專利名稱：對化學性和酒精性肝損傷有輔助保護作用的組合物及其保健食品的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種保健食品，具體地說，涉及一種對化學性和酒精性肝損傷有輔助保護作用的組合物及其保健食品。
背景技術：
當今社會已進入快速發展的高科技時代，人類的生產環境及生活環境日新月異， 給人類社會帶來改變的科技手段，在征服自然的同時，亦直接地威脅著人類的生存。肝臟作為機體的一個代謝中心，又是重要的解毒器官，已知其功能多達千多種。從各種途徑進入人體內的化學物質最終都要在肝臟內轉化或貯留，特別容易弓丨起肝損傷。飲酒、食品中殘留的農藥、工業及環境污染、藥物毒素是造成化學性肝損傷的重要原因。化學性肝損傷的實驗室指標主要為血清轉氨酶和膽紅素的升高、血清白蛋白降低、球蛋白升高、凝血酶原時間延長、血清堿性磷酸酶和谷氨酰轉移酶的升高等情況，最終引起不同程度肝細胞壞死、脂肪變性、肝纖維化、肝硬變和癌變。酒精經胃腸道黏膜迅速吸收進入血液，經肝臟代謝成為毒性很強的乙醛。乙醛進入血液，通過黃嘌呤氧化酶轉變成為超氧化物，導致脂質過氧化，破壞細胞膜，導致肝損傷。 酒精還能誘導肝臟P450酶活性增高，在肝臟代謝過程中產生大量活性氧(reactive oxygen species，R0S)，引發脂質過氧化，破壞肝細胞的結構和功能。目前也有很多保肝護肝、治療肝炎的西藥，但這些藥物往往在護肝的同時其在體內代謝過程又生成損害肝臟的物質，不適合長期服用，難以滿足人民群眾身體健康的保健需要；而利用傳統的中醫藥來保護肝臟在我國已有悠久的歷史，但傳統的中藥湯劑存在服用不方便，劑量與質量難以控制等弊端。因此利用現代生物技術，研究發現傳統護肝中藥及藥食兩用藥材的作用機理，結合現代制劑技術，研發適合長期服用的對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的保健食品具有現實意義。水飛薊素作為一種治療急、慢性肝炎的藥物，還可以應用于肝硬化，脂肪肝，中毒性肝損傷，酒精、藥物及其他因素引起的肝損傷，保護肝臟。迄今為止，還沒有國家食品藥品監督管理局批準的由水飛薊素作主要原料的保健食品。
發明內容
本發明所要解決的技術問題在于提供對化學性和酒精性肝損傷有輔助保護作用的組合物及其保健食品。為解決上述技術問題，本發明的技術方案是一種對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的組合物，所述組合物由水飛薊素、靈芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黃提取物組成，其重量百分比為水飛薊素8-15%、靈芝提取物10-20%、甘草提取物15-30%、葛根提取物15_20%、 枸杞子提取物15-20%、姜黃提取物12-25%。
一種保健食品，所述保健食品包含所述的對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的組合物。優選的，對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的保健食品，其重量百分比為水飛薊素12 %、靈芝提取物15 %、甘草提取物20 %、葛根提取物18 %、枸杞子提取物 15%、姜黃提取物20%。優選的，對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的保健食品，其重量百分比為水飛薊素10 %、靈芝提取物15 %、甘草提取物20 %、葛根提取物15 %、枸杞子提取物 15%、姜黃提取物25%。優選的，對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的保健食品，其重量百分比為水飛薊素15 %、靈芝提取物10 %、甘草提取物15 %、葛根提取物20 %、枸杞子提取物 20%、姜黃提取物20%。