納的權利要求55的物質組合物。58.權利要求57的制品，還包括附于所述容器的標簽或所述容器中包括的包裝插 頁，其涉及所述物質組合物用于癌癥的治療性處理或診斷性檢測的用途。59.抑制細胞生長的方法，所述細胞表達與所述任一項具有至少80%氨基酸序列 同一性的蛋白質(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相關信號肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的多肽，所述方法包括使所 述細胞接觸結合所述蛋白質的抗體、寡肽或有機分子，由此所述抗體、寡肽或有機分子與所 述蛋白質的結合引起所述細胞的生長抑制。60.權利要求59的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。61.權利要求59的方法，其中所述抗體是抗體片段。62.權利要求59的方法，其中所述抗體是嵌合或人源化抗體。63.權利要求59的方法，其中所述抗體、寡肽或有機分子與生長抑制劑偶聯。64.權利要求59的方法，其中所述抗體、寡肽或有機分子與細胞毒劑偶聯。65.權利要求64的方法，其中所述細胞毒劑選自毒素、抗生素、放射性同位素和溶 核酶。66.權利要求64的方法，其中所述細胞毒劑是毒素。67.權利要求66的方法，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。68.權利要求66的方法，其中所述毒素是美登木素生物堿。69.權利要求59的方法，其中所述抗體在細菌中產生。70.權利要求59的方法，其中所述抗體在CHO細胞中產生。71.權利要求59的方法，其中所述細胞是癌細胞。72.權利要求71的方法，其中使所述癌細胞進一步暴露于放射處理或化療劑。73.權利要求71的方法，其中所述癌細胞選自乳腺癌細胞、結腸直腸癌細胞、肺癌 細胞、卵巢癌細胞、中樞神經系統癌細胞、肝癌細胞、膀胱癌細胞、胰腺癌細胞、宮頸癌細胞、 黑素瘤細胞和白血病細胞。74.權利要求71的方法，其中所述癌細胞與相同組織來源的正常細胞相比更大量 的表達所述蛋白質。75.權利要求59的方法，其引起所述細胞死亡。
76.權利要求59的方法，其中所述蛋白質具有(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關信號肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的氨基酸序列。77.治療性處理具有癌性腫瘤的哺乳動物的方法，所述癌性腫瘤包含表達與下述 任一項具有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白質的細胞(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相關信號肽；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的多肽，所述方法包括給所 述哺乳動物施用治療有效量的結合所述蛋白質的抗體、寡肽或有機分子，由此有效治療所 述哺乳動物。78.權利要求77的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。79.權利要求77的方法，其中所述抗體是抗體片段。80.權利要求77的方法，其中所述抗體是嵌合或人源化抗體。81.權利要求77的方法，其中所述抗體、寡肽或有機分子與生長抑制劑偶聯。82.權利要求77的方法，其中所述抗體、寡肽或有機分子與細胞毒劑偶聯。83.權利要求82的方法，其中所述細胞毒劑選自毒素、抗生素、放射性同位素和溶 核酶。84.權利要求82的方法，其中所述細胞毒劑是毒素。85.權利要求84的方法，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。86.權利要求84的方法，其中所述毒素是美登木素生物堿。87.權利要求77的方法，其中所述抗體在細菌中產生。88.權利要求77的方法，其中所述抗體在CHO細胞中產生。89.權利要求77的方法，其中使所述腫瘤進一步暴露于放射處理或化療劑。90.權利要求77的方法，其中所述腫瘤是乳腺腫瘤、結腸直腸腫瘤、肺腫瘤、卵巢 腫瘤、中樞神經系統腫瘤、肝腫瘤、膀胱腫瘤、胰腺腫瘤或宮頸腫瘤。91.權利要求77的方法，其中所述腫瘤的癌性細胞與相同組織來源的正常細胞相 比更大量的表達所述蛋白質。92.權利要求77的方法，其中所述蛋白質具有(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關信號肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；
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(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的氨基酸序列。93.測定懷疑含有某種蛋白質的樣品中該蛋白質的存在的方法，其中所述蛋白質 與下述任一項具有至少80%的氨基酸序列同一性(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相關信號肽；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的多肽，所述方法包括使所 述樣品暴露于結合所述蛋白質的抗體、寡肽或有機分子，并測定所述樣品中所述抗體、寡肽 或有機分子與所述蛋白質的結合，其中所述抗體、寡肽或有機分子與所述蛋白質的結合表 明所述樣品中存在所述蛋白質。94.權利要求93的方法，其中所述樣品包含懷疑表達所述蛋白質的細胞。95.權利要求94的方法，其中所述細胞是癌細胞。96.權利要求93的方法，其中所述抗體、寡肽或有機分子被可檢測地標記。97.權利要求93的方法，其中所述蛋白質具有(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關信號肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的氨基酸序列。98.診斷哺乳動物中腫瘤的存在的方法，所述方法包括測定從所述哺乳動物獲得 的組織細胞的測試樣品中及相同組織來源的已知正常細胞的對照樣品中編碼與下述任一 項具有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白質的基因的表達水平(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相關信號肽；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的多肽，其中所述蛋白質在 測試樣品中的表達水平高于對照樣品表明獲取測試樣品的哺乳動物中存在腫瘤。99.權利要求98的方法，其中測定編碼所述蛋白質的基因的表達水平的步驟包括 在原位雜交或RT-PCR分析中使用寡核苷酸。100.權利要求98的方法，其中測定編碼所述蛋白質的基因的表達水平的步驟包 括在免疫組化或Western印跡分析中使用抗體。101.權利要求98的方法，其中所述蛋白質具有(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；
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(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關信號肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(e)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的氨基酸序列。102.診斷哺乳動物中腫瘤的存在的方法，所述方法包括使從所述哺乳動物獲得的 組織細胞的測試樣品接觸結合與下述任一項具有至少80%的氨基酸序列同一性的蛋白質 的抗體、寡肽或有機分子(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相關信號肽；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的多肽，并檢測測試樣品中 所述抗體、寡肽或有機分子和所述蛋白質之間復合物的形成，其中復合物的形成表明所述 哺乳動物中存在腫瘤。103.權利要求102的方法，其中所述抗體、寡肽或有機分子被可檢測地標記。104.權利要求102的方法，其中所述組織細胞的測試樣品從懷疑具有癌性腫瘤的 個體獲得。105.權利要求102的方法，其中所述蛋白質具有(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關信號肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的氨基酸序列。106.治療或預防與某種蛋白質的表達或活性增高有關的細胞增殖性紊亂的方法， 所述蛋白質與下述任一項具有至少80%的氨基酸序列同一性(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相關信號肽；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的多肽，所述方法包括給需 要此類治療的受試者施用有效量的所述蛋白質的拮抗劑，由此有效治療或預防所述細胞增 殖性紊亂。107.權利要求106的方法，其中所述細胞增殖性紊亂是癌癥。108.權利要求106的方法，其中所述拮抗劑是抗TAT多肽抗體、TAT結合寡肽、TAT 結合有機分子或反義寡核苷酸。
