miR-36l-5p作為內參miRNA在腫瘤診斷和監測中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及miR-361-5p的一種新用途，即，作為內參miRNA的應用。本發明還提供一種miRNA標準化定量的方法。本發明的優點在于，miR-361-5p在多數腫瘤及對照正常組織中表達最為穩定，最適合作為內參miRNA用于腫瘤miRNA的檢測結果的標準化。本發明提供的內參miRNA、miRNA標準化定量的方法、定量檢測miRNA的芯片或試劑盒可以使檢測結果標準化，值得廣泛推廣。
【專利說明】mi R-361 -5p作為內參m i RNA在腫瘤診斷和監測中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及分子生物學【技術領域】，具體地說，是miR-361-5p作為內參miRNA在腫 瘤診斷和監測中的應用。
【背景技術】
[0002] 微小核糖核酸（micr〇RNA，miRNA)是一類內源性的具有調控功能的非編碼RNA，長 約20~25個核苷酸。miRNA參與各種各樣的調節途徑，在腫瘤生成、增殖、代謝、凋亡中都發 揮著極為重要的作用，在腫瘤診斷和監測等方面也有著廣闊的發展前景。
[0003] 近年來已有多種方法被用于定量檢測樣本中的miRNA，如qRT-PCR、探針雜交和 microarray等。上述方法會因為樣本中miRNA的含量和質量、反應效率、以及試驗操作等原 因產生較大的誤差，此時便需要采用內參miRNA對這些方法的檢測結果進行標準化來消除 這些誤差，因此上述方法的準確性很大程度上取決于所采用的內參miRNA。并且在比較不同 實驗室及不同實驗方法所取得的檢測結果時，采用內參miRNA對結果進行標準化也十分重 要。
[0004] 理想的內參miRNA需要在不同樣本中均保持穩定的高表達。但目前仍缺乏對內參 miRNA的系統性評估與研究，內參miRNA的選擇仍主要依據傳統經驗，而研究已表明目前常 用的內參miRNA在不同情況下表達具有較大差異性，難以符合標準化的要求。因此，本領域 迫切需要鑒定最佳內參的miRNA，以用于miRNA檢測結果的標準化。本發明提供目前還未見 報道的最佳內參miRNA。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供miR-361_5p的一種新用途。
[0006] 為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：miR-361-5p作為內參miRNA的應用。
[0007] miR-361-5p作為內參miRNA在腫瘤診斷和監測中的應用。
[0008] -種miRNA標準化定量的方法，所述的方法包括以下步驟： (1) 測定樣本中待測miRNA的絕對濃度； (2) 將步驟（1)獲得的待測miRNA的絕對濃度與樣本中內參miRNA的絕對濃度進行比 較，從而獲得待測miRNA的相對濃度，所述的內參miRNA為miR-361-5p或包含miR-361-5p 的miRNA的組合。
[0009] 在步驟（2)中，將目的miRNA的絕對濃度與樣本中miR-361-5p的絕對濃度進行比 較。
[0010] 所述的樣本為腫瘤組織、腫瘤患者血液、血漿、血清、體液、細胞或者其組合。
[0011] 一種定量檢測miRNA的芯片或試劑盒，所述的芯片或試劑盒特異性地檢測 miR-361-5p 或包含 miR-361-5p 的 miRNA 組合。
[0012] 本發明優點在于： miR-361-5p在多數腫瘤及對照正常組織中表達最為穩定，最適合作為內參miRNA用于 腫瘤miRNA的檢測結果的標準化。本發明提供的內參miRNA、miRNA標準化定量的方法、定 量檢測miRNA的芯片或試劑盒可以使檢測結果標準化，值得廣泛推廣。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0013] 附圖1是miR-361-5p在14種腫瘤中的表達情況。
[0014] 附圖2是miR-361-5p、其它部分miRNA和常用內參在肺鱗癌、肺腺癌和食管癌中的 qRT-PCR檢測結果。
【具體實施方式】
[0015] 下面結合附圖對本發明提供的【具體實施方式】作詳細說明。
[0016] 本發明涉及的 HiiR-36I-5P,對應序列為 5'-uuaucagaaucuccagggguac-3'（如 SEQ NO. 1所示）。
[0017] 實施例1腫瘤miRNA表達數據分析 從TCGA數據庫中獲得腫瘤及正常對照組織的miRNA測序結果，共包含14種常見腫 瘤的589例正常對照組織和5727例腫瘤組織樣本數據，見表1。對mature miRNA和star miRNA進行分類，去掉頸環、前體和未注釋的數據，并按照miRbase V21. 0的MIMAT序列號整 理mature miRNA和star miRNA，計算每種miRNA的表達量，以RPM值表不。
[0018] 表1分析所納入的14種常見腫瘤及相應正常組織和腫瘤組織樣本數量
【權利要求】
1. miR-361-5p作為內參miRNA的應用。 2. miR-361-5p作為內參miRNA在腫瘤診斷和監測中的應用。
3. -種miRNA標準化定量的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步驟： (1) 測定樣本中待測miRNA的絕對濃度； (2) 將步驟（1)獲得的待測miRNA的絕對濃度與樣本中內參miRNA的絕對濃度進行比 較，從而獲得待測miRNA的相對濃度，所述的內參miRNA為miR-361-5p或包含miR-361-5p 的miRNA的組合。
4. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟（2)中，將目的miRNA的絕對濃度 與樣本中miR-361-5p的絕對濃度進行比較。
5. 根據權利要求3或4任一所述的方法，其特征在于，所述的樣本為腫瘤組織、腫瘤患 者血液、血楽、血清、體液、細胞或者其組合。
6. -種定量檢測miRNA的芯片或試劑盒，其特征在于，所述的芯片或試劑盒特異性地 檢測 miR-361-5p 或包含 miR-361-5p 的 miRNA 組合。
【文檔編號】C12Q1/68GK104212895SQ201410443995
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年9月3日 優先權日:2014年9月3日
【發明者】詹成, 王群, 時雨, 王琳 申請人:復旦大學附屬中山醫院