優選的，上述對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的保健食品，其重量百分比為水飛薊素8%、靈芝提取物20%、甘草提取物30%、葛根提取物15%、枸杞子提取物15%、姜黃提取物12%。上述對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的保健食品的制備方法，具體制備步驟如下取帶孢子的靈芝子實體去雜質，粉碎，加20倍量水浸泡，95°C浸提，每次池，連續3 次。合并三次浸提液，60°C真空濃縮，濃縮至比重約為1. 1。濃縮液加3倍體積的95%乙醇沉淀10 12h，離心除去上清液。沉淀物冰凍、真空干燥，即得靈芝提取物。取甘草清洗、干燥、粉碎后回流提取3次(分別加5、4、4倍量水)，每次2h，合并提取液，濃縮至原體積的1/5，過濾，濾液繼續濃縮，濃縮液140 160°C噴霧干燥，即得甘草提取物。取葛根清洗、干燥、粉碎后分別加5倍量水回流提取2次，每次池，過濾，合并二次濾液，離心分離，將離心后的濾液濃縮，再加入3倍體積的95%乙醇攪勻，靜置，離心，離心后的濾液減壓回收乙醇，濃縮液140 160°C噴霧干燥，即得葛根提取物。取枸杞子清洗、干燥、粉碎后分別加5倍量水在回流提取3次，每次池，過濾，合并三次濾液，60°C真空濃縮，濃縮液加3倍體積的95 %乙醇攪勻，靜置，離心后的濾液減壓回收乙醇，濃縮液140 160°C噴霧干燥，即得枸杞子提取物。取姜黃清洗、干燥、粉碎后過40目篩，于80%乙醇中加熱回流提取3次，3次的乙醇用量均為原藥材重量的6倍，提取時間每次池，合并提取液、濾過，濾液60°C減壓回收乙醇，濃縮液140 160°C噴霧干燥，即得姜黃提取物。取水飛薊素、靈芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黃提取物分別過篩，按配方量將各原料配料后混合均勻后裝膠囊即得。應用上述制備方法制成的對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的保健食品，每日服用3次，每次服用3粒(0. 25g/粒)。水飛薊素是從水飛薊果中提取的一種活性素，由二氫色原酮基團的四個同分異構體組成，其中起藥理作用的是水飛薊賓。首先，水飛薊賓可以整合于肝細胞膜中，競爭性結合肝細胞膜中的特殊受體，起到穩定肝細胞膜，阻斷細胞膜通過該類受體介導的對肝有毒性的物質的攝取，可以維持谷胱甘肽及超氧化物歧化酶等生理性抗氧化物質的活性；其次，水飛薊賓進入肝細胞后可與雌二醇受體結合并使其激活，活化的雌二醇受體可增強肝細胞核內RNA聚合酶I的活性，使核糖體RNA轉錄增多，導致胞漿內核糖體數目增加，從而促進功能性蛋白(酶類)和結構性蛋白的生物合成，再以生物反饋的方式促進細胞DNA的合成， 從而有利于肝細胞的修復和再生；另外，還可清除自由基，減輕其介導的肝細胞損傷和肝組織嚴炎癥，阻止其對肝纖維化的觸發，通過下調I型膠原蛋白mRNA含量，抑制纖維增生以及下調金屬蛋白酶組織抑制因子一 lmRNA，從而抑制金屬蛋白酶組織抑制因子一 1的合成，促進膠原蛋白減退，起到間接和直接抗纖維化作用。靈芝作為傳統的滋補品，可明顯降低四氯化碳、硫代乙酰胺引起的血清谷丙轉氨酶的升高，還能顯著減輕四氯化碳、硫代乙酰胺引起的小鼠肝臟脂肪的蓄積，抑制乙醇對肝臟的脂質過氧化損傷，促進肝細胞修復作用，加強肝臟的再生能力，增強肝臟解毒功能，還可通過增強機體的免疫系統功能而對肝炎有輔助治療作用。甘草主要含甘草酸及黃酮類化合物。甘草類黃酮可顯著保護乙醇誘導的肝臟丙二醛(MDA)增加及還原型谷胱苷肽(GSH)的耗竭。還可保護乙醇所致的肝細胞超微結構的損傷；甘草酸可預防四氯化碳及二甲基亞硝胺所致小鼠肝纖維化；甘草酸還可抑制“增毒”的細胞色素P450同工酶活性，減少毒物和致癌物的代謝活化，又能顯著誘導II相酶活性，加快毒物和致癌物的排泄。葛根自古以來就用于解酒毒，現代藥理研究證明葛根有明顯的預防酒醉作用；能有效拮抗酒精引起的肝脂質過氧化損害，飲用葛根提取物能有效地拮抗飲乙醇所引起的肝臟丙二醛(MDA)水平提高；葛根總黃酮可明顯的誘導P 450的作用；葛根還可對抗乙醇的降低血清載脂蛋白作用和升高膽固醇及甘油三酯作用。枸杞子具有良好的保肝作用。枸杞多糖能明顯抑制CC14所致肝損傷小鼠ALT的升高，增加肝糖元含量，并能明顯降低肝中丙二醛的含量，使肝小葉損傷區域縮小，肝細胞中脂滴減少，細胞核增大，RNA及核仁增多；枸杞還對二乙基亞硝胺誘發大鼠肝癌的抑制有