109.使抗體、寡肽或有機分子與細胞結合的方法，所述細胞表達與下述任一項具 有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白質(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相關信號肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的多肽，所述方法包括使所 述細胞接觸結合所述蛋白質的抗體、寡肽或有機分子，并允許所述抗體、寡肽或有機分子與 所述蛋白質的結合發生，由此使所述抗體、寡肽或有機分子結合所述細胞。110.權利要求109的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。111.權利要求109的方法，其中所述抗體是抗體片段。112.權利要求109的方法，其中所述抗體是嵌合或人源化抗體。113.權利要求109的方法，其中所述抗體、寡肽或有機分子與生長抑制劑偶聯。114.權利要求109的方法，其中所述抗體、寡肽或有機分子與細胞毒劑偶聯。115.權利要求114的方法，其中所述細胞毒劑選自毒素、抗生素、放射性同位素和 溶核酶。116.權利要求114的方法，其中所述細胞毒劑是毒素。117.權利要求116的方法，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。118.權利要求116的方法，其中所述毒素是美登木素生物堿。119.權利要求109的方法，其中所述抗體在細菌中產生。120.權利要求109的方法，其中所述抗體在CHO細胞中產生。121.權利要求109的方法，其中所述細胞是癌細胞。122.權利要求121的方法，其中使所述癌細胞進一步暴露于放射處理或化療劑。123.權利要求121的方法，其中所述癌細胞選自乳腺癌細胞、結腸直腸癌細胞、肺 癌細胞、卵巢癌細胞、中樞神經系統癌細胞、肝癌細胞、膀胱癌細胞、胰腺癌細胞、宮頸癌細 胞、黑素瘤細胞和白血病細胞。124.權利要求123的方法，其中所述癌細胞與相同組織來源的正常細胞相比更大 量地表達所述蛋白質。125.權利要求109的方法，其引起所述細胞死亡。126.權利要求1-5或30任一項的核酸在制備用于癌癥的治療性處理或診斷性檢 測的藥物中的用途。127.權利要求1-5或30任一項的核酸在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。128.權利要求1-5或30任一項的核酸在制備用于治療或預防細胞增殖性紊亂 (病癥)的藥物中的用途。129.權利要求6、7或31任一項的表達載體在制備用于癌癥的治療性處理或診斷 性檢測的藥物中的用途。130.權利要求6、7或31任一項的表達載體在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。131.權利要求6、7或31任一項的表達載體在制備用于治療或預防細胞增殖性紊亂(病癥)的藥物中的用途。132.權利要求8、9、32或33任一項的宿主細胞在制備用于癌癥的治療性處理或診 斷性檢測的藥物中的用途。133.權利要求8、9、32或33任一項的宿主細胞在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。134.權利要求8、9、32或33任一項的宿主細胞在制備用于治療或預防細胞增殖性 紊亂(病癥)的藥物中的用途。135.權利要求11-14任一項的多肽在制備用于癌癥的治療性處理或診斷性檢測 的藥物中的用途。136.權利要求11-14任一項的多肽在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。137.權利要求11-14任一項的宿主細胞在制備用于治療或預防細胞增殖性紊亂 的藥物中的用途。138.權利要求15-29任一項的抗體在制備用于癌癥的治療性處理或診斷性檢測 的藥物中的用途。139.權利要求15-29任一項的抗體在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。140.權利要求15-29任一項的抗體在制備用于治療或預防細胞增殖性紊亂的藥 物中的用途。141.權利要求35-44任一項的寡肽在制備用于癌癥的治療性處理或診斷性檢測 的藥物中的用途。142.權利要求35-44任一項的寡肽在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。143.權利要求35-44任一項的寡肽在制備用于治療或預防細胞增殖性紊亂的藥 物中的用途。144.權利要求45-54任一項的TAT結合有機分子在制備用于癌癥的治療性處理或 診斷性檢測的藥物中的用途。145.權利要求45-54任一項的TAT結合有機分子在制備用于治療腫瘤的藥物中的 用途。146.權利要求45-54任一項的TAT結合有機分子在制備用于治療或預防細胞增殖 性紊亂的藥物中的用途。147.權利要求55或56任一項的物質組合物在制備用于癌癥的治療性處理或診斷 性檢測的藥物中的用途。148.權利要求55或56任一項的物質組合物在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。149.權利要求55或56任一項的物質組合物在制備用于治療或預防細胞增殖性紊 亂的藥物中的用途。150.權利要求57或58任一項的制品在制備用于癌癥的治療性處理或診斷性檢測 的藥物中的用途。151.權利要求57或58任一項的制品在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。152.權利要求57或58任一項的制品在制備用于治療或預防細胞增殖性紊亂的藥 物中的用途。
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153.用于抑制細胞生長的方法，其中所述細胞的生長至少部分依賴與下述任一項 具有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白質的生長促進作用(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相關信號肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的多肽，所述方法包括使所 述蛋白質接觸與所述蛋白質結合的抗體、寡肽或有機分子，由此抑制所述細胞的生長。154.權利要求153的方法，其中所述細胞是癌細胞。155.權利要求153的方法，其中所述蛋白質由所述細胞表達。156.權利要求153的方法，其中所述抗體、寡肽或有機分子與所述蛋白質的結合 拮抗所述蛋白質的細胞生長強化活性。157.權利要求153的方法，其中所述抗體、寡肽或有機分子與所述蛋白質的結合 誘導所述細胞死亡。158.權利要求153的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。159.權利要求153的方法，其中所述抗體是抗體片段。160.權利要求153的方法，其中所述抗體是嵌合或人源化抗體。161.權利要求153的方法，其中所述抗體、寡肽或有機分子與生長抑制劑偶聯。162.權利要求153的方法，其中所述抗體、寡肽或有機分子與細胞毒劑偶聯。163.權利要求162的方法，其中所述細胞毒劑選自毒素、抗生素、放射性同位素和 溶核酶。164.權利要求162的方法，其中所述細胞毒劑是毒素。165.權利要求164的方法，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。166.權利要求164的方法，其中所述毒素是美登木素生物堿。167.權利要求153的方法，其中所述抗體在細菌中產生。168.權利要求153的方法，其中所述抗體在CHO細胞中產生。169.權利要求153的方法，其中所述蛋白質具有(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關信號肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的氨基酸序列。170.治療性處理哺乳動物中的腫瘤的方法，其中所述腫瘤的生長至少部分依賴與 下述任一項具有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白質的生長促進作用(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相關信號肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相關信號肽；
(d)SEQ工D N。2所示多肽的胞外域，缺少其相關信號肽；
(e)SEQ工D N。l所示核苷酸序列所編碼的多肽；或
(f)SEQ工D N。l所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的多肽，所述方法包括使所述蛋白質接觸與所述蛋白質結合的抗體1寡肽或有機分子，由此有效治療所述腫瘤。
171．權利要求170的方法，其中所述蛋白質由所述腫瘤的細胞表達。
172．權利要求170的方法，其中所述抗體1寡肽或有機分子與所述蛋白質的結合拮抗所述蛋白質的細胞生長促進活性。
173．權利要求170的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。
174．權利要求170的方法，其中所述抗體是抗體片段。
175．權利要求170的方法，其中所述抗體是嵌合或人源化抗體。
176．權利要求170的方法，其中所述抗體1寡肽或有機分子與生長抑制劑偶聯。
177．權利要求170的方法，其中所述抗體1寡肽或有機分子與細胞毒劑偶聯。
178．權利要求177的方法，其中所述細胞毒劑選自毒素1抗生素1放射性同位素和溶核酶。
179．權利要求177的方法，其中所述細胞毒劑是毒素。
180．權利要求179的方法，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。
181．權利要求179的方法，其中所述毒素是美登木素生物堿。
182．權利要求170的方法，其中所述抗體在細菌中產生。
183．權利要求170的方法，其中所述抗體在CH。細胞中產生。
184．權利要求170的方法，其中所述蛋白質具有
(a)SEQ工D N。2所示氨基酸序列；
(b)SEQ工D N。2所示氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；
(C)SEQ工D N。2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相關信號肽序列；
(d)SEQ工D N。2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相關信號肽序列；
(e)SEQ工D N。l所示核苷酸序列所編碼的氨基酸序列；或
(f)SEQ工D N。l所示核苷酸序列的全長編碼區所編碼的氨基酸序列。
186．分離的抗體，其與表11所示任何雜交瘤細胞系所產生的抗體結合相同表位。
187．權利要求186的抗體，其是單克隆抗體。
188．權利要求186的抗體，其是抗體片段。
189．權利要求186的抗體，其是嵌合或人源化抗體。
190．權利要求186的抗體，其與生長抑制劑偶聯。
191．權利要求186的抗體，其與細胞毒劑偶聯。
192．權利要求19l的抗體，其中所述細胞毒劑選自毒素1抗生素1放射性同位素和溶核酶。
193．權利要求19l的抗體，其中所述細胞毒劑是毒素。
194．權利要求193的抗體，其中所述毒素選自美登木素生物堿和加利車霉素。
195．權利要求193的抗體，其中所述毒素是美登木素生物堿。
196．權利要求186的抗體，其在細菌中產生。
197．權利要求186的抗體，其在CH。細胞中產生。
198.權利要求186的抗體，其誘導其所結合的細胞死亡。199.權利要求186的抗體，其被可檢測地標記。200.權利要求186的抗體，其包含表11所示任何雜交瘤細胞系所產生的任何抗體 的至少一個互補決定區。201.表11所示任何雜交瘤細胞所產生的單克隆抗體。202.產生結合TAT多肽的單克隆抗體的雜交瘤細胞。203.鑒定如下所述抗體的方法，所述抗體結合表11所示任何雜交瘤細胞系所產 生的抗體結合的表位，所述方法包括測定第一抗體阻斷表11所示任何雜交瘤細胞系所產 生的第二抗體與TAT多肽結合的能力，其中所述第一抗體在相等抗體濃度阻斷所述第二抗 體與所述TAT多肽結合達至少40%的能力表明所述第一抗體能夠結合所述第二抗體所結 合的表位。閱讀本說明書后，本發明的其它實施方案對于本領域技術人員而言將是顯而易見 的。附圖簡述圖 IA-E 顯示了 TAT10772 cDNA 的核苷酸序列(SEQ ID NO :1)，其中 SEQID NO 1 是本文中稱作“DNA772”的克隆。圖2A-B顯示了衍生自

