專利名稱：一株促進污染土壤植物修復的木霉菌株fs10-c及其微生物制劑的制備方法
技術領域：
本發明屬于微生物技術領域，尤其涉及一種用于促進污染土壤植物修復的木霉菌 株及其微生物制劑的制備方法。
背景技術：
木霉屬(Trichoderma)真菌在土壤中分布廣泛、生物量大，環境適應性強。目前農 業上多用于促進農作物生長、誘導植物產生抗病性等。近年薇等來，亦有研究表明木霉搖瓶 條件下對重金屬Cu、Si和1 有吸附作用，且對有機污染物有一定的轉化作用。木霉對營 養的需求并不十分嚴格，可以分解利用纖維素、半纖維素、幾丁質等多種多聚物作為其生長 的碳源物質，也可以利用多種簡單的和復雜的氮源化合物生長。但許傳坤等(2004)和潘瑋 等(2006)的研究表明向土壤中添加額外的能源物質及其它的有機物質能降低或全部解除 土壤對木霉的抑制作用。苜蓿含豐富的碳水化合物和多種礦物元素及維生素，可為木霉提 供良好的營養條件。以滅菌苜蓿粉為基質，進行木霉的固體發酵，有利于在苜蓿粉中大量增 殖，這點不同于一般的固體菌劑僅簡單的將微生物吸附于固體基質上，其孢子含量大于IO9 cfu g—1。且苜蓿粉作為一種有機質與木霉孢子混合添加入土壤減輕土壤對孢子的抑制作用 的同時可增加土壤肥力。
發明內容
發明目的本發明的目的是提供一株促進污染土壤植物修復的木霉菌株FSlO-C 及其微生物制劑的制備方法。該制劑通過木霉產生吲哚乙酸、赤霉素等植物生長調節物質、 產鐵載體能力和解磷作用等改變植物營養環境，以及提高植物抗逆性等生物活性，促進植 物生長，抑制病害發生和改善土壤微生態。另外具有調控重金屬污染作用，對有機污染物亦 有一定的轉化作用。技術方案一株促進污染土壤植物修復的木霉菌株FS10-C，該菌株已在國家知識 產權局指定的保藏單位保藏，保藏日期為2010年07月01日，保藏單位名稱中國微生物菌 種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號CGMCC No. 3970。該株木霉為土壤中篩選而 得，菌絲白色棉絮狀，綠色孢子、產黃色素，經鑒定為里氏木霉(Jrichoderma reesei) 0一種含有上述木霉的微生物制劑的制備方法，制備步驟為將粉碎的過10目篩后 的紫花苜蓿粉按重量比1:1與去離子水調勻后在12rc，30min滅菌處理制成滅菌基質；木 霉FSlO-C經PDA斜面培養，用無菌水洗孢子，配制為的孢子懸液，孢子濃度IO6 cfu · mL—1 ； 將孢子懸液按照接種量為6%wt接種到滅菌基質中，28°C恒溫培養，第3天起每天攪動1次，混勻計數孢子量為IO9 cfu · 制成木霉制劑。所述PDA斜面培養方法為木霉FSlO-C株在PDA平板活化后，接種PDA斜面，28°C 恒溫培養5d左右見斜面布滿綠色孢子。所述PDA培養基配制方法稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切成小塊，加水煮沸2(Γ30 分鐘，用四層紗布過濾得土豆汁，加入20g葡萄糖和18 20g瓊脂，冷卻后補足水分至1000毫升。有益效果(1)木霉制劑制備方法簡單、孢子量大木霉菌廣泛存在于土壤中，具 有較強的寄生能力，能夠存在與植物殘體和土壤結構中。以滅菌苜蓿粉為基質，進行木霉的 固體發酵，木霉可僅利用苜蓿的營養物質進行大量增殖，其孢子含量大于IO9 CfU · g—1，可 通過制劑顏色判斷制劑的孢子繁殖情況。這點不同于一般的固體菌劑僅簡單的將微生物吸 附于固體基質上。(2)木霉制劑具多種生物活性可促進植物修復土壤污染并且通過產生 吲哚乙酸、赤霉素等植物生長調節物質、產鐵載體能力和解磷作用等改變植物營養環境，以 及提高植物抗逆性等生物活性，促進植物生長，抑制病害發生和改善土壤微生態。另外具有 調控重金屬污染作用，對有機污染物亦有一定的轉化作用；(3)木霉制劑施用方法簡單木 霉制劑用于土壤污染治理于可參照一般菌肥的方法施用，且苜蓿粉作為一種有機質與木霉 孢子混合添加入土壤減輕了土壤對孢子的抑制作用，同時增加了土壤的肥力。