一定作用。姜黃中的主要活性成分姜黃素是脂質過氧化的強抑制劑，即可抑制肝組織中ROS 的產生，又能清除氧化過程中產生的氧自由基，增強肝臟抗氧化能力，減輕氧應激，從而起到保護肝細胞的作用；姜黃素還可以改善脂肪酸代謝，減少脂肪在肝臟的沉積；姜黃素也可通過抑制核因子KB(NF. KB)的激活及其介導的細胞因子的釋放，抑制膠原合成和肝星狀細胞活化等作用，從而減輕肝臟炎癥和纖維化的發展。所述對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的保健食品，具有了水飛薊素、靈芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黃提取物的綜合功能，且相互協同作用，大大提升了單一組分的服用效果，經功能試驗證明，對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用，其制備方法簡單，適合規模化工業生產的需要。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明的技術方案作進一步說明，其中，所涉及的實施例不應被視為對本發明的保護范圍的限制。實施例1取帶孢子的靈芝子實體去雜質，粉碎，加20倍量水浸泡，95°C浸提，每次池，連續3次。合并三次浸提液，60°C真空濃縮，濃縮至比重約為1. 1。濃縮液加3倍體積的95%乙醇沉淀10 12h，離心除去上清液。沉淀物冰凍、真空干燥，即得靈芝提取物。取甘草清洗、干燥、粉碎后回流提取3次(分別加5、4、4倍量水)，每次池，合并提取液，濃縮至原體積的1/5，過濾，濾液繼續濃縮，濃縮液140 160°C噴霧干燥，即得甘草提取物。取葛根清洗、干燥、粉碎后分別加5倍量水回流提取2次，每次池，過濾，合并二次濾液，離心分離，將離心后的濾液濃縮，再加入3倍體積的95 %乙醇攪勻，靜置，離心，離心后的濾液減壓回收乙醇，濃縮液140 160°C噴霧干燥，即得葛根提取物。取枸杞子清洗、干燥、粉碎后分別加5倍量水在回流提取3次，每次池，過濾，合并三次濾液，60°C真空濃縮，濃縮液加3倍體積的95 %乙醇攪勻，靜置，離心后的濾液減壓回收乙醇，濃縮液140 160°C噴霧干燥，即得枸杞子提取物。取姜黃清洗、干燥、粉碎后過40目篩，于80%乙醇中加熱回流提取3次，3次的乙醇用量均為原藥材重量的6倍，提取時間每次池，合并提取液、濾過，濾液60°C減壓回收乙醇，濃縮液140 160°C噴霧干燥，即得姜黃提取物。取水飛薊素Wig、靈芝提取物7. ^g、甘草提取物10kg、葛根提取物^ig、枸杞子提取物7. ^g、姜黃提取物IOkg分別過篩，混合均勻后分裝膠囊200000粒。實施例2對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的保健食品，由水飛薊素、靈芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黃提取物組成，其重量百分比為水飛薊素10%、靈芝提取物15%、甘草提取物20%、葛根提取物15%、枸杞子提取物15%、姜黃提取物25%。制備方法同實施例1。實施例3對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的保健食品，由水飛薊素、靈芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黃提取物組成，其重量百分比為水飛薊素15%、靈芝提取物10%、甘草提取物15%、葛根提取物20%、枸杞子提取物20%、姜黃提取物20%。制備方法同實施例1。