圖1中所示SEQ ID NO 1的編碼序列的氨基酸序列(SEQ ID NO 2)。圖3顯示了以下各項的輕鏈可變區氨基酸序列的比對輕鏈人亞類I共有序列 (huKI ；SEQ ID NO 3)、鼠 11D10 抗 TAT10772 抗體(mullD10-L ；SEQID NO 4)、禾口 11D10 抗 TAT10772 移植的“人源化”抗體(llDlO-graft ；SEQ IDNO 5)。圖4顯示了以下各項的重鏈可變區氨基酸序列的比對重鏈人亞組III共有序列 (hum III ；SEQ ID NO :6)、鼠 11D10 抗 TAT10772 抗體(mullD10-H ;SEQ ID NO :7)、和 11D10 抗 TAT10772 移植的“人源化”抗體(llDlO-graft ；SEQID NO 8)。圖5顯示了以下各項的輕鏈可變區氨基酸序列的比對輕鏈人亞類I共有序列 (huKI ；SEQ ID NO :3)、鼠 3A5 抗 TAT10772 抗體(mu3A5-L ;SEQ IDNO :9)、和 3A5 抗 TAT10772 移植的“人源化”抗體(3A5-graft ；SEQ ID NO 10)。圖6A-6B顯示了以下各項的重鏈可變區氨基酸序列的比對重鏈人亞組III共有 序歹Ij (hum III ；SEQ ID NO 6)、鼠 3A5 抗 TAT10772 抗體(mu3A5_H ；SEQID NO 11)、3A5 抗 TAT10772 移植的“人源化”抗體“L 變體”(3A5. L-graft ；SEQ ID NO 12)、和 3A5 抗 TAT10772 移植的“人源化”抗體“F變體” (3A5. F-graft ；SEQ ID NO 13)。圖7顯示了選定的親和力成熟的11D10衍生抗體的各種HVR-Ll序列(SEQ ID NOS 14-34)。圖8顯示了選定的親和力成熟的11D10衍生抗體的各種HVR-L2序列(SEQ ID NOS 35-58)。圖9顯示了選定的親和力成熟的11D10衍生抗體的各種HVR-L3序列(SEQ ID NOS 59-73)。圖10顯示了選定的親和力成熟的11D10衍生抗體的各種HVR-Hl序列(SEQ ID NOS 74-93)。
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圖11顯示了選定的親和力成熟的11D10衍生抗體的各種HVR-H2序列(SEQ ID NOS 94-112)。圖12顯示了選定的親和力成熟的11D10衍生抗體的各種HVR-H3序列(SEQ ID NOS 113-118)。圖13顯示了選定的親和力成熟的3A5衍生抗體的HVR-Ll序列(SEQ IDNO :119)。圖14顯示了選定的親和力成熟的3A5衍生抗體的各種HVR-L2序列(SEQ ID NOS 120-121)。圖15顯示了選定的親和力成熟的3A5衍生抗體的HVR-L3序列(SEQ IDNO 122)。圖16顯示了選定的親和力成熟的3A5衍生抗體的HVR-Hl序列(SEQ IDNO 123)。圖17顯示了選定的親和力成熟的3A5衍生抗體的各種HVR-H2序列(SEQ ID NOS 124-127)。圖18A-B顯示了選定的親和力成熟的3A5衍生抗體的各種HVR-H3序列(SEQ ID NOS 128-183)。圖19顯示了用于實施本發明的例示性受體人共有框架序列，序列標識符如下人 VH亞類I共有框架除去Kabat CDR(SEQ ID NO :184)、人VH亞類I共有框架除去延伸的高 變區(SEQ ID NO 185-187)、人 VH 亞類 II 共有框架除去 Kabat CDR (SEQ ID NO: 188)、人 VH亞類II共有框架除去延伸的高變區(SEQ ID NO :189_191)、人VH亞類III共有框架除 去Kabat CDR “L變體”(SEQ ID NO 192)、和人VH亞類III共有框架除去Kabat CDR “F變 體” (SEQ ID NO 193)。圖20顯示了用于實施本發明的例示性受體人共有框架序列，序列標識符如下人 VLk亞類I共有框架除去Kabat CDR(SEQ ID N0:194)、人VLk亞類II共有框架除去Kabat CDR(SEQ ID N0:195)、AVLk 亞類 III 共有框架除去 Kabat CDR(SEQ ID N0:196)、和人 VLk 亞類 IV 共有框架除去 KabatCDR (SEQ ID NO: 197)。圖21A-B顯示了以下抗體的完整重鏈可變區序列3A5vl (SEQ IDNO 198)、 3A5v2(SEQ ID NO 199)、3A5v3(SEQ ID NO :200)、3A5v4 (SEQ IDNO :201)、3A5v5(SEQ ID NO :202)、3A5v6(SEQ ID NO :203)、3A5v7(SEQ IDNO :204)、3A5v8(SEQ ID NO :205)、 3A5vlb. 52 (SEQ ID NO 206)、3A5vlb. 54 (SEQ ID NO 207)、3A5v4b. 52 (SEQ ID NO 208)、和 3A5v4b. 54 (SEQ IDNO :209)。所有這些抗體包含SEQ ID NO :3的huKI輕鏈可變區氨基酸序 列。圖22顯示了用于本文所述某些抗TAT10772抗體的完整輕鏈可變區序列(SEQ ID NO 210-211)。圖23顯示了各種人源化3A5抗體抑制釕標記的嵌合3A5結合生物素化5 ‘-結構 域TAT10772多肽靶物的能力。“h2H7 ctr”是不特異性結合TAT10772的陰性對照抗體。圖24顯示了各種人源化3A5抗體抑制釕標記的嵌合3A5結合生物素化CA125多 肽的能力。“h2H7 ctr”是不特異性結合TAT10772的陰性對照抗體。圖25顯示了使用各種人源化3A5抗體來測量0VCAR-3細胞結合的ELISA分析的 結果。“h2H7 ctr”是不特異性結合TAT10772的陰性對照抗體。圖26顯示了 0VCAR-3細胞(內源性表達TAT10772多肽)在用嵌合llDlO-vc-MMAF 或嵌合3A5-VC-MMAF抗體處理后的體外增殖。
圖27顯示了 0VCAR-3細胞(內源性表達TAT10772多肽)在用嵌合llDlO-vc-MMAE 或嵌合3A5-VC-MMAE抗體處理后的體外增殖。圖28顯示了 0VCAR-3細胞(內源性表達TAT10772多肽)在用嵌合11D10-MC-MMAF 或嵌合3A5-MC-MMAF抗體處理后的體外增殖。圖29顯示了經使其表達TAT10772多肽的載體轉染的PC3細胞(PC3/A5. 3B2)或 不表達TAT10772多肽的PC3細胞(PC3/neo)在用嵌合llD10-vc_MMAF或嵌合3A5-vc_MMAF 抗體處理后的體外增殖。圖30顯示了經使其表達TAT10772多肽的載體轉染的PC3細胞(PC3/A5. 3B2) 或不表達TAT10772多肽的PC3細胞(PC3/neo)在用嵌合llD10-vc-PAB-MMAE或嵌合 3A5-vc-PAB-MMAE抗體處理后的體外增殖。圖31顯示了經使其表達TAT10772多肽的載體轉染的PC3細胞(PC3/A5. 3B2)或 不表達TAT10772多肽的PC3細胞(PC3/neo)在用嵌合11D10-MC-MMAF或嵌合3A5-MC_MMAf 抗體處理后的體外增殖。圖32顯示了 PC3/A5. 3B2衍生腫瘤在用各種偶聯有毒素的嵌合3A5抗體、對照抗 體或僅媒介物處理后的體內平均腫瘤體積測量值(皮下注射模型)。圖33顯示了 0VCAR-3衍生腫瘤在用各種偶聯有毒素的嵌合3A5抗體、對照抗體或 僅媒介物處理后的體內平均腫瘤體積測量值(乳腺脂肪墊移植SCID米色小鼠模型)。圖34顯示了 0VCAR-3衍生腫瘤在用各種偶聯有毒素的嵌合3A5抗體、對照抗體或 僅媒介物處理后的體內平均腫瘤體積測量值(乳腺脂肪墊移植SCID米色小鼠模型)。圖35顯示了 0VCAR-3衍生腫瘤在用各種偶聯有毒素的嵌合3A5抗體、對照抗體或 僅媒介物處理后的體內平均腫瘤體積測量值(乳腺脂肪墊移植SCID米色小鼠模型)。圖36顯示了 PC3/A5. 3B2衍生腫瘤在用各種偶聯有毒素的嵌合3A5抗體、對照抗 體或僅媒介物處理后的體內平均腫瘤體積測量值(裸鼠中的異種移植腫瘤，每只小鼠106 個細胞)。圖37顯示了 0VCAR-3衍生腫瘤在用各種偶聯有毒素的嵌合3A5抗體、對照抗體或 僅媒介物處理后的體內平均腫瘤體積測量值(乳腺脂肪墊移植SCID米色小鼠模型)。優選實施方案的詳述I.定義術語“TAT多肽”和“TAT”在用于本文時且后面緊跟著數值名稱時指各種多肽，其 中完整名稱(即TAT/數值)指本文描述的特定多肽序列。術語“TAT/數值多肽”和“TAT/ 數值”，其中術語“數值”作為實際數值名稱提供，在用于本文時涵蓋天然序列多肽、多肽變 體和天然序列多肽的片段和多肽變體(本文中有進一步定義)。本文中描述的TAT多肽可 從多種來源分離，諸如人組織類型或其它來源，或者通過重組或合成方法制備。術語“TAT 多肽”指本文中公開的每一種個別的TAT/數值多肽。本說明書中涉及“TAT多肽”的所有 公開內容適用于獨自的以及共同的每一種多肽。例如，關于多肽的制備、純化、衍生、針對該 多肽的抗體的形成、針對該多肽的TAT結合寡肽的形成、針對該多肽的TAT結合有機分子的 形成、施用、含有該多肽的組合物、用該多肽治療疾病、等等的描述適用于本發明的具體的 每一種多肽。術語“TAT多肽”還包括本文中公開的TAT/數值多肽的變體。“天然序列TAT多肽”包括與衍生自自然界的相應TAT多肽具有相同氨基酸序列的
