專利名稱：固定化微生物細胞酶法制備l-2-氨基脂肪酸的方法
技術領域：
本發明涉及利用固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基脂肪酸的方 法，更具體的說本發明涉及將含氨基酰化酶的微生物細胞固定化，通 過固定化細胞內酶的作用將底物N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸拆分為L-2-氨基脂肪酸和N-乙酰-D-2-氨基脂肪酸，N-乙酰-D-2-氨基脂肪酸經消 旋后再次酶法拆分又可得到L-2-氨基脂肪酸。屬酶工程技術領域。
二背景技術：
2-氨基丁酸是抑制人體神經信息傳遞的脂肪族氨基酸，臨床可用 于腦血管病后遺癥，并具有降壓作用；2-氨基丁酸還是一種重要的化 工原料和醫藥中間體，已廣泛應用于藥物合成，如鹽酸乙胺丁醇、左 乙拉西坦等。2-氨基戊酸(正纈氨酸)是合成藥物培哚普利的關鍵中 間體，此外在枯草芽孢桿菌產生的一種抗真菌多肽中也發現了正纈氨 酸。2-氨基己酸(正亮氨酸)也是一種應用廣泛的藥物中間體。根據 目前文獻報導，以上三種2-氨基脂肪酸的制備方法主要有以下三種 1、化學法
2007年，奚強等(武漢工程大學學報，Vol. 29， No.4， 2007)以 正丁酸和溴為原料合成了 2-溴丁酸，再以2-溴丁酸與氨水反應制備 了 DL-2-氨基丁酸，其收率為62.5%。
2007年，陳新志等(CN 101007772A, 2007)以正丁醛、氰化鈉 和氯化銨為原料首先制備了氨基戊腈，經腈基酰胺化、L-酒石酸拆分、水解等步驟得到L-正纈氨酸。 .
2006年，陳新志等(CN 100427460C, 2006)以正戊酸為原料， 經酰氯化、溴化、氨化得到外消旋2-氨基戊酰胺，利用L-酒石酸拆 分后水解得到L-正纈氨酸。
2004年，王旭(CN 100352801C， 2004)以正丁醛和丙酮氰醇為 主要起始原料，依次經過氰基化、氨化、氰基酰胺化得到外消旋2-氨基戊酰胺，利用L-酒石酸拆分后水解得到L-正纈氨酸。
1991年，Tadashi等(Bull. Chen. Soc. Jpn.， 64， 1991)以N-乙 酰-L-丙氨酸銨鹽為共溶物，以替代結晶法在乙醇中光學拆分了 N-乙 酰-DL-氨基丁酸銨鹽、N-乙酰-DL-正纈氨酸銨鹽以及N-乙酰-DL-正 亮氨酸銨鹽，其中N-乙酰-L-正纈氨酸銨鹽收率達800/0。
1986年，Compagnone等(J. Org. Chem.， 51(10)， 1986)將L-蛋氨酸在T-1雷尼鎳作用下脫去甲硫基生成L-2-氨基丁酸。
1978年，Jeffery等(Aust. J. Chem.， 31(1)， 1978)利用滎電極 在氨水或氯化銨溶液中電催化還原其相應的酮式氨基酸(或氨基酸鈉 鹽)的方法，制備了DL-2-氨基丁酸，產率僅為48%，且有副產物谷 氨酸生成。
1970年，Mahendra等(Canadian Journal of Chemistry, 48， 1970)
以氫氰酸加成希夫堿的方法不對稱合成了正纈氨酸、正亮氨酸以及亮 氨酸，收率40%-60%。其具體步驟為利用甲基芐胺和脂肪醛制備 希夫堿，然后氫氰酸加成得到氨基腈，酸水解得到N-取代的氨基酸， 加氫催化得到苯乙烷和a-氨基酸。1965年，Babievskii等(Seriya Khimicheskaya， No.l， 1965)將
硝基乙酸甲酯、乙醛和乙酰氯的反應產物經催化加氫后得DL-2-氨基 丁酸甲酯，水解后制備了 DL-2-氨基丁酸，產率較低還有副產物蘇氨 酸生成。
1954年，Losse等(Chemische Berichte， 87(9)， 1954)利用手性 拆分劑D-酒石酸或聯苯甲酰-D-酒石酸拆分DL-2-氨基丁酸分別得到
其對應光學異構體。
2、 發酵法
2000年，Tomoihiro等(JP 2000279163 (A)， 1983)利用高紅曲 生產L-2-氨基丁酸。