實施例4對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的保健食品，由水飛薊素、靈芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黃提取物組成，其重量百分比為水飛薊素8 %、靈芝提取物20 %、甘草提取物30 %、葛根提取物15 %、枸杞子提取物15 %、姜黃提取物12%。制備方法同實施例1。實施例5安全性評價實施例1按GB15193-1994有關規定進行安全性毒理學評價試驗，方法及結果如下急性毒性試驗稱取樣品lOOOmg，加蒸餾水至20ml，充分混勻后配置成均勻混懸液，作為受試樣品。昆明種小鼠禁食(不禁水)16小時后，選擇雌雄小鼠各10只，體重在 18-22克之間，分放于兩鼠籠內，同性別小鼠之間體重之差不超過3g，將受試樣品采用一次經口灌胃方式對實驗動物染毒，灌胃容量按0.%il/20g體重計。觀察給樣后一周內動物的一般狀態、體重變化、中毒癥狀和死亡情況等。結果試驗期間各組動物活動正常，毛色光澤度好，未見任何中毒癥狀和死亡；雌性小鼠LD5tl > 10000mg/kg，雄性小鼠LD5tl > IOOOOmg/ kg。結論根據急性毒性半數致死劑量分級，屬實際無毒級物質。微核試驗稱取樣品5000、2500、1250mg，分別加蒸餾水至20ml，充分混勻后為受試樣品。取昆明種小鼠，體重25-30g，將動物隨機分為5組，每組10只，雌雄各半，分別作為樣品三個劑量組和蒸餾水陰性對照組、環磷酰胺陽性對照組，采用30小時兩次灌胃法，將配制不同濃度樣品按0. 4ml/20g體重，分別對各組動物灌胃，于第二次灌胃后6小時處死動物，取股骨骨髓加小牛血清涂片，進行Giemsa染色，鏡檢觀察，每鼠計數1000個嗜多染紅細胞的微核數，計算微核發生率。結果陰性。精子畸形試驗稱取樣品5000、2500、1250mg，分別加蒸餾水至20ml，充分混勻后為受試樣品。選擇25只昆明種小鼠，雌雄各半，體重在25-35克之間，分成5組，分別作為樣品三個劑量組和蒸餾水陰性對照組、環磷酰胺陽性對照組，將配制不同濃度樣品按 0. 4ml/20g體重，分別對各組動物灌胃，每日一次，連續5天，于第35天后處死動物，取副睪濾液涂片，2%伊紅染色，鏡檢觀察每鼠1000個精子的畸形數，計算精子畸形發生率。結果 陰性。Ames試驗稱取樣品lOOOmg，加無菌蒸餾水至20ml，混勻即得高劑量組受試液，吸取上述受試液5. 0,2. 0，1. 0,0. 2ml分別加無菌蒸餾水至IOml作為以下各劑量組的受試液。 選擇TA97、TA98、TA100、TA102測試菌株并進行大鼠肝S9的誘導和制備，按GB15193-94標準平板滲入法進行試驗。結果陰性。30天喂養試驗選擇SD大鼠80只，體重60_80g，雌雄各半，分4組，其中3組為試驗組，1組為空白對照組。按人體劑量的10倍、50倍、100倍作為實驗組將產品制成飼料顆粒單籠喂養，自由飲食，連續喂養30天后，逐只稱重，取鼠血進行血液學、生化學檢查，處死，大體解剖觀察有無明顯病變，取肝、腎、脾、性器官等臟器進行稱重，計算臟體比，并對這些臟器進行組織病理學檢查。結果顯示實驗動物生長情況良好，血液學檢查，生化學檢查， 主要臟體比及組織學檢查結果與對照組相比，均無明顯差異。實施例6對化學性肝損傷的輔助保護作用用本發明制劑且按《保健食品檢驗與評價技術規范》(2003年版)進行了對化學性肝損傷有輔助保護作用的動物功能學試驗。受試樣品本發明實施例1制劑，水飛薊素制劑(水飛薊素含量同實施例1制劑所含水飛薊素含量)，中藥復合制劑(由靈芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黃提取物組成，各組分含量同實施例1制劑)。劑量設計為本發明制劑人體推薦劑量的10倍，即實施例1制劑組0. 375g/kg，水飛薊素制劑組0. 045g/kg，中藥復合制劑組0.33g/kg，另設肝損傷模型組和正常對照組(給予蒸餾水)。樣品處理取實施例1制劑0. 375g，水飛薊素制劑0. 045g,中藥復合制劑0. 33g分別加蒸餾水至20ml，使成均勻混懸液，即為供試液。實驗動物昆明種小鼠，18_22g，雄性，由復旦大學醫學院實驗動物部提供的清潔級小白鼠。飼養室溫度20-24°C，相對濕度40-70 %。