24多肽。此類天然序列TAT多肽可從自然界分離，或者可通過重組或合成手段生成。術語“天 然序列TAT多肽”明確涵蓋天然存在的截短或分泌形式的特定TAT多肽(例如胞外結構域 序列)、該多肽的天然存在變體形式(例如可變剪接形式)和天然存在的等位變體。在本發 明的某些實施方案中，本文中公開的天然序列TAT多肽是包含附圖中所示全長氨基酸序列 的成熟或全長天然序列多肽。起始和終止密碼子(如果指示的話)在圖中以粗體和下劃線 顯示。附圖中以“N”或“X”指示的核酸殘基是任何核酸殘基。然而，盡管附圖中公開的TAT 多肽據顯示以本文中指派為圖中第1位氨基酸的甲硫氨酸殘基開始，可以想到且有可能的 是，可采用位于圖中第1位氨基酸上游或下游的其它甲硫氨酸殘基作為TAT多肽的起始氨 基酸殘基。TAT多肽“胞外結構域”或“ECD”指基本上不含跨膜結構域和胞質結構域的TAT多 肽形式。通常，TAT多肽ECD具有少于的所述跨膜結構域和/或胞質結構域，優選具有 少于0. 5%的所述結構域。可以理解，為本發明TAT多肽鑒定的任何跨膜結構域是依照本領 域常規用于鑒定該種類型疏水性結構域的標準鑒定的。跨膜結構域的精確邊界可以變化， 但最有可能是本文中最初鑒定的結構域任一末端不超過約5個氨基酸。因此，任選的是， TAT多肽的胞外結構域可含有實施例或說明書中鑒定的跨膜結構域/胞外結構域邊界任一 側的約5個或更少氨基酸，而且本發明設想了具有或沒有相關信號肽的此類多肽及編碼它 們的核酸。本說明書和/或附圖中可能顯示了本文中所公開的各種TAT多肽的“信號肽”的 大致位置。然而，應當注意，信號肽的C-末端邊界可以變化，但最有可能的是本文中最初 鑒定的信號肽C-末端邊界任一側不超過約5個氨基酸，其中信號肽的C-末端邊界可依照 本領域常規用于鑒定該種類型氨基酸序列元件的標準鑒定(例如Nielsen et al. , Prot. Eng. 10 1-6 (1997)和 von Heinjeet al.，Nucl. Acids. Res. 14 :4683_4690(1986))。此夕卜， 還認識到，在有些情況中，從分泌多肽上切除信號序列不是完全統一的，導致超過一種分泌 種類。本發明設想了這些成熟多肽，其中信號肽在本文中所鑒定的信號肽C-末端邊界任一 側不超過約5個氨基酸內切除，及編碼它們的多核苷酸。"TAT多肽變體”意指與本文中所公開的全長天然序列TAT多肽序列、缺乏本文中 所公開的信號肽的TAT多肽序列、具有或沒有本文中所公開的信號肽的TAT多肽胞外結構 域、或本文中所公開的全長TAT多肽序列的任何其它片段(諸如那些由只呈現全長TAT多 肽的完整編碼序列一部分的核酸編碼的片段)具有至少約80%的氨基酸序列同一性的本 文中所定義的TAT多肽，優選活性TAT多肽。此類TAT多肽變體包括例如其中全長天然氨 基酸序列的N-或C-末端添加或刪除一個或多個氨基酸殘基的TAT多肽。通常，TAT多肽 變體與本文中所公開的全長天然序列TAT多肽序列、缺乏本文中所公開的信號肽的TAT多 肽序列、具有或沒有本文中所公開的信號肽的TAT多肽胞外結構域、或本文中所公開的全 長TAT多肽序列的任何其它特別限定片段具有至少約80%的氨基酸序列同一性，或者至少 約 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%或99%的氨基酸序列同一性。通常，TAT變體多肽的長度為至少約10個氨 基酸，或者長度為至少約 20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、 180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、 370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600個氨基酸或更多。任選的是，TAT變體多肽與天然TAT多肽序列相比 具有不超過一個保守氨基酸替代，或者與天然TAT多肽序列相比具有不超過2、3、4、5、6、7、 8、9或10個保守氨基酸替代。關于本文中所鑒定的TAT多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定義 為對比序列并在必要時引入缺口以獲取最大百分比序列同一性后，且不將任何保守替代 視為序列同一性的一部分時，候選序列中與特定TAT多肽序列中的氨基酸殘基相同的氨 基酸殘基的百分率。可以本領域技術范圍內的多種方式進行測定百分比氨基酸序列同一 性目的的序列對比，例如使用公眾可得到的計算機軟件，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或 Megalign(DNASTAR)軟件。本領域技術人員可決定測量對比的適宜參數，包括對所比較序 列全長獲得最大對比所需的任何算法。然而，為了本發明，％氨基酸序列同一性值是使用 序列比較計算機程序ALIGN-2獲得的，其中下文表1中提供了 ALIGN-2程序的完整源代碼。 ALIGN-2序列比較計算機程序由Genentech公司編寫，下文表1所示源代碼已經連同用戶文 檔一起提交給美國版權局(USCopyright Office, Washington D. C.，20559)，并以美國版權 注冊號 TXU510087 注冊。公眾可通過 Genentech 公司(South San Francisco, California) 得到ALIGN-2程序，或者可從下文表1中提供的源代碼編譯。ALIGN2程序應當編譯成在 UNIX操作系統，優選數碼UNIX V4. OD上使用。所有序列比較參數由ALIGN-2程序設定且不 變。在采用ALIGN-2用于氨基酸序列比較的情況中，給定氨基酸序列A相對于(to)、與 (with)、或針對(against)給定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可表述為具有 或包含相對于、與、或針對給定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性的給定氨基酸序 列A)如下計算分數X/Y乘100其中X是由序列對比程序ALIGN-2在該程 序的A和B對比中評分為相同匹配的氨基酸殘基數，且其中Y是B中的氨基酸殘基總數。可 以領會，若氨基酸序列A的長度與氨基酸序列B的長度不相等，則A相對于B的％氨基酸序 列同一性將不等于B相對于A的％氨基酸序列同一性。作為使用這種方法的％氨基酸序列 同一性計算的例子，表2和3演示了如何計算指派為“比較蛋白質”的氨基酸序列相對于指 派為“ TAT ”的氨基酸序列的％氨基酸序列同一性，其中“ TAT ”代表目的假設TAT多肽的氨基 酸序列，“比較蛋白質”代表目的“TAT”多肽針對其進行比較的多肽的氨基酸序列，而“X”、 “Y”和“Z”各自代表不同假設氨基酸殘基。除非另有具體說明，本文中所使用的所有％氨基 酸序列同一性值都是依照上一段所述，使用ALIGN-2計算機程序獲得的。"TAT變體多核苷酸”或“TAT變體核酸序列”意指編碼本文中所定義的TAT多肽， 優選活性TAT多肽且與編碼本文中所公開的全長天然序列TAT多肽序列、本文中所公開的 缺乏信號肽的全長天然序列TAT多肽序列、本文中所公開的具有或沒有信號肽的TAT多肽 胞外結構域、或本文中所公開的全長TAT多肽序列的任何其它片段(諸如那些由只呈現全 長TAT多肽的完整編碼序列一部分的核酸編碼的片段)的核苷酸序列具有至少約80%核 酸序列同一性的核酸分子。通常，TAT變體多核苷酸與編碼本文中所公開的全長天然序列 TAT多肽序列、本文中所公開的缺乏信號肽的全長天然序列TAT多肽序列、本文中所公開 的具有或沒有信號序列的TAT多肽胞外結構域、或本文中所公開的全長TAT多肽序列的任 何其它片段的核酸序列具有至少約80%的核酸序列同一性，或者至少約81 %、82%、83 %、
2684%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或 99%的核酸序列同一性。變體不涵蓋天然核苷酸序列。通常，TAT變體多核苷酸的長度為至少約5個核苷酸，或者長度為至少約6、7、8、 9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、 55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、 160、165、170、175、180、185、190、195、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、 310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、 500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、 690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、 880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990 或 1000 個核苷酸，其中在此語境 中，術語“約”意指所述核苷酸序列長度加上或減去所述長度的10 %。關于本文中所鑒定的TAT編碼核酸序列的“百分比(％ )核酸序列同一性”定義 為對比序列并在必要時引入缺口以獲取最大百分比序列同一性后，候選序列中與TAT目的 核酸序列中的核苷酸相同的核苷酸的百分率。可以本領域技術范圍內的多種方式進行測定 百分比核酸序列同一性目的的序列對比，例如使用公眾可得到的計算機軟件，諸如BLAST、 BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟件。然而，為了本發明，％核酸序列同一性值是 使用序列比較計算機程序ALIGN-2獲得的，其中下文表1中提供了 ALIGN-2程序的完整源 代碼。ALIGN-2序列比較計算機程序由Genentech公司編寫，下文表1所示源代碼已經連 同用戶文檔一起提交給美國版權局(US CopyrightOffice, Washington D. C.，20559)，并 以美國版權注冊號TXU510087注冊。公眾可通過Genentech公司(South San Francisco, California)得到ALIGN-2程序，或者可從下文表1中提供的源代碼編譯。ALIGN2程序應 當編譯成在UNIX操作系統，優選數碼UNIX V4. OD上使用。所有序列比較參數由ALIGN-2 程序設定且不變。在采用ALIGN-2來比較核酸序列的情況中，給定核酸序列C相對于(to)、與 (with)、或針對(against)給定氨基酸序列D的％核酸序列同一性(或者可表述為具有或 包含相對于、與、或針對給定核酸序列D的某一％核酸序列同一性的給定核酸序列C)如下 計算分數W/Z乘100其中W是由序列對比程序ALIGN-2在該程序的 C和D對比中評分為相同匹配的核苷酸數，且其中Z是D中的核苷酸總數。可以領會，若核 酸序列C的長度與核酸序列D的長度不相等，則C相對于D的％核酸序列同一性將不等于D 相對于C的％核酸序列同一性。作為％核酸序列同一性計算的例子，表4和5演示了如何 計算指派為“比較DNA”的核酸序列相對于指派為“TAT-DNA”的核酸序列的％核酸序列同一 性，其中“TAT-DNA”代表目的假設TAT編碼核酸序列，“比較DNA”代表目的“TAT-DNA”核酸 分子針對其進行比較的核酸分子的核苷酸序列，而“N”、“L”和“V”各自代表不同假設核苷 酸。除非另有具體說明，本文中所使用的所有％核酸序列同一性值都是依照上一段所述，使 用ALIGN-2計算機程序獲得的。在其它實施方案中，TAT變體多核苷酸是編碼TAT多肽且能夠與編碼本文中所公 開的全長TAT多肽的核苷酸序列雜交，優選在嚴格雜交和洗滌條件下雜交的核酸分子。TAT 變體多肽可以是那些由TAT變體多核苷酸編碼的變體多肽。