1997年，Andrey等(Applied and Environmental Microbiology, Dec. 1997)利用重組大腸桿菌生物合成了 L-亮氨酸、L-纈氨酸、L-正纈氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸和L-酪氨酸，收率80%以上。
1983年，中西俊秀等(JP 63287493 (A), 1983)采用大腸桿菌屬 或谷氨酸棒桿菌屬的微生物發酵法制備了 L-2-氨基丁酸。
1977年，Masahiko等(Applied and Environmental Microbiology, Aug. 1977)以Serratiamarcescens正亮氨酸耐受突變株發酵法積累正 亮氨酸。
3、 酶法
2009年，焦慶才等(CN 200910030982.8， 2009)利用微生物來 源或基因工程來源的氨基酰化酶，以N-乙酰-DL-2-氨基丁酸為底物制 備了L-2-氨基丁酸，收率達78%以上。
62008年，Daniel等(Eur. J. Org. Chem.， 2008， 3506-3512)利用
堿性蛋白酶A在醛存在的條件下動態拆分DL-正纈氨酸乙酯得到L-
正纈氨酸。
2008年，苗維娟等(過程工程學報，8(1)， 2008)將甘油脫氫酶 和亮氨酸脫氫酶偶聯，以甘油和2-丁酮酸為底物，同時合成l, 3-二 羥基丙酮和L-2-氨基丁酸。.
1999年，Fotheringham等(Bioorganic & Medicinal Chemistry, 7 (10)， 1999)利用大腸桿菌K12菌體細胞以L-蘇氨酸和L-天冬氨酸 為底物通過轉氨反應合成了 L-2-氨基丁酸。
1989年,Chenault等(J. Am. Chem. Soc.， 1989， 6354-6364)以 豬腎和米曲霉來源的氨基酰化酶I拆分了 N-乙酰-DL-氨基丁酸、N-乙酰-DL-正纈氨酸等50幾種N-乙酰-a-氨基酸及其衍生物。
1945年，Greenstein等(Journal of Biological Chemistry, 182(2)， 1945)利用豬腎中提取的氨基酰化酶不對稱水解N-氯乙酰外消旋正 亮氨酸、正纈氨酸和a-氨基丁酸得到了其對應的L-型和D-型異構體， 其中L-型和D-型的收率分別為70%和60%。
利用游離細胞或酶轉化制備L-2-氨基脂肪酸，轉化液中會含有少 量菌體蛋白或其它雜質，不利于產物的分離純化，菌體細胞或酶的重 復利用率也不高。
到目前為止，利用固定化含氨基酰化酶的微生物細胞酶法制備 L-2-氨基脂肪酸的方法還未見報導。 三、發明內容1、 發明目的
本發明目的在于提供一種固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基 脂肪酸的方法。
2、 技術方案
一種利用固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基脂肪酸的方法，其 特征在于制備步驟如下
(1) 細胞固定化
將發酵獲得的含氨基酰化酶的菌體細胞和包埋劑混合均勻，加入 成型劑中固化成型，或固化成型后再加入強化劑進行強化處理，即得 固定化細胞；
(2) N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸生物轉化
將固定化細胞裝柱，使N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸水溶液流經酶柱 進行生物轉化，收集流出的轉化液，轉化液重復上柱，直至轉化液中 N-乙酰-L-2-氨基脂肪酸反應完全；
(3) L-2-氨基脂肪酸分離純化 上述轉化液用活性炭脫色去除雜質，濃縮、冷卻結晶或用活性炭
脫色除雜質后用陽離子交換柱分離，得到L-2-氨基脂肪酸和N-乙酰 -D-2-氨基脂肪酸，其中N-乙酰-D-2-氨基脂肪酸經消旋，得N-乙酰 -DL-2-氨基脂肪酸再次用于酶柱拆分。
