專利名稱：一株水貂源屎腸球菌及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一株從水貂體內分離得到的屎腸球菌，并特別涉及其在毛皮動物日糧 中的應用。
背景技術：
微生態制劑是通過改善寄主腸道菌群平衡而發揮有益作用的活的益生菌制劑，以 其綠色安全、無毒副作用、無殘留的優點逐步成為替代抗生素類添加劑的主力軍。腸球菌屬 細菌在自然界中分布很廣，在一些蔬菜和植物中常見，也是人和動物消化道內正常存在的 一種微生物，主要定植在回腸和結腸部位。腸球菌作為益生菌的應用主要集中在糞腸球菌 和屎腸球菌，屎腸球菌屬于乳酸菌，由于它生長速度快，有較好的黏附能力，能產生乳酸及 一些抗菌物質，被廣泛的用作為益生菌制劑。研究表明屎腸球菌組成的益生菌可提高幼年 畜禽的體增重，提高營養物質消化率，改善飼料報酬，減少腹瀉比率，緩解應激狀況，降低死 亡率。腸球菌除具備以上功能外，還可直接參與膽固醇的代謝，并對異常代謝進行調整，使 之恢復正常。腸球菌作為微生態制劑被廣泛的應用于肉雞、育肥豬、育肥牛、仔豬和奶牛生 產中。此外，微生態制劑對機體有明顯的免疫促進作用，可以促進新生兒腸道免疫系統的發 育，也可以促進腸道黏膜局部和系統免疫功能，對特異性和非特異性免疫應答均有調節作 用，維持機體在健康狀態時免疫功能的正常水平。盡管益生菌具有以上眾多免疫調節作用， 但對菌種來說，不僅種屬之間免疫效果有差異，而且菌株與菌株之間也有不同。此外，攝入 時間、供給方式和添加量等方面對免疫調節效果也有影響。宿主也因品種、年齡、生理狀況、 生活環境的差異，而產生不同的效果。屎腸球菌在環境中廣泛存在，并且屬于腸道共生菌，在很多動物新出生的2 3d 內占優勢地位，并且是一種兼性厭氧的乳酸菌，非常適合于生產和應用。目前市場上已有很 多產品中包含屎腸球菌菌株，如韓國的“媽咪愛”，德國和瑞典生產的益生菌制品Ventrux、 Bioflorin和Fiormil等，其活菌數大約為108_9個/g產品，目前含屎腸球菌的制品也已被 廣泛的應用于動物生產中，如韓國生產的飼料添加劑“優比他”等。圍產期奶牛飼喂含有屎 腸球菌的直接飼用微生物能夠促進草料在瘤胃中消化，增加產奶量。肉牛飼喂含有屎腸球 菌的直接飼用微生物能夠促進肉牛適應高精料日糧，防止酸中毒。應用得當的屎腸球菌不 僅可以促進營養物質消化吸收，降低血清膽固醇含量，維持腸道菌群平衡，還可以調節機體 免疫功能，刺激胸腺、脾臟和法氏囊等免疫器官的發育，增強巨噬細胞的吞噬活性，活化腸 道相關淋巴組織，促進免疫球蛋白A的生成，調節機體的免疫功能。關于乳酸菌添加劑，在毛皮動物生產中的研究與應用，國內外研究較少，本發明基 于益生菌添加劑的益生作用效果，提出了一株來源于毛皮動物體內的安全，穩定，高活性的 乳酸菌，并對其優勢作用進行檢測。
發明內容
從健康成年水貂腸道內分離乳酸菌，取小腸內容物20g，加入IOOml無菌水中，搖床震蕩30min，使顆粒物質充分溶解，梯度稀釋，利用傾注培養法進行分離培養，37°C培養 72h選擇具有溶鈣圈的菌落，采用平板劃線的方式純化，純化3-4代，鏡檢，將純化后的乳酸 菌接入MRS液體培養基中，檢測其微生物學特性，如形態學、生理學特性(表1)以及糖分解 代謝(表幻的能力，檢測其體外培養對膽固醇的降解功能(表幻。進行小鼠安全性(表 4)檢測以及對水貂生產性能(表幻的影響。該屎腸球菌MDF1104已于2010年10月21日于中國微生物菌種保藏管理委員會普 通微生物中心(地址中國北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所) 保藏，保藏號CGMCC No. 4237。其分類命名為屎腸球菌，拉丁名Enterococcusfaecium。
圖1屎腸球菌MDF1104在體外培養條件下對膽固醇的降解，橫坐標為培養時間 (單位小時)，縱坐標為降解率(％ )。下面結合實施例和圖進一步說明本發明實施例I屎腸球菌MDF1104形態學觀察、顯微鏡檢以及生理生化指標檢測無菌條件下用接種環挑取培養18_24h的屎腸球菌MDF1104，涂于干凈的載玻片 上，制片，革蘭氏染色進行形態學及染色結果觀察。無菌條件下將屎腸球菌接種于相應的培 養基或培養條件下，進行生理生化指標的檢測觀察，檢測結果見表1表1屎腸球菌MDFl 104形態學與理化試驗結果
權利要求
1.一種屎腸球菌(Enterococcus faecium)MDFl 104，保存編號 CGMCC No. 4237。
2.根據權利要求1，所述的乳酸菌分離自水貂體內，體外培養生長迅速，可廣泛利用碳 水化合物。
3.根據權利要求1和2所述的屎腸球菌MDF1104，具有膽固醇降解功能。
4.根據權利要求1和2所述的屎腸球菌MDFl104，通過小鼠安全性檢測，可以提高小鼠 采食量，增加日增重及提高免疫器官指數。
5.根據權利要求1和2所述的屎腸球菌MDFl104，可以提高水貂日采食量，體增重及日 增重，增加免疫器官重量。
6.根據權利要求3、4所述的屎腸球菌MDF1104，可以與其他常規載體組合，具有降低動 物血清膽固醇的功能。
7.根據權利要求4、5、6所述，屎腸球菌與其他常規載體混合后加入毛皮動物日糧中， 具有提高動物生產性能的功能。
8.根據權利要求7所述，一種飼料預混料，飼料預混料含有權利要求1所述屎腸球菌 MDFl104。
全文摘要
本發明涉及一種屎腸球菌菌株及其應用。具體涉及的屎腸球菌MDF1104，專利保藏號CGMCC No.4237。還涉及屎腸球菌MDF1104在碳水化合物發酵，膽固醇降解方面的應用；尤其涉及屎腸球菌MDF1104單獨應用或與常規載體組合可以增加水貂采食量，日增重，增強機體免疫機能，并且可以預防或治療水貂季節性腹瀉。
文檔編號C12N1/20GK102093967SQ20101056961
公開日2011年6月15日 申請日期2010年12月2日 優先權日2010年12月2日
發明者劉晗璐, 劉柏陽, 孫偉麗, 常忠娟, 李丹麗, 李光玉, 楊琛杰, 王凱英, 趙家平, 趙靖波, 鐘偉 申請人:中國農業科學院特產研究所