術語“全長編碼區”在涉及編碼TAT多肽的核酸使用時指編碼本發明全長TAT多肽 的核苷酸序列(常常在附圖中起始和終止密碼子(含)之間顯示)。術語“全長編碼區”在 涉及ATCC保藏核酸使用時指插入保藏在ATCC的載體中的cDNA的TAT多肽編碼部分(常 常在附圖中起始和終止密碼子(含)之間顯示)。“分離的”，在用于描述本文中所公開的各種TAT多肽時，意指已經鑒定且與/由其 天然環境的一種成分分開和/或回收的多肽。其天然環境的污染性成分指通常會干擾該多 肽的診斷或治療用途的物質，可包括酶、激素、和其它蛋白質性質或非蛋白質性質的溶質。 在優選的實施方案中，將多肽純化至(1)足以通過使用轉杯式測序儀獲得至少15個殘基的 N-末端或內部氨基酸序列的程度，或(2)根據使用考馬斯藍或優選銀染色的非還原或還原 條件下的SDS-PAGE，達到同質。既然TAT多肽天然環境的至少一種成分不會存在，那么分離 的多肽包括重組細胞內的原位多肽。然而，分離的多肽通常通過至少一個純化步驟來制備。“分離的”TAT多肽編碼核酸或其它多肽編碼核酸指已經鑒定且與該多肽編碼核酸 的天然來源中通常與之相關的至少一種污染性核酸分子分開的核酸分子。分離的多肽編碼 核酸分子不同于在自然界中發現它時的形式或背景。分離的多肽編碼核酸分子因此與存在 于天然細胞中時的特定多肽編碼核酸分子有區別。然而，分離的多肽編碼核酸分子包括通 常表達該多肽的細胞中所包含的多肽編碼核酸分子，例如當所述核酸分子在所述細胞中的 染色體定位不同于它在天然細胞中的染色體定位時。術語“控制序列”指在特定宿主生物體中表達可操作連接的編碼序列所必需的DNA 序列。例如，適于原核生物的控制序列包括啟動子、任選的操縱基因序列、和核糖體結合位 點。已知真核細胞利用啟動子、多腺苷酸化信號、和增強子。若一條核酸與另一條核酸序列處于功能性相互關系中，則它是“可操作連接”的。 例如，若前序列(presequence)或分泌前導序列(secretory leader)的DNA表達成參與多 肽分泌的前蛋白質(preprotein)，則它與多肽的DNA可操作連接；若啟動子或增強子影響 編碼序列的轉錄，則它與該序列可操作連接；或者，若核糖體結合位點的位置促進翻譯，則 它與編碼序列可操作連接。通常，“可操作連接”意味著相連的DNA序列是相鄰的，而且在分 泌前導的情況中意味著相鄰且處于閱讀狀態。然而，增強子不必相鄰。連接可通過在方便 的限制性位點處的連接反應來實現。如果沒有此類位點，那么依照常規實踐使用合成的寡 核苷酸銜接頭或接頭。雜交反應的“嚴格性”可以容易的由本領域普通技術人員確定，而且通常根據探針 長度、洗滌溫度、和鹽濃度憑經驗計算。通常，較長的探針要求較高的溫度以正確退火，而較 短的探針需要較低的溫度。雜交通常依賴于當互補鏈存在于低于其解鏈溫度的環境中時變 性DNA重新退火的能力。探針和可雜交序列之間的期望同源性程度越高，可使用的相對溫 度也越高。結果是，推斷出較高相對溫度將趨向于使反應條件更為嚴格，而較低溫度也就較 不嚴格。關于雜交反應嚴格性的另外細節和解釋，參見Ausubel等人，((CurrentProtocols in Molecular Biology)), Wiley Interscience Publishers, 1995。“嚴格條件”或“高嚴格性條件”，如本文中所定義的，可如下鑒別(1)采用低離 子強度和高溫進行洗滌，例如0. 015M氯化鈉/0. 0015M檸檬酸鈉/0. 十二烷基硫酸鈉， 500C ； (2)在雜交過程中采用變性劑，諸如甲酰胺，例如50% (ν/ν)甲酰胺及0.1%牛血清 清蛋白/0. 1% Ficoll/0. 聚乙烯吡咯烷酮/50mM磷酸鈉緩沖液pH 6. 5，含750mM氯化
28鈉，75mM檸檬酸鈉，42°C ；或(3)在采用50%甲酰胺，5x SSC(0. 75M NaCl，0. 075M檸檬酸 鈉)，50mM磷酸鈉(pH 6.8)，0. 焦磷酸鈉，5x Denhardt氏溶液，超聲波處理的鮭魚精 DNA(50yg/ml),0. SDSjP 10%硫酸右旋糖苷的溶液中于42°C雜交過夜，以及于42°C在 0. 2x SSC(氯化鈉/檸檬酸鈉)中洗滌10分鐘，接著在含EDTA的0. Ix SSC中于55°C進行 10分鐘高嚴格性洗滌。“中等嚴格條件”可以如 Sambrook 等人，《Molecular Cloning =ALaboratory Manual)),New York, Cold Spring Harbor Press，1989所述鑒別，包括使用比上文所述較不 嚴格的洗滌溶液和雜交條件(例如溫度、離子強度和％ SDS)。中等嚴格條件的一個例子是 于 37°C 在含20% 甲酰胺，5x SSC(150mM NaCl，15mM 檸檬酸三鈉)，50mM 磷酸鈉(pH 7.6)， 5x Denhardt氏溶液，10%硫酸右旋糖苷，和20mg/ml變性剪切的鮭魚精DNA的溶液中溫育 過夜，接著在Ix SSC中于約37-50°C洗滌濾膜。技術人員將認識到如何根據需要調整溫度、 離子強度等以適應諸如探針長度等因素。術語“表位標記的”在用于本文時指包含與“標簽多肽”融合的TAT多肽或抗TAT 抗體的嵌合多肽。標簽多肽具有足夠殘基以提供表位而可制備針對其的抗體，但又足夠短 使得其不干擾與其融合的多肽的活性。標簽多肽優選還是相當獨特的，使得所述抗體基本 上不與其它表位發生交叉反應。合適的標簽多肽通常具有至少6個氨基酸殘基且通常在約 8個到約50個氨基酸殘基之間(優選在約10個到約20個氨基酸殘基之間)。“有活性的”或“活性”為了本發明指保留天然或天然存在TAT的生物學和/或免 疫學活性的TAT多肽形式，其中“生物學”活性指由天然或天然存在TAT引起的，誘導針對 天然或天然存在TAT所具有的抗原性表位的抗體生成的能力以外的生物學功能(或是抑制 性的或是刺激性的)，而“免疫學”活性指誘導針對天然或天然存在TAT所具有的抗原性表 位的抗體生成的能力。術語“拮抗劑”以最廣義使用，包括部分或完全阻斷、抑制、或中和本文中所公開的 天然TAT多肽的生物學活性的任何分子。類似的，術語“激動劑”以最廣義使用，包括模擬 本文中所公開的天然TAT多肽的生物學活性的任何分子。合適的激動劑或拮抗劑分子明確 包括激動性或拮抗性抗體或抗體片段、天然TAT多肽的片段或氨基酸序列變體、肽、反義寡 核苷酸、有機小分子等。用于鑒定TAT多肽的激動劑或拮抗劑分子的方法可包括使TAT多 肽接觸候選激動劑或拮抗劑分子并測量通常與TAT多肽有關的一種或多種生物學活性的 可檢測變化。“處理”或“治療”或“緩和”指治療性處理及預防性或防范性措施二者，其中目標 是預防或減緩(減輕)所針對的病理學狀況或紊亂。需要治療的受試者包括早就患有紊亂 的受試者以及傾向于患上紊亂的受試者或要預防紊亂的受試者。如果在依照本發明的方法 接受治療量的抗TAT抗體、TAT結合寡肽或TAT結合有機分子后，患者在如下一項或多項中 顯示出可觀察和/或可測量的降低或消失，那么受試者或哺乳動物成功“治療” 了表達TAT 多肽的癌癥癌細胞數減少或癌細胞消失；腫瘤體積縮小；癌細胞浸潤到周圍器官中，包括 癌傳播到軟組織和骨中受到抑制(即一定程度的減緩，優選停止)；腫瘤轉移受到抑制(即 一定程度的減緩，優選停止)；腫瘤生長受到一定程度的抑制；和/或與特定癌癥有關的一 種或多種癥狀得到一定程度的減輕；發病率和死亡率降低；及生命質量提高。就抗TAT抗 體或TAT結合寡肽可預防癌細胞生長和/或殺死現有癌細胞而言，它可能是抑制細胞的和/或毒害細胞的。這些體征或癥狀的減輕還可以由患者感受到。用于評估疾病的成功治療和改善的上述參數可以容易地通過內科醫師所熟悉 的常規流程來測量。對于癌癥治療，可通過例如評估疾病進展時間(time to disease progression, TTP)和/或測定響應速率(response rate, RR)來測量功效。轉移可通過分 期測試(staging test)來測定，及通過骨掃描及鈣水平和其它酶的測試以測定是否傳播到 骨。還可進行CT掃描以查明是否傳播到骨盆及該區域中的淋巴結。分別使用胸腔X射線 和通過已知方法進行的肝酶水平測量來分別查明是否轉移到肺和肝。用于監測疾病的其它 常規方法包括經直腸超聲檢查(TRUS)和經直腸針吸活組織檢查(TRNB)。“長期”施用指以與短期模式相反的連續模式施用藥劑，從而將初始治療效果(活 性)維持較長的一段時間。“間歇”施用指并非連續不間斷進行的處理，而是本質上是循環 的處理。對于癌癥的治療、減輕癥狀、或診斷而言，“哺乳動物”指歸入哺乳類的任何動物， 包括人、家畜和牲畜，及動物園、運動或寵物動物，諸如犬、貓、牛、馬、綿羊、豬、山羊、兔等。 優選的是，哺乳動物指人。“聯合”一種或多種其它治療劑的施用包括同時(共同)施用和任意次序的連續施用。“載體”在用于本文時包括藥學可接受的載體、賦形劑或穩定劑，它們在所采用的 劑量和濃度對暴露于其的細胞或哺乳動物是無毒的。通常，生理學可接受的載體是PH緩沖 水溶液。生理學可接受載體的來自包括緩沖劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機酸鹽的緩 沖劑；抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(少于約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清清蛋 白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，諸如甘氨酸、谷氨酰 胺、天冬酰胺、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精； 螯合劑，諸如EDTA ；糖醇，諸如甘露醇或山梨醇；成鹽相反離子，諸如鈉；和/或非離子表面 活性劑，諸如TWEEN _ 、聚乙二醇(PEG)和PLUR0NICS 。“固相”或“固體支持物”意指本發明的抗體、TAT結合寡肽或TAT結合有機分子可 粘著或附著其上的非水性基質。本文中所涵蓋的固相的例子包括那些部分或完全由玻璃 (例如可控孔徑玻璃)、多糖(例如瓊脂糖)、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚乙烯醇和聚硅氧烷 (silicone)制成的固相。在某些實施方案中，根據語境，固相可包括測定板的孔；在其它實 施方案中，它指純化柱(例如親和層析柱)。此術語還包括離散顆粒的不連續固相，諸如美 國專利4，275，149中所述。“脂質體”指由各種類型脂質、磷脂和/或表面活性劑構成的，可用于對哺乳動物遞 送藥物(諸如TAT多肽、針對其的抗體或TAT結合寡肽)的小囊泡。與生物膜的脂質排列 相似，脂質體的成分通常排列成雙層形式。“小”分子或有機“小”分子在本文中定義為分子量小于約500道爾頓。本文中所公開的多肽、抗體、TAT結合寡肽、TAT結合有機分子、或其激動劑或拮抗 劑的“有效量”指足以實現明確規定的目的的量。“有效量”可憑經驗且以常規方式，聯系所 述的目的來確定。術語“治療有效量”指在受試者或哺乳動物中有效“治療”疾病或紊亂的抗體、多 肽、TAT結合寡肽、TAT結合有機分子或其它藥物的量。在癌癥的情況中，藥物的治療有效