上述步驟(1)中所述含氨基酰化酶的菌體為刺孢小克銀漢霉 9980、米曲霉、基因工程菌1016或基因工程菌DM202。
上述步驟(1)中所述菌體細胞和包埋劑混合后的濃度為10 200g/L，在成型劑中固定化時間為l 48h，強化劑處理時間為10 180min。
上述步驟(1)中所述的包埋劑為海藻酸鈉、卡拉膠、明膠或殼 聚糖，所述的成型劑為氯化鈣、氯化鉀或磷酸鈉溶液，所述的強化劑 為戊二醛。其中包埋劑海藻酸鈉或卡拉膠濃度為10 50g/L，成型劑 氯化鈣或氯化鉀水溶液濃度為10 60g/L;包埋劑明膠濃度為50 200g/L，膠體強化劑戊二醛的濃度為5 30g/L;包埋劑殼聚糖濃度為 10 100g/L，成型劑為pH6 8的磷酸鈉溶液。
上述步驟(2)中所述的N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸為N-乙酰-DL-2-氨基丁酸、N-乙酰-DL-2-氨基戊酸或N-乙酰-DL-2-氨基己酸。
上述步驟(2)中所述的N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸水溶液濃度為 50 400g/L， pH6.0 9.0，流經酶柱的速度為100 1000mL/h，轉化 溫度為25 60°C。 3、有益效果
本發明利用固定化微生物細胞酶法拆分N-乙酰-DL-2-氨基脂肪 酸得到L-2-氮基脂肪酸，反應條件溫和，酶法轉化效率高，產物易于 分離純化且固定化細胞可重復使用，具有生產成本低、工藝流程簡單、 適合工業化生產等優點。具體實施例方式
實施例1固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基丁酸的方法
取1000mL剌孢小克銀漢霉9980發酵液，2000r/min離心20min 收集菌體，菌體濕重40g。洗入700mL30g/L海藻酸鈉水溶液中，混勻，然后用注射器將含有菌體的海藻酸鈉水溶液滴入lOOOmL 20g/L 氯化鈣水溶液中，固化2h后去除氯化鈣溶液，并用生理鹽水洗滌三 次。
將所得固定化細胞裝入直徑4cm，高50cm的玻璃柱中。1000mL 10% N-乙酰-DL-2-氨基丁酸鈉水溶液以300mL/h流經酶柱，控制溫度 45°C， pH6.5，流出液重復上柱直至底物轉化完全。
將轉化完全的流出液升溫至7(TC加入活性炭脫色，真空濃縮至 150mL，冷卻結晶，真空過濾得L-2-氨基丁酸粗品，烘干得26g;將 26g粗品加入到150mL75。/o乙醇中，攪拌洗滌，真空抽濾得L-2-氨基 丁酸18.3g;將乙醇濾液蒸發濃縮，將濃縮液與粗品母液合并，用6 mol/L鹽酸調pH2.0，冷卻結晶，真空過濾得N-乙酰-D-2-氨基丁酸粗 品，烘干得47g，粗品母液循環套用。N-乙酰-D-2-氨基丁酸經消旋后 再次用于酶柱拆分。
實施例2固定化微生物細胞酶法制備L-正纈氨酸的方法
取1000mL米曲霉發酵液，2000r/min離心20min收集菌體，菌 體濕重34g。洗入600mL30g/L海藻酸鈉水溶液中，混勻，然后用注 射器將含有菌體的海藻酸鈉水溶液滴入1000mL 20g/L氯化鈣水溶液 中，固化2h后去除氯化鈣溶液，并用生理鹽水洗滌三次。
將所得固定化細胞裝入直徑4cm，高50cm的玻璃柱中。1000mL 10% N-乙酰-DL-正纈氮酸鈉水溶液以300mL/h流經酶柱，控制溫度 45°C， pH7.5，流出液重復上柱直至底物轉化完全。
將轉化完全的流出液升溫至7(TC加入活性炭脫色，真空濃縮至180mL，冷卻結晶，真空過濾得L-正纈氨酸粗品，烘干得31g;將31g 粗品加入到180mL 75%乙醇中，攪拌洗滌，真空抽濾得L-正纈氨酸 24.7g;將乙醇濾液蒸發濃縮，將濃縮液與粗品母液合并，用6mol/L 鹽酸調pH2.0，冷卻結晶，真空過濾得N-乙酰-D-正纈氨酸粗品，烘 干得51.5g，粗品母液循環套用。N-乙酰-D-正纈氨酸經消旋后再次用 于酶柱拆分。