給樣方式灌胃，灌胃容積為0. 4ml/20go實驗方法與結果選擇健康小鼠50只，隨機分為5組，每組10只。各樣品組給以樣品，對照組和模型組飲用蒸餾水，連續30天。第30天各樣品組及模型組用CCL4染毒，劑量Mmg/kg，腹腔注射(i.p)。第31天，5組動物摘眼球取血，離心，取血清。測定如下生化指標血清谷丙轉氨酶(GPT)、谷草轉氨酶(GOT)、白/球蛋白比例(A/G)；并取肝臟進行病理組織學檢查。實驗結果用Spss軟件統計。樣品對動物體重的影響如表1所示。表 權利要求
1.一種對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的組合物，其特征在于，所述組合物由水飛薊素、靈芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黃提取物組成，其重量百分比為水飛薊素8-15%、靈芝提取物10-20%、甘草提取物15-30%、葛根提取物15-20%、枸杞子提取物15-20%、姜黃提取物12-25%。
2.如權利要求1所述的對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的組合物，其特征在于，其重量百分比為水飛薊素12%、靈芝提取物15%、甘草提取物20%、葛根提取物 18%、枸杞子提取物15%、姜黃提取物20%。
3.如權利要求1所述的對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的組合物，其特征在于，其重量百分比為水飛薊素10%、靈芝提取物15%、甘草提取物20%、葛根提取物 15%、枸杞子提取物15%、姜黃提取物25%。
4.如權利要求1所述的對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的組合物，其特征在于，其重量百分比為水飛薊素15%、靈芝提取物10%、甘草提取物15%、葛根提取物 20 %、枸杞子提取物20 %、姜黃提取物20 %。
5.如權利要求1所述的對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的組合物，其特征在于，其重量百分比為水飛薊素8%、靈芝提取物20%、甘草提取物30%、葛根提取物 15%、枸杞子提取物15%、姜黃提取物12%。
6.一種保健食品，所述保健食品包含如權利要求1-5中任一項所述的對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用的組合物。
7.—種如權利要求6所述的保健食品的制備方法，其特征在于，取水飛薊素、靈芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黃提取物分別過篩，按配方量將各原料配料后混合均勻。
全文摘要
本發明提供一種對化學性和酒精性肝損傷有輔助保護作用的組合物及其保健食品，所述組合物或保健食品由水飛薊素、靈芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黃提取物組成，其重量百分比為水飛薊素8-15％、靈芝提取物10-20％、甘草提取物15-30％、葛根提取物15-20％、枸杞子提取物15-20％、姜黃提取物12-25％。所述保健食品具有了水飛薊素、靈芝提取物、甘草提取物、葛根提取物、枸杞子提取物、姜黃提取物的綜合功能，且相互協同作用，大大提升了單一組分的服用效果，經功能試驗證明，對化學性肝損傷和酒精性肝損傷有輔助保護作用，其制備方法簡單，適合規模化工業生產的需要。
文檔編號A23L1/29GK102160637SQ20111000313
公開日2011年8月24日 申請日期2011年1月7日 優先權日2011年1月7日
發明者孔翎, 張連龍, 王繼武 申請人:上海健特生命科技有限公司, 上海黃金搭檔生物科技有限公司