30量可減少癌細胞數；縮小腫瘤體積；抑制(即一定程度的減緩，優選停止)癌細胞浸潤到周 圍器官中；抑制(即一定程度的減緩，優選停止)腫瘤轉移；一定程度的抑制腫瘤生長；和/ 或一定程度的減輕與癌癥有關的一種或多種癥狀。參見本文中“治療”的定義。就藥物可 預防現存癌細胞生長和/或殺死現有癌細胞的程度而言，它可以是抑制細胞的和/或毒害 細胞的。抗TAT抗體、TAT多肽、TAT結合寡肽或TAT結合有機分子的“生長抑制量”指能夠 在體外或在體內抑制細胞，尤其是腫瘤，例如癌細胞生長的量。抗TAT抗體、TAT多肽、TAT 結合寡肽或TAT結合有機分子為了抑制腫瘤性細胞生長的“生長抑制量”可憑經驗且以常 規方式來確定。抗TAT抗體、TAT多肽、TAT結合寡肽或TAT結合有機分子的“細胞毒性量”指能夠 在體外或在體內引起細胞，尤其是腫瘤，例如癌細胞破壞的量。抗TAT抗體、TAT多肽、TAT 結合寡肽或TAT結合有機分子為了抑制腫瘤性細胞生長的“細胞毒性量”可憑經驗且以常 規方式來確定。術語“抗體”以最廣義使用，明確覆蓋例如單一抗TAT單克隆抗體(包括激動性、 拮抗性和中和性抗體)、具有多表位特異性的抗TAT抗體組合物、多克隆抗體、單鏈抗TAT抗 體、及抗TAT抗體的片段(見下文)，只要它們展現出期望生物學或免疫學活性。術語“免 疫球蛋白”(Ig)在本文中與抗體可互換使用。“分離的”抗體指已經鑒定且與/由其天然環境的一種成分分開和/或回收的抗 體。其天然環境的污染性成分指會干擾該抗體的診斷或治療用途的物質，可包括酶、激素、 和其它蛋白質性質或非蛋白質性質的溶質。在優選的實施方案中，將抗體純化至(1)根據 Lowry方法的測定，抗體重量超過95%，最優選重量超過99%，(2)足以通過使用轉杯式測 序儀獲得至少15個殘基的N-末端或內部氨基酸序列的程度，或(3)根據使用考馬斯藍或 優選銀染色的還原性或非還原性條件下的SDS-PAGE，達到同質。既然抗體天然環境的至少 一種成分不會存在，那么分離的抗體包括重組細胞內的原位抗體。然而，分離的抗體通常通 過至少一個純化步驟來制備。基本的4鏈抗體單元是由兩條相同的輕鏈(L)和兩條相同的重鏈(H)構成的異四 聚體糖蛋白(IgM抗體由5個基本的異四聚體單元及稱作J鏈的另外多肽組成，因此包含10 個抗原結合位點；而分泌型IgA抗體可聚合形成包含2-5個基本的4鏈單元及J鏈的多價 裝配物)。在IgG的情況中，4鏈單元通常是約150，000道爾頓。每條輕鏈通過一個共價二 硫鍵與重鏈相連，而兩條重鏈通過一個或多個二硫鍵彼此相連，二硫鍵的數目取決于重鏈 的同種型。每條重鏈和輕鏈還具有間隔規律的鏈內二硫鍵。每條重鏈在N-末端具有一個 可變區(Vh)，接著是三個(對于α和Y鏈)或四個(對于μ和ε同種型)恒定區(Ch)。 每條輕鏈在N-末端具有一個可變區(VJ，接著是其另一端的一個恒定區(Q)。\與乂11排 列在一起，而Q與重鏈的第一恒定區(ChI)排列在一起。認為特定的氨基酸殘基在輕鏈和 重鏈可變區之間形成界面。成對的一個Vh和一個\ 一起形成一個抗原結合位點。關于不 同類別抗體的結構和性質，參見例如《Basic and Clinical Immunology》，第8版，Daniel P. Stites,Abba I. Terr 禾口 Tristram G. Parslow 編，Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, 第71頁和第6章。來自任何脊椎動物物種的輕鏈，根據其恒定區氨基酸序列，可歸入兩種截然不同
31類型中的一種，稱作卡帕(κ)和拉姆達(λ)。根據其重鏈(Ch)恒定區氨基酸序列，免疫球 蛋白可歸入不同的類別或同種型。有五類免疫球蛋白IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分別具有 稱作α、δ、ε、Υ和μ的重鏈。根據Ch序列和功能的較小差異，、和α類可進一步分 為亞類，例如人類表達下列亞類=IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。術語“可變的”指可變區中的某些區段在抗體序列中差異廣泛的實情。V結構域介 導抗原結合并限定特定抗體對其特定抗原的特異性。然而，變異性并非均勻分布于可變區 跨越的Iio個氨基酸。事實上，V區由15-30個氨基酸，稱作框架區(KR)的相對不變異的 區段及將框架區分開的每個長度為9-12個氨基酸，稱作“高變區”的極度變異的較短區域 構成。天然重鏈和輕鏈的可變區各自包含四個FR，它們大多采取β-折疊構象，通過形成 環狀連接且在有些情況中形成β-折疊結構一部分的三個高變區連接。每條鏈中的高變區 通過FR非常接近的保持在一起，并與另一條鏈的高變區一起促成抗體的抗原結合位點的 形成(參見 Kabat 等人，《Sequences of Proteins of Immunological Interest》，第 5 版， Public Health Service, National Institutes ofHealth, Bethesda, MD，1991)。 ’g胃g 不直接參與抗體與抗原的結合，但展現出多種效應器功能，諸如抗體依賴性細胞介導的細 胞毒性(ADCC)中抗體的參與。術語“單克隆抗體”在用于本文時指從一群基本上同質的抗體獲得的抗體，即構成 群體的各個抗體相同，除了可能以極小量存在的可能的天然存在突變外。單克隆抗體是高 度特異的，針對單一抗原性位點。另外，與通常包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體的 多克隆抗體制備物不同，每種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。除了它們的特異性，單 克隆抗體的優越性體現在它們在合成時可未受到其它抗體的污染。修飾語“單克隆”不能解 釋為要求通過任何特定方法來生成抗體。例如，可用于本發明的單克隆抗體可通過最初由 Kohler et al.，Nature，256 =495(1975)描述的雜交瘤方法來制備，或者可通過重組DNA方 法在細菌、真核動物或植物細胞中制備(參見例如美國專利4，816，567)。“單克隆抗體”還 可使用例如 Clackson et al.，Nature，352 :624_628 (1991)和Marks et al.，J. Mol. Biol.， 222 581-597(1991)中描述的技術從噬菌體抗體庫分離。單克隆抗體在本文中包括“嵌合”抗體，以及此類抗體的片段，其中重鏈和/或輕 鏈的一部分與衍生自特定物種或屬于特定抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同 源，而鏈的剩余部分與衍生自另一物種或屬于另一抗體類別或亞類的抗體中的相應序列 相同或同源，只要它們展現出期望生物學活性(參見美國專利4，816，567和Morrison et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81 :6851_6855 (1984))。本文中感興趣的嵌合抗體包括包含 衍生自非人靈長類動物(如舊大陸猴類(Old World Monkey)、猿等)的可變區抗原結合序 列和人恒定區序列的“靈長類化(primatized) ”抗體。“完整抗體”指包含抗原結合位點以及Q和至少重鏈恒定區CH1、Ch2和Ch3的抗 體。恒定區可以是天然序列恒定區(例如人天然序列恒定區)或其氨基酸序列變體。優選 的是，完整抗體具有一項或多項效應器功能。“抗體片段”包含完整抗體的一部分，優選完整抗體的抗原結合區或可變區。抗體 片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab' )2和Fv片段；雙抗體(diabody)；線性抗體(參見美 國專利 5，641，870，實施例 2 ;Zapata et al. , Protein Eng. 8(10) 1057-1062 (1995))；單 鏈抗體分子；及由抗體片段形成的多特異性抗體。
用木瓜蛋白酶消化抗體產生兩個相同的抗原結合片段，稱作“Fab”片段，和一個殘 余“Fe”片段，其名稱反映了它易于結晶的能力。Fab片段由一條完整輕鏈及一條重鏈的可 變區(Vh)和第一恒定區(ChI)組成。每個Fab片段對于抗原結合是單價的，即它具有一個 抗原結合位點。胃蛋白酶處理抗體產生一個較大F(ab' )2片段，它粗略相當于兩個通過二 硫鍵相連的Fab片段，具有二價抗原結合活性且仍能夠交聯抗原。Fab’片段因在ChI結構 域的羧基末端增加了少數殘基而與Fab片段有所不同，包括來自抗體鉸鏈區的一個或多個 半胱氨酸。Fab’ -SH是本文中對其中恒定區半胱氨酸殘基攜帶游離硫醇基的Fab’的稱謂。 F(ab' )2抗體片段最初是作為成對Fab’片段生成的，在Fab’片段之間具有鉸鏈半胱氨酸。 還知道抗體片段的其它化學偶聯。Fc片段包含通過二硫鍵保持在一起的兩條重鏈的羧基末端部分。抗體的效應器功 能是由Fc區中的序列決定的，該區還是受到在某些類型細胞上發現的Fc受體(FcR)識別 的部分。“Fv”是包含完整抗原識別和結合位點的最小抗體片段。此片段由緊密、非共價結 合的一個重鏈可變區和一個輕鏈可變區的二聚體組成。從這兩個結構域的折疊中散發出六 個高變環(重鏈和輕鏈各3個環)，貢獻出抗原結合的氨基酸殘基并賦予抗體以抗原結合特 異性。然而，即使是單個可變區(或只包含對抗原特異的三個CDR的半個Fv)也具有識別 和結合抗原的能力，盡管親和力低于完整結合位點。“單鏈Fv”，也可縮寫為“sFv”或“scFv”，是包含連接成一條多肽鏈的抗體Vh和 八結構域的抗體片段。優選的是，sFv多肽在Vh和八結構域之間還包含多肽接頭，使得 sFv形成抗原結合期望的結構。關于sFv的綜述參見PlUckthun，《The Pharmacology of Monoclonal Antibodies》，vol. 113, Rosenburg 禾口 Moore 編，Springer-Verlag, New York, pp. 269-315，1994 ；Borrebaeck 1995，見下文。術語“雙抗體”指通過在Vh和\結構域之間使用短接頭(約5-10個殘基)構建 sFv片段(見上一段)而制備的小型抗體片段，由于接頭短，使得V結構域實行鏈間而非 鏈內配對，導致二價片段，即具有兩個抗原結合位點的片段。雙特異性雙抗體是兩個“交 叉” sFv片段的異二聚體，其中兩種抗體的Vh和\結構域存在于不同多肽鏈上。雙抗體更 完整的描述于例如 EP 404, 097 ；WO 93/11161 ；Hollinger et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90 6444-6448(1993)。非人(例如嚙齒類)抗體的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人抗體的序 列的嵌合抗體。在極大程度上，人源化抗體指人免疫球蛋白(受體抗體)中的高變區殘基 用具有期望抗體特異性、親和力和能力的非人物種(供體抗體)諸如小鼠、大鼠、兔或非人 靈長類的高變區殘基替換的免疫球蛋白。在有些情況中，將人免疫球蛋白的框架區(FR)殘 基用相應的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體或供體抗體中沒有發現的 殘基。進行這些修飾是為了進一步改進抗體的性能。通常，人源化抗體包含至少一個、通 常兩個基本上整個如下可變區，其中整個或基本上整個高變環對應于非人免疫球蛋白的高 變環，且整個或基本上整個FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗體任選還包含至少部 分免疫球蛋白恒定區(Fe)，通常是人免疫球蛋白的恒定區。更多細節參見Jones et al., Nature 321:522-525(1986) ；Riechmannet al., Nature 332:323-329(1988) ；Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2 :593_596 (1992)。