實施例3固定化微生物細胞酶法制備L-正亮氨酸的方法
取1000mL刺孢小克銀漢霉9980發酵液，2000r/min離心20min 收集菌體，菌體濕重41g。洗入700mL30g/L海藻酸鈉水溶液中，混 勻，然后用注射器將含有菌體的海藻酸鈉水溶液滴入lOOOmL 20g/L 氯化鈣水溶液中，固化2h后去除氯化鈣溶液，并用生理鹽水洗滌三 次。
將所得固定化細胞裝入直徑4cm，高50cm的玻璃柱中。1000mL 10% N-乙酰-DL-正亮氨酸鈉水溶液以300mL/h流經酶柱，控制溫度 45°C， pH7.0，流出液重復上柱直至底物轉化完全。
將轉化完全的流出液升溫至7(TC加入活性炭脫色，真空濃縮至 200mL，冷卻結晶，真空過濾得L-正亮氨酸粗品，烘干得32.3g;將 32.3g粗品加入到200mL75。/。乙醇中，攪拌洗滌，真空抽濾得L-正亮 氨酸25g;將乙醇濾液蒸發濃縮，將濃縮液與粗品母液合并，用6 mol/L 鹽酸調pffi.O，冷卻結晶，真空過濾得N-乙酰-D-正亮氨酸粗品，烘 干得55g，粗品母液循環套用。N-乙酰-D-正亮氨酸經消旋后再次用 于酶柱拆分。實施例4固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基丁酸的方法
取1000mL米曲霉發酵液，2000r/min離心20min收集菌體，菌 體濕重36g。洗入600mL30g/L卡拉膠水溶液中，混勻，然后用注射 器將含有菌體的卡拉膠水溶液滴入1000mL 40g/L氯化鉀水溶液中， 固化4h后去除氯化鉀溶液，并用生理鹽水洗滌三次。
將所得固定化細胞裝入直徑4cm，高50cm的玻璃柱中。lOOOmL 20% N-乙酰-DL-2-氨基丁酸鈉水溶液以200mL/h流經酶柱，控制溫度 45°C， pH7.0，流出液重復上柱直至底物轉化完全。
將轉化完全的流出液升溫至7(TC加入活性炭脫色，真空濃縮至 250mL，冷卻結晶，真空過濾得L-2-氨基丁酸粗品，烘干得53.2g; 將53.2g粗品加入到250mL75。/。乙醇中，攪拌洗滌，真空抽濾得L-2-氨基丁酸36g;將乙醇濾液蒸發濃縮，將濃縮液與粗品母液合并，用 6mol/L鹽酸調pH2.0，冷卻結晶，真空過濾得N-乙酰-D-2-氨基丁酸 粗品，烘干得98g，粗品母液循環套用。N-乙酰-D-2-氨基丁酸經消旋 后再次用于酶柱拆分。
實施例5固定化微生物細胞酶法制備L-正纈氨酸的方法
取1000mL基因工程菌1016發酵液，4000r/min離心20min收集 菌體，菌體濕重15g。洗入300mL30g/L卡拉膠水溶液中，混勻，然 后用注射器將含有菌體的卡拉膠水溶液滴入600mL 40g/L氯化鉀水 溶液中，固化4h后去除氯化鉀溶液，并用生理鹽水洗滌三次。
將所得固定化細胞裝入直徑4cm，高50cm的玻璃柱中。1000mL 20% N-乙酰-DL-正纈氨酸鈉水溶液以200mL/h流經酶柱，控制溫度45°C， pH7.0，流出液重復上柱直至底物轉化完全。
將轉化完全的流出液升溫至7(TC加入活性炭脫色，真空濃縮至 300mL，冷卻結晶，真空過濾得L-正纈氨酸粗品，烘干得59g;將59g 粗品加入到300mL 75%乙醇中，攪拌洗滌，真空抽濾得L-正纈氨酸 44g;將乙醇濾液蒸發濃縮，將濃縮液與粗品母液合并，用6 mol/L 鹽酸調pH2.0，冷卻結晶，真空過濾得N-乙酰-D-正纈氨酸粗品，烘 干得105g，粗品母液循環套用。N-乙酰-D-正纈氨酸經消旋后再次用 于酶柱拆分。
實施例6固定化微生物細胞酶法制備L-正亮氨酸的方法
取1000mL基因工程菌DM202發酵液，4000r/min離心20min收 集菌體，菌體濕重15g。洗入300mL30g/L卡拉膠水溶液中，混勻， 然后用注射器將含有菌體的卡拉膠水溶液滴入600mL 40g/L氯化鉀 水溶液中，固化4h后去除氯化鉀溶液，并用生理鹽水洗滌三次。