圖1不同處理的菌劑產生的孢子數量。
具體實施例方式以下結合實例對本發明作進一步的描述 實施例1 菌劑的固體發酵正交實驗
1. 1孢子液的制取取培養好的種子斜面，加5mL無菌水，振蕩，將孢子洗脫至無菌三角 瓶中，稀釋至孢子濃度為IO6 cfu · mL—1，待用。固體發酵實驗選取物料種類、物料量、固水比、接種量四個發酵參數，每個參數設 3個水平，分別為物料種類(A):有機肥A、有機肥B、苜蓿粉；物料量(B):20g、40g、60g;固水 重量比(C) :1:0. 2、1:0. 6、1:1 ；接種量(D) :2%wt、6%wt、10%wt。采用正交試驗法。選用L9 (34)正交表，其試驗因素水平見表1。有機肥A、有機肥B和紫花苜蓿粉三種有機物料，分別 按照試驗設計加去離子水，充分混勻后，裝于直徑15cm大玻璃平皿中，121°C滅菌30min， 冷卻至室溫后按照試驗設計接種孢子懸液，混勻，于無菌靜止培養，定時攪拌，補水，進 行發酵培養。各處理經發酵培養后，稱取Img發酵固料，放入9mL的含無菌水中洗脫和收集 分生孢無菌水，充分震蕩，靜置，取上清液lmL，梯度稀釋，用血球計數板計數孢子量(李振高 等，2008)。
表1正交試驗因素水平
權利要求
1.一株促進污染土壤植物修復的木霉菌株FS10-C，該菌株已在國家知識產權局指定 的保藏單位保藏，保藏日期為2010年07月01日，保藏單位名稱中國微生物菌種保藏管理 委員會普通微生物中心，保藏編號CGMCC No. 3970。
2.一種含有權利要求1所述木霉的微生物制劑的制備方法，其特征在于制備步驟為 將粉碎的過10目篩后的紫花苜蓿粉按重量比1:1與去離子水調勻后在121°C，30min滅菌 處理制成滅菌基質；木霉FSlO-C經PDA斜面培養，用無菌水洗孢子，配制為的孢子懸液，孢 子濃度IO6 cfu · ml/1 ；將孢子懸液按照接種量為6%wt接種到滅菌基質中恒溫培養， 第3天起每天攪動1次，混勻計數孢子量為IO9 cfu · g—1，制成木霉制劑。
3.根據權利要求2所述的含有木霉的微生物制劑的制備方法，其特征在于所述PDA斜 面培養方法為木霉FSlO-C株在PDA平板活化后，接種PDA斜面，恒溫培養5d左右見 斜面布滿綠色孢子。
4.根據權利要求2或3所述的含有木霉的微生物制劑的制備方法，其特征在于所述 PDA培養基配制方法稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切成小塊，加水煮沸2(Γ30分鐘，用四層 紗布過濾得土豆汁，加入20g葡萄糖和18 20g瓊脂，冷卻后補足水分至1000毫升。
全文摘要
一株促進污染土壤植物修復的木霉菌株FS10-C及其微生物制劑的制備方法，木霉制劑由土壤中篩選出的木霉FS10-C株，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號CGMCC NO.3970。具體制備方法為將粉碎的苜蓿粉(過10目篩),1:1用去離子水調勻后121℃，30min滅菌處理制成滅菌基質。木霉FS10-C經PDA斜面培養，用無菌水洗孢子，配制為的孢子懸液(孢子濃度106cfu·mL-1)，按照接種量為6%wt接種到滅菌基質中。28℃恒溫培養，第3天起每天攪動1次，混勻計數孢子量為109cfu·g-1，制成木霉制劑。
文檔編號C12N1/14GK102080052SQ20101059200
公開日2011年6月1日 申請日期2010年12月17日 優先權日2010年12月17日
發明者吳龍華, 李振高, 滕應, 田曄, 趙靜, 駱永明 申請人:中國科學院南京土壤研究所