33
“物種依賴性抗體”，例如哺乳動物抗人IgE抗體，指對來自第一哺乳動物物種的 抗原的結合親和力強于對來自第二哺乳動物物種的該抗原的同系物的結合親和力的抗體。 通常，物種依賴性抗體“特異性結合”人類抗原(即具有不超過約IxlO-7M,優選不超過約 1χ10_8Μ，最優選不超過約1x10_9M的結合親和力(Kd))，但是對來自第二非人哺乳動物物種 的該抗原的同系物具有比其對人類抗原的結合親和力弱至少約50倍，或至少約500倍，或 至少約1000倍的結合親和力。物種依賴性抗體可以是上文定義的各種類型抗體，但是優選 人源化抗體或人抗體。術語“依照Kabat的可變域殘基編號”或“依照Kabat的氨基酸位置編號”及其變 體指Kabat et al. ,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)巾白勺車t 用于重鏈可變域或輕鏈可變域的編號系統。使用此編號系統，實際的線性氨基酸序列可包 含較少或另外的氨基酸，對應于可變域FR或CDR的縮短或插入。例如，重鏈可變域可包含 H2殘基52后的單一氨基酸插入(依照Kabat為殘基52a)及重鏈FR殘基82后的插入殘基 (例如依照Kabat為殘基82a、82b和82c等)。給定抗體的Kabat殘基編號可通過將抗體 序列與“標準”Kabat編號序列對比同源區來確定。短語“基本上相似”或“基本上相同，，在用于本文時表示兩個數值(通常一個涉及 本發明的抗體而另一個涉及參照/比較抗體)之間足夠高的相似程度，以致本領域技術人 員將認為在用所述數值(例如Kd值)所測量的生物學特性背景內兩個數值之間的差異具 有很小的或沒有生物學和/或統計學顯著性。作為參照/比較抗體的數值的函數，所述兩 個數值之間的差異優選小于約50%，優選小于約40%，優選小于約30%，優選小于約20%， 優選小于約10%。“結合親和力”通常指分子(例如抗體)的單一結合位點與其結合配偶體(例如抗 原)之間全部非共價相互作用總和的強度。除非另有說明，在用于本文時，“結合親和力”指 反映結合對的成員(例如抗體與抗原)之間1 1相互作用的內在結合親和力。分子X對 其配偶體Y的親和力通常可用解離常數(Kd)來表述。親和力可通過本領域知道的常用方 法來測量，包括本文中所描述的。低親和力抗體通常緩慢的結合抗原且趨于容易解離，而高 親和力抗體通常更快速的結合抗原且趨于保持更長時間的結合。本領域知道測量結合親和 力的多種方法，其中任一種都可用于本發明的目的。下文描述了具體的示例性實施方案。在一個實施方案中，依照本發明的“Kd”或“Kd值”是通過如下測定法所述使用Fab 型式的目的抗體及其抗原進行的放射性標記抗原結合測定法(RIA)來測量的通過在存在 未標記抗原的滴定系列的條件下，用最小濃度的125I標記抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗體 包被的平板捕捉結合的抗原來測量Fab對抗原的溶液中的結合親和力(Chen，et al.，J Mol Biol 293:865-881(1999))。為了確定測定條件，用50mM碳酸鈉(pH 9.6)中的5yg/ml捕 捉用抗Fab抗體(Cappel Labs)包被微量滴定板(Dynex)過夜，隨后用PBS中的2% (w/v) 牛血清清蛋白在室溫(約23°C )封閉2-5小時。在非吸附平板(Nunc#269620)中，將IOOpM 或26pM[125I]_抗原與連續稀釋的目的Fab混合(例如與Prestaet al.，Cancer Res. 57 4593-4599 (1997)中抗VEGF抗體，Fab_12的評估一致)。然后將目的Fab保溫過夜；不過， 保溫可持續更長時間(例如65個小時)以保證達到平衡。此后，將混合物轉移至捕捉板以 進行室溫保溫(例如1小時)。然后除去溶液，并用含0. 1 % Tween-20的PBS洗板8次。平板干燥后，加入150 μ 1/孔閃爍液(MicroScint-20 ；Packard)，然后在Topcount伽馬計 數器(Packard)上對平板計數10分鐘。選擇各Fab的給出小于或等于最大結合之20%的 濃度用于競爭性結合測定法。依照另一實施方案，Kd或Kd值是通過表面等離振子共振測 定法使用 BIAcore -2000 或 BIAcore -3000 (BIAcore，Inc.，Piscataway, NJ)在 25°C使用 固定化抗原CM5芯片在約10個響應單位(RU)測量的。簡而言之，依照供應商的說明書用 鹽酸N-乙基-N’ -(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS) 活化羧甲基化右旋糖苷生物傳感器芯片(CM5，BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸鈉pH 4. 8將 抗原稀釋至5 μ g/ml (約0. 2 μ Μ)，然后以5 μ 1/分鐘的流速注入以獲得約10個響應單位 (RU)的偶聯蛋白質。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封閉未反應基團。為了進行動力學測 量，在25°C以約25 μ 1/分鐘的流速注入在含0. 05% Tween-20的PBS(PBST)中兩倍連續 稀釋的Fab(0. 78nM至500nM)。使用簡單一對一朗格繆爾(Langmuir)結合模型(BIAcore Evaluation Software version 3.2)通過同時擬合結合和解離傳感圖計算結合速率(k。n) 和解離速率(k。ff)。平衡解離常數(Kd)以比率k。ff/k。n計算。參見例如Chen，Y.，et al.， J Mol Biol 293:865-881(1999)。如果根據上文表面等離振子共振測定法，結合速率超過 IO6M-1S-1，那么結合速率可使用熒光淬滅技術來測定，即根據分光計諸如配備了斷流裝置的 分光光度計(a stop-flow equipped spectrophometer) (Aviv Instruments)或 8000 系列 SLM-Aminco分光光度計(ThermoSpectronic)中用經攪拌的比色杯的測量，在存在濃度漸 增的抗原的條件下，測量PBS，pH 7. 2中的20nM抗抗原抗體(Fab形式)在25°C的熒光發 射強度(激發=295nm;發射=340nm，16nm帶通(band pass))的升高或降低。
it M R _ W “^n -π“ (on-rate, rate ofassociation, association
rate)或“k。n”也可通過上文所述相同的表面等離振子共振技術使用BIACore -2000或 BIAcore -3000 (BIAcore, Inc.，Piscataway, NJ)在 25°C使用固定化抗原 CM5 芯片在約 10 個響應單位(RU)來測定。簡而言之，依照供應商的說明書用鹽酸N-乙基-N’-(3-二甲基氨 基丙基)_碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物傳感 器芯片(CM5，BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸鈉pH 4. 8將抗原稀釋至5 μ g/ml (約0· 2 μ Μ)， 然后以5 μ 1/分鐘的流速注入以獲得約10個響應單位(RU)的偶聯蛋白質。注入抗原后，注 入IM乙醇胺以封閉未反應基團。為了進行動力學測量，在25°C以約25 μ 1/分鐘的流速注入 在含0. 05% Tween-20的PBS (PBST)中兩倍連續稀釋的Fab (0. 78nM至500nM)。使用簡單一 對一朗格繆爾(Langmuir)結合模型(BIAcoreEvaluation Software version 3.2)通過同 時擬合結合和解離傳感圖計算結合速率(k。n)和解離速率(k。ff)。平衡解離常數(Kd)以比率 讓。 /\11計算。參見例如0^11，￥.，6丨 al. ,J Mol Biol 293 :865_881 (1999)。然而，如果根據 上文表面等離振子共振測定法，結合速率超過IO6M-1S-1,那么結合速率優選使用熒光淬滅技 術來測定，即根據分光計諸如配備了斷流裝置的分光光度計(Avivlnstruments)或8000系 列SLM-Aminco分光光度計(ThermoSpectronic)中用經攪拌的比色杯的測量，在存在濃度 漸增的抗原的條件下，測量PBS，pH 7.2中的20碰抗抗原抗體(Fab形式)在25°C的熒光發 射強度(激發=295nm ；發射=340nm, 16nm帶通)的升高或降低。在一個實施方案中，依照 本發明的“Kd”或“Kd值”是通過如下測定法所述使用Fab型式的抗體和抗原分子進行的放 射性標記抗原結合測定法(RIA)來測量的通過在存在未標記抗原的滴定系列的條件下， 用最小濃度的125I標記抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗體包被的平板捕捉結合的抗原來測量
35Fab 對抗原的溶液中的結合親和力(Chen，et al.，J Mol Biol 293 :865_881 (1999))。為了 確定測定條件，用50mM碳酸鈉(pH 9. 6)中的5 μ g/ml捕捉用抗Fab抗體(Cappel Labs)包 被微量滴定板(Dynex)過夜，隨后用PBS中的2% (w/v)牛血清清蛋白在室溫(約23°C)封 閉2-5小時。在非吸附平板(Nunc#269620)中，將IOOpM或26pM[125I]_抗原與連續稀釋的目 的 Fab 混合(與 Presta et al.，Cancer Res. 57 :4593_4599 (1997)中抗 VEGF 抗體，Fab-12 的評估一致)。然后將目的Fab保溫過夜；不過，保溫可持續更長時間(例如65個小時)以 保證達到平衡。此后，將混合物轉移至捕捉板以進行室溫保溫1小時。然后除去溶液，并用 含0. 1 % Tween-20的PBS洗板8次。平板干燥后，加入150 μ 1/孔閃爍液(MicroScint-20 ； Packard)，然后在Topcount伽馬計數器(Packard)上對平板計數10分鐘。選擇各Fab的給 出小于或等于最大結合之20%的濃度用于競爭性結合測定法。依照另一實施方案，Kd或Kd 值是通過表面等離振子共振測定法使用BIACOreTM-2000或BIACOreTM-3000 (BIAcore, Inc.， Piscataway, NJ)在25°C使用固定化抗原CM5芯片在約10個響應單位(RU)測量的。