將所得固定化細胞裝入直徑4cm，高50cm的玻璃柱中。1000mL 20% N-乙酰-DL-正亮氨酸鈉水溶液以200mL/h流經酶柱，控制溫度 45°C， pH7.0，流出液重復上柱直至底物轉化完全。
將轉化完全的流出液升溫至7(TC加入活性炭脫色，真空濃縮至 350mL，冷卻結晶，真空過濾得L-正亮氨酸粗品，烘干得63g;將63g 粗品加入到350mL 75%乙醇中，攪拌洗滌，真空抽濾得L-正亮氨酸 47.6g;將乙醇濾液蒸發濃縮，將濃縮液與粗品母液合并，用6mol/L 鹽酸調pH2.0，冷卻結晶，真空過濾得N-乙酰-D-正亮氨酸粗品，烘 干得110g，粗品母液循環套用。N-乙酰-D-正亮氨酸經消旋后循再次用于酶柱拆分。
實施例7固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基丁酸的方法
取1000mL基因工程菌1016發酵液，4000r/min離心20min收集 菌體，菌體濕重15g。洗入300mL60g/L明膠水溶液中，混勻，然后 置于4"凝固，固化10h后將膠塊切成5mmx5mm的膠粒，并用600mL 1%戊二醛交聯lh。去除戊二醛水溶液，并用生理鹽水洗滌三次。
將所得固定化細胞裝入直徑4cm,高50cm的玻璃柱中。1000mL 30% N-乙酰-DL- 2-氨基丁酸鈉水溶液以150mL/h流經酶柱，控制溫 度45。C， pH7.0，流出液重復上柱直至底物轉化完全。
將轉化完全的流出液升溫至7(TC加入活性炭脫色，真空濃縮至 350mL，冷卻結晶，真空過濾得L-2-氨基丁酸粗品，烘干得79.4g; 將79.4g粗品加入到350mL 75%乙醇中，攪拌洗滌，真空抽濾得L- 2-氮基丁酸54.8g;將乙醇濾液蒸發濃縮，將濃縮液與粗品母液合并， 用6mol/L鹽酸調pH2.0，冷卻結晶，真空過濾得N-乙酰-D-2-氨基丁 酸粗品，烘干得153g，粗品母液循環套用。N-乙酰-D-2-氨基丁酸經 消旋后再次用于酶柱拆分。
實施例8固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基丁酸的方法
取1000mL基因工程菌DM202發酵液，4000r/min離心20min收
集菌體，菌體濕重15g。洗入500mL20g/L殼聚糖水溶液中，混勻，
然后將含有菌體的殼聚糖溶液滴入pH7.5， 40g/L磷酸鈉溶液中固化
24h。去除磷酸鈉溶液，并用生理鹽水洗滌三次。
將所得固定化細胞裝入直徑4cm，高50cm的玻璃柱中。1000mL30% N-乙酰-DL- 2-氨基丁酸鈉水溶液以150mL/h流經酶柱，控制溫 度45。C， pH7.5，流出液重復上柱直至底物轉化完全。
將轉化完全的流出液升溫至7(TC加入活性炭脫色，真空濃縮至 350mL，冷卻結晶，真空過濾得L-2-氨基丁酸粗品，烘干得77.8g; 將77.8g粗品加入到350mL75。/。乙醇中，攪拌洗滌，真空抽濾得L-2-氨基丁酸52g;將乙醇濾液蒸發濃縮，將濃縮液與粗品母液合并，用 6mol/L鹽酸調pH2.0，冷卻結晶，真空過濾得N-乙酰-D-2-氨基丁酸 粗品，烘干得158g，粗品母液循環套用。N-乙酰-D-2-氨基丁酸經消 旋后再次用于酶柱拆分。
權利要求
1、一種固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基脂肪酸的方法，其制備步驟如下(1)細胞固定化將發酵獲得的含氨基酰化酶的菌體細胞和包埋劑混合均勻，加入成型劑中固化成型，或固化成型后再加入強化劑進行強化處理，即得固定化細胞；(2)N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸生物轉化將固定化細胞裝柱，使N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸水溶液流經酶柱進行生物轉化，收集流出的轉化液，轉化液重復上柱，直至轉化液中N-乙酰-L-2-氨基脂肪酸反應完全；(3)L-2-氨基脂肪酸分離純化上述轉化液用活性炭脫色去除雜質，濃縮、冷卻結晶或用活性炭脫色除雜質后用陽離子交換柱分離，得到L-2-氨基脂肪酸和N-乙酰-D-2-氨基脂肪酸，其中N-乙酰-D-2-氨基脂肪酸經消旋，得N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸再次用于酶柱拆分。