簡而 言之，依照供應商的說明書用鹽酸N-乙基-N’ -(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(EDC) 和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物傳感器芯片(CM5，BIAc0re Inc.)。 用IOmM乙酸鈉pH 4. 8將抗原稀釋至5 μ g/ml (約0. 2 μ Μ)，然后以5 μ 1/分鐘的流速注入 以獲得約10個響應單位(RU)的偶聯蛋白質。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封閉未反應基 團。為了進行動力學測量，在25°C以約25 μ 1/分鐘的流速注入在含0. 05% Tween-20的 PBS (PBST)中兩倍連續稀釋的Fab (0. 78nM至500nM)。使用簡單一對一朗格繆爾(Langmuir) 結合模型(BIAcoreEvaluation Software version 3.2)通過同時擬合結合和解離傳感圖 計算結合速率(k。n)和解離速率(k。ff)。平衡解離常數(Kd)以比率k。ff/k。n計算。參見例如 Chen, Y. ,et al. ,J Mol Biol 293:865-881(1999)。如果根據上文表面等離振子共振測定 法，結合速率超過IO6M-1S-1,那么結合速率可使用熒光淬滅技術來測定，即根據分光計諸如 配備了斷流裝置的分光光度計(Aviv Instruments)或8000系列SLM-Aminco分光光度計 (ThermoSpectronic)中用經攪拌的比色杯的測量，在存在濃度漸增的抗原的條件下，測量 PBS，pH 7.2中的20碰抗抗原抗體(Fab形式)在25°C的熒光發射強度(激發= 295nm;發 射=340nm, 16nm帶通)的升高或降低。 在一個實施方案中，依照本發明的“結合速率”(on-rate，rate of association, association rate)或“k。n”是通過上文所述相同的表面等離振子共振技術使用 BIAcore -2000 或 BIAcore -3000 (BIAcore，Inc.，Piscataway, NJ)在 25°C使用固定化抗 原CM5芯片在約10個響應單位(RU)測定的。簡而言之，依照供應商的說明書用鹽酸N-乙 基-N’-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基 化右旋糖苷生物傳感器芯片(CM5，BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸鈉pH 4. 8將抗原稀釋至 5 μ g/ml (約0. 2 μ Μ)，然后以5 μ 1/分鐘的流速注入以獲得約10個響應單位(RU)的偶聯蛋 白質。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封閉未反應基團。為了進行動力學測量，在25°C以約 25 μ 1/分鐘的流速注入在含0. 05% Tween-20的PBS (PBST)中兩倍連續稀釋的Fab (0. 78nM 至 500nM)。使用簡單一對一朗格繆爾(Langmuir)結合模型(BIAcore Evaluation Software version 3.2)通過同時擬合結合和解離傳感圖計算結合速率(k。n)和解離速率(k。ff)。 平衡解離常數(Kd)以比率k。ff/k。n計算。參見例如Chen，Y.，et al.，J Mol Biol 293 865-881(1999)。然而，如果根據上文表面等離振子共振測定法，結合速率超過IO6M-1S-1JP
36么結合速率優選使用熒光淬滅技術來測定，即根據分光計諸如配備了斷流裝置的分光光度 計(Aviv Instruments)或 8000 系列 SLM-Aminco 分光光度計(ThermoSpectronic)中用經 攪拌的比色杯的測量，在存在濃度漸增的抗原的條件下，測量PBS，pH7. 2中的20nM抗抗原 抗體(Fab形式)在25°C的熒光發射強度(激發=295nm ；發射=340nm, 16nm帶通)的升 高或降低。短語“實質性降低”或“實質性不同”在用于本文時表示兩個數值(通常一個涉及 本發明的抗體而另一個涉及參照/比較抗體)之間足夠高的差異程度，以致本領域技術人 員將認為在用所述數值(例如Kd值、HAMA反應)所測量的生物學特性背景內兩個數值之間 的差異具有統計學顯著性。作為參照/比較抗體的數值的函數，所述兩個數值之間的差異 優選大于約10 %，優選大于約20 %，優選大于約30 %，優選大于約40 %，優選大于約50 %。“抗原”是抗體可選擇性結合的預定抗原。靶抗原可以是多肽、碳水化合物、核酸、 脂質、半抗原或其它天然發生的或合成的化合物。優選的是，靶抗原是多肽。就本文目的而 言，“受體人框架”是包含衍生自人免疫球蛋白框架或人共有框架的VL或VH框架之氨基酸 序列的框架。“衍生自”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受體人框架包含與之相同的氨基 酸序列，或者可包含預先存在的氨基酸序列變化。當存在預先存在的氨基酸變化時，優選存 在不超過5個，優選4個或更少，或者3個或更少預先存在的氨基酸變化。當VH中存在預 先存在的氨基酸變化時，優選那些變化只位于71H、73H和78H中的三個、兩個或一個位置； 例如，位于那些位置的氨基酸殘基可以是71A、73T和/或78A。在一個實施方案中，VL受體 人框架在序列上與VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。本發明的抗體可能能夠競爭對第二抗體所結合的相同表位的結合。若單克隆抗體 在標準體外抗體競爭結合分析中在相同抗體濃度阻斷其它單克隆抗體的結合達40%或更 多，則認為各單克隆抗體共享“相同表位”。“人共有框架”是代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列選集中最常見的氨基酸殘基 的框架。通常，所述人免疫球蛋白VL或VH選集來自可變區序列亞型。通常，所述序列亞型 是如Kabat等人所述的亞型。在一個實施方案中，對于VL，所述亞型是如Kabat等人所述的 亞型κ I。在一個實施方案中，對于VH，所述亞型是如Kabat等人所述的亞型III。“VH亞型III共有框架”包含獲自Kabat等人所述的可變重鏈亞型III中的氨基 酸序列的共有序列。"VL亞型I共有框架”包含獲自Kabat等人所述的可變輕鏈κ亞型I中的氨基酸 序列的共有序列。“未修飾的人框架”是具有與受體人框架相同的氨基酸序列的人框架，例如在受體 人框架中沒有人到非人的氨基酸替代。“改變的高變區”就本文目的而言是其中包含一個或多個(例如1個至約16個)
氨基酸替代的高變區。“未修飾的高變區”就本文目的而言是具有與衍生它的非人抗體相同的氨基酸序 列的高變區，即其中沒有一個或多個氨基酸替代的高變區。術語“高變區”、“HVR”或“HV”在用于本文時指抗體可變域中序列上高度可變且 /或形成結構上確定的環的區域。通常，抗體包含6個高變區三個在VH中(Η1、Η2、Η3)， 三個在VL中(L1、L2、L3)。本文使用且包括許多高變區的敘述。Kabat互補決定區(OTR)是以序列可變性為基礎的，而且是最常用的(Kabat et al.，Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health,Bethesda,MD. (1991))。Chothia 改為指結構環的位置(Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917(1987))。“接觸”高變區是以可獲得復雜晶體結構的分析為基礎的。下 文記錄了這些高變區中每一個的殘基。除非另有說明，將采用Kabat編號。高變區的位置 通常如下第24-34位氨基酸(HVR-Ll)、第49-56位氨基酸(HVR-L2)、第89-97位氨基酸 (HVR-L3)、第26-35A位氨基酸(HVR-Hl)、第49-65位氨基酸(HVR-H2)和第93-102位氨基 酸(HVR-H3)。高變區還可包括如下“延伸的高變區”:VL中的氨基酸24_36(L1)和氨基酸 46-56 (L2)。對于這些定義中的每一個，可變域殘基是依照文獻Kabat等人(見上文)所述 編號的。“框架”或“FR”殘基是可變區中除了如本文所定義的高變區殘基以外的那些殘基。“人抗體”是具有與由人生成的抗體的氨基酸序列對應的氨基酸序列且/或使用本 文所公開的用于制備人抗體的任何技術制備的抗體。人抗體的這種定義明確排除了包含非 人抗原結合殘基的人源化抗體。“親和力成熟的”抗體指在其一個或多個CDR中具有導致抗體對抗原的親和力 與沒有這些改變的親本抗體相比有所改進的一處或多處改變的抗體。優選的親和力成熟 的抗體將具有納摩爾或甚至皮摩爾水平的對靶抗原的親和力。親和力成熟的抗體可通過 本領域已知流程生成。Marks et al.，Bio/Technology 10 :779_783 (1992)描述了經由 通過VH和VL結構域改組的親和力成熟。下列文獻描述了 CDR和/或框架殘基的隨機誘 ^ =Barbas et al. ，Proc.Nat. Acad. Sci. USA 91 3809-3813(1994) ；Schier et al. ，Gene 169 147-155(1995) ；Yelton et al.，J. Immunol. 155 1994-2004(1995) Jackson et al.， J. Immunol. 154(7) :3310_9 (1995)；及 Hawkins et al.，J. Mol. Biol. 226 :889_896 (1992)。“阻斷性”抗體或“拮抗性”抗體指抑制或降低其所結合的抗原的生物學活性的抗 體。優選的阻斷性抗體或拮抗性抗體基本上抑制或完全抑制抗原的生物學活性。"TAT結合寡肽”指結合，優選特異性結合本文中所描述的TAT多肽的寡肽。TAT 結合寡肽可使用已知寡肽合成方法而化學合成，或者可使用重組技術來制備和純化。TAT 結合寡肽的長度通常是至少約5個氨基酸，或者長度為至少約6、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、 40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、 65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、 90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100個氨基酸或更多，其中能夠結合，優選特異性結合 本文所述TAT多肽的此類TAT結合寡肽可使用眾所周知的技術無需過多實驗就得以鑒定。 在這點上，注意到用于對寡肽庫篩選能夠特異性結合多肽靶物的寡肽的技術是本領域眾 所周知的(參見例如美國專利 5，556，762，5，750，373，4，708，871，4，833，092，5，223，409， 5，403，484，5，571，689，5，663，143 ;PCT
發明者保羅·波拉基斯, 威廉·馬利特, 馬克·丹尼斯 申請人:健泰科生物技術公司