2、 根據權利要求1所述的固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于步驟(1)中所述含氨基酰化酶的菌體為刺孢 小克銀漢霉9980、米曲霉、基因工程菌1016或基因工程菌DM202。
3、 根據權利要求1所述的固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于步驟(1)中所述菌體細胞和包埋劑混合后的 濃度為10 200g/L，在成型劑中固定化時間為1 48h,強化劑處理時間為10 180min。
4、 根據權利要求1所述的固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于步驟(1)中所述的包埋劑為海藻酸鈉、卡拉 膠、明膠或殼聚糖，所述的成型劑為氯化鈣、氯化鉀或磷酸鈉溶液， 所述的強化劑為戊二醛。
5、 根據權利要求1所述的固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于步驟(2)中所述的N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸 為N-乙酰-DL-2-氨基丁酸，N-乙酰-DL-2-氨基戊酸或N-乙酰-DL-2-氨基己酸。
6、 根據權利要求1所述的固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于步驟(2)中所述的N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸 水溶液濃度為50 400g/L， pH6.0 9.0，流經酶柱的速度為100 1000mL/h,轉化溫度為25 60°C 。
7、 根據權利要求4所述的固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于所述的包埋劑海藻酸鈉或卡拉膠的濃度為10 50g/L，成型劑氯化鈣或氯化鉀水溶液的濃度為10 60g/L。
8、 根據權利要求4所述的固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于所述的包埋劑明膠的濃度為50 200g/L，膠體 強化劑戊二醛的濃度為5 30g/L。
9、 根據權利要求4所述的固定化微生物細胞酶法制備L-2-氨基脂肪 酸的方法，其特征在于所述的包埋劑殼聚糖的濃度為10 100g/L，成 型劑為pH6.0 8.0的磷酸鈉溶液。
全文摘要
本發明是以N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸為原料的固定化細胞酶法制備L-2-氨基脂肪酸的方法。將發酵得到的含氨基酰化酶的微生物細胞用不同固定化載體包埋裝柱，使一定濃度的N-乙酰-DL-2-氨基脂肪酸水溶液以一定速度流經固定化細胞填充柱，收集流出液，濃縮結晶或用陽離子交換柱分離純化得L-2-氨基脂肪酸和N-乙酰-D-2-氨基脂肪酸，其中N-乙酰-D-2-氨基脂肪酸經消旋后再次用于酶柱拆分。N-乙酰-L-2-氨基脂肪酸的摩爾轉化率達96％以上，L-2-氨基脂肪酸收率高于85％。本發明生產工藝簡單、微生物細胞利用率高、適合工業化生產。
文檔編號C12P13/00GK101603063SQ20091018176
公開日2009年12月16日 申請日期2009年7月23日 優先權日2009年7月23日 公開號200910181762.發明者茜 劉, 劉均忠, 焦慶才, 凱 董, 趙根海, 陳爭依 申請人:南京大學